实验琼脂糖凝胶电泳的原理和方法
DNA的琼脂糖凝胶电泳实验原理和操作步骤
DNA的琼脂糖凝胶电泳实验原理和操作步骤DNA的琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分子生物学技术，用于分析DNA 的大小和纯度，以及进行DNA分子的分离和纯化。
凝胶电泳实验可以帮助我们确定DNA样本的大小和获得纯化的DNA片段供进一步研究使用。
下面是DNA琼脂糖凝胶电泳实验的原理和操作步骤。
【原理】DNA琼脂糖凝胶电泳是根据DNA分子在电场中的不同迁移速率来分离大小不同的DNA片段。
琼脂糖凝胶是一种凝胶状物质，其孔隙大小能够将DNA分子限制在一定范围内，较大的DNA分子迁移速率较慢，而较小的DNA分子迁移速率较快。
琼脂糖凝胶通常是在平均浓度为1%至2%之间的范围内制备，以便在不同大小的DNA分子之间提供适当的分辨率。
实验中，DNA样品通过切割酶或PCR等方法获得，样品经过核酸电泳缓冲液稀释，并在琼脂糖凝胶板上进行电泳。
凝胶板两侧连接电源，DNA 的带电粒子将在电场的作用下从负极迁移到正极，迁移过程中形成DNA的“条带”，条带的位置和长度反映了DNA的大小。
通常，DNA条带由荧光染料或核酸染料标记，以便在电泳结束后进行可视化。
【操作步骤】以下是DNA琼脂糖凝胶电泳实验的一般操作步骤：1.制备琼脂糖凝胶板：a.准备琼脂糖粉末和核酸电泳缓冲液（通常为TAE或TBE缓冲液）。
b.按照说明书将琼脂糖粉末溶解于核酸电泳缓冲液中。
c.将溶液加热至沸腾并搅拌，使琼脂糖完全溶解。
d.将溶液倒入预先准备好的电泳仓中，插入梳子或制备好的孔板，使其凝固。
2.样品制备：a.提取DNA样品并测定其浓度。
b. 将DNA样品稀释到适当浓度，通常为10-50 ng/μL。
c. 添加适当的加载缓冲液，通常是一些染料和甘胺酸（glycine）或其他添加剂。
3.DNA加载和电泳：a.打开琼脂糖凝胶仓盖，将DNA样品负载于凝胶孔内。
b.将DNA负载区域和样品标注在电泳仓中，以便在电泳结束后可以准确识别DNA带。
c.关闭盖子，将电泳仓放入电泳设备中。
生物化学经典实验DNA琼脂糖凝胶电泳的原理、步骤、试剂配制、结果分析分析
凝胶冷却至50°C，加EB至终浓度0.5μg/ml
铺
胶
凝胶凝固后取出梳子
加电泳缓冲液
准备样品
点
样
电
泳
注意观察溴酚蓝染液的迁移
紫外灯下观察电泳结果
照
相
DNA琼脂糖凝胶电泳
实验原理
琼脂糖为链状多糖 →绳状琼脂糖束→大网孔型凝
胶 ——分离、鉴定、纯化DNA
在 pH 值为 8.0～8.3 时，核酸分子碱基几乎不解
离，磷酸全部解离，核酸分子带负电，在电泳时 向正极移动。
采用适当浓度的凝胶介质作为电泳支持物，在分
子筛的作用下，使分子大小和构象不同的核酸分
子泳动率出现较大的差异，从而达到分离核酸片 段检测其大小的目的。
实验原理
当用低浓度的荧光嵌入染料溴化乙啶(Ethidium
bromide, EB)染色, 在紫外光下至少可以检出110ng的DNA条带, 从而可以确定DNA片段在凝胶 中的位置。
此外, 还可以从电泳后的凝胶中回收特定的DNA
条带, 用于以后的克隆操作。
状DNA>开环DNA
DNA片段越长，泳动速度越慢
在低电压时，泳动速度与电场强度成正比
不同浓度琼脂糖分离DNA分子的范围
琼脂糖浓度（W/V,%） 分离范围（kb）
0.3
0.6 0.7 0.9 1.2
5-60
1-20 0.8-10 0.5-7 0.4-6
1.5
2.0
0.2-4
0.1-3
DNA电泳迁移率的对数与凝胶浓度成线性关系。
胶浓（%） 0.6 溴酚蓝 b 0.15kb
2kb
1.6kb
操作步骤
琼脂糖凝胶的制备：溶化，冷却，EB 凝胶板的制备：加梳子，倒胶 样品的制备：样品+1/5体积溴酚蓝
琼脂糖凝胶电泳实验原理和实验方法
琼脂糖凝胶电泳实验原理和实验方法琼脂糖凝胶电泳实验原理和实验方法[实验原理]电泳是现在用于分离和纯化DNA片段的最常用技术。
包含电解质的多孔支持介质----“胶”并把它置于静电场中。
则DNA分子将向阳极移动，这是因为DNA分子沿其双螺旋骨架两侧带有含负电荷的磷酸根残基。
当DNA长度增加时，来自电场的驱动力和来自凝胶的阻力之间的比率就会降低，不同长度的DNA片段就会表现出不同的迁移率。
因而就可依据DNA分子的大小来使其分离。
该过程通过把示踪染料（Purple Loading Dye）或分子量标准参照物(Ladder)和样品(DNA&RNA)一起进行电泳而得到检测。
分子量标准参照物也可以提供一个用于确定DNA片段大小的标准。
琼脂糖凝胶适用于分离大小在0.2-50Kb范围内的DNA片段。
[实验用品]1.琼脂糖 1.0%1.0g琼脂糖+100ml电泳缓冲液(TAE),微波炉中火30秒至沸腾,熔化的琼脂物冷却至60℃时可加入10mg/ml溴化乙锭10μl,充分混匀,将温热的凝胶倒入已置好梳子(鉴定胶用细密点的梳子；回收胶用粗稀的梳子）的胶膜中在室温下放置30-45min后现进行电泳。
1.5%:琼脂糖1.5g。
2.电泳缓冲液50×TAE Tris 乙酸 Tris 242g 终2 mol/L乙酸57.1ml 终1mol/L0.5M EDTA200ml pH8.0 终100mmol/LdH2O 补足至1000ml使用时稀释1×TAE。
5×TBE Tris 硼酸 Tris 54g 终445mmol/L硼酸27.5g 终445mmol/L0.5M EDTA20ml pH8.0 终10mmol/LdH2O 补足至1000ml使用时稀释10倍成0.5倍如50ml贮存液+450ml水→500ml工作液。
[实验内容与方法]1.移取适量的琼脂糖(如制备1%的琼脂糖胶液就移1g的琼脂糖溶于100ml TAE缓冲液中)微波炉加热使其溶于TAE缓冲液中。
琼脂糖凝胶电泳
琼脂糖凝胶浓度与DNA分子的有效分离范围
胶浓度（％） 0.3 0.6 0.7 0.9 1.2 1.5 2.0 线性DNA分子大小（kb） 5～60 1～20 0.8～10 0.5～7 0.4～6 0.2～4 0.1～3
二、仪器设备及材料
