大小型层析柱的装填实践介绍(中文)
（完整word版）层析柱使用方法
（完整word版）层析柱使用方法层析柱使用方法层析柱使用方法柱层析和TLC是有机化学工作者必须下苦功夫的两项实验技术。
这两项技术掌握与否，对于提高实验的效率至关重要。
常见的例子是：在柱层析时，由于层析柱中的硅胶填料装得不均匀（没有填严实），使得柱子在淋洗过程中就因为出现太多气泡变花，导致分离效果不好。
更常见的例子是：层析柱虽然装得不错，但是由于淋洗剂选择不恰当，结果导致几十毫克产品，用了几百毫升淋洗剂都还没有完全分离。
分离同样的东西，熟手可能只需要半个小时，而一个层析技术不过关的人可能半天都不能得到纯品。
由此可见，这两项技术掌握与否，对于提高工作效率，减轻工作量，减少有机溶剂的使用，从而对身心健康和环境保护都有明显的作用。
柱层析关键在于柱子是否装好和淋洗剂是否选择恰当。
而淋洗剂的选择则是通过TLC 确定。
这里要指出的一点是：TLC的作用除了跟踪反应进程，检测试剂和原料纯度外，一个重要的用途就是为柱层析选择适当的淋洗剂。
首先谈柱层析：1：装柱子（添硅胶）时，有两种方法：即湿法装柱和干法装柱，二者各有优劣。
不论干法还是湿法，硅胶（固定相）的上表面一定要平整，并且硅胶（固定相）的高度一般为15cm左右，太短了可能分离效果不好，太长了也会由于扩散或拖尾导致分离效果不好。
湿法装柱：是先把硅胶用适当的溶剂拌匀后，再填入柱子中，然后再加压用淋洗剂“走柱子”，本法最大的优点是一般柱子装的比较结实，没有气泡。
干法装柱：则是直接往柱子里填入硅胶，然后再轻轻敲打柱子两侧，至硅胶界面不再下降为止，然后再填入硅胶至合适高度，最后再用油泵直接抽，这样就会使得柱子装的很结实。
接着是用淋洗剂“走柱子”，一般淋洗剂是采用TLC分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂。
通常上面加压，下面再用油泵抽，这样可以加快速度。
干法装柱较方便，但最大的缺陷在于“走柱子”时，由于溶剂和硅胶之间的吸附放热（可以用手摸柱子明显感觉到），容易产生气泡，这一点在使用低沸点的淋洗剂时如乙醚，二氯甲烷更为明显。
柱层析实验报告
柱层析分离色素一、【实验目的】1．了解柱层析的分类，掌握各种柱层析的原理。
2．熟练掌握吸附层析的原理和操作技术。
二、【实验原理】叶绿体色素是植物吸收太阳光能进行光合作用的重要物质，主要有叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。
从植物叶片中提取和分离叶绿体色素是对其认识和了解的前提。
利用叶绿体色素能溶于有机溶剂的特性，可用95%乙醇或无水乙醇提取。
分离色素的方法有多种，如纸层析、柱层析等。
柱层析法是色谱法中的一种，它是根据混合物中各组分对固定相的吸附能力，以及对洗脱剂（即移动相）的溶解度不同将各组分分离。
常用的柱色谱有吸附色柱谱和分配柱色谱两类。
吸附柱色谱通常是在玻璃管中填入表面积很大，经过活化的多孔性物质或粉状固体作为吸附剂（如氧化铝或硅胶），当混合物的溶液流经吸附柱时，就被吸附在柱的上端，然后从柱顶加入溶剂（洗脱剂）洗脱。
由于不同化合物在吸附柱上的吸附能力不同，在同一溶剂中的溶解度也不同，因此各组分随溶剂以不同速度下移，形成色带。
继续用溶剂洗脱，吸附能力最弱的组分就随溶剂首先流出，整个层析过程进行反复的吸附-解析-再吸附-再解吸。
用柱层析法可以分别收集各组分，并逐个鉴定。
本实验是把三氧化二铝填入玻璃管中（压成柱状）作为吸附剂，将叶绿体色素的石油醚提取液倾于吸附柱上，色素即被吸附。
由于色素的种类不同，被吸附的强弱不同，就在吸附柱上排列成为不同的色层，再利用吸附剂在不同溶剂中有不同的吸附力，用不同的溶剂进行洗脱，从而达到叶绿体主要的4种色素（叶绿素a、叶绿素b、叶黄素、胡萝卜素）的分离。
三、【实验材料】原料：新鲜的菠菜叶试剂：1．无水乙醇或95%乙醇 5.三氧化二铝2．石英砂 6．饱和氯化钠溶液3．丙酮 7.水硫酸钠4．石油醚（60-90℃） 8洗脱液：丙酮：石油醚＝1：9 器材：层析柱（1×30cm），研钵，蒸馏装置，脱脂棉，天平，烧杯，过滤漏斗，玻璃棒，锥形瓶，分液漏斗，试管，铁架台四、【实验操作】1．色素的提取：20克菠菜，加少许石英砂，再加20毫升无水乙醇研磨成浆，脱脂棉过滤，保存滤液，滤渣再用无水乙醇提取一次，合并滤液，滤渣再加入30毫升石油醚提取一次，过滤，合并滤液，转移至分液漏斗中,再加入40毫升饱和氯化钠溶液震荡，弃去下层溶液，再分别加入20毫升水震荡洗涤几次，直至下层无色，保留上层溶液，转移至三角瓶中，加入无水硫酸钠干燥5分钟，备用. 2．样品的浓缩：将提取液放入蒸馏烧瓶中，蒸除多余的石油醚，至剩余液体5-8毫升左右，以备加样使用。
层析柱装填要点和要求
层析柱装填要点和要求
1. 嘿，一定要注意啊，装填层析柱的时候，颗粒大小可不能马虎呀！就像建房子，砖的大小得合适吧。
比如说用硅胶装填，颗粒太大或太小，效果能好吗？
2. 别忘了均匀装填呀！你想想，要是填得乱七八糟的，那不就像走在坑坑洼洼的路上，能顺顺畅畅吗？比如说填的时候东一块西一块的，那怎么行！
