谷胱甘肽琼脂糖凝胶使用说明
GST琼脂糖凝胶FF
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北京卓冠科技有限公司 北京市西城区德外大街 2 号 512 室
邮政编码：100011
TEL：62364123
FAX：62360884
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货号
产品名称
CS-A03-00 GST 琼脂糖凝胶 FF
CS-A03-01 CS-A03-02 CS-A03-03 CS-A03-04
GST 琼脂糖凝胶 FF GST 琼脂糖凝胶 FF GST 琼脂糖凝胶 FF GST 琼脂糖凝胶 FF
联系人：韦新桂
E-mail: weixingui@
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北京卓冠科技有限公司 北京市西城区德外大街 2 号 512 室
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１、除去因离子交换作用吸附的蛋白，用 2-3 倍柱床体积 2M 的 NaCl 溶液淋洗柱子， 再反向淋洗。 ２、除去蛋白沉淀、疏水性蛋白，用 1M 的 NaOH 以 100cm/h 的速度淋洗柱子 1-2h， 再 反向淋洗。 ３、所有操作中，都要用至少 3 倍柱床体积的初始缓冲液洗柱子。 ４、除去强的疏水性蛋白和脂质等，用 4 倍柱床体积的 70%的乙醇或者 30%的异丙醇洗 柱子，再反向淋洗。 八、保存 在 20%乙醇，4℃下长期保存。
包装 1ml (预装 柱) 25ml
100ml
500ml
大包装
载量 mg/ml
≤10mg/ml
≤10mg/ml ≤10mg/ml ≤10mg/ml ≤10mg/ml
特性 及应用
平均粒 径(μm)
GST 及 GST 融 合蛋白
90
GST 及 GST 融 合蛋白
90
GST 及 GST 融 合蛋白
90
琼脂糖凝胶
谢谢观看
琼脂糖 Agarose，缩写为AG，是琼脂中不带电荷的中性组成成份，也译为琼胶素或琼胶糖。琼脂糖化学结构 由β-D-吡喃半乳糖(1-4)连接3,6-脱水α-L-吡喃半乳糖基单位构成.
制作方法
把琼脂糖，即几乎不含硫酸根的主要成分为多糖的琼脂，溶于热水，冷却制成的凝胶。
作用
制成的小颗粒用于凝胶过滤。适于用sephadex不能分级分离的大分子的凝胶过滤，若使用5%以下浓度的凝胶， 也能够分级分离细胞颗粒、病毒等。利用其吸附性小的特点，有时用它代替琼脂、以作为免疫电泳或凝胶内沉降 反应的支持物。
琼脂糖凝胶
以琼脂糖为支持介质制备的凝胶
01 商品名称
03 制作方法
目录
02 基本结构 04 作用
琼脂糖凝胶是以琼脂糖为支持介质制备的凝胶。琼脂糖分为一般琼脂糖和经化学修饰后熔点降低的低熔点琼 脂糖，琼脂糖的熔点在62〜65°C之间，融化后在37°C下可维持液态数小时，30°C时凝固成胶。多用于对染色 体DNA在凝胶内进行原位酶切及DNA片段回收。琼脂糖凝胶由于孔径大常用于大分子蛋白质、DNA的分离。
商品名称
琼脂糖凝胶agarose gel 储藏温度:常温 商品名很多，常见的有，Sepharose（瑞典，pharmacia ），Bio-Gel-A（美国Bio-Rad）链如氢键来维持状结构，状结构的疏密依靠琼脂糖的浓度。一般情况下， 它的结构是稳定的，可以在许多条件下使用（如水，pH4-9范围内的盐溶液）。琼脂糖凝胶在40℃以上开始融化， 也不能高压消毒，可用化学灭菌活处理。
琼脂糖凝胶电泳常考操作流程
琼脂糖凝胶电泳常考操作流程
准备工具：用蒸馏水将制胶工具洗干净，准备好制胶平板，用琼脂将模具边缘封闭，架好梳子。
配制琼脂糖凝胶：根据要分离的样品（DNA）大小配制合适浓度的琼脂糖凝胶。
将一定量的琼脂糖干粉加入到合适体积的锥形瓶中，加入一定量的电泳缓冲液（30ml左右TAE）。
融化琼脂糖：将琼脂糖放入到微波炉内加热融化，冷却片刻（不烫手即可）。
浇灌凝胶：融化后的琼脂溶液摇晃混匀，倒入电泳槽中，等其凝固。
凝固凝胶：室温下凝固30-40min左右，小心的拔出梳子，取出凝固好的凝胶放入电泳槽内，准备上样。
加入电泳缓冲液：在电泳槽中倒入电泳缓冲液（TAE）；没过胶面1mm左右，去除胶孔内的气泡。
上样：将DNA样品和对应体积的上样缓冲液（loading buffer）和染料混合，用抢混匀后加入到凝胶孔内。