1、电泳装置：包括电泳槽（多采用水平方式）、 胶床和梳子三部分组成。 2、稳压电泳仪：电压可变范围0～300～600V， 电流可变范围0～250～500mA。 3、紫外线检测仪：可产生254、302、366nm 3个 波段紫外线，并配备防护眼镜和5mm厚的黑色 有机玻璃防护板。 4、照相机： 5、微波炉： 6、其它：三角烧瓶、量筒、胶带纸、一次性手套等。
3、铺胶：将冷却致60℃的凝胶倒入准备好的胶
床内，凝胶厚度3～5mm。 4、室温下静置1小时左右，凝胶固化。撕去胶床 两端的胶带纸，将带凝胶的胶床置于电泳槽中， 并使样品孔位于电场负极。 5、向电泳槽中加入0.5×TBE电泳缓冲液，以越 过凝胶表面1～2mm为宜。 6、轻轻拔出固定在凝胶中的梳子。 原梳齿处 (样品孔) 即被缓冲液充满，如发现 有气泡，应设法去除。 7、样品准备：向核酸样品中加入约为样品体积 1/6的上样缓冲液，用加样器轻轻混匀。
8、上样：用加样器吸取样品，轻轻的加入到凝 胶的样品孔中。加样量一般10～30μl。
9、盖上电泳槽，接通电源，开始电泳。 开始电泳前，再次确认凝胶样品孔处于电场的负极。 电泳条件：电压1～5v/cm；时间1小时左右。 10、电泳结束后，切断电源，取出凝胶。
11、电泳结果分析： ①紫外检测仪直接观察电源条带； ②摄影记录； ③凝胶成像分析系统处理。
溴化乙锭缺点：
EB是一种强诱变剂，并有中度毒性。 注意：①操作中务必带上防护用手套。 ②如不慎皮肤与溶液接触，应立即用清水彻底冲洗。 ③含溴化乙锭的溶液使用后应进行净化处理，使其 致诱变活性下降为原来的1/200左右，方可丢弃。
实验琼脂糖凝胶电泳的原理和方法
实验琼脂糖凝胶电泳的原理和方法实验琼脂糖凝胶电泳（Agarose gel electrophoresis）是一种常用的分离DNA和RNA分子的技术。
它基于琼脂糖凝胶电泳原理，利用琼脂糖凝胶的孔隙大小和电泳电场的力对DNA和RNA分子进行分离。
琼脂糖是一种高分子多糖，当加热溶解后冷却凝固时，形成一个多孔的凝胶网络。
这个凝胶网络中的孔隙大小是可以调控的，通过改变琼脂糖的浓度可以得到不同孔隙大小的凝胶。
1.制备琼脂糖凝胶：按照实验需要，称取适量琼脂糖加入缓冲液中，搅拌使其溶解，然后加热至溶解。
等溶液冷却至约50℃时，在一个电泳板间夹两块玻璃片或塑料片，将琼脂糖凝胶溶液倒入电泳板中，并将梳子插入凝胶中，让凝胶固化。
2.样品制备：将要检测的DNA或RNA分子提取和纯化，并用缓冲液稀释合适浓度。
添加适量的DNA荧光染料或核酸染色剂，使其在紫外光下可见。
3.样品加载：将样品加入琼脂糖凝胶的凝胶孔口中，注意不要将样品推到凝胶中。
4.电泳分离：将凝胶板放入电泳槽中，加入适量缓冲液，注意保证电泳液中缓冲液位置高于凝胶。
然后将负极电极和正极电极分别连接到电泳槽的两端，开启电源，施加适当电压使DNA或RNA分子在电场力的作用下进行电泳分离。
5.染色和可视化：电泳结束后，取出凝胶板，并用染色剂对DNA或RNA分子进行染色。
染色剂与DNA或RNA结合后，用紫外光照射凝胶，通过相应设备观察凝胶上的条带形成。
实验琼脂糖凝胶电泳的原理是基于DNA和RNA分子在电场下按照大小进行分离的特性。
在电场作用下，DNA或RNA分子荷负性被引向正极（阴极）方向移动。
琼脂糖凝胶的孔隙大小可以根据需要调控，大分子难以通过，小分子易于通过。
因此，DNA或RNA分子根据其大小不同，通过孔隙大小的限制，从而形成条带，完成了对DNA或RNA的分离。
实验13琼脂糖凝胶电泳的原理和方法
1983年，Schwartz等人根据DNA分子弹性弛豫 时间(外推为零的滞留时间)与DNA分子大小有关的 特性，设计了脉冲电场梯度凝胶，交替采用两个垂 直方向的不均匀电场，使DNA分子在凝胶中不断改 变方向，从而使DNA按分子大小分开。后来，Carle 等改进了电泳技术，并发现周期性的反转换电场 (periodic inversion of the electric field)亦能使大 分子DNA通过电泳分开。电泳系统是由一个水平式 电泳槽和两组独立，彼此垂直的电极组成，一组电 极负极为N，正极为S；另一组负极为W，正极为E 。
不同构型DNA的移动速度次序为：共价闭环 DNA(covalently closed circular，简称cccDNA)＞直线 DNA＞开环的双链环状DNA。当琼脂糖浓度太高时，环状 DNA(一般为球形)不能进入胶中，相对迁移率为0(Rm=O)， 而同等大小的直线双链DNA(刚性棒状)则可以 长轴方向 前进(Rm＞O)，由此可见，这3种构型的相对迁移率主要 取决于凝胶浓度，但同时，也受到电流强度、缓冲液离 子强度等的影响。
琼脂糖凝胶电泳的 原理和方法
一、电泳方法的分类
按支持物的物理性状不同，区带电泳可为： 滤纸及其他纤维（如醋酸纤维、玻璃纤维、 聚氯乙烯纤维）薄膜电位； 粉末电泳，如纤维素粉、淀粉、玻璃粉电 泳； 凝胶电泳，如琼脂、琼脂糖、硅胶、淀粉 胶、聚丙烯酰胺凝胶等； 丝线电泳，如尼龙丝、人造丝电泳。
DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应 和分子筛效应。DNA分子在高于等电点的pH溶液 中带负电荷，在电场中向正极移动。在一定的 电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛 效应，即DNA分子本身的大小和构型。
12
13
在凝胶中，DNA片段迁移距离(迁移率)与碱 基对的对数成反比，因此通过已知大小的标准 物移动的距离与未知片段的移动距离进行比较， 便可测出未知片段的大小。
琼脂糖凝胶电泳技术的原理和方法
（3）溴化乙锭为扁平状分子，在紫外光照射下发射荧光。EB可与DNA分子形成 EB-DNA复合物，其荧光强度与DNA的含量成正比。据此可判断DNA分子量大小
和粗略估计样品DNA浓度。
三 仪器、材料与试剂
1.质粒样品、酶切样品和PCR样品。 2.凝胶电泳系统和电泳图像分析系统(凝胶成像系统)等。 3.琼脂糖、 1XTAE电泳缓冲液、Goldview、 6X载样缓冲
2.凝胶成像分析系统
3.Marker