3. 要把气泡赶跑啊！气泡在里面就像个捣蛋鬼，会坏事的呀！就好比你吃饭的时候有颗沙子，多难受啊。
比如装的时候不小心混进了气泡，得想办法弄出去呀。
4. 压实也很关键呀！松松垮垮的可不行，这就好像搭积木不压实会倒一样。
比如说随便弄弄，那后续分离还能靠谱吗？
5. 速度不能太快也不能太慢啊！快了容易出问题，慢了又耽误时间。
就像开车，太快危险，太慢也急人。
比如填充的时候没把握好速度，那不就糟糕了。
6. 注意柱子的垂直哦！歪歪扭扭的可不像话，就跟站没站相一样。
比如说没放垂直，那后续操作能顺利吗？
7. 清洗干净也超级重要！脏兮兮的怎么用啊，就像你穿脏衣服出门一样。
比如装填前不认真清洗，那不是给自己找麻烦嘛。
8. 还有啊，多检查几遍呀！不检查怎么能放心呢，就像考试不检查会丢分一样。
比如说填完了就不管了，万一有问题呢！总之啊，装填层析柱这些要点和要求一定得认真对待，这样才能得到好的结果呀！。
层析柱装柱流程范文
层析柱装柱流程范文层析柱(CLC)是一种分离和纯化化学物质的常用技术。
它在许多领域，包括制药、生物化学、环境科学和食品科学中广泛应用。
层析柱装柱流程是在层析柱中装填填料的过程，决定着柱的分离性能和吸附能力。
下面是一种常见的层析柱装柱流程:1.准备填料首先需要选择适当的填料。
填料的选择取决于分离目标和样品特性。
常见的填料包括硅胶、脱色树脂、离子交换树脂和凝胶颗粒等。
填料应具有一定的吸附能力，能够与目标物发生相互作用。
2.准备柱子将柱子清洗干净，并根据填料的尺寸调整柱子的高度。
柱子可以是玻璃柱、不锈钢柱或塑料柱，具体选择取决于实验要求。
3.浸泡填料将填料放入容器中，加入合适的溶剂。
浸泡填料有助于去除可能存在的杂质，提高填料表面的活性。
可以根据填料类型和实验要求调整浸泡时间，一般需要几小时到几天。
4.烘干填料将浸泡过的填料放入烘箱中或暴露在室温下进行干燥。
烘干填料有助于去除残留的溶剂，使填料能够更好地保持其结构和吸附性能。
5.装填填料将干燥的填料均匀地倒入柱子中。
填料的层高度应根据实验要求调整，一般为柱子高度的1/3到2/3、填料应当尽量均匀地分布在柱子中，以确保有效的分离效果。
6.压实填料使用压实设备或手动敲击柱子，将填料压缩和固定在柱子中。
压实的目的是增加填料的堆积密度，减少填料颗粒之间的间隙，提高分离效果。
压实的程度应根据填料类型和实验要求进行调整。
7.洗涤柱子将柱子与适当的溶剂进行冲洗，以去除可能存在的杂质和残留的溶剂。
洗涤的选择取决于填料和实验要求。
洗涤过程可以重复几次，直到柱子完全清洁。
8.储存柱子装填完成后，柱子可以进行包装或储存。
柱子应存放在阴凉干燥的地方，以保持填料的性能和活性。
柱层析实验报告
柱层析分离色素一、【实验目的】1．了解柱层析的分类，掌握各种柱层析的原理。
2．熟练掌握吸附层析的原理和操作技术。
二、【实验原理】叶绿体色素是植物吸收太阳光能进行光合作用的重要物质，主要有叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。
从植物叶片中提取和分离叶绿体色素是对其认识和了解的前提。
利用叶绿体色素能溶于有机溶剂的特性，可用95%乙醇或无水乙醇提取。
分离色素的方法有多种，如纸层析、柱层析等。
柱层析法是色谱法中的一种，它是根据混合物中各组分对固定相的吸附能力，以及对洗脱剂（即移动相）的溶解度不同将各组分分离。
常用的柱色谱有吸附色柱谱和分配柱色谱两类。
吸附柱色谱通常是在玻璃管中填入表面积很大，经过活化的多孔性物质或粉状固体作为吸附剂（如氧化铝或硅胶），当混合物的溶液流经吸附柱时，就被吸附在柱的上端，然后从柱顶加入溶剂（洗脱剂）洗脱。
由于不同化合物在吸附柱上的吸附能力不同，在同一溶剂中的溶解度也不同，因此各组分随溶剂以不同速度下移，形成色带。
继续用溶剂洗脱，吸附能力最弱的组分就随溶剂首先流出，整个层析过程进行反复的吸附-解析-再吸附-再解吸。
用柱层析法可以分别收集各组分，并逐个鉴定。
本实验是把三氧化二铝填入玻璃管中（压成柱状）作为吸附剂，将叶绿体色素的石油醚提取液倾于吸附柱上，色素即被吸附。
由于色素的种类不同，被吸附的强弱不同，就在吸附柱上排列成为不同的色层，再利用吸附剂在不同溶剂中有不同的吸附力，用不同的溶剂进行洗脱，从而达到叶绿体主要的4种色素（叶绿素a、叶绿素b、叶黄素、胡萝卜素）的分离。
三、【实验材料】原料：新鲜的菠菜叶试剂：1．无水乙醇或95%乙醇 5.三氧化二铝2．石英砂 6．饱和氯化钠溶液3．丙酮 7.水硫酸钠4．石油醚（60-90℃） 8洗脱液：丙酮：石油醚＝1：9 器材：层析柱（1×30cm），研钵，蒸馏装置，脱脂棉，天平，烧杯，过滤漏斗，玻璃棒，锥形瓶，分液漏斗，试管，铁架台四、【实验操作】1．色素的提取：20克菠菜，加少许石英砂，再加20毫升无水乙醇研磨成浆，脱脂棉过滤，保存滤液，滤渣再用无水乙醇提取一次，合并滤液，滤渣再加入30毫升石油醚提取一次，过滤，合并滤液，转移至分液漏斗中,再加入40毫升饱和氯化钠溶液震荡，弃去下层溶液，再分别加入20毫升水震荡洗涤几次，直至下层无色，保留上层溶液，转移至三角瓶中，加入无水硫酸钠干燥5分钟，备用. 2．样品的浓缩：将提取液放入蒸馏烧瓶中，蒸除多余的石油醚，至剩余液体5-8毫升左右，以备加样使用。
