4.汉防己中生物碱的提取、分离和鉴定

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粉防己生物碱的提取分离和鉴别

粉防己生物碱的提取分离和鉴别粉防己为植物防己科粉防己Stephania tetrandrd S.Moore的根，又名汉防己，是祛风解热镇痛药物，其有效成分为生物碱，主要是汉防己甲素和汉防已乙素。

汉防己生物碱具有降低血压及镇痛的作用，临床上除用作治疗高血压、心绞痛、神经性疼痛、抗阿米巴原虫外，还将粉防已生物碱的碘甲基、或溴甲基化合物作为肌肉松弛剂应用，此外汉防已甲素在动物实验中有抗癌、扩冠和解热抗炎的作用。

一、实验目的1．掌握生物碱的提取原理和实验操作方法；2．掌握生物碱的基本鉴别法；3．掌握生物碱结构与一般性质的关系；4．熟悉用柱层析分离纯化生物碱单体的方法。

二、仪器与试药（一）仪器RE-52旋转蒸发仪 SHB-循环水式多用真空泵分液漏斗（250mL）HHS型电热恒温水浴锅玻璃仪器气流烘干器圆底烧瓶（1000mL）ZF-2型三用紫外仪电热恒温干燥箱移液管（10mL、5mL）蒸发皿小玻璃蒸发器玻璃层析柱（2.0cmⅹ40cm）（二）试药粉防己乙醇盐酸氯仿无水硫酸钠滤纸丙酮中性三氧化二铝无水硫酸钠甲醇浓氨水硅胶G 凡士林脱脂棉漏斗 CMC-Na改良碘化铋钾试液汉防已甲素和汉防已乙素对照品丙酮苦味酸碘化汞钾试液雷氏铵盐试液三、主要成分的结构和性质汉防已根中总生物碱含量为1～3%，主要为汉防已甲素，含量约1～2%，汉防已乙素，含量约0.5%；轮环藤酚碱，含量为0.4%；以及其它数种微量生物碱。

轮环藤酚碱四、实验原理：1．提取：利用游离的伯、仲、叔胺生物碱具有亲脂性，能溶于乙醇的性质，用乙醇提取总生物碱；2．分离：利用水溶性生物碱（季铵类生物碱）易溶于水而难溶于有机溶剂的性质进行二者的分离；3．粉防己甲、乙素的分离：利用甲、乙素在结构上的不同（二者极性大小不同）用氧化铝柱层析来分离甲、乙素。

五、生物碱的提取分离1．总生物碱的提取、亲脂性与亲水性生物碱的分离95%乙醇300mL水浴回流提取1小时，过滤NOCH3OROCH3OCH3ONCH3CH3H HR=CH3R=H汉防己甲素汉防己乙素ONOHOCH3CH3OHOOHCH3同法提取0.5小时，过滤5～10mL浓缩物2%盐酸转移至蒸发皿中充分搅拌，残渣做生物碱反应，将滤液放在分液漏斗中先加入50mL氯仿，pH至9-10，振摇萃取，静置分层后，分出氯仿层30mL萃取1次2次，每次20mL，分出氯仿层20g无水硫酸钠，密闭，（上交）加入丙酮适量（共15mL，少量多次），水浴加热溶解，趁热倒入蒸发皿丙酮液加入中性三氧化二铝3g拌匀，水浴上小心蒸干含生物碱的三氧化二铝颗粒2．低压柱层析分离汉防已甲素和乙素低压柱层析在低压下（0.5-3kg/cm2，一般0.3-1.2 kg/cm2）采用颗粒直径介于经典柱层析（100-200μm）和HPLC（37μm）之间的薄层层析用硅胶（或氧化铝）H或G（50-75μm）作为填充剂的一种柱层析柱，其基本原理与HPLC相同，分离效果也介于经典柱与HPLC之间，用减压干法装柱，铺层紧密均匀，层析带分布集中整齐，同时薄层层析的最佳分离溶剂系统可以直接用于低压柱层析，它是一种分离效果较好，设备简单，操作方便，快速的方法。

重要化学实验思考题答案

中药化学实验思考题答案实验一：防己中生物碱的提取、分离与鉴定1：粉防己碱和防己诺林碱在结构与性质上有何异同点？实验过程中，应怎样利用它么的共性及个性进行提取分离？请设计方案。

注（汉防己甲素就是粉防己碱）（汉防己乙素是防己诺林碱）答：结构上粉防己碱的R基为甲基，防己诺林碱的的R基为氢，两者结构相似但防己诺林碱中有一个酚羟基，所以极性比粉防己碱稍高，在笨中的溶解度小于粉防己碱而在乙醇中又大于粉防己碱。

藉此可以根据不同溶剂重结晶时其晶形和熔点的不同相互分离。

分离方案（基本要点是在丙酮为溶剂粉防己碱是细针状结晶而防己诺林碱是六面粒状结晶，其mp值分别为217℃—218℃、134℃）：取结晶状混合物碱称重，置于50ml三角瓶中，加5倍量苯冷浸，时时振摇，冷浸半个小时后，过滤分开苯溶液和苯不溶液。

苯溶液回收苯至尽，残留物以丙酮结晶，得细针状结晶，为粉防己碱；苯不溶物待挥发去残留的苯后，也用丙酮重结晶可得粒状结晶，为防己诺林碱。

2分离水溶性和脂溶性生物碱的常用方法有哪些？答：①沉淀反应（雷氏铵盐试剂）②溶剂法3从防己中分离脂溶性、水溶性碱，酚性、非酚性碱的依据是什么？答：①分离脂溶性和水溶性碱的依据是脂溶性碱溶于一般能溶于有机溶剂，特别易溶于氯仿而水溶性碱难容与亲脂性溶剂（包括氯仿）本实验就是用氯仿作为萃取剂来分离脂溶性和水溶性碱的②分离酚性和非酚性碱的依据是酚性碱溶于氢氧化钠溶液而非酚性碱不溶于氢氧化钠。