一个已知分子质量的 DNA 样品做最对照，用来确定待 测样品的相对分子质量。
4.常用电泳缓冲液
缓冲液
TAE
TBE TPE
缓冲容量 最低 很高
Байду номын сангаас迁移速度 最快
(高10％)
较慢
分辨率
用途
高度复杂DNA混 高分子量高 合物；超螺旋
DNA
低分子量高
价格昂贵，不常 用
5.上样缓冲液
配制多大浓度的琼脂糖凝胶，要根据被检的DNA分子大小来确定。琼 脂糖是一种线性多糖聚合物。浓度越高，孔隙越小，其分辨能力就越强。
表1 琼脂糖凝胶的浓度与DNA分子大小的关系
琼脂糖浓度(%) 0.3 0.6 0.7 0.9 1.2 1.5 12.0
线型DNA分子的分离范围(Kb) 5～60 1～20 0.8～10 0.5～7 0.9～6 0.2～3 0.1～2
液 （ 6X loading buffer）和DNA分子量标准（Marker ） 等。
1.凝胶电泳系统
美国Bio-rad伯乐 小型水平电泳槽Mini-Sub Cell GT Cell
DYY-6C型 双稳定时电泳仪电源（北 京六一） 输出范围（显示分辨率）： 6-600V(1V) 4-400mA (1mA) 240W
DNA的琼脂糖凝胶电泳实验原理和操作步骤
一、实验目的琼脂糖凝胶电泳是常用的检测核酸的方法，学习DNA琼脂糖凝胶电泳的使用技术，掌握有关的技术和识读电泳图谱的方法.二、实验原理琼脂糖凝胶电泳是常用的用于分离、鉴定DNA、RNA分子混合物的方法,这种电泳方法以琼脂凝胶作为支持物，利用DNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应，达到分离混合物的目的。
DNA分子在高于其等电点的溶液中带负电，在电场中向阳极移动。
在一定的电场强度下,DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即分子本身的大小和构型是主要的影响因素。
DNA分子的迁移速度与其相对分子量成反比。
不同构型的DNA分子的迁移速度不同。
如环形DNA分子样品，其中有三种构型的分子：共价闭合环状的超螺旋分子（cccDNA）、开环分子（ocDNA)、和线形DNA分子（IDNA）.这三种不同构型分子进行电泳时的迁移速度大小顺序为：cccDNA＞IDNA＞ocDNA核酸分子是两性解离分子，pH3。
5是碱基上的氨基解离，而三个磷酸基团中只有一个磷酸解离，所以分子带正电，在电场中向负极泳动；而pH8。
0-8。
3时，碱基几乎不解离,而磷酸基团解离，所以核酸分子带负电，在电场中向正极泳动.不同的核酸分子的电荷密度大致相同,因此对泳动速度影响不大.在中性或碱性时，单链DNA与等长的双链DNA的泳动率大致相同。
影响核酸分子泳动率的因素主要是：1、样品的物理性状即分子的大小、电荷数、颗粒形状和空间构型。
一般而言，电荷密度愈大，泳动率越大。
但是不同核酸分子的电荷密度大致相同，所以对泳动率的影响不明显。
对线形分子来说，分子量的常用对数与泳动率成反比,用此标准样品电泳并测定其泳动率,然后进行DNA分子长度（bp）的负对数——泳动距离作标准曲线图,可以用于测定未知分子的长度大小。
DNA分子的空间构型对泳动率的影响很大，比如质粒分子,泳动率的大小顺序为：cDNA＞I DNA＞ocDNA但是由于琼脂糖浓度、电场强度、离子强度和溴化乙锭等的影响,会出现相反的情况.2、支持物介质核酸电泳通常使用琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶两种介质,琼脂糖是一种聚合链线性分子.含有不同浓度的琼脂糖的凝胶构成的分子筛的网孔大小不同，是于分离不同浓度范围的核酸分子。
实验二 琼脂糖凝胶电泳实验
实验二琼脂糖凝胶电泳实验【实验目的】（1）学习琼脂糖凝胶电泳的基本原理；（2）掌握使用水平式电泳仪的方法；（3）学习在含有甲醛的凝胶上进行RNA电泳的方法。
【实验原理】琼脂糖凝胶电泳是基因工程实验室中分离鉴定核酸的常规方法。
核酸是两性电解质，其等电点为pH2-2.5，在常规的电泳缓冲液中（pH约8.5），核酸分子带负电荷，在电场中向正极移动。
核酸分子在琼脂糖凝胶中泳动时，具有电荷效应和分子筛效应，但主要为分子筛效应。
因此，核酸分子的迁移率由下列几种因素决定：（1）DNA的分子大小。
线状双链DNA分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速率与DNA分子量对数成反比，分子越大则所受阻力越大，也越难于在凝胶孔隙中移动，因而迁移得越慢。
（2）DNA分子的构象。
当DNA分子处于不同构象时,它在电场中移动距离不仅和分子量有关,还和它本身构象有关。
相同分子量的线状、开环和超螺旋质粒DNA在琼脂糖凝胶中移动的速度是不一样的，超螺旋DNA移动得最快，而开环状DNA移动最慢。
如在电泳鉴定质粒纯度时发现凝胶上有数条DNA带难以确定是质粒DNA不同构象引起还是因为含有其他DNA引起时，可从琼脂糖凝胶上将DNA带逐个回收，用同一种限制性内切酶分别水解，然后电泳，如在凝胶上出现相同的DNA图谱，则为同一种DNA。
（3）电源电压。
在低电压时，线状DNA片段的迁移速率与所加电压成正比。
但是随着电场强度的增加，不同分子量的DNA片段的迁移率将以不同的幅度增长，片段越大，因场强升高引起的迁移率升高幅度也越大，因此电压增加，琼脂糖凝胶的有效分离范围将缩小。
要使大于2kb 的DNA 片段的分辨率达到最大，所加电压不得超过5v/cm。
（4）离子强度影响。
电泳缓冲液的组成及其离子强度影响DNA的电泳迁移率。
在没有离子存在时（如误用蒸馏水配制凝胶），电导率最小，DNA几乎不移动；在高离子强度的缓冲液中（如误加10×电泳缓冲液），则电导很高并明显产热，严重时会引起凝胶熔化或DNA变性。
琼脂糖凝胶电泳
琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳是一种凝胶电泳方法，用于生物化学、分子生物学、遗传学和临床化学，以分离琼脂糖基质中的大分子混合群，例如DNA、RNA 或蛋白质。
琼脂糖是从海藻中提取的天然线性聚合物，当在缓冲液中加热并冷却时，通过氢键形成凝胶基质。