层析柱装填高度
层析柱装填高度摘要：一、层析柱简介1.层析柱的概念2.层析柱的分类3.层析柱的作用二、层析柱装填高度的重要性1.装填高度对层析效果的影响2.装填高度与样品移动速度的关系3.装填高度与分辨率的关系三、层析柱装填高度的确定1.理论计算法2.实验测定法3.经验公式法四、装填高度的调整与优化1.装填高度的调整2.装填高度的优化策略3.装填高度调整与优化的实际应用正文：层析柱是色谱分离技术中常用的分离介质，对于样品的分离起着关键作用。
本文主要探讨了层析柱装填高度的重要性及其确定方法。
首先，层析柱装填高度对层析效果具有重要影响。
适当的装填高度可以保证样品在柱中发生有效的分离，从而提高柱的分离效果。
装填高度不足可能导致分离效果不佳，而过度装填则可能使样品在柱中扩散不均，影响分离效果。
其次，装填高度与样品在柱中的移动速度密切相关。
在一定范围内，装填高度越高，样品在柱中的扩散阻力越大，从而降低样品的移动速度。
这会对分离效果产生一定影响，因此需要在实际操作中权衡。
此外，装填高度还会影响柱的分辨率。
适当的装填高度有利于提高柱的分辨率，从而实现样品的有效分离。
在实际操作中，确定层析柱装填高度的方法有理论计算法、实验测定法和经验公式法。
理论计算法是通过计算样品在柱中的扩散系数来确定装填高度；实验测定法是通过实际操作，根据样品在柱中的分离效果来调整装填高度；经验公式法是参照已有的实验数据，根据经验公式来确定装填高度。
最后，装填高度的调整与优化是提高柱分离效果的关键。
在实际操作中，可以通过调整装填高度、优化流动相和梯度条件等方法来提高柱的分离效果。
柱层析实验报告
柱层析分离色素一、【实验目的】1．了解柱层析的分类，掌握各种柱层析的原理。
2．熟练掌握吸附层析的原理和操作技术。
二、【实验原理】叶绿体色素是植物吸收太阳光能进行光合作用的重要物质，主要有叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。
从植物叶片中提取和分离叶绿体色素是对其认识和了解的前提。
利用叶绿体色素能溶于有机溶剂的特性，可用95%乙醇或无水乙醇提取。
分离色素的方法有多种，如纸层析、柱层析等。
柱层析法是色谱法中的一种，它是根据混合物中各组分对固定相的吸附能力，以及对洗脱剂（即移动相）的溶解度不同将各组分分离。
常用的柱色谱有吸附色柱谱和分配柱色谱两类。
吸附柱色谱通常是在玻璃管中填入表面积很大，经过活化的多孔性物质或粉状固体作为吸附剂（如氧化铝或硅胶），当混合物的溶液流经吸附柱时，就被吸附在柱的上端，然后从柱顶加入溶剂（洗脱剂）洗脱。
由于不同化合物在吸附柱上的吸附能力不同，在同一溶剂中的溶解度也不同，因此各组分随溶剂以不同速度下移，形成色带。
继续用溶剂洗脱，吸附能力最弱的组分就随溶剂首先流出，整个层析过程进行反复的吸附-解析-再吸附-再解吸。
用柱层析法可以分别收集各组分，并逐个鉴定。
本实验是把三氧化二铝填入玻璃管中（压成柱状）作为吸附剂，将叶绿体色素的石油醚提取液倾于吸附柱上，色素即被吸附。
由于色素的种类不同，被吸附的强弱不同，就在吸附柱上排列成为不同的色层，再利用吸附剂在不同溶剂中有不同的吸附力，用不同的溶剂进行洗脱，从而达到叶绿体主要的4种色素（叶绿素a、叶绿素b、叶黄素、胡萝卜素）的分离。
三、【实验材料】原料：新鲜的菠菜叶试剂：1．无水乙醇或95%乙醇 5.三氧化二铝2．石英砂 6．饱和氯化钠溶液3．丙酮 7.水硫酸钠4．石油醚（60-90℃） 8洗脱液：丙酮：石油醚＝1：9 器材：层析柱（1×30cm），研钵，蒸馏装置，脱脂棉，天平，烧杯，过滤漏斗，玻璃棒，锥形瓶，分液漏斗，试管，铁架台四、【实验操作】1．色素的提取：20克菠菜，加少许石英砂，再加20毫升无水乙醇研磨成浆，脱脂棉过滤，保存滤液，滤渣再用无水乙醇提取一次，合并滤液，滤渣再加入30毫升石油醚提取一次，过滤，合并滤液，转移至分液漏斗中,再加入40毫升饱和氯化钠溶液震荡，弃去下层溶液，再分别加入20毫升水震荡洗涤几次，直至下层无色，保留上层溶液，转移至三角瓶中，加入无水硫酸钠干燥5分钟，备用.2．样品的浓缩：将提取液放入蒸馏烧瓶中，蒸除多余的石油醚，至剩余液体5-8毫升左右，以备加样使用。
层析柱装柱注意事项
层析柱装柱注意事项《层析柱装柱那些事儿》嘿，朋友们！今天咱来聊聊层析柱装柱这档子事儿。
这可真是个技术活，稍有不慎，那后果可是不堪设想啊！首先，选柱子就像找对象一样，得找个合适的。
尺寸得匹配你的实验需求，不然就像小脚穿大鞋或者大脚挤小鞋，都难受。
这柱子要是选错了，后面的事儿可就不好办喽。
然后，就是填料啦！这填料就像是柱子的灵魂，得好好对待。
千万别毛手毛脚地把它弄得到处都是，不然就像撒了一地的珍珠，心疼着呢。
装填料的时候，要慢慢地、轻轻地，就像给宝贝穿衣服一样，小心翼翼的。
还有啊，装柱的时候可得保持耐心。
这可不是着急就能搞定的事儿，得慢慢把填料压实，不能有气泡。
就好像盖房子打地基一样，得结实，不然房子可就要歪歪扭扭啦！有时候，我就觉得自己像是一个雕塑大师，在精心雕琢我的作品。