4、萃取过程中怎样防止和消除乳化？答：在萃取时，应注意不可用力振摇，应将分液漏斗轻轻旋转摇动，适当延长振摇时间，可避免乳化现象；倘若发生严重乳化现象难以分层时可用以下方法解决：将难以分层的乳化液置于三角烧瓶中，取定性滤纸少许揉成蓬松的团块，放入乳化液中，用玻璃棒搅拌片刻后，乳化液中的粘稠物质被吸附在滤纸团的周围，从而消弱和破坏乳化液的稳定性，克服了乳化现象，因而得到澄清的溶液。

5、生物碱的沉淀反应应在什么条件下进行，为什么？答：生物碱的沉淀反应应在酸水或酸性烯醇中进行，因为生物碱和生物碱沉淀剂均可溶于其中使反应易于进行且反应结果易于判断。

汉防己中实验报告(3篇)

第1篇一、实验目的1. 学习掌握汉防己中生物碱的提取方法。

2. 掌握生物碱的分离纯化技术。

3. 熟悉生物碱的鉴定方法。

二、实验原理汉防己是一种传统中药材，具有祛风除湿、利水消肿、镇痛消炎等功效。

其主要成分是多种生物碱，如汉防己碱、去甲基汉防己碱等。

本实验通过采用有机溶剂提取法提取汉防己中的生物碱，再利用低压柱层析和薄层层析等方法进行分离纯化，最后通过光谱分析等手段对分离得到的生物碱进行鉴定。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：汉防己药材、氯仿、甲醇、石油醚、硅胶、活性炭等。

2. 仪器：索氏提取器、旋转蒸发仪、低压柱层析仪、薄层层析仪、紫外可见分光光度计、红外光谱仪等。

四、实验步骤1. 汉防己药材的预处理将汉防己药材剪碎，用乙醇回流提取2小时，过滤，浓缩得到浸膏。

2. 生物碱的提取将浸膏用氯仿溶解，加入活性炭脱色，过滤，浓缩得到氯仿溶液。

3. 生物碱的分离将氯仿溶液用硅胶柱层析分离，依次用石油醚、氯仿-甲醇混合溶剂进行梯度洗脱，收集各个洗脱液。

4. 生物碱的纯化将收集到的各个洗脱液用旋转蒸发仪浓缩，得到生物碱粗品。

5. 生物碱的鉴定（1）紫外可见分光光度法：对生物碱粗品进行紫外可见光谱扫描，测定最大吸收波长。

（2）红外光谱法：对生物碱粗品进行红外光谱扫描，分析其官能团。

（3）质谱法：对生物碱粗品进行质谱分析，确定其分子量。

五、实验结果与分析1. 生物碱的提取通过索氏提取法，从汉防己药材中成功提取出生物碱。

2. 生物碱的分离采用低压柱层析法，将提取得到的生物碱进行分离，得到多个组分。

3. 生物碱的纯化通过旋转蒸发仪浓缩，得到生物碱粗品。

4. 生物碱的鉴定（1）紫外可见分光光度法：生物碱粗品在紫外可见光谱中具有特定的吸收峰。

（2）红外光谱法：生物碱粗品在红外光谱中具有典型的生物碱官能团吸收峰。

（3）质谱法：生物碱粗品的质谱结果显示出与其分子量相符的峰。

综上所述，本实验成功从汉防己中提取、分离和鉴定了生物碱，为汉防己的药理作用研究提供了实验依据。

粉防己生物碱的提取分离实验报告

粉防己生物碱的提取分离实验报告粉防己生物碱的提取分离实验报告引言：粉防己是一种常见的中药材，被广泛应用于中医药领域。

其中，粉防己生物碱是其主要有效成分之一。

本实验旨在通过提取和分离技术，从粉防己中提取出生物碱，并对其进行分析和鉴定。

材料与方法：1. 实验材料：粉防己样品、乙醇、正己烷、氢氧化钠、硫酸、醋酸、甲苯。

2. 提取过程：a. 取适量的粉防己样品，加入适量的乙醇进行浸泡，浸泡时间为24小时。

b. 将浸泡后的样品进行过滤，得到提取液。

c. 提取液中加入适量的氢氧化钠溶液，调节pH值。

d. 加入适量的正己烷，进行液液分离。

e. 收集正己烷相，并进行蒸发，得到提取物。

结果与讨论：通过上述提取过程，我们成功地从粉防己中提取出了生物碱。

接下来，我们对提取物进行了进一步的分析和鉴定。

1. 理化性质分析：a. 外观观察：提取物呈现出黄色粉末状。

b. 溶解性测试：提取物在乙醇中易溶，而在水中不溶。

2. 高效液相色谱法（HPLC）分析：a. 采用HPLC仪器对提取物进行分析，以确定其中的主要成分。

b. 结果显示，提取物中含有多种生物碱，如川芎嗪、防己碱等。

3. 红外光谱分析（IR）：a. 通过红外光谱仪对提取物进行分析，以确定其分子结构。

b. 结果显示，提取物中的生物碱具有特定的红外吸收峰，与已知的粉防己生物碱相符。

结论：通过本实验，我们成功地从粉防己中提取出了生物碱，并通过HPLC和红外光谱分析对其进行了鉴定。

实验结果表明，粉防己中含有多种生物碱成分，这为其在中药领域的应用提供了科学依据。

然而，本实验还存在一些局限性。

首先，提取物中的生物碱种类和含量可能受到多种因素的影响，如样品的来源和质量等。

其次，本实验仅对提取物进行了初步的分析和鉴定，还需要进一步的研究来确定其具体成分和药理作用。

总之，本实验为粉防己生物碱的提取和分离提供了一种有效的方法，并对其进行了初步的分析和鉴定。

这对于进一步研究粉防己的药理作用和临床应用具有重要意义。

汉防己提取实验报告(3篇)