电泳：上样结束，接通电源，红色正极，黑色负极，DNA样品有负极往正极运动，加样孔侧为负，，40-50v电压，电压30敏左右即可（<40min）。
观察结果：电压结束，关闭电源，凝胶成像仪上观察电压位置并比对marker 判断大小。
纯泰GST(GSH)亲和层析介质使用说明书
z 聚苯乙烯层析柱
1) 将层析柱固定在铁架台或层析架上，封闭层析 柱下端出口，向柱内充入纯水，排开层析柱内 空气，先将垫片完全浸没于水面下方，在保持 水平的状态下，小心推向底部，避免垫片下方 滞留气泡。
2) 打开层析柱下端出口，排出柱中纯水；在液面 低至距垫片1~1.5cm高度时封闭下端出口，用移 液枪按需要量吸取介质，或用玻璃棒紧靠柱子 内壁引流，将介质加入到层析柱中；静置30min， 让介质自然沉降。
每次层析前，为达到最佳纯化效果，需对介质 进行再生，步骤如下：
1) 2倍介质体积高pH缓冲液（0.1M Tris-HCl, 0.5M
NaCl, pH8.5）和低pH缓 冲液（0.1M sodium acetate, 0.5M NaCl, pH4.5）交替洗脱三次。 2) 10倍介质体积缓冲液A平衡介质。 7. SDS-PAGE检测：
三、 适用范围
分离谷胱甘肽S-转移酶（GST）融合蛋白、其 它谷胱甘肽转移酶以及与谷胱甘肽有亲和作用的 蛋白。
四、 操作说明
1. 缓冲液配制
z 缓冲液A（平衡缓冲液）：10mM Na2HPO4， 1.8mM KH2PO4，140mM NaCl，2.7mM KCl， 调节pH值至 8.0。
z 缓冲液 B（洗脱缓冲液）：10mM Glutathione
-1-
1) 用10倍介质体积缓冲液A过柱，平衡介质； 2) 上样； 3) 用5~10倍介质体积缓冲液A过柱，洗去层析柱
中剩余上样液并重新平衡介质； 4) 用5~10倍介质体积缓冲液B洗脱，收集洗脱液； 5) 用5~10倍介质体积缓冲液A重新平衡介质。 注：纯化过程流速不宜过快，对于1ml介质，流速 保持在0.5ml/min为宜。 5. 介质清洗
琼脂糖凝胶电泳标准操作流程
琼脂糖凝胶电泳操作标准流程一、实验目的琼脂糖凝胶电泳是常用的检测核酸的方法，具有操作方便、经济快速等优点。
本铜人阵学习DNA琼脂糖凝胶电泳的使用技术，此关为能力考核，通关成功后，代表具备操作琼脂糖电泳的能力。
二、实验原理琼脂糖凝胶电泳是常用的用于分离、鉴定DNA、RNA分子混合物的方法，这种电泳方法以琼脂凝胶作为支持物，利用DNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应，达到分离混合物的目的。
DNA分子在高于其等电点的溶液中带负电，在电场中向阳极移动。
在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即分子本身的大小和构型是主要的影响因素。
DNA分子的迁移速度与其相对分子量成反比。
不同构型的DNA分子的迁移速度不同。
如环形DNA分子样品，其中有三种构型的分子：共价闭合环状的超螺旋分子（cccDNA）、开环分子(ocDNA)、和线形DNA分子(IDNA)。
这三种不同构型分子进行电泳时的迁移速度大小顺序为:cccDNA＞IDNA＞ocDNA影响核酸分子泳动率的因素主要还是：1、DNA分子大小；2、琼脂糖浓度；3、DNA构想；4、所用的电压；5、琼脂糖种类；6、电泳缓冲液核酸电泳中常用的染色剂是溴化乙锭（ethidium bromide EB）。
溴化乙锭是一种扁平分子，可以嵌入核酸双链的配对碱基之间。
在紫外线照射BE-DNA 复合物时，出现不同的效应。
254nm的紫外线照射时，灵敏度最高，但对DNA损伤严重；360nm紫外线照射时，虽然灵敏度较低，但对DNA损伤小，所以适合对DNA样品的观察和回收等操作。
300nm紫外线照射的灵敏度较高，且对DNA损伤不是很大，所以也比较适用。
三、材料、试剂及器具1、材料不同大小的基因组片段；2、试剂Hind III digest DNA Marker（分子量标准）(TaKaRa)；D2000(TianGen)；BIOWESTAGAROSE（西班牙琼脂糖）；加样缓冲液（6x）：溴酚黄；电泳缓冲液（1×TAE）；溴化乙锭（EB）；3、仪器及器具（1）移液器、吸头、锥形瓶（2）电泳系统：电泳仪、水平电泳槽、托盘、胶托、梳子等。
凝胶的正确使用流程解
凝胶的正确使用流程解1. 凝胶的概述凝胶是一种在实验室中广泛使用的材料，常用于电泳和蛋白质分离等实验。
正确使用凝胶可以确保实验结果的准确性和可重复性。