说起气泡，那可真是讨厌的家伙！一旦有气泡在里面，就像一个隐藏的炸弹，随时可能爆炸，让你的实验化为泡影。
所以啊，得时刻警惕着，一有气泡冒出来，就得赶紧把它赶跑。
记得有一次，我着急忙慌地装柱，结果填料没压实，实验做得一塌糊涂。
那心情啊，简直比丢了钱包还难受。
从那以后，我就吸取教训了，装柱的时候再也不马虎了。
另外，装柱的过程中也得注意保持环境卫生哦！别搞得乱七八糟的，不然被导师看到了，那可少不了一顿批评。
咱可得把实验台收拾得干干净净的，就像自己的小天地一样。
总之，层析柱装柱虽然看似简单，实则暗藏玄机。
咱们可得用心对待，就像对待自己最喜欢的玩具一样。
只有这样，才能保证实验的顺利进行，得到我们想要的结果。
好啦，今天就跟大家分享这些。
希望我的这些经验和感受能对你们有所帮助，让你们在装柱的道路上少走些弯路。
祝大家实验顺利，都能成为层析柱装柱的高手！哈哈！。
大小型层析柱的装填实践介绍
大小型层析柱的装填实践介绍层析柱是一种常用的分离技术仪器，广泛应用于生化、药学、环境分析等领域。
其原理是利用样品在固定相和移动相间的相互作用下，通过各自不同的迁移速率，从而实现混合物各组分的分离。
一般情况下，层析柱包括大型和小型两种。
下面将讨论这两种层析柱的装填实践介绍。
首先是大型层析柱的装填实践。
大型层析柱一般适用于样品量较大的情况，例如工业生产中的在线层析分离。
其装填实践主要包括以下几个步骤。
第一步是选择合适的填料。
选择填料是大型层析柱装填实践中的关键步骤。
一般情况下，需要根据样品的性质和分离要求来选择合适的填料。
常见的填料有硅胶、Sephadex、糖果胶等。
填料的选择应该考虑到颗粒大小、比表面积、孔隙结构等因素。
第二步是准备填料。
填料在装填前一般需要经过一系列处理，以提高其分离效果。
常见的处理方法包括洗涤、干燥和激活等。
洗涤可以去除填料表面的杂质，干燥可以除去填料中的水分，而激活可以增加填料的活性。
第三步是装填填料。
在装填填料之前，需要将填料与层析柱的内壁润湿。
一般使用的方法是将填料悬浮在适量的移动相中，然后缓慢注入到层析柱中。
装填填料时应注意层析柱的填料层高度和均匀度，以保证分离效果。
第四步是压实填料。
压实填料是装填实践中的重要步骤，可以提高填料层的均一性和稳定性。
压实填料时，可以利用酒精、氮气或专用的装填仪器进行。
压实填料时应注意避免填料的堵塞和破碎。
第五步是检查填料层的质量。
填料层质量的检查可以通过观察填料层的均匀性、密实度和干燥程度来进行。
如果发现填料层存在问题，可以进行调整或更换。
以上是大型层析柱的装填实践介绍，下面我们将介绍小型层析柱的装填实践。
小型层析柱一般适用于实验室规模的研究或分析。
其装填实践与大型层析柱的装填实践相似，但由于样品量较小，操作上相对简单。
其装填实践主要包括以下几个步骤。
第一步是选择合适的填料。
填料的选择原则与大型层析柱相同，根据样品的性质和分离要求来选择合适的填料。
层析柱装填高度
层析柱装填高度（最新版）目录1.层析柱的概念及分类2.层析柱装填高度的定义3.层析柱装填高度的影响因素4.层析柱装填高度的测量方法5.层析柱装填高度的优化正文层析柱，又称为色谱柱，是一种用于色谱分析的装置，主要用于样品的分离和检测。
根据固定相的不同，层析柱可以分为气相色谱柱、液相色谱柱和薄层色谱柱等。
在色谱分析过程中，层析柱的装填高度对分析结果具有重要影响。
层析柱装填高度指的是色谱柱中固定相填充物的高度，通常用毫米（mm）表示。
装填高度的选择会影响到色谱柱的分离效果、保留时间和峰形等。
为了获得较好的分离效果，需要在装填高度、柱效和分离度之间寻求平衡。
影响层析柱装填高度的因素主要有以下几点：1.固定相的种类和颗粒大小：不同种类的固定相具有不同的比表面积和孔隙结构，颗粒大小对装填高度也有影响。
一般来说，颗粒越小，装填高度越高。
2.色谱柱的直径：色谱柱直径的大小会影响到固定相填充物的装填量，直径越大，装填高度越高。
3.色谱柱的长度：色谱柱长度的增加会导致样品在柱中的保留时间增加，从而影响分离效果。
因此，需要在保证分离效果的前提下，选择合适的色谱柱长度。
测量层析柱装填高度的方法有：1.称重法：通过称取固定相前后的重量，计算装填高度。
2.目测法：根据色谱柱中填充物的高度进行估计。
3.液柱法：在柱中加入一定体积的流动相，根据液柱高度计算装填高度。
为了优化层析柱装填高度，可以采取以下措施：1.选择合适的固定相：根据样品的特性，选择合适的固定相种类和颗粒大小。
2.控制装填压力：在填充固定相时，应控制好装填压力，避免压力过大导致填充物压缩。
3.选择合适的色谱柱直径和长度：根据实验需求，选择合适的色谱柱直径和长度，以满足分离效果和柱效的要求。
总之，层析柱装填高度是影响色谱分析结果的重要因素。
层析柱的干法湿法填充和相关知识
层析柱装填及相关常识常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。
我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。