它们是分离中、大型核酸最常用的介质，分离范围广。
琼脂糖凝胶电泳实验常用以DNA 切胶回收，DNA 分离和用于佐证DNA 是否重组、质粒等是否切开。
今天我们就来聊聊琼脂糖凝胶电泳实验的一些小技巧小细节。
第一步：胶液的制备称取0.4g 琼脂糖，置于200ml 锥形瓶中，加入50ml 0.5×TBE 稀释缓冲液，放入微波炉里加热，直到琼脂糖全部熔化，取出摇匀，此为0.8%琼脂糖凝胶液。
总液体量不宜超过锥瓶的50%容量。
否则会溢出来的。
毛博就吃过这个亏。
还要擦洗微波炉。
加热过程中要不时摇动，使附于瓶壁上的琼脂糖颗粒进入溶液。
加热时应盖上封口膜，以减少水份蒸发。
第二步：胶板的制备倒胶时的温度不可太低，否则凝固不均匀。
东一块西一块的。
果冻做出来就不好看啦。
速度也不可太快，否则容易出现气泡。
果冻做出来里面都是气泡。
怎么吃呀？待胶完全凝固后拨出梳子，注意不要损伤梳底部的凝胶。
第三步：加样注意上样时要小心操作，避免损坏凝胶或将样品槽底部凝胶刺穿。
果冻下面被戳个窟窿，还怎么吃呀？第四步：电泳加完样后，合上电泳槽盖，立即接通电源。
控制电压保持在60-80V，电流在40mA 以上。
当溴酚蓝条带移动到距凝胶前沿约2cm 时，停止电泳。
第五步：染色未加EB 的胶板在电泳完毕后移入0.5μg/ml 的EB 溶液中，室温下染色20-25 分钟。
第六步：观察和拍照在波长为254nm 的长波长紫外灯下观察染色后的或已加有EB的电泳胶板。
DNA 存在处显示出肉眼可辨的桔红色荧光条带。
紫光灯下观察时应戴上防护眼镜或有机玻璃面罩，以免损伤眼睛。
除这些细节之外，还有一些注意事项：1. 酶切时所加的DNA 溶液体积不能太大，否则DNA 溶液中其他成分会干扰酶反应。
dna琼脂糖凝胶电泳
DNA琼脂糖凝胶电泳介绍DNA琼脂糖凝胶电泳是一种常用的生物技术实验方法，用于分离DNA分子并确定其大小。
它基于DNA分子的电荷和大小不同，通过应用电场使DNA分子在琼脂糖凝胶中迁移，从而实现分离。
原理DNA琼脂糖凝胶电泳的基本原理是：DNA分子带负电荷，当置于电场中后，电场将使DNA分子向正电极移动。
然而，DNA分子在琼脂糖凝胶中的迁移速度取决于它的大小。
较长的DNA分子由于受阻力较大，迁移速度较慢，而较短的DNA分子迁移速度较快。
因此，琼脂糖凝胶电泳可以将DNA分子根据大小进行分离。
实验步骤1. 样品处理将待测DNA样品与凝胶电泳缓冲溶液混合，并加入负荷样品的染料来增加样品的重量和使其可见。
一般使用表现著名的溴化乙锭（Ethidium Bromide）来染色DNA分子。
2. 准备琼脂糖凝胶制备琼脂糖凝胶液，并根据实验需要将其倒入电泳槽中，并形成一个凝胶。
此过程需要使用琼脂糖凝胶制备缓冲液，一般为Tris–醋酸–EDTA缓冲液，简称TAE缓冲液。
3. 样品加载使用微量吸管或特殊的样品加载微孔将样品加载到琼脂糖凝胶上。
每个微孔能够承载一定量的样品，因此要根据样品的数量进行安排。
通常还会在凝胶上加载一个DNA分子大小标记（Marker）作为参考，以便确定未知样品的大小。
4. 电泳将凝胶放入电泳槽中，并将正负电极接入电源。
通过给定的电流和时间来进行电泳实验。
电流的选择取决于琼脂糖凝胶的密度和样品的大小范围。
5. 可视化和分析凝胶电泳完成后，通过紫外线照射或荧光成像系统来观察结果。
DNA分子在凝胶上能够与染料结合产生发光，从而可在琼脂糖凝胶上看到DNA分子的大小分布。
通过与已知DNA分子大小标记的对比，可以确定未知样品DNA分子的大小。
应用领域1. 分子生物学在分子生物学研究中，DNA琼脂糖凝胶电泳是一种常用的手段。
它可以用于检测DNA分子的大小、评估PCR反应的效果、验证基因敲除和插入等分子操作的成功性等。
DNA琼脂糖凝胶电泳实验原理及超详细步骤
DNA琼脂糖凝胶电泳实验原理及超详细步骤实验原理：琼脂糖凝胶电泳是利用DNA分子的电荷和大小差异来分离DNA分子的一种方法。
DNA分子在电场作用下，会向阳极移动，移动速度与DNA分子的大小呈反比。
琼脂糖凝胶是一种聚合物，可以形成一种网络结构，在凝胶中进行电泳分离。
DNA分子在凝胶孔隙中相互碰撞，分子大小不同的DNA分子会在不同的速度下向阳极移动，从而实现了DNA分子的分离。
实验步骤：1.实验前的准备：a.制备琼脂糖凝胶：取一定量的琼脂糖粉末加入缓冲液中，加热溶解后冷却至大约50℃左右，倒入琼脂糖凝胶板中，插入梳子，待凝固。
b.缓冲液的制备：根据需要准备TAE缓冲液或TBE缓冲液。
2.DNA样品制备：a.将待测DNA样品加入试管中，用适当的缓冲液稀释样品。
b.使用嵌入剂将DNA样品加入琼脂糖凝胶中，通常将样品加入凝胶中的槽道。
3.凝胶电泳操作：a.将琼脂糖凝胶板放入电泳槽中，加入足够的缓冲液，使凝胶完全浸泡在缓冲液中。
b.将阴极和阳极电极连接到电泳槽中。
c.将样品和一些DNA分子大小标准物质分别加入凝胶中，用以测量DNA的大小。
d.打开电源，设定电流和电压，并进行电泳分离。
4.凝胶染色和成像：a.完成电泳分离后，关闭电源，取出琼脂糖凝胶板。
b.将琼脂糖凝胶板放入DNA染色剂中，染色一段时间后，取出凝胶板。
c.在紫外灯下观察琼脂糖凝胶板，可以看到DNA分子的条带。
5.数据分析：a.使用图像分析软件或标尺对琼脂糖凝胶板上的DNA条带进行测量，得到DNA分子的大小。
b.根据标准物质的条带大小，将待测DNA分子的大小与标准物质进行对比，计算DNA分子的大小。
c.根据DNA条带的强度和大小，可以估算DNA的浓度。
需要注意的是，具体的实验步骤可能因实验设备和试剂的不同而有所差异，所以在进行实验之前最好仔细阅读实验操作手册，并参考实验室老师或资深研究人员的指导。
琼脂糖凝胶电泳技术的原理和方法
琼脂糖凝胶电泳技术的原理和方法一、原理：琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分离和分析生物大分子的方法。
其原理是利用琼脂糖凝胶作为固定相，通过电场作用将待分离物质在凝胶中进行分离。
琼脂糖凝胶是一种具有多孔结构的凝胶介质，可以根据待分离物质的尺寸和电荷特性进行分离。
