--临床常见标本的微生物学检验

简易快速鉴定
快速检验对及时控制感染，预防败血症的 发生十分重要。在临床细菌学检验中，常 常主要根据细菌形态、革兰染色结果，菌 落特征，再加上快速的生化反应 （如氧化 酶试 验） 及血清学试验等特点加以报告。
认真检查细菌学检验单
收到送检单后，及时登记； 认真检查送检单上的标本类型、来源、送 检目的等； 核定抗生素的使用情况； 核定标本的采集方法和时间。
6．标本的采取应以提高阳性检出率为目的。
血 液 骨 髓 标 本 的 细 菌 学 检 验 程 序
血液骨髓 细菌学检验
一般细菌的检验
标本接种于肉汤培养基后，立即置35 ±1 ℃温箱内 孵育，每天取出一次观察有无 细菌生长，应特别注 意观察肉汤内有无混浊、沉淀、菌膜、色素、血液 变色、指示剂变 色等现象，并记录之。
若培养3 ～4 周后仍无细菌生长者，则可报告：“经 X 周培养无细菌生长。”
血液骨髓 细菌学检验
脑膜炎奈瑟菌
首先将胰胨肉汤或含2g／L 葡萄糖的肝浸液 （或肉浸液） 预温至35 ℃，然后再将病 人的血液标本注入培养基瓶中， 摇匀后培养于10 ％二氧化碳环境中，每天观察一次。
如疑有细菌生长，再移种于经35 ℃预温的巧克力色血平板 或血平板进行划线分离，然 后于35 ±1 ℃、5 ％～10 ％二 氧化碳环境中培养18 ～48 小时，如发现平板上有光滑、湿 润、透明、粘性的菌落且中等大小，经革兰染色为阴性双 球菌者，可做出初步报告：“有脑膜炎奈瑟菌生长。”
临床常见标本的 细菌学检验
临床标本细菌学检验的原则
安全 准确 快速 敏感 低耗
加速细菌生长
在培养基中加入必要的营养物质。胰胨、天 然蛋白和酵母浸膏等。 改善培养环境。如以37 ℃水浴代替温箱，使 温度恒定，同时尚可通过水浴中 的液体对流 来增加细菌与营养物质的接触机会；加入适 当的药物如硫酸镁、对氨基苯甲酸、枸橼酸 钠、青霉素酶等以抵消和破坏培养标本中的 抗菌物质。
标本采集 注意事项
1．血液标本应在病人发热1 ～2 天内或发热高 峰采集培养为宜，此时阳性率较高。
2．培养基与血液的比例为10∶1 。 3．培养一般细菌用普通肉汤或酚红葡萄糖肉汤，
培养对营养要求较高的细菌用肝 浸液或胰胨 肉汤等。
标本采集 注意事项
4．采血和接种时应严格注意无菌操作，避免污染 杂菌。
同时挑取菌落接种于预温的巧克力色或血平板同上法行纯 培 养。经涂片染色镜检确定后，作糖发酵、氧化酶、自凝 现象，血清玻片凝集等试验，以 与其他奈瑟菌区别。如各 项检查均符合此菌者，必要时再用分群血清作玻片凝集进 行分 群作出最后鉴定。
加速细菌生长
在培养基中加入有效的生长刺激剂 （如小 核黄素、生物素、烟 酰胺等）。这些物质多为辅酶或辅基的 成 分，在细菌新陈代谢中起重要作用。
快速分离
在培养过程中，采取多次观察和移种并把移 种量加大，这样可提前和较容易发现阳 性结 果。尤其对血液培养更应如此，每6 ～8 小 时进行1 次，连续3 天，有结果随时与 临床 取得联系，然后再仔细鉴定细菌的种类，不 要拘于常规鉴定，延误报告。一般3 天 后不 见生长，可改为每天移种1 次，仍继续观察 数天才可。
一般细菌的检验
如不见细菌生长，应继续培养至第7 天，取 出后接种于血平板，经培养仍无细 菌生长 时，可报告为：“经7 天培养无细菌生长。” 对于亚急性心内膜炎病人标本，应培 养一 个月，才能作出结论。
血液骨髓 细菌学检验
布氏杆菌的检验
将可疑为布氏杆菌的血液标本接种于肝浸液2 支， 分别置于10 ％二氧化碳环境中及普通环境中35 ±1 ℃培养，每天观察一次，每隔5 天移种一次血平板。 培养1 周后， 若肝浸液有此菌生长时，出现肉眼可 见的轻度混浊，久之可出现菌膜并有粘稠性沉淀 物。 此时应作涂片染色镜检，并立即移种于2 份肝浸液 平板或血平板，分别置于10 ％ 二氧化碳及普通环境 下培养。如菌落及涂片染色镜检形态典型，再作布 氏杆菌血清凝集 试验，如为阳性，可报告为：“培 养出布氏杆菌”。必要时，可将分离的菌株进一步 鉴定 及分型。
一般细菌的检验
当疑有细菌生长时，应以无菌操作挑取培 养物涂片进行革兰染色镜检。一旦见 有细
菌生长，并能排除污染，应及时转种于血 平板或其他培养基进行药物敏感试验或分
离培养。根据菌落特征及菌体染色镜检形 态，可得出初步印象，并需继续培养，按 各种 属细菌加以鉴定。报告：“有XX X 菌 生长”。
血液骨髓 细菌学检验
如有细菌生长，肉汤可呈现各种不同的生长现象， 若发生混浊， 大多可疑为革兰阴性杆菌；
若均匀混浊有绿色荧光，则可疑为绿脓杆菌；上面 澄清，下 面有沉淀，可疑为链球菌；
若见自下而上的溶血现象，可疑为溶血性链球菌；
若呈现肉 冻样凝固现象，疑为葡萄球菌；
若表面有灰白菌膜，疑为枯草杆菌或类白喉杆菌。
血液骨髓 细菌学检验
5．抗生素可影响细菌检出的结果。故在采集标本时 应力争在抗菌药物治疗 之前。如果病人曾服用磺 胺类药物，应在每100ml 培养基内加对氨苯甲酸 5mg ，以防止 磺胺类药物对细菌的抑制作用。如 果病人已用青霉素治疗，应在培养基中加入青霉素 酶100U／50ml （青霉素酶不耐热，应在临用时加 入）。若病人已用其他抗生素治疗时，可用 硫酸 镁肉汤增菌。
标本的采集和处理
无菌操作 标本种类 采集时间 安全防护 及时检验和报告
识别污染菌
1. 观察菌落是否在划线上 ； 2. 结合拟培养细菌的生长特点去对照判断 ； 3. 注意观察培养时间。非致病菌与致病菌的
生长速度不同； 4. 涂片染色检查，观察是否与目的菌一样。
值得提出的是机体的某些部位通常是 无菌 的，若检出细菌，应视为致病菌 （如血液、 骨髓、脑脊液等）。
血液及骨髓标本的 细菌学检验
标本采集 操作方法
1．将患者拟采血部位放平，扎以止血带，选好 静脉穿刺点，以皮点为中心用2．5 ％～3 ％ 碘酊从内向外周擦拭，待干后再以同法用75 ％乙醇脱碘。消毒范围不得过小。
2．以无菌手续由静脉取血5ml ，立即注入适当 的液体增菌培养基内，迅速轻摇，使 充分混 合，以防止凝固。