由于柱分的经验成分太多，所以下面我就几年来过柱的体会写些心得，希望能有所帮助。
1、柱子可以分为：加压，常压，减压压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。
所以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但是时间也最长，比如天然化合物的分离，一个柱子几个月也是有的。
减压柱能够减少硅胶的使用量，感觉能够节省一半甚至更多，但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发（有时在柱子外面有水汽凝结），以及有些比较易分解的东西可能得不到，而且还必须同时使用水泵抽气（很大的噪音，而且时间长）。
以前曾经大量的过减压柱，对它有比较深厚的感情，但是自从尝试了加压后，就几乎再也没动过减压的念头了。
加压柱是一种比较好的方法，与常压柱类似，只不过外加压力使淋洗剂走的快些。
压力的提供可以是压缩空气，双连球或者小气泵（给鱼缸供气的就行）。
特别是在容易分解的样品的分离中适用。
压力不可过大，不然溶剂走的太快就会减低分离效果。
个人觉得加压柱在普通的有机化合物的分离中是比较适用的。
2、关于柱子的尺寸，应该是粗长的最好柱子长了，相应的塔板数就高。
柱子粗了，上样后样品的原点就小（反映在柱子上就是样品层比较薄），这样相对的减小了分离的难度。
试想如果柱子十厘米，而样品就有二厘米，那么分离的难度可想而知，恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。
而如果样品层只有0.5厘米，那么各组分就比较容易得到完全分离了。
当然采用粗大的柱子要牺牲比较多的硅胶和溶剂了，不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了（有些不环保的说，不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费）。
现在见到的柱子径高比一般在1：5～10，书中写硅胶量是样品量的30～40倍，具体的选择要具体分析。
如果所需组分和杂质分的比较开（是指在所需组分rf在0.2～0.4，杂质相差0.1以上），就可以少用硅胶，用小柱子（例如200毫克的样品，用2cm×20cm的柱子）；如果相差不到0.1，就要加大柱子，我觉得可以增加柱子的直径，比如用3cm的，也可以减小淋洗剂的极性等等。
中试及工业用手动层析柱装填指南
中试及工业用手动层析柱装填指南1. 中试及工业用手动层析柱中试及工业用手动层析柱的设计，秉承了创新的设计理念，采用专利密封方式以及专利的柱头旋转结构，手动装填层析填料简单，配套工具少，并能够为各种层析填料提供快速的手动装填方法，节约时间，并降低了工作者的工作强度，还能够获得准备而重复性的装柱效果，更快协调不同产品线的转换。
通常手动层析柱从直径100mm到450mm，高度有500mm和1000mm两种。
手动层析柱列表2. 准备工作1.检查层析柱的完整性，容器具已按容器具清洁管理规程清洁待用。
并且在装填前要进行保压密封性及清洁验证。
2.填料在装填前要按填料:匀浆液=1:1.5-2的比例充分匀浆，可以用匀浆棒匀浆，装柱前要脱气处理，可以通过抽真空及超声脱气。
3.将层析柱拆卸，将各部件用注射用水清洗干净。
匀浆棒3. 装柱过程1.装柱参数确定：根据工艺确定（略）。
2.将柱子不锈钢下底盘放在底座支架上，用螺丝固定，底盘出口用软管连接，将软管连接至蠕动泵泵管出口（蠕动泵软管入口在注射用水中），开启蠕动泵，调节流速旋钮至所需位置，检验并确定管线连接无外漏。
3.下底盘放上蓄水环，蓄装水1cm高，排尽气泡，将两层金属网的经纬线以45°角错开，放在底盘中心位置，确认无气泡后将膜盖盖紧。
取下蓄水环。
4.套红色橡胶圈，放底盘，用螺丝对称旋紧。
套垫圈，小心地将玻璃柱体放在垫圈上。
将四根金属杆旋上，玻璃柱顶部套上硅胶圈，不锈钢顶盘穿过金属杆盖在硅胶圈上，使硅胶圈，玻璃柱和顶盘的内边缘刚好对齐。
用螺母将金属杆对称旋紧。
此过程中蠕动泵应不停地泵入水，直至玻璃柱上有2~4cm高的水位时，可停泵，并将底盘软管与蠕动泵泵管连接断开，将底盘软管出口置高过玻璃柱，防止玻璃柱内水流光。
5.将填料沿玻璃柱的内壁缓慢倒入层析柱中，尽量避免产生气泡，填料全部倒完后再加入注射用水使液面与玻璃柱顶端齐平。
如果填料一次性倒不完，可将层析柱出口放低，使水流走一部分再倒填料，此过程中应尽量避免已经沉降好的填料翻起来。
AKTA--实验室层析柱装柱技术介绍
Column packing
Sepharcyl S HR
Flow rates given below. Pack the gel in STEP 1 for 2 hours or until the gel has reached a constant height, then increase the flow rate to the value listed for STEP 2 and pack for 60 minutes.