本文将介绍凝胶的正确使用流程，包括准备凝胶、制备样品、装载样品和进行电泳分离等步骤。
2. 准备凝胶准备凝胶是使用凝胶的第一步，可根据实验需求选择不同种类的凝胶，如聚丙烯酰胺凝胶（Polyacrylamide gel）或琼脂糖凝胶（Agarose gel）。
以下是准备凝胶的步骤：•准备所需试剂和设备，包括凝胶模具、凝胶缓冲液和凝胶聚合物等。
•根据实验需要，按照要求配置凝胶缓冲液，并溶解凝胶聚合物。
•将凝胶模具放在水平的工作台上，并将模具中装有凝胶缓冲液的试管或烧杯放在模具内。
•缓慢地将凝胶聚合物溶液倒入模具内，确保液面平整，然后等待凝胶聚合。
3. 制备样品准备样品是使用凝胶进行分离的关键步骤，以下是制备样品的步骤：•收集所需的样品，并将样品转移到离心管或试管中。
•如有必要，对样品进行预处理，例如离心、加热或添加荧光染料等。
•根据实验需要，添加适量的样品缓冲液或加载缓冲液，以确保样品在电泳过程中保持稳定。
4. 装载样品装载样品是将样品置于凝胶上的步骤，以下是装载样品的步骤：•将凝胶从模具中取出，并放在凝胶室或电泳槽中。
•使用微量移液器或吸管将样品缓冲液和样品分别加载到凝胶孔中。
•根据实验需要，可以在凝胶孔中加载分子量标记物，以便确定目标DNA或蛋白质的大小。
5. 进行电泳分离进行电泳分离是使用凝胶的最后一步，以下是进行电泳分离的步骤：•将装有样品的凝胶室或电泳槽连接到电源以及电泳缓冲液槽。
•设置所需的电压和时间参数，并启动电泳操作。
•在电泳过程中，观察凝胶中样品的迁移情况，并确保凝胶在适当的时间范围内完成分离。
•分离完成后，关闭电源并移除凝胶室或电泳槽。
6. 结果分析完成电泳分离后，可以根据实验需求选择适当的方式对分离结果进行分析，如用紫外线照射凝胶来可视化DNA条带或用染色剂染色来可视化蛋白条带。
琼脂糖凝胶电泳的操作步骤
琼脂糖凝胶电泳的操作步骤琼脂糖凝胶电泳是一种常用的蛋白质和核酸分析方法。
本文将介绍琼脂糖凝胶电泳的具体操作步骤，帮助读者更好地理解和掌握这一实验技术。
材料准备1.琼脂糖凝胶：根据需要选择合适的琼脂糖凝胶，通常有0.8%、1%和1.5%等不同浓度的琼脂糖凝胶可供选择。
2.海藻酸缓冲液：配制1×TAE缓冲液，将适量的氨基乙酸和琼脂糖溶解在去离子水中，并调整pH值至7.5。
样品制备1.样品处理：将待分析的蛋白质或核酸样品按照实验要求进行处理，例如进行裂解、消化等。
2.加载缓冲液：将样品与适量的样品加载缓冲液混合均匀，通常加载缓冲液中含有甘氨酸、溴酚蓝等成分，有利于负载样品。
凝胶制备1.琼脂糖溶液的制备：将适量的琼脂糖粉末加入到海藻酸缓冲液中，用力搅拌使其充分溶解。
2.加入染色剂：在溶解的琼脂糖溶液中加入适量的染色剂，如溴酚蓝，以便观察凝胶的迁移情况和样品带。
3.准备载玻片：在凝胶电泳槽的两侧放置两块玻璃板，用胶条固定，形成一个长方形的凝胶槽。
4.倒制凝胶：将制备好的琼脂糖溶液倒入凝胶槽中，并用打孔器在凝胶上打孔，用来加载样品。
电泳过程1.样品加载：将经过处理的样品加载到凝胶孔洞中，注意不要溢出或漏掉。
2.正常电泳：将凝胶槽放入电泳槽中，使凝胶完全浸泡在TAE缓冲液中，注意缓冲液的量要覆盖凝胶槽。
3.开启电源：将凝胶槽连接到电源上，并设定合适的电流和电压，开始电泳过程。
4.电泳时间：根据实验需要设定合适的电泳时间，通常为30分钟到数小时不等。
5.关闭电源：在电泳结束后，关闭电源，取出凝胶槽。
凝胶染色和成像1.染色凝胶：将电泳结束的凝胶浸泡在适量的染色液中，常用的染色剂有共染剂、Coomassie蓝等。
2.染色时间：根据染色剂的要求和实验需要，将凝胶浸泡在染色液中一定时间，以达到理想的染色效果。
3.洗涤凝胶：将染色液倒掉，用去离子水洗涤凝胶，去除多余的染色剂。
4.成像和分析：将凝胶放入凝胶成像系统中进行成像，根据需要可进行图像分析和数据提取。
谷胱甘肽-琼脂糖凝胶4B (GST标签纯化树脂)使用说明
谷胱甘肽-琼脂糖凝胶4B（GST标签纯化树脂）使用说明货号：P2020规格：5ml/10ml保存：4℃保存，有效期至少一年产品简介：pGEX载体表达的外源蛋白与谷胱甘肽S-转移酶融合，因此可以通过谷胱甘肽-琼脂糖亲和层析进行纯化。
GSTs是一类以谷胱甘肽（γ-谷氨酰半胱氨酰甘氨酸）作为底物，通过形成硫醇尿酸失活毒性小分子的酶。
由于GST对底物的亲和力是亚毫摩尔级的，因此谷胱甘肽固化于琼脂糖形成的亲和层析树脂对GST及其融合蛋白的纯化效率很高。
可以用含游离谷胱甘肽的缓冲液洗脱结合GST融合蛋白。