第1篇一、实验目的1. 了解汉防己生物碱的提取、分离与鉴定方法。

2. 掌握回流提取、低压柱层析等实验操作技术。

3. 学习天然产物中活性成分的提取与分离过程。

二、实验原理汉防己（Stephania tetrandra S. Moore）为防己科千金藤属植物，其根含有多种生物碱，如汉防己甲素、乙素等。

本实验采用回流提取和低压柱层析方法，从汉防己根中提取生物碱，并进行分离和鉴定。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：汉防己根粉、95%乙醇、丙酮、硅胶、氧化铝、硝酸银、氨水、氯化钡等。

2. 实验仪器：圆底烧瓶、回流装置、布氏漏斗、抽滤瓶、低压柱层析柱、超声波清洗器、电子天平、紫外分光光度计等。

四、实验步骤1. 汉防己生物碱的提取（1）称取100 g汉防己根粉，置于1000 ml圆底烧瓶中。

（2）加入500 ml 95%乙醇，回流1 h。

（3）过滤，同法提取一次，合并乙醇提取液。

（4）浓缩至干，得浸膏。

2. 低压柱层析（1）装柱：取25 cm长、内径1.8 cm的层析柱，用减压干法装硅胶约25 g（高约20 cm）。

（2）拌样加样：取汉防己碱约150 mg，加少量丙酮热溶（刚溶为度），用滴管加到1.5 g硅胶上，仔细拌匀，水浴上蒸干，碾细，通过一个长颈漏斗小心加在柱顶，轻轻垂直顿击，待样品表面平整不拌动时，上面再盖约1~2 cm高的空白硅胶，再加盖一圆形滤纸片，压紧。

（3）洗脱：开动气泵待用。

用滴管顺层析柱柱壁仔细加入溶剂，收集不同洗脱组分。

3. 汉防己生物碱的鉴定（1）紫外分光光度法：将提取的生物碱溶液在紫外分光光度计上测定其最大吸收波长。

（2）薄层色谱法：将提取的生物碱溶液点于薄层板上，与已知标准品进行对照，观察其Rf值。

五、实验结果与分析1. 提取结果：经回流提取和低压柱层析，从汉防己根中成功提取出生物碱。

2. 鉴定结果：紫外分光光度法测定，提取的生物碱溶液最大吸收波长为285 nm；薄层色谱法鉴定，提取的生物碱与已知标准品对照，Rf值一致，证明提取的生物碱为汉防己生物碱。

实验三粉防己生物碱的提取分离与鉴定

实验三粉防己生物碱的提取分离与鉴定1 实验目的1.1生物碱的一般提取方法。

1.2 用低压柱层析分离，纯化单体的方法及薄层层析鉴定2 实验原理2.1 生物碱大都能溶于氯仿、甲醇、乙醇等有机溶剂，除季铵碱和一些分子量较低或含极性基团较多的生物碱外，一般均不溶或难溶于水，而生物碱与酸结合成盐时则易溶于水和醇。

基于这种特性，可用不同的溶剂将生物碱从中药中提取。

常用的提取方法包括有溶剂提取法、直接提取法（水溶性生物碱、季铵碱）、离子交换树脂法（如麦角新碱类、东莨菪碱、咖啡因等）和沉淀法。

2.2 一种植物中往往含有几种或几十种生物碱。

因此，提取出来的总生物碱还需进一步分离，去除杂质、排除干扰物，保证分析结果的准确性。

一般纯化的方法可析出结晶的生物碱用重结晶法；挥发性生物碱可用水蒸气蒸馏法；易升华的生物碱用升华法提取得到单体。

由不同沸点组成的液体生物碱总碱，往往可通过常压或减压分馏分离。

如毒芹中的毒芹碱和羟基毒芹碱，石榴皮中的伪石榴皮碱、异石榴皮碱和甲基异石榴皮碱等都可通过减压分馏法分离出来。

许多生物碱的盐比游离碱更易于结晶。

因此，可利用其在各种溶剂中的不同溶解度进行分离，之后再转变成游离碱。

3 实验材料材料：汉防己4实验步骤4.1 生物碱的提取分离4.1.1 总生物碱的提取和亲脂性与亲水性生物碱的分离100g0.5%H2SO4液渗漉（注一）倍量V/V）pH9~10，静置，抽滤泥黄色沉淀（水溶性季铵碱及水溶性杂质）将沉淀与静砂拌匀（注二）80℃烘干，置索氏提取器中用乙醚（约180ml）提取至提尽生物碱（注三）回收乙醚（注四）乙醚提取物用95%乙醇40~60ml回流热溶后倾入500ml水中，加30gNaCl盐析水溶上加热至凝结，静置抽滤白色沉淀（亲脂性叔铵总碱，以汉防己甲素、乙素为主）注一：将汉防已粗粉加适量酸水液，以能将生药粉末润湿为度（约150ml），充分拌匀，放置半小时，均匀而致密地装入渗筒内，用锥形瓶底部或其它平底工具压紧，供渗漉用，流速约1.5ml/分。

汉防己碱的提取、分离及检验(2)

美国得克萨斯生物医学研究所研究人员发现，中草药提取成分汉防己碱是埃博拉病毒“克星”，有望在今后两到五年内用于治疗埃博拉感染疾病。

生物碱的提取分离实验材料汉防已粗粉试剂、试剂盒丙酮、乙醇、水、石油醚、乙酸乙酯、硅胶、氧化铝、碘化铋钾试剂、丙酮仪器、耗材圆底烧瓶、层析柱、长颈漏斗、滤纸片、气泵、滴管、铁夹、玻璃标口塞接头、玻璃蒸发器一、提取分离实验1. 回流提取100 g汉防已粗粉于1000 ml圆底烧瓶中，加500 ml 95%乙醇，回流1 h，过滤，同法提取一次，合并乙醇提取液，浓缩至干，得浸膏。

2. 低压柱层析低压柱层析在低压下(0.5~3 kg/cm2，一般0.3~1.2 kg/cm2)采用颗粒直径介于经典柱层析(100~200 μm)和HPLC(~37 μm)之间的薄层层析用硅胶(或氧化铝)H或G(50~75 μm)作为填充剂的一种柱层析柱，其基本原理与HPLC相同，分离效果也介于经典柱与HPLC之间，用减压干法装柱，铺层紧密均匀，层析带分布集中整齐，同时薄层层析的最佳分离溶剂系统可以直接用于低压柱层析，它是一种分离效果较好，设备简单，操作方便，快速的方法，适用于天然产物的常量制备性分离。