怎样获得好的层析结果
检测柱效 清洗或重装柱子 减少样品上样体积，不要超量 控制流速 严格控制缓冲液、样品的pH及电导 改用其它种类的凝胶
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Area
mAU*ml 50.6325
0.7791
Area/Peak area
(volume) % 98.48 1.52
Height
mAU 16.974
0.131
Column packing
N/m= 5.54 (Ve/Vh)2100/L As = b/a
Column packing
检测装柱效果一般用<0.5% (30um介质) 或<1% (90um介质) 柱体积的1%丙酮测 柱效和峰形
好的柱效是层析成功的关键 不同种类的凝胶、不同的层析柱有不同
的装柱方法 柱效测定的方法 层析柱的维护
Column packing
层析柱干法装柱步骤
层析柱干法装柱步骤层析柱干法装柱，这事儿就像搭积木，得有个章法。
咱先得把层析柱给准备好。
这层析柱就好比是一个特殊的小房子，要装东西进去的。
得保证这个小房子干净又干燥，要是里面脏兮兮或者湿漉漉的，那后面装进去的东西可就“住”得不舒服了。
就像你自己的家，如果到处是灰尘和水，你能乐意吗？再来说说填料。
填料是这个柱子里的关键角色，就像是小房子里的家具。
把填料从容器里取出来的时候，动作要轻，可不能像个莽撞的大汉似的。
为啥呢？因为填料如果被弄得乱七八糟，它在柱子里就没法好好排列了。
这就好比你整理衣柜，要是把衣服都胡乱扔进去，找衣服的时候可就麻烦了。
现在开始往柱子里装填料。
把柱子一端封闭好，就像给小房子关上门，只留一个入口。
然后慢慢地把填料倒进去，这个过程要均匀，就像往杯子里倒水，要是一股脑儿全倒进去，水就会溅得到处都是。
填料倒的时候，得时不时晃一晃柱子，让填料在里面铺得更均匀。
这就像你铺床的时候，要把被子铺平展，要是有褶皱，睡起来就不得劲儿。
可不能心急，要是填料倒得太快或者不均匀，那柱子里就会有缝隙或者空洞，这可不行，就像房子的墙有了漏洞，那还怎么住人呢？填料倒得差不多的时候，要轻轻敲打柱子的管壁。
这就像是在给填料做按摩，让它们在柱子里更紧实。
不过敲打的力度得掌握好，不能太用力，不然就把填料给敲坏了。
这就好比你敲鸡蛋，太用力鸡蛋就破了，填料要是破了，那整个柱子的功能可就受影响了。
等填料装得差不多了，再把柱子顶端多余的填料弄平。
这就像是给房子的屋顶做最后的修整，要弄得平平整整的。
要是不平，那后面使用的时候就会有问题。
装完柱之后，可别忘了检查一下。
看看柱子里的填料是不是均匀，有没有什么地方看起来不太对劲。
这就像是做完一件手工品，得检查检查有没有瑕疵。
要是发现有问题，就得重新调整，总不能让一个有毛病的柱子就这么开始工作吧，那肯定会出乱子的。
干这个层析柱干法装柱啊，就得像照顾自己的小宝贝一样细心。
每个步骤都不能马虎，每个细节都很重要。
柱层析实验报告
柱层析分离色素一、【实验目的】1．了解柱层析的分类，掌握各种柱层析的原理。
2．熟练掌握吸附层析的原理和操作技术。
二、【实验原理】叶绿体色素是植物吸收太阳光能进行光合作用的重要物质，主要有叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。
从植物叶片中提取和分离叶绿体色素是对其认识和了解的前提。
利用叶绿体色素能溶于有机溶剂的特性，可用95%乙醇或无水乙醇提取。
分离色素的方法有多种，如纸层析、柱层析等。
柱层析法是色谱法中的一种，它是根据混合物中各组分对固定相的吸附能力，以及对洗脱剂（即移动相）的溶解度不同将各组分分离。
常用的柱色谱有吸附色柱谱和分配柱色谱两类。
吸附柱色谱通常是在玻璃管中填入表面积很大，经过活化的多孔性物质或粉状固体作为吸附剂（如氧化铝或硅胶），当混合物的溶液流经吸附柱时，就被吸附在柱的上端，然后从柱顶加入溶剂（洗脱剂）洗脱。
由于不同化合物在吸附柱上的吸附能力不同，在同一溶剂中的溶解度也不同，因此各组分随溶剂以不同速度下移，形成色带。
继续用溶剂洗脱，吸附能力最弱的组分就随溶剂首先流出，整个层析过程进行反复的吸附-解析-再吸附-再解吸。
用柱层析法可以分别收集各组分，并逐个鉴定。
本实验是把三氧化二铝填入玻璃管中（压成柱状）作为吸附剂，将叶绿体色素的石油醚提取液倾于吸附柱上，色素即被吸附。