树脂用3mol/L NaCl的缓冲液再生。
谷胱甘肽琼脂糖对GST融合蛋白的结合能力很强（每毫升柱床体积的树脂能结合8毫克融合蛋白）。
特性:粒度：45-165um流速：75cm/h工作PH:4-10耐压:0.3Mpa载量:＞5mg谷胱甘肽S-转移酶使用说明：谷胱甘肽树脂的处理:1.轻轻颠倒盛有谷胱甘肽-琼脂糖树脂的容器，将树脂混成匀浆。
2.取部分匀浆放入15ml聚丙烯管（每100ml细菌培养物大约需要2ml匀浆）。
3.4℃500g离心5分钟，小心去掉上清。
4.在树脂中加入10倍柱床体积预冷的PBS，颠倒数次混匀，4℃500g离心5分钟，小心去掉上清。
5.每毫升树脂加入1毫升冷的PBS，制成50%匀浆，颠倒数次，混合均匀，悬液冰上放置待用。
制备细胞抽提物：6.每100毫升培养物的细胞沉淀重悬于4mlPBS缓冲液中。
7.加入溶菌酶至终浓度为1mg/ml,冰上放置30分钟。
8.用针筒将10ml浓度为0.2%的TritonX-100强行注入黏稠的细胞裂解物中，剧烈振动数次混匀。
加入DNase和RNase至终浓度5ug/ml,4℃振动温育10分钟，4℃3000g 离心30分钟，去除不溶性细胞碎片，上清转移到一只新管中，加入DTT至终浓度1mmol/L。
纯化融合蛋白：9.细胞裂解物与适量50%谷胱甘肽-琼脂糖树脂匀浆混和，每100毫升细菌培养物加2ml树脂，于室温轻摇30min。
琼脂糖凝胶
琼脂糖凝胶什么是琼脂糖凝胶琼脂糖凝胶是一种由琼脂素制成的凝胶状物质，具有较好的凝胶性能。
它是一种常见的实验室试剂，广泛用于分离、纯化和分析生物大分子如蛋白质、核酸和多糖等。
琼脂糖凝胶的制备方法材料•琼脂素（Agarose）•缓冲溶液步骤1.准备含有适量琼脂素的缓冲溶液，通常使用Tris缓冲溶液或磷酸盐缓冲溶液。
2.将缓冲溶液中的琼脂素加热至溶解，可以使用烧杯和加热板完成这一步骤。
3.琼脂素完全溶解后，将溶液倒入矩形或圆形的琼脂糖凝胶模具中。
4.等待琼脂糖凝胶冷却和凝胶化。
凝胶的结构可以通过调整琼脂素的浓度和凝胶化温度来进行控制，常见的琼脂糖凝胶浓度为0.5%-2.0%。
琼脂糖凝胶的应用琼脂糖凝胶在生物科学领域有广泛的应用，主要包括以下几个方面：1. 蛋白质凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳是一种常见的蛋白质分离技术。
凝胶中的孔隙结构可以根据蛋白质分子的大小、形状和电荷特性，实现对蛋白质的分离和纯化。
通过电泳电场的作用，蛋白质分子会迁移至电泳胶中，形成一系列条带，可以根据条带的位置和宽度来判断样品中蛋白质的相对含量和纯度。
2. 核酸凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳也被广泛应用于核酸分析和分离。
琼脂糖凝胶可以在电场中对核酸进行分子大小分离，并可通过DNA染料或放射性标记物对核酸进行可视化。
这种技术可以用于DNA片段的分离、纯化和定量分析，也可以用于RNA的分离和检测等。
3. 蛋白-核酸相互作用研究琼脂糖凝胶亦可用于研究蛋白与核酸之间的相互作用。
通过在琼脂糖凝胶中添加核酸和蛋白质样品，可以观察它们之间的相互作用。
这种方法可以用于研究蛋白与DNA或RNA之间的结合，还可以用于筛选与特定核酸序列结合的蛋白。
4. 免疫固定电泳琼脂糖凝胶亦可用于免疫固定电泳，用于研究蛋白质的抗原性质。
在这种方法中，将抗原与琼脂糖凝胶混合，使其固定在凝胶孔隙中，然后通过电泳将抗原从凝胶中迁移出来。
迁移过程中，抗原与抗体之间的特异性结合会引起凝胶中条带的出现，可以用于确定蛋白质的抗原性质。
SP-琼脂糖凝胶 H.P.使用说明
SP-琼脂糖凝胶H.P.使用说明货号：S9220规格：100ml保存：4℃~25℃，有效期3年。
一、简介SP-琼脂糖凝胶H.P.是将磺酸基丙基键合在高流速琼脂糖微球上形成的一种强阳离子交换介质。
广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的离子交换制备。
P-琼脂糖凝胶H.P.为白色球状凝胶,无嗅、无味、无肉眼可见杂质。