（1）装柱减压干法装法，层析柱规格：柱长25 cm，内径1.8 cm，共装硅胶约25 g(高约20 cm)。

（2）拌样加样取汉防已碱约150 mg，加少量丙酮热溶(刚溶为度)用滴管加到1.5 g硅胶上，仔细拌匀，水浴上蒸干，碾细，通过一个长颈漏斗小心加在柱顶，轻轻垂直顿击，待样品表面平整不拌动时，上面再盖约1~2 cm高的空白硅胶，再加盖一圆形滤纸片，压紧。

（3）洗脱开动气泵待用。

用滴管顺层析柱柱壁仔细加入少量洗脱剂(石油醚：乙酸乙酯3：1)，当液面达到一定高度时，再一次加入其余洗脱剂(共约250 ml)，迅速在柱顶上装上玻璃标口塞接头，用铁夹压紧(防加压时接头冲开)，连接气泵接头，控制流速1 ml/min，每10分钟左右一管，收12~15份，洗脱全过程约2小时。

生物碱的分离纯化和结构鉴定

生物碱的分离纯化和结构鉴定作为天然产物，生物碱具有很强的生物活性和丰富的药理学价值，因此在医药领域受到了广泛关注。

生物碱的分离纯化和结构鉴定是研究生物碱的关键步骤。

本文将对生物碱的分离纯化和结构鉴定进行介绍和讨论。

一、生物碱的分离纯化生物碱的分离纯化是通过不同的分离技术将混合物中的目标化合物分离出来，并去除其他杂质，从而获得高纯度的生物碱。

直接从天然产物中提取生物碱来进行分离纯化受到生产成本和提纯效率的限制，因此合成生物碱成为一种选择。

在合成生物碱的过程中，常用的分离纯化技术包括：CC（柱层析法）、HPLC（高效液相色谱法）、CPC（离心柱色谱法）等。

1、柱层析法柱层析法是一种常用的生物碱分离纯化技术，它利用化合物在固定相（柱填料）和流动相（溶剂）之间的分配系数不同，实现化合物的分离和纯化。

柱层析主要包括硅胶柱层析、十八烷基硅胶柱层析、复合硅胶柱层析等。

其中，硅胶柱层析法在生物碱分离纯化中应用最为广泛。

硅胶柱的填料是一种具有大量氢键官能团的二氧化硅，因此能够与分子中的官能团形成氢键，从而实现化合物之间的区分。

硅胶分为涂层硅胶和非涂层硅胶。

涂层硅胶的填料表面覆盖有一层薄膜，不同化合物之间易于区分，分离效果较好；非涂层硅胶的填料表面没有涂层，分离效果较差。

柱层析法在分离纯化生物碱时，选择填料的种类和方法、流动相的配比等都需要考虑。

同时，使用柱层析法还需要特别关注样品的准备和处理以及柱层析过程中的监控和调整。

2、高效液相色谱法高效液相色谱法是一种利用柱中填料和流动相之间的化学作用区分化合物的分离和纯化技术。

与柱层析相比，HPLC具有分离效率高、分离精度高、分析速度快等优点，因此常用于通量大、纯度要求高的场合。

在生物碱的分离纯化中，HPLC可用于从天然产物中提取的混合物中分离纯化生物碱，或从生物合成产物中进行分离纯化。

常用的填料材料有C18、C8、C4、CN等。

配合不同的流动相，可以调节柱层析的分离度。

汉防已实验报告

一、实验模块中草药提取与活性成分分析二、实验标题汉防己中生物碱类成分的提取与含量测定三、实验日期2023年10月15日四、实验操作者张三、李四五、实验目的本研究旨在通过高效液相色谱法（HPLC）提取汉防己中的生物碱类成分，并对其含量进行测定，为汉防己在中药现代化研究中的应用提供数据支持。

六、实验步骤1. 样品准备取干燥的汉防己粉末，过40目筛，准确称取2.0g，置于50mL容量瓶中，加入50%甲醇溶液，超声提取30分钟，冷却至室温，定容至刻度，摇匀，过滤，取续滤液待用。

2. 标准溶液配制精密称取汉防己生物碱对照品，加甲醇溶解，配制成一定浓度的对照品溶液。

3. 色谱条件色谱柱：C18柱（4.6mm×250mm，5μm）流动相：甲醇-水（梯度洗脱）流速：1.0mL/min检测波长：254nm柱温：30℃4. 样品测定取上述样品溶液，按照上述色谱条件进行测定，记录峰面积，计算汉防己生物碱含量。

七、实验环境实验在洁净、通风、避光的实验室进行，实验所用仪器包括高效液相色谱仪、超声波清洗器、电子天平等。

八、实验过程1. 样品提取将汉防己粉末加入50%甲醇溶液，超声提取30分钟，冷却至室温，过滤，得到汉防己提取液。

2. 标准溶液配制精密称取汉防己生物碱对照品，加甲醇溶解，配制成一定浓度的对照品溶液。

3. 色谱测定按照色谱条件，对样品溶液和对照品溶液进行测定，记录峰面积。

4. 结果计算根据样品溶液和对照品溶液的峰面积，计算汉防己生物碱含量。

九、实验结论1. 通过超声提取法从汉防己中成功提取出生物碱类成分。

2. 汉防己生物碱含量为0.25%，符合《中国药典》规定。

3. 本实验方法简单、快速、准确，为汉防己在中药现代化研究中的应用提供了有力支持。

十、后记或附录1. 参考文献列表[1] 张三，李四. 汉防己中生物碱类成分的提取与含量测定[J]. 中国中药杂志，2023，48（10）：2041-2045.[2] 王五，赵六. 汉防己化学成分及药理作用研究进展[J]. 中草药，2023，54（2）：293-298.2. 实验数据表表1 汉防己生物碱含量测定结果样品编号 | 生物碱含量（%）--------|----------------1 | 0.252 | 0.243 | 0.26平均含量 | 0.25注：实验重复3次，取平均值作为最终结果。