二、方法：1. 准备琼脂糖凝胶：首先，按照所需的凝胶浓度和体积配制琼脂糖溶液。
然后，在琼脂糖溶液中加入缓冲液，并搅拌均匀。
将混合液倒入凝胶板中，待其凝固后，准备好使用的琼脂糖凝胶。
2. 样品制备：将待分离的样品进行处理，如蛋白质样品可以经过蛋白质提取和纯化步骤，DNA样品可以进行酶切等处理。
3. 样品加载：将处理好的样品加载到琼脂糖凝胶中。
可以使用样品井或样品孔进行加载，确保每个样品均匀地加载到凝胶中。
4. 电泳条件设置：根据待分离物质的特性和需求，设置适当的电泳条件。
包括电场强度、电泳时间和缓冲液pH值等。
5. 电泳分离：将凝胶板放入电泳槽中，连接电源，进行电泳分离。
在电场的作用下，待分离物质会在凝胶中进行迁移，根据其尺寸和电荷特性进行分离。
6. 结果分析：电泳结束后，可以通过染色等方法观察凝胶板上的带状图案。
根据不同的染色方法，可以观察到不同的待分离物质，如蛋白质带、DNA带等。
三、应用：琼脂糖凝胶电泳技术在生物科学研究中具有广泛的应用。
其中，常见的应用有以下几个方面：1. 蛋白质分离与鉴定：可以通过琼脂糖凝胶电泳技术对蛋白质进行分离和鉴定。
蛋白质在电泳过程中根据其分子量的不同而分离成多个带状条带，通过染色或Western blotting等方法可以对目标蛋白质进行定性或定量分析。
2. DNA分析：琼脂糖凝胶电泳技术在DNA分析中也有重要应用。
可以通过电泳分离来检测DNA片段的长度和纯度，如测序片段、PCR产物等。
3. RNA分析：琼脂糖凝胶电泳技术也可以用于RNA的分析。
通过电泳分离可以检测RNA的大小、纯度和相对含量等。
4. 蛋白质-核酸相互作用研究：通过琼脂糖凝胶电泳技术，可以研究蛋白质与核酸之间的相互作用。
DNA琼脂糖凝胶电泳实验原理和方法步骤
DNA的琼脂糖凝胶电泳实验原理和方法步骤脂糖凝胶泳是用于分别、定和提DNA 片段的准方法。
脂糖是从脂中提取的一种多糖，具水性，但不荷，是一种很好的泳支持物。
DNA 在碱性条件下〔pH8 0 的冲液〕荷，在中通凝胶介向正极移，不同样 DNA 分子片段由于分子和构型不同样，在中的泳速率液不同样。
溴化乙〔 EB〕可嵌入 DNA分子碱基形成光合物，紫外照射后，可分出不同样的区，到达分别、定分子量，重子的目的。
⋯一、实验目的学习和掌握琼脂糖电泳法判断DNA 的原理和方法。
二、实验原理琼脂糖凝胶电泳是用于分别、判断和提纯DNA 片段的标准方法。
琼脂糖是从琼脂中提取的一种多糖，具亲水性，但不带电荷，是一种很好的电泳支持物。
DNA 在碱性条件下〔的缓冲液〕带负电荷，在电场中经过凝胶介质向正极搬动，不同样DNA 分子片段由于分子和构型不同样，在电场中的泳动速率液不同样。
溴化乙锭〔EB〕可嵌入 DNA 分子碱基对间形成荧光络合物，经紫外线照射后，可分出不同样的区带，到达分别、判断分子量，精选重组子的目的。
三、实验资料实验 14 提取的 DNA 样品，四、器具及药品电泳仪，电泳槽，紫外透射反射仪，恒温水浴锅，微波炉，微量进样器，三羟甲基氨基甲烷，盐酸，醋酸钠， EDTA，琼脂糖，溴酚蓝，溴化乙锭。
五、实验步骤1、安装电泳槽将有机玻璃的电泳凝胶床洗净，晾干，用胶带将两端的张口封好，放在水平的工作台上，插上样品梳。
2、琼脂糖凝胶的制备称取琼脂糖溶解在电泳缓冲液中，〔按的琼脂糖含量，1-25kb 大小的 DNA 用1%的凝胶，20-100kb 的 DNA 用%的凝胶， 200-2000bp 的 DNA 用 %的凝胶〕置微波炉或沸水浴中加热至完好溶化〔不要加热至沸腾〕，取出摇匀。
3、灌胶将冷却到60℃的琼脂糖溶液轻轻倒入电泳槽水平板上。
4、待琼脂糖胶凝固后，在电泳槽内参加电泳缓冲液，尔后拔出梳子。
5、加样将 DNA 样品与加样缓冲液〔 loading buffer 〕按 4： 1 混匀后，用微量移液器将混杂液加到样品槽中，每槽加 10-20μl，记录样品的点样次序和加样量。
琼脂糖凝胶电泳实验原理及步骤
实验三琼脂糖凝胶电泳一、实验原理琼脂糖凝胶电泳是分离和纯化DNA 片段的常用技术。
把DNA样品加入到一块包含电解质的多孔支持介质（琼脂糖凝胶）的样品孔中，并置于静电场上。
由于DNA分子的双螺旋骨架两侧带有含负电荷的磷酸根残基，因此在电场中向正极移动。
在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应。
具有不同的相对分子质量的DNA片段泳动速度不一样，因而可依据DNA分子的大小来使其分离。
凝胶电泳不仅可分离不同分子质量的DNA，也可以分离相对分子质量相同，而构型不同的DNA分子。
在电泳过程中可以通过示踪染料或相对分子质量标准参照物和样品一起进行电泳而得到检测。
相对分子质量标准参照物相对可以提供一个用于确定DNA片段大小的标准。
在凝胶中加入少量溴化乙锭(ethidium bromide, EB)，其分子可插入DNA的碱基之间，形成一种络合物，在254～365nm波长紫外光照射下，呈桔红色荧光，因此也可对分离的DNA 进行检测。
一般琼脂糖凝胶电泳适用于大小在0.2kb～50kb范围内的DNA片段。
本实验介绍琼脂糖凝胶的制备以及琼脂糖凝胶电泳在DNA片段分离中的应用方法。
二、仪器及试剂1.仪器及耗材：水平电泳槽、电泳仪、凝胶成像分析系统、微波炉、微量移液器、透明胶带、点样板或parafilm、100 ml或250 ml锥形瓶、量筒、吸头等。
2.试剂及配制：50×TAE缓冲液的配制：2 mol/L Tris-乙酸，0.05 mol/L EDTA（pH8.0）配制1000 mlTris 242 g冰乙酸 57.1 ml0.5 mol/L EDTA 100 ml加入600 ml去离子水后搅拌溶解，将溶液定容至1 L后。
高温高压灭菌，室温保存。
DNA的琼脂糖凝胶电泳实验原理和方法步骤
⑸100倍电泳缓冲液的配制：
4mol/LTris-HCl（pH8..0），2mol/L醋酸钠，200mmol/LEDTA
称取，无水乙酸钠，，先用400ml双蒸水加热搅拌溶解后，再用冰乙酸调pH至（大约加入冰乙酸50ml），然后定容至500ml。用时稀释100倍。