二、亲和填料特性项目指标化学基团-CH 2CH 2CH 2SO 3―，可交换离子Na +离子交换类型强阳离子型基质6%交联琼脂糖高分辨率蛋白质吸附容量55mg RNase A 总离子交换量0.15-0.20mmol/ml 介质形状球形粒径10~45µm 流速最大流速150cm/h 工作温度4~40℃耐压0.3MPapH值稳定性3~14(短时间，在位清洗)，4~13(长时间) pH工作范围4~13化学稳定性在以下液体中稳定：所有常用的水相缓冲液；1mol/L氢氧化钠；8mol/L尿素；6mol/L盐酸胍；70%乙醇*检测条件：层析柱10mm×300mm*柱床高15cm，25℃，流动相为0.1mol/LNaCl。
.三、适用范围本产品具有高化学稳定性、高流速、高载量、好的机械性能、可在位清洗、多次重复使用等特点，非特异性吸附低，回收率高，适用于工业规模生产，适用于在pH工作范围内可形成正离子的生物大分子的分离纯化，广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的离子交换制备。
四、操作说明1装柱（1）让所有的材料和试剂达到室温。
配制初始缓冲液（平衡液）和洗脱缓冲液。
（2）根据柱子大小取所需量的凝胶，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始缓冲液（按凝胶：缓冲液=3：1的比例）配成匀浆。
（3）将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位（液面略高于滤膜），务必使底端无气泡。
（4）用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。
打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。
琼脂糖凝胶电泳实验操作流程
琼脂糖凝胶电泳实验操作流程如下：
1.按所分离的DNA分子的大小范围，称取适量的琼脂糖粉末，
放到一锥形瓶中，加入适量的0.5×TBE电泳缓冲液。
稍摇匀，得胶液。
2.取有机玻璃制胶板槽，有透明胶带沿胶槽四周封严，并滴加少
量的胶液封好胶带与胶槽之间的缝隙。
3.水平放置胶槽，在一端插好梳子，在槽内缓慢倒入已冷至60℃
左右的胶液，使之形成均匀水平的胶面。
4.待胶凝固后，小心拔起梳子，撕下透明胶带，使加样孔端置阴
极段放进电泳槽内。
5.在槽内加入0.5×TBE电泳缓冲液，至液面覆盖过胶面。
6.把待检测的样品，按量在洁净载玻片上小心混匀，用移液枪加
至凝胶的加样孔中。
7.接通电泳仪和电泳槽，并接通电源，调节稳压输出，电压最高
不超过5V/cm，开始电泳。
琼脂糖凝胶电泳注意事项及操作流程
琼脂糖凝胶电泳注意事项及操作流程琼脂糖凝胶电泳操作注意事项及流程在进行凝胶电泳操作时，需要注意以下事项：1.缓冲液的使用：缓冲液的离子强度会影响DNA的迁移速度，因此应选择合适的缓冲液，并定期更换或循环使用，避免电泳过程中出现DNA变性的情况。
2.琼脂糖的选择：不同品牌和批次的琼脂糖杂质含量不同，会影响DNA的迁移和荧光背景的强度，因此应有选择地使用。
3.凝胶的制备：凝胶中所加缓冲液应与电泳槽中的相一致，避免出现凝固结块和气泡等影响电泳结果的情况。
4.样品加入量：加样量的多少应根据加样孔的大小和DNA中片段的数量和大小而定，过多的量会导致超载，从而影响电泳结果。
5.DNA标准参照物的使用：电泳系统的变化会影响DNA的迁移，因此需要加入DNA标准参照物进行判定。
6.盐浓度的影响：DNA样品中盐浓度会影响DNA的迁移率，因此应使用同样的缓冲条件进行平行对照样品以消除这种影响。
7.凝胶浓度的选择：不同浓度的凝胶有可能分辨范围广泛的DNA分子，应根据DNA分子的范围来选择凝胶的浓度。
小片段的DNA电泳应采用聚丙烯酰胺凝胶电泳以提高分辨率。
在加样时，需要注意以下事项：1.使用移液抢将样品加至点样孔，每孔点样的体积一般少于25ul，操作要稳当且细心。
2.加入适量的蔗糖来增加样品的浓度，以使每个样品停留在各自的点样孔中。
3.加入水溶性的阴离子追踪染料，用以观察样品移动的距离。
4.加入标准分子质量样品进行标准曲线的制作。
5.在追踪染料泳动到胶的80%部位时停止电泳，注意电泳期间要安全盖好电泳槽盖，以防止液体蒸发和电击的可能性。
6、在电泳结束后，将凝胶浸泡在浓度为1mg/L的溴化乙锭（EB）中，经过5分钟后，可以看到DNA带的出现。
这是因为EB分子能够插入到DNA的双链核苷酸之间，从而与DNA结合。
另外一种方法是在电泳时向凝胶中加入EB。
7、通过在紫外灯下观察，由于EB分子会发出强烈的橘红色荧光，因此可以很明显地观察到DNA带的存在。
琼脂糖凝胶的配制和DNA回收