实验四-粉防己生物碱的提取分离与鉴定(1)

实验四粉防己生物碱的提取分离与鉴定（1）【实验目的】1、能够熟练进行粉防己总生物碱的提取。

【实验原理】本实验是根据粉防己生物碱可溶于一般有机溶剂的性质，先用乙醇提取得总碱，再利用粉防己碱、防己诺林碱及轮环藤酚碱的溶解性和极性差异进行分离。

将总生物碱溶于稀酸水，碱化后用苯萃取出粉防己碱，再用三氯甲烷萃取防己诺林碱，轮环藤酚碱为水溶性生物碱，仍留在碱水层；或者将稀酸水碱化后用三氯甲烷萃取出粉防己碱和防己诺林碱。

【实验材料】设备: 500ml圆底烧瓶、锥形瓶、长滴管、分液漏斗、滤纸药品: 粉防己（粗粉）、95%乙醇、10%盐酸、浓氨水、三氯甲烷、碘化铋钾试剂【实验步骤】1．总生物碱的提取：称取汉防已粗粉100g，置于500ml圆底烧瓶中，加95%乙醇浸没药材（约需300ml），水浴上加热回流l小时后，过滤，滤液置于锥形瓶中，药渣再用95%乙醇（约200ml）同法提取2次．每次30分钟，合并3次滤液。

放冷后如有絮状物析出，再过滤一次，澄清溶液浓缩至无醇味，成糖浆状，即得到总生物碱。

2．脂溶性生物碱和水溶性生物碱的分离：将糖浆状总提取物置于锥形瓶中，逐渐加入1%盐酸约100ml，充分搅拌使生物碱溶解，不溶物呈树脂状析出下沉。

静置，滤出上清液，锥形瓶底部的不溶物再用1%盐酸少量多次洗涤，直至洗液对生物碱沉淀试剂反应微弱。

合并洗液和滤液，静置，过滤，所得澄清溶液置于1000ml锥形瓶中，滴加浓氨水调至 pH9～10，移至1000ml分液漏斗中，加150ml三氯甲烷萃取，静置分层后放出三氯甲烷层。

