小吞噬细胞实验幻灯片
合集下载
中性粒细胞吞噬试验PPT课件
200Biblioteka 参考值：61.4%-64.2%
9
8.计数
吞噬指数：观察200个中性粒细胞， 计算其中被吞噬的细菌总数，平均 每个中性粒细胞吞噬的细菌数即为 吞噬指数。
200个中性粒细胞中吞噬的细菌总数
吞噬指数=
200
参考值：1.01-1.11
10
2019/11/17
.
11
6
5.推片 6.瑞氏染色 7.镜检 油镜检查：寻找中性粒细胞，如果染
色结果正确，可见细胞核 及被吞噬的细菌染成紫色， 而粒细胞的细胞浆则为淡红色。
7
8
8.计数
吞噬百分率：观察200个中性粒细 胞，计算其中吞噬有细菌的中性粒 细胞数，计算出吞噬细胞百分率。
200个中性粒细胞中吞噬细菌的细胞数数
X100%
实验六 中性粒细胞的吞噬作用
临床微免教研室
1
2
实验目的
1.熟悉中性粒细胞的吞噬作用原理 和方法。 2.通过本实验理解机体的非特异性 免疫机制。
3
实验原理
血液中的中性粒细胞即小吞噬细胞， 通过趋化、调理、吞入和杀菌等几个 步骤，能吞噬和消化衰老、死亡细胞 及病原微生物等异物，是机体非特异 性免疫的重要组成部分。
4
实验材料
1.白色葡萄球菌8h培养物 2.抗凝人血（肝素抗凝管）、瑞氏 染液、蒸馏水 3.试管、玻片、采血针、酒精棉球、 吸管、滴管、显微镜、香柏油
5
试验步骤 1.白色葡萄球菌培养物的准备 2.采血（2滴） 3.加菌液（用微量加样器取准备好的
菌液40ul加入肝素抗凝血试管内， 轻轻混匀） 4.37℃温育30min
9
8.计数
吞噬指数：观察200个中性粒细胞， 计算其中被吞噬的细菌总数，平均 每个中性粒细胞吞噬的细菌数即为 吞噬指数。
200个中性粒细胞中吞噬的细菌总数
吞噬指数=
200
参考值：1.01-1.11
10
2019/11/17
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6
5.推片 6.瑞氏染色 7.镜检 油镜检查：寻找中性粒细胞，如果染
色结果正确，可见细胞核 及被吞噬的细菌染成紫色， 而粒细胞的细胞浆则为淡红色。
7
8
8.计数
吞噬百分率：观察200个中性粒细 胞，计算其中吞噬有细菌的中性粒 细胞数，计算出吞噬细胞百分率。
200个中性粒细胞中吞噬细菌的细胞数数
X100%
实验六 中性粒细胞的吞噬作用
临床微免教研室
1
2
实验目的
1.熟悉中性粒细胞的吞噬作用原理 和方法。 2.通过本实验理解机体的非特异性 免疫机制。
3
实验原理
血液中的中性粒细胞即小吞噬细胞， 通过趋化、调理、吞入和杀菌等几个 步骤，能吞噬和消化衰老、死亡细胞 及病原微生物等异物，是机体非特异 性免疫的重要组成部分。
4
实验材料
1.白色葡萄球菌8h培养物 2.抗凝人血（肝素抗凝管）、瑞氏 染液、蒸馏水 3.试管、玻片、采血针、酒精棉球、 吸管、滴管、显微镜、香柏油
5
试验步骤 1.白色葡萄球菌培养物的准备 2.采血（2滴） 3.加菌液（用微量加样器取准备好的
菌液40ul加入肝素抗凝血试管内， 轻轻混匀） 4.37℃温育30min
中性粒细胞吞噬功能试验(小吞噬试验)
中性粒细胞吞噬功能试验（小吞噬试验）
实验目的
1.熟悉中性粒细胞的吞噬作用原理和方法。
2.通过本实验理解机体的非特异性免疫机制。
实验原理
血液中的中性粒细胞即小吞噬细胞，通过趋化、调理、吞入和杀菌等几个步骤，能吞噬和消化衰老、死亡细胞及病原微生物等异物，是机体非特异性免疫的重要组成部分。
实验材料
1.金黄色葡萄球菌悬液。
2.瑞氏染液、双蒸水
3.试管、玻片、采血针、酒精棉球、吸管、滴管、显微镜、香柏油
实验方法
1.取小鼠一只，给腹腔注射金黄色葡萄球菌悬液0.6ml,10~15min
2.取小鼠腹腔液。
3. 置37℃水浴箱水浴15分钟，中途混匀一次。
4 取出小试管，用吸管将试管中血液打匀后取血半滴于载玻片上，用另一载玻片推成薄血片。