配1%的琼脂糖凝胶称量琼脂糖0.3g，倒入锥形瓶中，再用量筒量取30ml TAE，混到一起，放入微波炉中煮沸两次，直到看不到颗粒为止（每次大约三分钟），取出后冷却至60℃左右后加入Gold view（万分之一），同时将有机玻璃内槽置于一水平位置模具上，安好挡板，放好梳子。
吸取少量琼脂糖溶液封固胶膜边缘，任其凝固，在距离底板0.5～1.0mm的位置上放置梳子，以便加入琼脂糖后可以形成完好的加样孔，将剩余的温热琼脂糖溶液倒入胶膜中，使胶液缓慢地展开，直到在整个有机玻璃板表面形成均匀的胶层。
凝胶的厚度在3～5mm之间，检查一下梳子的齿下或齿间是否有气泡。
冷却好后拔梳子（30min左右），将板放入电泳槽里，倒入TAE溶液（1X），在冰箱中拿Loading buffer和两个maker（1kb 和D100），将Loading buffer吸到PE手套上（吸取量随意用枪点一下即可）和样品混匀，向凝胶中加样，两侧的孔里加Maker，通电120V跑胶，红为正，黑为负（DNA带负电，所以往红色正极处跑），放到紫外盒上看结果，同时将亮带部分切下来放入1.5ml的已经称完重量的EP管中（若忘了称重量，按照0.9计算），再次称重计算胶的重量，接下来按照DNA回收试剂盒操作步骤回收DNA，测浓度。
普通琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒操作步骤使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。
1. 柱平衡步骤：向吸附柱CA2中（吸附柱放入收集管中）加入500 μl平衡液BL，12,000 rpm(~13,400×g )离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
（请使用当天处理过的柱子）2. 将单一的目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下（尽量切除多余部分）放入干净的离心管中，称取重量。
3. 向胶块中加入等倍体积溶液PN（如果凝胶重为0.1 g，其体积可视为100μl，则加入100 μlPN溶液），50℃水浴放置，其间不断温和地上下翻转离心管，以确保胶块充分溶解。
琼脂糖凝胶电泳的操作步骤
琼脂糖凝胶电泳的操作步骤试剂准备：5xTBE缓冲液：450mmol/L三硼酸，10mmol/LEDTA，pH8.0。
使用时，将上述存储溶液稀释至0.5倍TBE缓冲溶液10倍，可同时用作电泳和凝胶制备的缓冲溶液。
制胶：①根据凝胶量和凝胶浓度，向琼脂糖瓶中加入一定量的电泳缓冲液（琼脂糖粉的总液体量不得超过锥形瓶容量的50％）。
②用保鲜膜或牛皮纸盖住锥形瓶的嘴，在膜或纸上打一些小孔，然后在微波中加热并溶解琼脂糖。
加热时，当溶液沸腾时，戴上耐热手套并小心地摇动锥形瓶，以充分均匀地溶解琼脂糖。
重复该操作几次，直到琼脂糖完全溶解。
③让溶液冷却至约50°C-60°C。
如有必要，添加溴化乙锭溶液（终浓度为0.5μg/ml）或以1μL/30mL的比例添加DNAgreen染料，并充分混合。
④将琼脂糖溶液倒入橡胶模具中，然后将梳子插入适当的位置。
凝胶的厚度通常在3至5mm之间。
上胶模具如下图所示。
对于小胶水，倒入约25-30mL的琼脂糖溶液，对于大胶水，倒入约60-70mL。
如果需要切割和回收凝胶，可以适当地增稠凝胶。
⑤让胶水在室温下凝固约30分钟至1小时。
上样：①将适量的样品与6x上样缓冲液混合（例如：1μl样品和5μl6x— 1 —上样缓冲液），然后用微量移液器小心地将其添加到样品孔中。
②可根据样品浓度调节样品量。
如果DNA含量低，则可以按照上述比例增加样品量，但总体积不得超过样品罐的容量（小孔通常为40μl，大孔通常为200μl上限取决于粘合膜的规格。
③添加每个样品后，请更换移液器吸头，以防止相互污染。
装入样品时要小心，以免损坏凝胶或刺穿样品罐底部的凝胶。
电泳：①添加样品后，关闭电泳槽盖并立即打开电源。
控制电压保持在110V，电流大于40mA。
②当条带移离凝胶前端约2cm（约40分钟）时，停止电泳。
③拍照并在紫外线下观察。
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1%琼脂糖凝胶的配制
1%琼脂糖凝胶的配制
琼脂糖凝胶是一种由琼脂糖和其他添加剂组成的凝胶，常用于生物学实验中的凝胶电泳等分离技术。
1%琼脂糖凝胶是一种较为常见的浓度，其配制方法如下：
材料与仪器：
- 琼脂糖
- 缓冲液（如TAE或TBE缓冲液）