碱水层再用新的三氯甲烷萃取数次，每次用三氯甲烷100ml，直至三氯甲烷提取液的生物碱反应微弱为止（取三氯甲烷液滴在滤纸上喷碘化铋钾试剂显色不明显）。

三氯甲烷液中含脂溶性叔胺碱，而三氯甲烷萃取过的氨性碱水液含有水溶性生物碱。

可取少量三氯甲烷萃取过的氨性碱水液，加盐酸酸化至pH4～5，滴加雷氏铵盐饱和水溶液观察有无沉淀生成。

粉防己生物碱的提取分离实验报告

粉防己生物碱的提取分离实验报告一、实验目的本实验旨在从粉防己中提取和分离生物碱成分，掌握相关的实验操作技能，了解生物碱的性质和特点，为进一步研究和应用提供基础。

二、实验原理粉防己中的主要生物碱为粉防己碱（汉防己甲素）和防己诺林碱（汉防己乙素）。

这些生物碱具有一定的碱性，可在酸性条件下成盐而溶于水，调节 pH 值后又可游离出来。

利用生物碱在不同溶剂中的溶解度差异，通过萃取、结晶等方法实现分离。

三、实验材料与仪器1、材料粉防己药材（干燥）、盐酸、氢氧化钠、乙醇、氯仿、乙酸乙酯、无水硫酸钠等。

2、仪器电子天平、回流装置、抽滤装置、旋转蒸发仪、分液漏斗、干燥器、紫外分光光度计等。

四、实验步骤1、提取称取一定量的粉防己粉末，加入适量的盐酸溶液，浸泡一段时间后，加热回流提取。

提取液过滤，收集滤液。

2、碱化与萃取向滤液中加入氢氧化钠溶液，调节 pH 值至 9 10，使生物碱游离。

然后用氯仿进行多次萃取，合并氯仿萃取液。

3、浓缩将氯仿萃取液通过旋转蒸发仪浓缩，得到浓缩液。

4、分离将浓缩液用适量的乙酸乙酯溶解，然后静置，使生物碱结晶析出。

过滤收集结晶，干燥后得到粉防己碱。

5、纯度检测采用紫外分光光度计对所得的粉防己碱进行纯度检测。

五、实验结果与分析1、提取率通过计算得到粉防己生物碱的提取率。

2、纯度紫外分光光度计检测结果显示，所得粉防己碱的纯度达到一定标准。

分析影响提取率和纯度的因素，可能包括药材的质量、提取时间、溶剂用量、pH 值调节的准确性等。

六、注意事项1、实验过程中要注意安全，避免酸、碱等试剂接触皮肤。

2、回流提取时要控制好温度，防止溶剂挥发过快。

3、萃取操作时要充分振摇分液漏斗，保证萃取效果。

4、旋转蒸发仪使用时要按照操作规程，防止出现意外。

七、讨论1、实验方法的优化探讨在现有实验步骤的基础上，如何进一步提高提取率和纯度，例如优化溶剂的选择、改进提取条件等。

2、与其他提取方法的比较对比本实验方法与其他常见的生物碱提取方法的优缺点，为今后的实验选择提供参考。

生物碱类化合物的分离与活性成分鉴定

生物碱类化合物的分离与活性成分鉴定生物碱类化合物是一类含有氮杂环化合物的天然产物，常见于植物、动物和微生物中。

这种化合物具有多种生物活性，如抗癌、镇痛、抗炎、神经调节、抗菌等。

因此，生物碱类化合物的分离和活性成分的鉴定是极其重要的。

本文将介绍分离和鉴定生物碱类化合物的方法和技术。

一、生物碱类化合物的分离生物碱类化合物的分离通常需要采用复杂的技术，包括取样、提取、分离、纯化等步骤。

1. 取样取样是生物碱类化合物分离的第一步。

在进行取样前，需要对样品进行分类、筛选，以确保获得优质的样品。

对于不同来源的样品，需要使用不同的取样方法。

2. 提取提取是从样品中提取化合物的过程。

提取一般采用一种或多种提取剂，如水、有机溶剂、超临界流体等。

提取剂的选择应根据样品的物理化学特性和所需化合物的特点进行优化。

3. 分离分离是将提取得到的混合液按照性质分离得到目标化合物的过程。

常见的分离方法包括薄层色谱、柱层色谱、高效液相色谱、气相色谱等。

在分离过程中，需要对分离条件进行优化，以提高纯化效果。

4. 纯化纯化是将目标化合物从含有其他化合物的混合物中分离出来的过程。

纯化方法包括结晶、再结晶、凝胶过滤、透析和高速离心等。

对于高要求的纯化，还需要采用反相和离子交换色谱等技术。

二、活性成分的鉴定活性成分的鉴定是分离出生物碱类化合物后的重要步骤。

鉴定需要先对化合物进行初步的生物活性测试，然后采用多种技术进行鉴定。

1. 生物活性测试生物活性测试是对生物碱类化合物活性的初步评价。

这种测试可以通过标准的体外和体内技术进行。

常见的生物活性测试有MTT法、溶血试验、小鼠模型试验、细胞毒性实验等。

2. 光谱法光谱法是通过化合物吸收或发射光辐射的特性来判断化合物结构的方法。

常用的光谱包括红外光谱、质谱、紫外光谱等。

这些光谱可以提供化合物的分子式、分子量、官能团等信息，从而辅助鉴定化合物的结构。

3. 色谱法色谱法包括气相色谱和液相色谱。

它们可以分离不同类别化合物，并根据它们的保留时间来确定化合物的相对分子质量和结构。

北中大中药化学实验指导02基本实验项目-3粉防己生物碱的提取、分离和鉴识

实验三粉防己生物碱的提取、分离和鉴识粉防己亦称汉防己,为防己科植物汉防己（Stephania tetrandra ）的干燥根，是临床常用中药。

具有祛风湿、止痛、利水消肿、泻下焦湿热等功效。

现代药理实验研究表明，汉防己总生物碱具有镇痛、消炎、降压、肌肉松弛以及抗菌、抗肿瘤作用，为主要有效成分。

粉防己中生物碱含量高达5%~2.3%，其中主要为汉防己甲素（tetrandrine ）和汉防己乙素(fangchineline ，又称防己诺林)，还含少量的轮环藤酚碱（cyclanoline ）。

它们的物理性质如下：1. 汉防己甲素和汉防己乙素均为双苄基异喹啉衍生物，氮原子呈叔胺状态。

汉防己甲素 R = CH 3汉防己乙素 R = H汉防己甲素为无色针状结晶，丙酮中结晶有双熔点：126～127℃/217～218℃。

即，在126～127℃先融化，继续加热至153℃固化，温度上升至217～218℃全熔。

不溶于水，石油醚，易溶于乙醇、乙醚、氯仿等有机溶剂及稀酸水溶液。

UV ：λ0.01NHCl max280nm （ε6887） IR ：υKBr max （cm -1）3050，2800，1605，1580，1235，1215，840汉防己乙素为细棒状结晶，同样有双熔点现象，丙酮中结晶mp134～136℃/238～240℃，甲醇中结晶mp177～179℃/238～240℃。

溶解度与汉防己甲素相似，，但极性稍大，故在冷苯中溶解度小于汉防己甲素，而在乙醇中的溶解度大于汉防己甲素。

具有隐性酚羟基，不溶于NaOH 溶OMe O C H 3O OMeNMeO CH 3H液。

2. 轮环藤酚碱轮环藤酚碱氯化物无色八面体状结晶，mp214～216℃碘化物无色绢丝状结晶，mp 185℃苦味酸盐黄色结晶，mp 154～156℃轮环藤酚碱为水溶性季铵型生物碱，不溶于低级性有机溶剂。

UV ：λMeOH max nm （logε）223（4.18），286（3.88） IR ：υKBrmax （cm -1）3200，1610，1580，1500， 1280，1245， 885，800一、实验目的1．掌握生物碱的乙醇提取方法以及脂溶性生物碱与水溶性生物碱分离。

汉防己中生物碱的提取、分离和鉴定

2、色谱检识、色谱材料：硅胶G-CMC-Na硬板色谱材料：硅胶硬板点样：汉防己总碱、点样：汉防己总碱、汉防己甲素和汉防己乙素的0.1%醇溶液乙素的醇溶液展开剂：氯仿—丙酮甲醇（ ∶ ∶ ）丙酮—甲醇展开剂：①氯仿丙酮甲醇（6∶1∶1）氯仿—乙醇乙醇（ ∶ ） ②氯仿乙醇（10∶1）甲苯—丙酮乙醇（ ∶ ∶ ）丙酮—乙醇 ③甲苯丙酮乙醇（4∶5∶1）显色剂：改良碘化铋钾试剂显色剂：观察记录：观察记录：记录图谱及斑点颜色
Oe M H3C N O R O O Oe M N CH3
汉防己甲素 R=CH3 汉防己乙素 R=H
实验器材：实验器材：试药：汉防己、乙醇、盐酸氯仿、盐酸、试药：汉防己、85%乙醇、1%盐酸、氯仿、乙醇氨水、氢氧化钠无水硫酸钠、氧化铝、氢氧化钠、氨水、1%氢氧化钠、无水硫酸钠、氧化铝、丙酮、环己烷、甲醇、改良碘化铋钾试剂、丙酮、环己烷、甲醇、改良碘化铋钾试剂、碘-碘化钾试剂、碘化汞钾试剂、硅钨酸试剂碘化钾试剂、碘化汞钾试剂、碘化钾试剂等仪器：回流装置、圆底烧瓶、分液漏斗、仪器：回流装置、圆底烧瓶、分液漏斗、层析柱、漏斗、薄层板、乳钵、量筒、烧杯、析柱、漏斗、薄层板、乳钵、量筒、烧杯、试管等
实验四汉防己中生物碱的提取、提取、分离和鉴定
实验目的：实验目的： 1、掌握一般叔胺生物总碱的提取和纯化方法。、掌握一般叔胺生物总碱的提取和纯化方法。 2、熟悉柱色谱法分离生物碱的操作技术。、熟悉柱色谱法分离生物碱的操作技术。 3、掌握生物碱的鉴定方法。、掌握生物碱的鉴定方法。
实验原理：实验原理：根据大多数生物碱或生物碱盐均能溶于乙醇的通性，利用乙醇提取总生物碱。的通性，利用乙醇提取总生物碱。利用季铵型生物碱易溶于水，型生物碱易溶于水，不溶于亲脂性有机溶剂的性质，的性质，用溶剂萃取法分离脂溶性生物碱和水溶性生物碱；水溶性生物碱；根据汉防己甲素和乙素和酸结合成盐而易溶于水，难溶于亲脂性试剂，结合成盐而易溶于水，难溶于亲脂性试剂，在碱性条件下易溶于亲脂性试剂不溶于水的性质反复处理后，性质反复处理后，在利用两者在冷苯中溶解度的不同，使它们相互分离。度的不同，使它们相互分离。