5.待血片自干后，用瑞氏染液染色。
瑞氏染色法：取瑞氏染液数滴滴于上述血片上先染1分钟。
然后加等量蒸馏水，
轻轻晃动混匀，继续染5分钟，水洗，用吸水纸吸干后镜检。
结果观察
油镜检查：寻找中性粒细胞，如果染色结果正确，可见细胞核及被吞噬的细菌染成紫色，而粒细胞的细胞浆则为淡红色。
中性粒细胞吞噬试验
计数：1.吞噬百分率：观察100个中性粒细胞，计算其中吞噬有细菌的中性粒细胞数，计算出吞噬细胞百分率。
2.吞噬指数：观察100个中性粒细胞，计算其中被吞噬的细菌总数，
平均每个中性粒细胞吞噬的细菌数即为吞噬指数。
《小吞噬实验》课件
实验的不足之处与改进建议
实验设计：需要更加严谨， 考虑更多的因素
实验操作：需要更加规范， 避免操作失误
数据处理：需要更加细致， 避免数据误差
实验结果：需要更加客观， 避免主观判断
实验报告：需要更加详细， 便于他人理解
实验改进：需要更加全面， 提高实验效果
实验的应用前景与展望
实验结果：验证了 小吞噬现象的存在
培养基
作用：为细胞提供生长所需 的营养和条件
成分：包括营养物Biblioteka 、缓冲 物质、激素等类型：有液体培养基、固体 培养基等
制备方法：根据实验需求选 择合适的配方和制备方法
其他试剂
缓冲液：用于维持实验环境的pH值 荧光染料：用于标记细胞或蛋白质 酶抑制剂：用于抑制某些酶的活性 抗体：用于特异性识别和结合目标蛋白
小吞噬实验
,
汇报人：
目录 /目录
01
点击此处添加 目录标题
04
实验操作
02
实验目的
05
实验结果分析
03
实验材料
06
实验总结与展 望
01 添加章节标题
02 实验目的
了解吞噬作用
吞噬作用是细胞吞噬和消化外 来物质的过程
实验目的是观察吞噬作用的过 程和机制
通过实验了解吞噬作用的生理 功能和意义
实验可以帮助我们理解免疫系 统的工作原理
实验结论：小吞噬现象是细 胞内物质运输的一种方式
实验目的：验证小吞噬现象 的存在
展望：未来可以进一步研究 小吞噬现象的机制和应用
实验中遇到的问题与解决方法
问题：实验过程中出现误差 解决方法：重新进行 实验，确保数据准确
解决方法：重新进行实验，确保数据准确
实验四 巨噬细胞的吞噬实验.ppt
血细胞包括红细胞、白细胞和血小板。根据白细胞的细胞质 内是否含有特殊颗粒，把白细胞分为有粒、无粒两类。含有 颗粒的白细胞为粒细胞，按瑞色染色时所染成的不同颜色分为 中性、嗜酸性和嗜碱性三种粒细胞。无粒白细胞又分为淋巴 细胞和单核细胞。
白细胞5000～10000/ml个。嗜中性粒细胞数量最多，占50～70％ 常穿出血管，聚集于炎症组织的周围，作变形运动，吞噬细菌。
实验四 小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬实验
实验简介
细胞的胞吞胞吐是细胞进行新陈代谢的方 式之一。高等动物的细胞在摄取营养物质的同 时，有的细胞如单核细胞和巨噬细胞还有通过 识别与吞噬细菌、病毒等外来物质的作用来达 到机体防御的功能。本实验通过预先激活腹腔 巨噬细胞，然后腹腔注射鸡红细胞，从而引起 腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞。通过光镜可清楚 地观察到这一有趣的现象。
体内有炎症时，它的数量就增多。嗜酸性粒细胞数量最少。淋巴
细胞与免疫有密切关系，患结核病时，淋巴细胞明显增加。单核
细胞是血液中最大的细胞，变形活动非常活跃，能吞噬细菌和
异物。单核细胞穿出血管到结缔组织中可变为巨噬细胞。
嗜酸性粒细胞具有粗大的嗜酸性颗粒，颗粒内含有过氧化物酶 和酸性磷酸酶；嗜碱性粒细胞中有嗜碱性颗粒，内含组织胺、
将染色后的涂片置于显微镜油镜下观察，绘图记录。 未被吞噬பைடு நூலகம்鸡红细胞
吞噬了鸡红细胞 的吞噬细胞
实验结果的观察