由于色素的种类不同，被吸附的强弱不同，就在吸附柱上排列成为不同的色层，再利用吸附剂在不同溶剂中有不同的吸附力，用不同的溶剂进行洗脱，从而达到叶绿体主要的4种色素（叶绿素a、叶绿素b、叶黄素、胡萝卜素）的分离。
三、【实验材料】原料：新鲜的菠菜叶试剂：1．无水乙醇或95%乙醇 5.三氧化二铝2．石英砂 6．饱和氯化钠溶液3．丙酮 7.水硫酸钠4．石油醚（60-90℃） 8洗脱液：丙酮：石油醚＝1：9 器材：层析柱（1×30cm），研钵，蒸馏装置，脱脂棉，天平，烧杯，过滤漏斗，玻璃棒，锥形瓶，分液漏斗，试管，铁架台四、【实验操作】1．色素的提取：20克菠菜，加少许石英砂，再加20毫升无水乙醇研磨成浆，脱脂棉过滤，保存滤液，滤渣再用无水乙醇提取一次，合并滤液，滤渣再加入30毫升石油醚提取一次，过滤，合并滤液，转移至分液漏斗中,再加入40毫升饱和氯化钠溶液震荡，弃去下层溶液，再分别加入20毫升水震荡洗涤几次，直至下层无色，保留上层溶液，转移至三角瓶中，加入无水硫酸钠干燥5分钟，备用. 2．样品的浓缩：将提取液放入蒸馏烧瓶中，蒸除多余的石油醚，至剩余液体5-8毫升左右，以备加样使用。
装柱与上样的方法
湿法装柱是先把硅胶用适当的溶剂拌匀后，再填入柱子中，然后再加压用淋洗剂"走柱子"，本法最大的优点是一般柱子装的比较结实，没有气泡。
干法装柱则是直接往柱子里填入硅胶，然后再轻轻敲打柱子两侧，至硅胶界面不再下降为止，然后再填入硅胶至合适高度，最后再用油泵直接抽，这样就会使得柱子装的很结实。
接着是用淋洗剂"走柱子"，一般淋洗剂是采用TLC分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂。
通常上面加压，下面再用油泵抽，这样可以加快速度。
干法装柱较方便，但最大的缺陷在于"走柱子"时，由于溶剂和硅胶之间的吸附放热（可以用手摸柱子明显感觉到），容易产生气泡，这一点在使用低沸点的淋洗剂时如乙醚，二氯甲烷更为明显。
虽然产生的气泡在加压的情况下不易察觉，但是，一旦撤去压力，如在上样、加溶剂等操作的时候，气泡就会释放出来，严重时，整个柱子变花，样品不可能平整地通过，当然也就谈不上分离了。
解决的办法是：第一、硅胶一定要天结实；第二、一定要用较多的溶剂"走柱子"，一定要到柱子的下端不再发烫，恢复到室温后再撤去压力。
也有介绍在硅胶的最上层填上一小层石英砂，防止添加溶剂的时候，使得样品层不再整齐。
但我的感觉是如果小心上样，添加溶剂，则没有这个必要。
上样也有干法和湿法之分：干法就是把待分离的样品用少量溶剂溶解后，在加入少量硅胶，拌匀后再旋去溶剂。
如此得到的粉末再小心加到柱子的顶层。
干法上样较麻烦，但可以保证样品层很平整。
湿法上样就是用少量溶剂（最好就是展开剂，如果展开剂的溶解度不好，则可以用一极性较大的溶剂，但必须少量）将样品溶解后，再用胶头滴管转移得到的溶液，沿着层析柱内壁均匀加入。
然后用少量芗洗涤后，再加入。
湿法较方便，熟手一般采用此法.关于TLC和柱层析之我的体会(转)柱层析和TLC是有机化学工作者必须下苦功夫的两项实验技术。
这两项技术掌握与否，对于提高实验的效率至关重要。
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2M Na2SO4 or (NH4)2SO4 in 50mM phosphate buffer
0.5M NaCl in 0.1M NaHCO3 or phosphate buffer 1M NaCl in 100mM phosphate or NaHCO3 buffer 2M NaCl in 20 nM phosphate buffer 0.5M NaCl or 0.2M glycine in 20mM phosphate or Tris buffer 2M KCI or NaCl in 20mM phosphate
TOYOPEARL的静臵时间
TOYOPEARL 粒径
Coarse Medium Fine Superfine C级规格: 100 µm M级规格: 65 µm F级规格: 45 µm S级规格: 35 µm 水中静臵时间 15-30 Min. 30-45 Min. 45-60 Min. 60-90 Min.