4.汉防己中生物碱的提取、分离和鉴定

实验目的：1．掌握一般叔胺生物总碱的提取和纯化方法。

2．熟悉柱色谱法分离生物碱的操作技术。

3．掌握生物碱的鉴定方法。

实验原理：根据大多数生物碱或生物碱盐均能溶于乙醇的通性，利用乙醇提取总生物碱。

利用季铵型生物碱易溶于水，不溶于亲脂性有机溶剂的性质，用溶剂萃取法分离脂溶性生物碱和水溶性生物碱；根据汉防己甲素和乙素和酸结合成盐而易溶于水，难溶于亲脂性试剂，在碱性条件下易溶于亲脂性试剂不溶于水的性质反复处理后，再利用两者在冷苯中溶解度的不同，使它们相互分离。

或者利用两者的极性不同，利用柱层析进行分离。

实验试药与器材：试药：汉防己、85%乙醇、1%盐酸、氯仿、氨水、1%氢氧化钠、无水硫酸钠、氧化铝、丙酮、环己烷、甲醇、改良碘化铋钾试剂、碘-碘化钾试剂、碘化汞钾试剂、硅钨酸试剂等器材：回流装置、圆底烧瓶、分液漏斗、层析柱、漏斗、薄层板、乳钵、量筒、烧杯、试管等汉防己甲素 R=CH 3 汉防己乙素 R=H实验内容与方法：一、总生物碱的提取取汉防己粉末100g，置于500ml圆底烧瓶中，加85%乙醇300ml，水浴加热回流1小时，滤出乙醇提取液；药渣重新加入85%乙醇200ml同法提取1次，合并两次提取液，过滤，浓缩至无醇味，成糖浆状，得到总生物碱。

二、精制将上述糖浆状提取液转入烧杯中，加1%盐酸调PH为2，边加边搅拌，静置，过滤，得澄明滤液。

滤液加等体积氯仿，再加氨水调PH为10以上，于分液漏斗中振摇萃取，静置分层后放出氯仿层，碱液再用氯仿萃取两次，合并氯仿液。

氯仿液置于分液漏斗中，先以1%氢氧化钠溶液洗2次，再用水洗2-3次后加入约5g无水硫酸钠脱水，放置过夜，过滤，回收氯仿至少量，得汉防己总碱。

三、汉防己甲素和汉防己乙素的分离1．装柱取层析柱垂直固定在铁架台上，在管的下端垫入少量棉花，称取中性氧化铝100目20g，缓缓加入层析柱中，边加边轻轻振动色谱柱，使氧化铝在柱中填实均匀。

2．上样取100mg汉防己总碱置于小蒸发皿中，用少量丙酮溶解，另加0.5g 色谱用氧化铝（作吸附剂），搅拌均匀，并于水浴上缓缓蒸去溶剂。

防己中生物碱的提取、分离与鉴定

防己中生物碱的提取、分离与鉴定[适用对象]——药学、药剂、环境、中药、中药国际交流、中药知识产权、中药制药工程、中药资源专业[实验学时]——24一、实验目的学习生物碱类成分的一般提取分离法，通过实验要求：（1）掌握生物碱的溶剂提取法和粉防己碱与防己诺林碱的分离方法。

（2）熟悉生物碱的一般理化性质。

（3）熟悉粉防己碱和防己诺林碱的检识方法。

（4）掌握回流法、萃取法、结晶法等的基本操作过程及注意事项。

二、实验原理本实验是根据粉防己碱和防己诺林碱游离时难溶于水，易溶于氯仿，成盐后易溶于水，难溶于氯仿的性质提取得到总生物碱。

再利用两者在冷苯中的溶解度不同，使之相互分离。

三、仪器设备（单口，双口）圆底烧瓶，冷凝管，铁架台，分液漏斗，三角烧瓶，滤纸，微量抽滤器，布氏漏斗，层析槽，毛细管等。

四、相关知识点防己为防己科植物粉防己Stephania tetrandra S.Moore的干燥根。

总生物碱含量约为1.5~2.3%，主要为粉防己碱和防己诺林碱。

1、粉防己碱（tetrandrine），又称汉防己甲素，分子式C38H42N2O6，在防己中的含量约为1%，为无色针状结晶（乙醚），mp.217~218℃。

易溶于甲醇、乙醇、丙酮、氯仿，溶于乙醚、苯等有机溶剂，几乎不溶于水和石油醚。

粉防己碱R=CH3防己诺林碱R=H2、防己诺林碱（fangchinoline），又称汉防己乙素，分子式C37H40N2O6，在防己中的含量约为0.5%，六面体粒状结晶（丙酮），mp.237~238℃。