观察细胞的形态特征，注意不同细胞的大 小比例和形状；鸡红细胞和巨噬细胞的区分； 吞噬前后的大小和形状的不同。注意鸡红细胞 被吞噬后形态上的变化：多观察不到核，且形 态变圆。
吞噬过程的观察：吸附、正在吞噬、吞噬 后、消化后（一般观察不到正在吞噬的过程， 想想为什么）。
中性粒细胞吞噬功能试验ppt课件
干燥物镜A与油浸物镜B的光线通路 注：使用完毕后清洁油镜！！！9
此课件下载可自行编辑修改，供参考！ 感谢您的支持，我们努力做得更1
• 实验原理
中性粒细胞具有吞噬杀菌功能，当与颗粒性物质（如 葡萄球菌等）混合孵育一定时间后，颗粒性物质被吞噬杀 灭，根据吞噬率、吞噬指数可反映该细胞的吞噬功能。
2
3
• 实验方法
1、取样
2、孵育
① 肝素 0.02ml ② 无菌采血 0.04ml ③ 菌液 0.02ml
3、制片
4、镜检
单凹玻片
370C孵育30分 钟
湿盒
恒温箱
4
3、制片 •取一小滴上述混合液，置于载玻片上，用另一载玻片推 成薄血片，待干。 •滴加甲醇固定5min，水洗。 •加碱性美蓝染色5min，水洗印干。
5
4、镜检
红细胞 中性粒细胞 葡萄球菌
6
7
8
• 油镜的使用 以香柏油为观察介质，微生物图像更清晰明亮。
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• 实验原理
中性粒细胞具有吞噬杀菌功能，当与颗粒性物质（如 葡萄球菌等）混合孵育一定时间后，颗粒性物质被吞噬杀 灭，根据吞噬率、吞噬指数可反映该细胞的吞噬功能。
2
3
• 实验方法
1、取样
2、孵育
① 肝素 0.02ml ② 无菌采血 0.04ml ③ 菌液 0.02ml
3、制片
4、镜检
单凹玻片
370C孵育30分 钟
湿盒
恒温箱
4
3、制片 •取一小滴上述混合液，置于载玻片上，用另一载玻片推 成薄血片，待干。 •滴加甲醇固定5min，水洗。 •加碱性美蓝染色5min，水洗印干。
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4、镜检
红细胞 中性粒细胞 葡萄球菌
6
7
8
• 油镜的使用 以香柏油为观察介质，微生物图像更清晰明亮。
小吞噬实验
实验流程取凹玻片一张在凹孔中加一滴枸橼酸钠或肝素酒精棉球消毒手指后用采血针从消毒部位取2大滴血约02ml加入凹孔中混匀加表皮葡萄糖液1滴002004ml然后用牙签轻轻搅匀将玻璃片放湿盒内置37孵箱3040min
小吞噬实验
（体外法）
主讲： Q Q：
【实验目的 】 吞噬细胞吞噬功能的测定 【实验原理 】血液中的中性粒细胞即小吞噬
将玻璃片放湿盒内，置37℃孵 箱30~40min。
作用完毕，取1滴制成薄片，自然干燥。
【结果观察】
结果：胞浆呈蓝色或淡红色，细菌呈深蓝色或紫 色，细 胞呈褐色，细胞核呈紫红色。
【注意事项 】
1.个体差异、年龄、健康状况的不同，其吞噬能 力亦不同。 2.涂血片时不宜太厚，否则不宜观察。
细胞，通过趋化、调理、吞入和杀菌等步骤，能 吞噬和消化衰老、死亡细胞及病原微生物等异物 是机体固有免疫的重要组成部分。
【临床意义】 在某些情况下，小吞噬细胞也
能参与某些超敏反应和自身免疫疾病的组织损伤 和炎症过程。因此，测定小吞噬细胞功能可在一 定程度上反映机体的免疫状态，也可作为判断疗 效的一种指标。 枸橼酸钠或肝素（25U/ml）、毛细吸管、凹玻片、 载玻片、牙签、甲醇 瑞氏-吉姆萨染料、pH6.4PB、 酒精棉球、采血针等。
【材料 】表皮葡萄糖球菌液（9亿/ml）、3.8枸橼酸钠或肝素
酒精棉球消毒手指后，用采 血针从消毒部位取2大滴血 （约0.2ml）加入凹孔中混匀
加表皮葡萄糖液1滴 （0.02~0.04ml）， 然后用牙签轻轻搅匀 置瑞氏液1min， 置pH6.4PB中3min， 置吉姆萨染液5~10min， 蒸馏水洗， 待干， 镜检
小吞噬实验
（体外法）
主讲： Q Q：