- 水
- 量筒
- 烧杯
- 搅拌棒
- 电泳槽
- 电泳电源
步骤：
1. 将所需琼脂糖称量并加入烧杯中。
按照1%的浓度，需加入1克琼脂糖。
2. 加入所需缓冲液并充分搅拌，在室温下静置15分钟左右，让琼脂糖充分溶解。
3. 将溶液加热至沸腾，持续搅拌，直至琼脂糖完全溶解。
4. 将溶液冷却至约50℃左右，再加入适量的水调节体积，使其达到所需体积。
一般来说，配制1%琼脂糖凝胶时，需要配制100毫升。
5. 充分搅拌使溶液均匀，然后倒入电泳槽中。
在溶液凝固前，用搅拌棒将表面的气泡排除。
6. 等待凝胶完全固化，即可进行凝胶电泳实验。
注意事项：
1. 在配制过程中，应注意卫生和安全。
避免口吐琼脂糖溶液，避免溶液溅入眼睛等敏感部位。
2. 在加热过程中，应注意溶液是否沸腾过于激烈，避免烫伤或将溶液溅出烧杯。
3. 在调节体积时，应注意准确测量加水量，避免导致浓度错误。
4. 在倒入电泳槽前，应确保凝胶槽干净，避免杂质或细菌污染。
总结：
1%琼脂糖凝胶是一种常见的实验用品，其配制方法简单易行。
在配制过程中，应注意卫生和安全，避免误操作导致事故。
配制完成后，应确保凝胶槽干净，避免影响实验结果。
琼脂糖凝胶CL-2B使用说明
琼脂糖凝胶CL-2B使用说明货号：S8731规格：10ml/100ml一、简介琼脂糖凝胶CL-2B是在琼脂糖凝胶2B的基础上通过交联使微球的刚性增强，理化性能提高，有利用于工业生产。
该介质用于生物大分子的凝胶层析。
本品呈白色球状凝胶，无嗅、无味、无肉眼可见杂质。
二、亲和填料特性项目指标基质2%交联琼脂糖排阻极限70000~40×106(球蛋白)形状球形粒径60~200μm最高流速100cm/h*耐热pH7水中120℃20min耐压0.025MPapH稳定性3~13(长时间)，2~14(短时间，在位清洗)化学稳定性可耐8mol/L尿素、6mol/L盐酸胍；可耐有机溶剂，如乙醇、DMF、THF、DMS、CH3Cl、丙酮、二甲基甲酰胺、二氯乙烷、吡啶、乙腈*检测条件：层析柱10mm×300mm*柱床高15cm，25℃，流动相为0.1mol/LNaCl。
三、适用范围本产品具有很高的化学稳定性、高流速、较好的机械性能、可多次重复使用等特点，非特异性吸附低，回收率高，可用有机溶剂及1~2mol/L的NaOH在位清洗，适用于工业规模生产，广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的凝胶色谱纯化。
四、注意事项产品应密封贮存在4℃~25℃（保存溶液为20%乙醇），通风、干燥、清洁的地方。
不能冷冻。
用过的柱子贮存在4℃（20%乙醇）。
本产品避免与氧化剂接触；避免长时间暴露在空气中。
保质期：5年。
五、操作步骤：1、装柱凝胶过滤介质的使用对装柱的要求较高，为了保证分离效果，一般通过柱子上加一个装柱器来使分离柱装满凝胶，或采用带有轴向加压装置的柱子。
凝胶柱床一般高于60cm。
装柱效果可用染料或丙酮-水溶液进行检验。
以下过程为通用介质装填过程。
若为带有轴向加压装置的柱子，可在柱床稳定后将柱床压紧，接好管路。
（1）让所有的材料和试剂达到室温。
配制缓冲液。
凝胶层析上样、平衡和洗脱只用一种低盐浓度的缓冲液。
琼脂糖凝胶电影操作方法
琼脂糖凝胶电影操作方法琼脂糖凝胶电泳是一种常见的分离和检测生物大分子的方法，广泛应用于分子生物学、生物化学以及遗传学等领域。
下面我将详细介绍琼脂糖凝胶电泳的操作步骤和注意事项。
1. 准备工作首先，准备琼脂糖凝胶电泳所需的试剂和仪器设备，包括琼脂糖粉末、缓冲液、DNA样品、DNA标记物和电泳槽等。
2. 制备琼脂糖凝胶将适量的琼脂糖粉末加入缓冲液中，搅拌均匀直至完全溶解，并加热至约80以促进溶解。
然后，将琼脂糖溶液倒入预先准备好的电泳槽中，在琼脂糖溶液表面涂上适量的凝胶刷，用以定位样品孔洞位置。
3. 定位DNA样品孔洞在琼脂糖溶液凝固之前，在刷上的凝胶表面使用透明塑料薄膜压实，然后将DNA 样品孔洞定位模板放置在薄膜上，轻轻旋转以使其与凝胶完全接触。
待凝胶完全凝固后，将模板轻轻取出，即可得到清晰的DNA样品孔洞。
4. 加载DNA样品和DNA标记物将待测的DNA样品进行预处理，包括酶切、PCR扩增等步骤。
然后，将DNA 样品与DNA标记物按照比例混合，将混合物加入到样品孔洞中。
同时，加入一份DNA标记物作为内参。
5. 进行电泳将装有样品的电泳槽放置在电泳仪中，加入适量的缓冲液，确保完全浸没凝胶。
接下来，将正负极电极连接到电泳槽的两端，注意保持正确的极性。