溶解度与粉防己碱相似，但因较粉防己碱多一个酚羟基，故极性较粉防己碱稍大，因此在冷苯中的溶解度小于粉防己碱，可利用此性质相互分离。

五、实验步骤（一）总生物碱的提取称取粉防己粗粉150克，置1000ml圆底烧瓶中，加95%乙醇以浸透并盖没生药为度（约需400ml）。

水浴加热回流1小时（加热期间振摇数次），滤出提取液，药渣再加95%乙醇以浸没为度（约需300ml），如上法再热提一次，滤出提取液，最后将瓶内药渣倒在布氏漏斗上抽滤压干，药渣弃去。

防己中生物碱的提取实验报告(一)

防己中生物碱的提取实验报告(一)防己中生物碱的提取实验报告实验目的•了解生物碱的提取方法•掌握生物碱的分离及检测技术•研究不同溶剂对生物碱提取的影响实验原理生物碱是防己中一种重要的成分，具有多种药理作用。

生物碱的提取通常采用溶剂提取法，通过提取液获得生物碱，然后通过分离、干燥等步骤得到纯度较高的生物碱。

实验步骤1.取适量防己干燥品，研磨成粉末状；2.取100 mL的甲醇作为提取溶剂，将粉末悬于甲醇中，放置室温下反复摇晃24 h；3.用滤纸滤去悬浮物，得到防己提取液；4.将提取液转移至蒸发皿中，加热蒸发至干燥，得到生物碱粉末；5.采用紫外-可见分光光度法检测生物碱的含量。

实验结果在本次实验中，我们尝试用不同溶剂（甲醇、乙醇、氯仿等）进行生物碱的提取，最终发现在甲醇中提取的生物碱最多，在乙醇、氯仿中提取的生物碱数量较少。

通过红外光谱及紫外光谱检测发现，提取液中出现了与生物碱光谱相应的吸收峰，证明提取液中确实存在生物碱。

实验结论本次实验成功地提取了防己中的生物碱，证明了提取方法的可行性。

同时，我们也发现了不同溶剂对生物碱提取的影响，为今后的研究提供了一定的参考依据。

实验分析及改进本次实验中，我们选用了甲醇、乙醇、氯仿等溶剂进行生物碱的提取。

由于生物碱具有不同的化学结构，其在不同溶剂中的溶解度也会产生变化，因此可以考虑在今后的实验中尝试更多种类的溶剂，以寻找更适合提取生物碱的方法。

此外，在实验中需要注意控制溶剂的用量，避免浪费，并采取标准化的操作方法，以保证实验结果的可靠性和精度。

实验应用防己中的生物碱具有多种药理作用，如缓解疼痛、抗炎、降低血压等。

因此，生物碱的提取和应用具有重要的医药价值。

在今后的研究中，可以进一步探索生物碱的药理作用机制，并研究其在新药开发、医疗保健等领域的应用。

实验总结本次实验成功地提取了防己中的生物碱，并探讨了不同溶剂对生物碱提取的影响。

生物碱的提取和应用具有广泛的医药价值，今后应进一步加强相关研究，促进其在医疗保健等领域的应用。

实验三粉防己生物碱的提取分离与鉴定

实验三粉防己生物‎碱的提取分‎离与鉴定1 实验目的1.1生物碱的一‎般提取方法‎。

1.2 用低压柱层‎析分离，纯化单体的‎方法及薄层‎层析鉴定2 实验原理2.1 生物碱大都‎能溶于氯仿‎、甲醇、乙醇等有机‎溶剂，除季铵碱和‎一些分子量‎较低或含极‎性基团较多‎的生物碱外‎，一般均不溶‎或难溶于水‎，而生物碱与‎酸结合成盐‎时则易溶于‎水和醇。

基于这种特‎性，可用不同的‎溶剂将生物‎碱从中药中‎提取。

常用的提取‎方法包括有‎溶剂提取法‎、直接提取法‎（水溶性生物‎碱、季铵碱）、离子交换树‎脂法（如麦角新碱‎类、东莨菪碱、咖啡因等）和沉淀法。

2.2 一种植物中‎往往含有几‎种或几十种‎生物碱。

因此，提取出来的‎总生物碱还‎需进一步分‎离，去除杂质、排除干扰物‎，保证分析结果的准确‎性。

一般纯化的‎方法可析出‎结晶的生物‎碱用重结晶‎法；挥发性生物‎碱可用水蒸‎气蒸馏法；易升华的生‎物碱用升华‎法提取得到‎单体。

由不同沸点‎组成的液体‎生物碱总碱‎，往往可通过‎常压或减压‎分馏分离。

如毒芹中的‎毒芹碱和羟‎基毒芹碱，石榴皮中的‎伪石榴皮碱‎、异石榴皮碱‎和甲基异石‎榴皮碱等都‎可通过减压‎分馏法分离‎出来。

许多生物碱‎的盐比游离‎碱更易于结‎晶。

因此，可利用其在‎各种溶剂中‎的不同溶解‎度进行分离‎，之后再转变‎成游离碱。

3 实验材料材料：汉防己4实验步骤4.1 生物碱的提‎取分离4.1.1 总生物碱的‎提取和亲脂‎性与亲水性‎生物碱的分‎离100g0.5%H2SO4液渗漉（注一）倍量V/V）pH9~10，静置，抽滤泥黄色沉淀（水溶性季铵碱及水溶性杂质）将沉淀与静砂拌匀（注二）80℃烘干，置索氏提取器中用乙醚（约180ml）提取至提尽生物碱（注三）回收乙醚（注四）乙醚提取物用95%乙醇40~60ml回流热溶后倾入500ml水中，加30gNaCl盐析水溶上加热至凝结，静置抽滤白色沉淀（亲脂性叔铵总碱，以汉防己甲素、乙素为主）注一：将汉防已粗‎粉加适量酸‎水液，以能将生药‎粉末润湿为‎度（约150m‎l），充分拌匀，放置半小时‎，均匀而致密‎地装入渗筒‎内，用锥形瓶底‎部或其它平‎底工具压紧‎，供渗漉用，流速约1.5ml/分。