生化试验课件实验十：凝胶柱层析分离血红蛋白和DNP-胰糜蛋白酶
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4、凝胶的再生
观察后，要不断的加水使有色溶液全部流出，为下次实 验做准备。
四、结果及讨论：
★将看到的现象以图示的 方法画到你的实验报告上。 并分析实验结果。 ★ Sephadex G-50? 交联度与凝胶孔径的关系？
★ 凝胶柱的制备质量决定分离效果的好坏 。 加样分离时，滴速越慢，分离效果越好。
实验十 凝胶柱层析分离血红 蛋白和DNP-胰糜蛋白酶
刘向华
南京医科大学
Nanjing来自百度文库medical university
生化与分子生物学系
Department of biochemistry and molecular biology
一、目的与要求：
掌握凝胶层析的原理、 熟练掌握实验操作。
三、操作步骤：
不平，可用玻棒轻轻的搅动，让凝胶自然沉降，使表 面平整。 4、上留1--2cm的水，关闭出口。
3、加样与洗脱
1、加样：滴管将血样加入水下床面上，在柱内形成一薄层 2、洗脱：打开出口，保持流速10滴/min，使样品溶液渗
入凝胶。注意不断轻轻的加入蒸馏水，保持凝胶床面不 露出水面。 3、观察：血红蛋白和DNP-胰糜蛋白酶的分离。相对分子 量为：67000和13500。
1. Sephadex G-50的准备 2.装柱15~20cm
1、洗净的层析柱保持垂直。 2、放蒸馏水，排沙芯下空气，留2ml水，关闭出口 3、加入搅拌均匀的SephadexG-50悬液，调节流速10滴
/min，使凝胶均匀沉降，不断补充，直至15cm。 注意：床面上要保持少许水，防止胶床露出液面。如胶面
观察后，要不断的加水使有色溶液全部流出，为下次实 验做准备。
四、结果及讨论：
★将看到的现象以图示的 方法画到你的实验报告上。 并分析实验结果。 ★ Sephadex G-50? 交联度与凝胶孔径的关系？
★ 凝胶柱的制备质量决定分离效果的好坏 。 加样分离时，滴速越慢，分离效果越好。
实验十 凝胶柱层析分离血红 蛋白和DNP-胰糜蛋白酶
刘向华
南京医科大学
Nanjing来自百度文库medical university
生化与分子生物学系
Department of biochemistry and molecular biology
一、目的与要求：
掌握凝胶层析的原理、 熟练掌握实验操作。
三、操作步骤：
不平，可用玻棒轻轻的搅动，让凝胶自然沉降，使表 面平整。 4、上留1--2cm的水，关闭出口。
3、加样与洗脱
1、加样：滴管将血样加入水下床面上，在柱内形成一薄层 2、洗脱：打开出口，保持流速10滴/min，使样品溶液渗
入凝胶。注意不断轻轻的加入蒸馏水，保持凝胶床面不 露出水面。 3、观察：血红蛋白和DNP-胰糜蛋白酶的分离。相对分子 量为：67000和13500。
1. Sephadex G-50的准备 2.装柱15~20cm
1、洗净的层析柱保持垂直。 2、放蒸馏水，排沙芯下空气，留2ml水，关闭出口 3、加入搅拌均匀的SephadexG-50悬液，调节流速10滴
/min，使凝胶均匀沉降，不断补充，直至15cm。 注意：床面上要保持少许水，防止胶床露出液面。如胶面