DNA的琼脂糖凝胶电泳实验原理和方法步骤
琼脂糖凝胶电泳是用于分离、鉴定和提纯DNA片段的标准方法。琼脂糖是从琼脂中提取的一种多糖，具亲水性，但不带电荷，是一种很好的电泳支持物。DNA在碱性条件下（pH8 0的缓冲液）带负电荷，在电场中通过凝胶介质向正极移动，不同DNA分子片段由于分子和构型不同，在电场中的泳动速率液不同。溴化乙锭（EB）可嵌入DNA分子碱基对间形成荧光络合物，经紫外线照射后，可分出不同的区带，达到分离、鉴定分子量，筛选重组子的目的。…
4、待琼脂糖胶凝固后，在电泳槽内加入电泳缓冲液，然后拔出梳子。
5、加样
将DNA样品与加样缓冲液（loading buffer）按4：1混匀后，用微量移液器将混合液加到样品槽中，每槽加10-20μl，记录样品的点样次序和加样量。
6、电泳
安装好电极导线，点样孔一端接负极，另一端接正极，打开电源，调电压至3-5V/cm，电泳1-3hr，当溴酚蓝移到距凝胶前沿1-2cm时，停止电泳。
2、琼脂糖凝胶的制备
称取琼脂糖溶解在电泳缓冲液中，（按的琼脂糖含量，1-25kb大小的DNA用1%的凝胶，20-100kb的DNA用%的凝胶，200-2000bp的DNA用%的凝胶）置微波炉或沸水浴中加热至完全溶化（不要加热至沸腾），取出摇匀。
3、灌胶
琼脂糖凝胶电泳的原理和关键操作
琼脂糖凝胶电泳的原理和关键操作一、原理琼脂糖凝胶电泳是一种常用的生物分子分离和分析技术。
其原理基于琼脂糖凝胶的特性和电泳的原理。
琼脂糖是一种多糖类物质，具有高分子量和黏性。
在电泳过程中，琼脂糖凝胶能够形成一种网状结构，通过这种结构可以筛选分离不同大小和电荷的生物分子。
琼脂糖凝胶电泳是在一定浓度的琼脂糖溶液中进行的。
琼脂糖溶液被加热并冷却后形成凝胶。
凝胶中的孔隙大小与琼脂糖的浓度有关，浓度越高，孔隙越小。
在电泳过程中，样品被加载到琼脂糖凝胶中的孔隙中。
然后，在电场的作用下，样品中的带电分子会向电极方向移动。
由于琼脂糖凝胶的筛选作用，分子的迁移速度将与其大小和电荷有关。
大分子迁移速度较慢，小分子迁移速度较快。
二、关键操作1. 准备琼脂糖凝胶：将适量的琼脂糖加入缓冲液中，加热溶解后冷却形成凝胶。
凝胶的浓度应根据分离物的大小来选择，一般可选用0.5-2%的琼脂糖。
2. 加载样品：将待分析的生物样品加入琼脂糖凝胶中的孔隙中。
可以使用微量吸管或微量注射器等工具，尽量避免产生气泡。
3. 设置电场：将琼脂糖凝胶放置在电泳槽中，并加入适量的缓冲液。
然后，将电泳槽连接到电源上，设置适当的电压和电流。
4. 进行电泳：打开电源，开始进行电泳。
根据需要，可以选择常规电泳或脉冲电泳等不同的电泳方式。
5. 分析结果：根据分子的大小和电荷，不同的分子将在琼脂糖凝胶中以不同的速度迁移。
经过一定时间后，可以停止电泳，取出琼脂糖凝胶进行染色或进一步分析。
通过琼脂糖凝胶电泳，可以实现DNA、RNA、蛋白质等生物分子的分离和定量分析。
在实验室中，琼脂糖凝胶电泳被广泛应用于基因测序、蛋白质分析、病毒检测等领域。
总结：琼脂糖凝胶电泳是一种基于琼脂糖凝胶和电泳原理的生物分子分离和分析技术。
关键操作包括准备琼脂糖凝胶、加载样品、设置电场、进行电泳和分析结果。
该技术在生物学研究和临床诊断中具有重要的应用价值。
琼脂糖凝胶电泳原理
琼脂糖凝胶电泳原理
琼脂糖凝胶电泳（简称DNA电泳）是一种用于分离和分析核酸样品的常用方法。
它是以琼脂糖凝胶为基质，利用电场和其他物理现象将DNA分离出来。
DNA电泳的原理是：DNA分子受到电场的作用，其中负电荷的碱基（即碱基对）产生负电势，然后在电场的作用下向正电极处移动，而正电荷的碱基（即碱基对）产生正电势，并向负电极处移动，从而形成一个电场，使DNA呈现出一种梯度电泳现象，从而将DNA 分离出来。
琼脂糖凝胶电泳的步骤大致如下：首先，将DNA样品中的蛋白质和碳水化合物溶解掉，然后将溶解后的DNA样品放入琼脂糖凝胶中，再将其加入电极槽，最后在凝胶中加入少量的电解液，使其充满电荷，并通过电源将凝胶中的DNA分离。
琼脂糖凝胶电泳有许多优点，如可以分离出不同长度和完全不同的DNA分子，可以大量分离出DNA分子，可以分离出RNA分子，且操作简便，分离效率高，分离时间短，而且它的分离结果可以通过电泳板清楚地显示出来。
由此可见，琼脂糖凝胶电泳是一种非常有效的方法，用于分离和分析核酸样品。
它在分子生物学研究中有着重要的作用，可用于检测
染色体变异、基因突变等，是一种非常重要的分子生物学技术。
实验三 琼脂糖凝胶电泳
三、实验材料
上次实验提取的质粒 pSK（3 kb） 和MP3 （6 kb）
关于质粒大小在电泳中的鉴定：酶切后线性化条带电泳时 所处的位置指示质粒的大小。
该质粒载体用的是pUC的复制子，拷 贝数能达到500-700个。
（三）电泳
打开电源开关，调节电压至3-5 V/cm，可见到溴酚蓝条带由负极向正极移动， 约一小时后即可观察。
（四）观察
将电泳好的凝胶置于紫外透射检测仪上，戴上防护观察罩，打开紫外灯， 可见到绿色核酸条带，根据条带粗细和荧光强度，可粗略估计该样品DNA
的浓度。同时根据已知分子量的标准DNA，通过线性DNA条带的相对位置初
TAE是Tris-乙酸，缓冲容量小，但是溶解度大，易于储存； TBE是Tris-硼酸，缓冲容量大，但是溶解度小，不易长期储
存，易产生沉淀；
分离大片段最好用TAE，小片段用TBE； TBE存在硼离子，会对一些酶的活性稍有影响。
常用6×凝胶加样缓冲液配方
有的10 × loading buffer中多了一样SDS（1%），它会使酶类（如Taq酶和限 制性内切酶）变性，有终止酶促反应的作用。但在电泳时（以PCR产物为 例），在电泳泳道上会产生一片弥散，如果电泳跑的距离短，和多出来一 条带没有什么区别（大概1000 bp左右）。不加SDS的凝胶加样缓冲液只有 电泳指示剂和沉淀样品的作用。
注意：同样的marker点在不同的胶孔中，电泳迁移率有差异。因为电泳 时有边缘效应，边上的跑得快；跑胶时间长了会发热，整快胶受热不均 时也会出现这种现象。
碱裂解法抽提质粒电泳会出现几条带？