内容提要 装填前的准备工作
– 小颗粒的去除 – 缓冲液平衡 – 匀浆准备
装填步骤 / 层析柱类型 层析柱的操作
– 柱子的平衡与柱效评价 – 保存
Peak Biotech
TOSOH BIOSCIENCE GmbH
TOYOPEARL树脂填料的装填
装填的一般原则
☆TOYOPEARL的装填压力最好在0.5 - 5 bar的范围内 ☆装填流速至少比实际操作流速高50% ☆不要使用会产生剪切力的装臵（如：磁力搅拌器、 齿轮泵）
装填
管路清洗
运行
卸料
优点：易于装填 弱点：填料用量较大, 卸料可能较难, 有剪切力发生, 卸料会导致大量的浆液体积
Resolute
TOSOH BIOSCIENCE GmbH
恒压装填方法
Radial Flow - “Self Packer” - preset column volume (Proxcys-CRIO)
TOSOH BIOSCIENCE GmbH
恒压装填方法
Horizontal Flow - “Self Packer” - preset column volume
(Pall/Euroflow-ResoluteTM, Millipore-IsoPakTM, GE Healthcare-Chromaflow, Eastern River)
TOSOH BIOSCIENCE GmbH
TOYOPEARL树脂填料 大小型工业制备色谱柱的装填实践
Götec
GE Healthcare
Pall
Pall-Euroflow / Resolute A. Sprauer – 5/06
TOSOH BIOSCIENCE GmbH
TOYOPEARL树脂填料的装填
TOSOH BIOSCIENCE GmbH
恒流速装填方法
恒流速装填法中流速的增加量举例：
柱尺寸 (I.D. x L) 2.2 cm x 60 cm 9 cm x 30 cm 25 cm x 30 cm 填料类型
目标流速 (ml/min)
2
增加量 (ml/min) 0.5 50 500
保持时间 (min) 0.5 2 2
40 – 150
40 – 150 400 – 600 800 – 1000 800 – 1200 700 – 1000 800 – 1200 400 – 600 800 – 1000 800 – 1200 800 – 1000 800 – 1200 800 – 1000
15 – 30
15 – 30 45 – 65 80 – 130 80 – 600 80 – 240 80 – 500 45 – 65 80 – 130 80 – 500 80 – 130 80 – 500 30 – 130
1 M NaCl in 50 mM phosphate, Tris, or acetate buffer
HIC Ether-650, Phenyl-650, PPG-600m, Butyl-650, SuperButyl550C and Hexyl-650c AFC AF-Tresyl and AF-Epoxy-650M AF-Formyl-650M, AF-Amino-650M and AF-Carboxy-650M AF-Heparin HC-560M AF-Chelate-650M AF-Blue HC-650M, AF-Red-650M
TOSOH BIOSCIENCE GmbH
匀浆准备
利用量筒测量静臵胶体体积或使用水泵抽滤浆液至湿滤饼后 计算装填所需要的填料体积 通过添加装填缓冲液调节浆液浓度:
流动式装填柱 ~ 40 - 70% (v/v) 自动装填柱 20 - 60% (v/v)
最终装填好的柱床体积是要小于装填前胶体静臵体积或抽干 的湿滤饼的体积
CRIO - Colonne Radiale InOxidable
o Low space requirements – only 0,5~1 m2; even 600 liter BV is mounted on wheels o Large inlet surface area – cotrolled & gentle product application (“Natural Distribution”). o Thin frit keeps the resin together – it is not used as flow distributor –> a barrier of only ~60um – negligible influence on pressure generation
HW-55S QAE-550C DEAE-650M
300
2000
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恒流速装填方法- 扰动（由入口处筛板下气泡而引起的）
气泡会由于切换阀、管路连接处、 Götec/Superformance 20cm ID Column 活塞运动、未脱气缓冲液而引起........
F (45 um)
HW-75 IEC DEAE-650, SuperQ-650 CM-650, SP-650 2,2 x 60 2,2 x 20 F (45 um) S (35 um) M (65 um) C (100 um) SP-550, QAE-550 MegaCap II SP-550 HIC Ether-650, Phenyl-650, Butyl-650 2,2 x 20 2,2 x 20 2,2 x 20 C (100 um) EC (100-300 um) S (35 um) M (65 um) C (100 um) PPG-600, Butyl-600 SuperButy-550, Hexyl-550 AFC AF-Amino-650, AF-Carboxy-650 AF-Formyl-650, AF-Epoxy-650 AF-Tresyl-650, AF-Chelate-650, AF-Blue HC-650, AF-Heparin-HC-650 AF-Red-650 2,2 x 20 2,2 x 20 2,2 x 10 M (65 um) C (100 um) M (65 um)
Millipore Quik Scale
TOSOH BIOSCIENCE GmbH
实验室规模最优化的装填及柱操作流速
模式 填料类型 柱尺寸 [cm ID x L] SEC HW-40 2,2 x 60 S (30 um) F (45 um) C (75 um) HW-50 2,2 x 60 S (30 um) F (45 um) HW-55 2,2 x 60 S (30 um) F (45 um) HW-65 2,2 x 60 S (30 um) 填料等级 装填流速 [cm/h] 30 – 40 60 – 80 120 – 160 25 – 35 50 – 70 25 – 35 50 – 70 20 – 75 操作流速 [cm/h] 10 – 25 25 – 50 50 – 100 10 – 20 25 – 35 10 – 20 25 – 35 10 – 15
Slurry preparation in the column Settling resin Slurry preparation in a separate tank
Amicon Moduline-120cm ID
TOSOH BIOSCIENCE GmbH
对于给定的柱子，装柱所需的静臵胶体积
Toyopearl HW-40, HW-50, HW-55 HW-65 and HW-75F Ether-650, Phenyl-650 Butyl-650, DEAE-650 Super-Q-650, CM-650 SP-650 and all Affinity QAE-550C and SP-550C
TOSOH BIOSCIENCE GmbH
恒流速装填方法
Flow Packed Columns (Millipore-QuikScale+Moduline, GE Healthcare-BPG, Götec-Superformance, BioRadGeltec, etc.)
方法简介:
将柱底筛板用装填缓冲液润湿（赶走气泡） 任何时候，均需确保浆液在注入层析柱前进行过匀浆操作 匀浆液倒入后，立刻将分配器臵于储槽内浆液表面 分配器与溶液浆液间不应有气泡存在 阶段性调整装填流速至目标流速，以产生一个实时的、没有太大振动 的栓塞流 – 在最初的压实操作基础上，为进一步压实柱床，至少泵入5-10倍柱体 积的装填缓冲液 – 调整分配器至胶体表面 – 重复后两个步骤，直至柱床被彻底压实。最后将分配器移至距离柱床 2-5 mm 处（最后一次）。不要担心使用分配器的同时进行柱床的压 实操作！ – – – – –