根据实验需求，设定适当的电流和电压参数，开始电泳。
6. 可视化和记录结果经过一定时间的电泳，待DNA样品在凝胶中分离并到达所需距离后，关闭电源，将凝胶取出。
可使用紫外光或荧光成像设备对凝胶进行成像，观察带状图案并拍照记录。
也可以使用DNA染色剂对凝胶进行染色，然后观察和记录结果。
在进行琼脂糖凝胶电泳的操作过程中，还需要注意以下事项：1. 严格遵守实验室的安全操作规程，戴上实验手套和实验眼镜等个人防护用具。
2. 凝胶刷、电泳槽等实验仪器设备要保持清洁，以免影响实验结果。
3. 缓冲液的配制要准确无误，确保电泳条件的稳定性。
4. 千万不能用手直接触摸琼脂糖凝胶，以免污染样品。
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谷胱甘肽琼脂糖凝胶使用说明 Pgex 载体表达的外源蛋白与谷胱甘肽 S-转移酶溶合，因此可以通过谷胱甘肽-琼脂糖亲和层 析进行纯化。Pgex 是一类以谷胱甘肽（γ-谷胱甘肽半胱胺酰甘氨酸）作为底物，通过形成 硫醇尿酸失活毒性小分子的酶。由于 GST 对底物的亲和力是亚豪摩尔级的，因此谷胱甘肽固 化琼脂糖形成的亲和层析树脂 GST 及其融合蛋白的纯化效率很高。可以用含游离谷胱甘肽的 缓冲液洗脱结合 GST 融合蛋白。树脂用 3mol/L NaCl 的缓冲液再生。 谷胱甘肽琼脂糖对 GST 融合蛋白的结合能力很强（每毫升柱床体积的树脂能结合 8 毫克融合 蛋白）。 1 谷胱甘肽树脂的处理 （1）轻轻颠倒盛有谷胱甘肽-琼脂糖树脂的容器，将树脂混成匀浆； （2）取部分匀浆放入 15ml 聚丙烯管（每 100ml 细菌培养物需要 2ml 匀浆）； （3）4℃ 500 g 离心 5 分钟，小心去掉上清； （4）在树脂中加入 10 倍柱床体积的冷的 PBS，颠倒数次，混合均匀，4℃ 500 g 离心 5 分 钟，小心去掉上清； （5）每毫升树脂加入 1 毫升冷的 PBS，制成 50%匀浆，颠倒数次，混合均匀，悬液冰上放置 待用。 2 制备细胞抽提物 （1）每 100 毫升培养基的细胞沉淀悬于 4mlPBS； （2）加入溶菌酶至终浓度 1mg/ml,冰上放置 30 分钟； （3）用针筒将 10ml 0.2%TritonX-100 强行注入黏的细胞裂解物中，剧烈振动数次均匀。 加入 DNase 和 RNase 至终浓度 5ug/ml,4℃振动温育 10 分钟，4℃3000g 离心 30 分钟，去除 不溶性细胞碎片，上清转移到一只新管中，加入 DTT 至终浓度 1mmol/L。 3 纯化融合蛋白 （1）细胞裂解物与适量 50%谷胱甘肽-琼脂糖树脂匀浆混合，每 100 毫升细菌培养物加 2ml 树脂，于室温轻摇 30min；
（2）混合物于 4℃以 500g 离心 5 分钟，小心去掉上清并留样少许进行 SDS 聚丙烯酰胺凝胶 电泳； （3）沉淀中加入 10 倍柱床体积的冷的 PBS，颠倒离心管数次混匀，洗去未与树脂结合的蛋 白； （4）4℃以 500g 离心 5 分钟，小心去掉上清并留样少许进行 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳； （5）重复步骤 11 和 12 两次； （6）合的 GST 融合蛋白可用谷胱甘肽洗脱缓冲液洗脱，也可用凝血酶、肠激酶或 Xa 因子切 割。 4 用谷胱甘肽洗脱融合蛋白 （1）沉淀中加入 1 倍柱床体积的谷胱甘肽洗脱缓冲液，室温轻轻搅动 10min,洗脱树脂上结 合的蛋白； （2）如步骤 12 离心，上清（含洗脱的融合蛋白）移至管中； （3）重复步骤 a 和 b，合并三次上清。 5 蛋白酶解 （1）在结合了融合蛋白的树脂中加入凝血酶、肠激酶或 Xa 因子（根据融合蛋白中的位点选 择），每 ml 树脂加入 50 单位溶于 1mlPBS 的蛋白酶。颠倒离心管数次混匀，室温下振荡 2-16 小时。用小规模试验确定精确时间； （2）4℃以 500g 离心 5 分钟，上清小心移至新管中。（GST 仍结合在树脂上，而靶蛋白也在 上清中，仍需要奋力）； （3）10%SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳分析每一步样品的蛋白质组成。 6 试剂配制
谷胱甘肽洗脱缓冲液：10mmol/L 还原型谷胱甘肽 50mmol/L Tris-Cl(PH8.0)
特别注意： 上样之前，样品必须去除色素，否则色素会被吸附到填料上，影响填料的正常使用。