但因为抽提质粒时各人的操作差异,造成CCC/OC/L等多种构型， 条带多少不一，亮暗也不一。但最典型的有三条：超螺旋、 开环和复制中间体。 如果RNaseA添加过少或者质量不高，会导致RNA降解不完全， 会有一条远离点样孔跑的最快的残余RNA条带；根据RNA降解 程度不同，条带亮度会有很大差异。 提取过程中加溶液震荡剧烈会导致基因组片段断裂成很小的 片段，因此质粒中含有基因组的短片段会导致一些电泳条带 的出现。 还有电泳时间的长短造成各条带的移动距离也不一，一般较 难判断是对是错。电泳跑的时间较短，尽管能分出大小，但 习惯上跑开点对分辨差别不大的条带有好处，短胶容易出现 误判。
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26
1983年，Schwartz等人根据DNA分子弹性弛豫 时间(外推为零的滞留时间)与DNA分子大小有关的
特性，设计了脉冲电场梯度凝胶，交替采用两个垂 直方向的不均匀电场，使DNA分子在凝胶中不断改 变方向，从而使DNA按分子大小分开。后来，Carle 等改进了电泳技术，并发现周期性的反转换电场 (periodic inversion of the electric field)亦能使大 分子DNA通过电泳分开。电泳系统是由一个水平式 电泳槽和两组独立，彼此垂直的电极组成，一组电 极负极为N，正极为S；另一组负极为W，正极为E 。
4
D-半乳糖
3，6-脱水-L-半乳糖
琼脂糖链依分子内和分子间氢键及其它力的作 用使其互相盘绕形成绳状琼脂糖束，构成大网孔型 凝胶。
5
冷却
松散，随机地，盘绕地琼脂糖链
6
双螺旋结构区域与线性链相链接
淬火
溶胶状态
初级胶
最终的凝胶结构
7
琼脂糖为电泳支持物进行平板电泳，其优点 (1)琼脂糖凝胶电泳操作简单，电泳速度快，样品
19
(5) 琼脂糖凝胶分离大分子DNA实验条件的研究结果表 明：在低浓度、低电压下，分离效果较好。在低电压 条件下，线性DNA分子的电泳迁移率与所用的电压呈正 比。但是，在电场强度增加时，较大的DNA片段迁移率 的增加相对较小。因此随着电压的增高，电泳分辨率 反而下降，为了获得电泳分离DNA片段的最大分辨率， 电场强度不宜高于5V/cm 电泳系统的温度对于DNA在琼脂糖凝胶中的电泳行 为没有显著的影响。通常在室温下进行电泳，只有当 凝胶浓度低于0.5%时，为增加凝胶硬度，可在4℃，进 (6)
常用荧光染料溴乙锭(EB)染色，在紫外光下观察D NA条带，用紫外分析仪拍照，或用凝胶成像系统输出 照片，并进行有关的数据分析。
20
注意!
溴化乙锭（EB）为强致癌剂，操作时应戴手 套，尽量减少台面污染。 目前实验室一般用相对安全的GoldenView等核 酸荧光染料代替。
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四、印迹转移电泳
生物化学与分子生物学的研究工作经常需要对电泳分离 后的DNA进行分子杂交，但琼脂糖不适合于进行杂交操作， 1975年，Southern创造了将DNA区带原位转移到硝酸基纤维 素膜(NC膜)上，再进行杂交的方法，被称为Southern印迹法。 随后，Alwine等将类似方法用于RNA印迹，被戏称为 Northern印迹，1979年Towbin等设计了将蛋白质从凝胶转移 到硝酸纤维素膜的装置，将蛋白质转移到膜上，再与相应的 抗体等配体反应，被戏称为Western印迹，这种装置将膜和 凝胶、滤纸等制成夹心饼干状，用低电压高电流电泳完成转 移。1982年Reinhart等用电转移法将等电聚焦后的蛋白质区 带从凝胶转移到特定膜上 ，称Eastern印迹
DNA(一般为球形)不能进入胶中，相对迁移率为0(Rm=O)，
而同等大小的直线双链DNA(刚性棒状)则可以长轴方向前
进(Rm＞O)，由此可见，这3种构型的相对迁移率主要取
决于凝胶浓度，但同时，也受到电流强度、缓冲液离子
强度等的影响。
16
3. 电泳方法 (1) 用于分离核酸的琼脂糖凝胶电泳可分为垂直型 及水平型(平板型)。水平型电泳时，凝胶板完全浸 泡在电极缓冲液下1-2mm，故又称为潜水式。目前 更多用的是后者，因为它制胶和加样比较方便，电 泳槽简单，易于制作，又可以根据需要制备不同规
按支持物的装置形式不同，区带电泳可为：
平板式电泳，支持物水平放置，是最常用 的电泳方式；
垂直板式电泳，聚丙烯酰胺凝胶常做成垂 直板式电泳； 垂直柱式电泳，聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳 即属于此类；
连续液动电泳，首先应用于纸电泳，将滤 纸垂直竖立，两边各放一电极，溶液自顶端 向下流，与电泳方向垂直。
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一块正方形琼脂糖凝胶板(10cm×10cm或 20cm×20cm)呈45°置于中央，电场在N-S和W-E之间交 替建立。电场交替改变的时间长短与欲分离的DNA分子大 小有关。电泳时，DNA分子处在连续间隔交替的电场中。 首先向S极移动，然后改向E极。在每次电场方向改变时， DNA分子就要有一定的时间松弛，改变形状和迁移方向。 只有当DNA分子达到一定构型后，才能继续前进。DNA分 子净移动方向与加样线(图中点线)垂直，使样品中各组分 沿同一泳道形成各自的区带。交变脉冲电泳可有效分离数 百万bp的大分子DNA。较新式的仪器电极间的角度和脉冲
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二、琼脂糖凝胶电泳
概念：以琼脂糖凝胶作支持体的电泳方式。
天然琼脂（agar）:又名琼胶、菜燕、冻粉，从石花菜及 其它红藻类植物提取出来的一种线状高聚物。 琼脂糖（agarose） 琼脂胶（agaropectin）
3
天然琼脂(agar)是一种多聚糖，主要由 琼脂糖(约占80%)及琼脂胶组成。琼脂糖是 由半乳糖及其衍生物构成的中性物质，不带 电荷。而琼脂胶是一种含硫酸根和羧基的强 酸性多糖，由于这些基团带有电荷，在电场 作用下能产生较强的电渗现象，加之硫酸根 可与某些蛋白质作用而影响电泳速度及分离 效果。
TAE缓冲能力较低，后两者有足够高的缓冲能 力，因此更常用。TBE浓溶液长期贮存会出现沉 淀，为避免此缺点，室温下贮存5×溶液，用时稀 释10倍。0.5×工作液也可提供足够的缓冲能力。
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(3)
以稀释的电极缓冲液为溶剂，用沸水浴或 微波炉配制一定浓度的溶胶，冷却至45-50℃时 灌入水平胶框或垂直胶膜，插入梳子，自然冷 却。 (4) DNA样品用适量Tris-EDTA缓冲液溶解，缓 冲溶解液内含有0.25%溴酚蓝或其他指示染料， 含有10%-15%蔗糖或5%-10%甘油，以增加其比重 ，使样品集中。为避免蔗糖或甘油可能使电泳 结果产生U形条带，可改用2.5% Ficoll(聚
按电泳法分： 乳糜微粒（CM） -脂蛋白 （-位） 前-脂蛋白（2-位） -脂蛋白 （1-位） 按超速离心法分： 乳糜微粒CM ( < 0.96 ) 极低密度脂蛋白VLDL(0.961.006) 低密度脂蛋白LDL (1.0191.063)
高密度脂蛋白HDL(1.0631.21)
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(2)
缺少离子时，电流太小，DNA迁移慢；相反， 高离子强度的缓冲液由于电流太大会大量产热 ， 严重时，会造成胶熔化和DNA 常用的电泳缓冲液有EDTA(pH8.0)和Tris-乙 酸(TAE)，Tris-硼酸(TBE)或Tris-磷酸(TPE)等 ，浓度约为50mmol/L(pH7.5-7.8) 。电泳缓冲液 一般都配制成浓的贮备液，临用时稀释到所需倍
(2)琼脂糖凝胶结构均匀，含水量大(约占98-99%)， 近似自由电泳，样品扩散度较自由电泳小，对样品吸附 极微，因此电泳图谱清晰，分辨率高，重复性好 (3)琼脂糖透明无紫外吸收，电泳过程和结果可直 (4)电泳后区带易染色，样品易洗脱，便于定量测
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琼脂糖凝胶电泳的缺点： (1) 机械强度差，易破碎，浓度不能太低。 (2) 易被细菌污染，不易保存，临用前配制。 (3) 琼脂糖支持层上的区带易于扩散，电泳后必 须立即固定染色。 (4) 与PAGE相比，分子筛作用小，区带少。
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pH 8.6 > pI ，各种脂蛋白均带负电，电泳时由负 极 到正 极 ； VLDL 为圆 形，受阻力小， LDL 形 态 不 规则，受阻力大，所以VLDL跑在前。
CM LDL VLDL HDL
—
+
加样槽
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β
前β
α
临床应用：高脂蛋白血症的分型 CM β 前β
α
正常 Ⅰ型 Ⅱa型 Ⅱb型 Ⅲ型 Ⅳ型 Ⅴ型
琼脂糖凝胶电泳的
原理和方法
一、电泳方法的分类
按支持物的物理性状不同，区带电泳可为： 滤纸及其他纤维（如醋酸纤维、玻璃纤维、 聚氯乙烯纤维）薄膜电位； 粉末电泳，如纤维素粉、淀粉、玻璃粉电 泳； 凝胶电泳，如琼脂、琼脂糖、硅胶、淀粉 胶、聚丙烯酰胺凝胶等； 丝线电泳，如尼龙丝、人造丝电泳。
1
进行印迹转移电泳时，要注意缓冲液的离子强度要低，pH 要远离pI，使蛋白质带有较多电荷，一般用稳定性较好的Tris缓冲体系。还要注意凝胶与支持膜之间不能有气泡。适当提高 电压或电流可以提高转移速度，但亦会增加热效应，故电压或 电流不可过高。
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五、交变脉冲电场凝胶电泳
一般琼脂糖凝胶电泳只能分离小于20kb的DNA。 这是因为在琼脂糖凝胶中，DNA分子的有效直径超 过凝胶孔径时，在电场作用下，迫使DNA变形挤过 筛孔，而沿着泳动方向伸直，因而分子大小对迁移 率影响不大。如此时改变电场方向，则DNA分子必 须改变其构象，沿新的泳动方向伸直，而转向时间 与DNA分子大小关系极为密切。
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(2)琼脂糖的浓度： 不同大小的DNA需要用不同浓度的琼脂糖凝 胶进行电泳分离,如下表所示:
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2. 核酸构型与琼脂糖凝胶电泳分离的关系
不同构型DNA的移动速度次序为：共价闭环 DNA(covalently closed circular ，简称cccDNA)＞直线 DNA＞开环的双链环状DNA。当琼脂糖浓度太高时，环状
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在凝胶中，DNA片段迁移距离(迁移率)与碱 基对的对数成反比，因此通过已知大小的标准 物移动的距离与未知片段的移动距离进行比较， 便可测出未知片段的大小。 但是当DNA分子大小超过20kb时，普通琼脂 糖凝胶就很难将它们分开。此时电泳的迁移率 不再依赖于分子大小，因此，应用琼脂糖凝胶 电泳分离DNA时，分子大小不宜超过此值。
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三、DNA的琼脂糖凝胶电泳
琼脂糖凝胶电泳对核酸的分离作用主要 依据它们的相对分子质量及分子构型，同 时与凝胶的浓度
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1.核酸分子大小及琼脂糖的浓度的关系 (1)DNA分子的大小： DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应 和分子筛效应。DNA分子在高于等电点的pH溶液 中带负电荷，在电场中向正极移动。在一定的 电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛 效应，即DNA分子本身的大小和构型。