【实验目的 】 吞噬细胞吞噬功能的测定 【实验原理 】血液中的中性粒细胞即小吞噬
将玻璃片放湿盒内，置37℃孵 箱30~40min。
作用完毕，取1滴制成薄片，自然干燥。
【结果观察】
结果：胞浆呈蓝色或淡红色，细菌呈深蓝色或紫 色，细 胞呈褐色，细胞核呈紫红色。
【注意事项 】
1.个体差异、年龄、健康状况的不同，其吞噬能 力亦不同。 2.涂血片时不宜太厚，否则不宜观察。
细胞，通过趋化、调理、吞入和杀菌等步骤，能 吞噬和消化衰老、死亡细胞及病原微生物等异物 是机体固有免疫的重要组成部分。
【临床意义】 在某些情况下，小吞噬细胞也
能参与某些超敏反应和自身免疫疾病的组织损伤 和炎症过程。因此，测定小吞噬细胞功能可在一 定程度上反映机体的免疫状态，也可作为判断疗 效的一种指标。 枸橼酸钠或肝素（25U/ml）、毛细吸管、凹玻片、 载玻片、牙签、甲醇 瑞氏-吉姆萨染料、pH6.4PB、 酒精棉球、采血针等。
【材料 】表皮葡萄糖球菌液（9亿/ml）、3.8枸橼酸钠或肝素
酒精棉球消毒手指后，用采 血针从消毒部位取2大滴血 （约0.2ml）加入凹孔中混匀
加表皮葡萄糖液1滴 （0.02~0.04ml）， 然后用牙签轻轻搅匀 置瑞氏液1min， 置pH6.4PB中3min， 置吉姆萨染液5~10min， 蒸馏水洗， 待干， 镜检
医学免疫学实验小吞噬+大吞噬+E花环
2.培养结束后，弃去上清，混匀细胞，加入离心 管中，1500rpm离心10min。
操作步骤
3.弃上清，吸取白细胞层制片，自然干燥。 4.甲醇固定1~ 2min后，姬姆萨染色15~20min, 水洗，干燥。 5.油镜下计数200个淋巴细胞，观察淋巴细胞的 形态变化，计算淋巴细胞转化率。
结果判断
未转化的淋巴细胞
医学免疫学实验
实验内容
1.中性粒细胞吞噬功能测定试验 2.单核巨噬细胞吞噬功能试验（示教） 3.E花环形成试验（示教） 4.T淋巴细胞转化试验（示教）
吞噬细胞（phagocyte）：主要包括中性粒细 胞（neutrophil）和单核吞噬细胞 （mononuclear -phagocyte）两类。
3.水洗（勿先倒掉染液，应以流水冲去）。
4.吸水纸拍干水分，干燥。
（三）显微镜油镜镜检
五、注意事项
➢ 注射菌液时不要注射到皮下或腹腔脏器内，注 射后轻揉腹部，使液体在腹腔内分散均匀。
➢ 涂片应薄厚均匀适中，避免过薄或过厚。 ➢ 瑞氏染液染色时间不能过长以免染色过重。
A 红细胞 B 、H 淋巴细胞 C 、E、I 中性粒细胞 D 嗜酸性粒细胞 F 单核细胞 G 血小板 J 嗜碱性粒细胞
实验原理
植物血凝素(PHA)
T淋巴细胞
增殖分化 淋巴母细胞
体积变大 胞浆增多、空炮 核染色质疏松 核仁明显 有丝分裂
试剂与器材 ■1. RPMI1640 培养液。包含:小牛血清10%、 青霉素100u/m1 、链霉素100ug/m1,用无菌 的3% NaHCO3调pH 至7. 2~7.4。 ■2.植物血凝素(PHA)。用含10%小牛血清 的RPMI培养液稀释至500~ 1000ug/ml.
检测指标：
操作步骤
3.弃上清，吸取白细胞层制片，自然干燥。 4.甲醇固定1~ 2min后，姬姆萨染色15~20min, 水洗，干燥。 5.油镜下计数200个淋巴细胞，观察淋巴细胞的 形态变化，计算淋巴细胞转化率。
结果判断
未转化的淋巴细胞
医学免疫学实验
实验内容
1.中性粒细胞吞噬功能测定试验 2.单核巨噬细胞吞噬功能试验（示教） 3.E花环形成试验（示教） 4.T淋巴细胞转化试验（示教）
吞噬细胞（phagocyte）：主要包括中性粒细 胞（neutrophil）和单核吞噬细胞 （mononuclear -phagocyte）两类。
3.水洗（勿先倒掉染液，应以流水冲去）。
4.吸水纸拍干水分，干燥。
（三）显微镜油镜镜检
五、注意事项
➢ 注射菌液时不要注射到皮下或腹腔脏器内，注 射后轻揉腹部，使液体在腹腔内分散均匀。
➢ 涂片应薄厚均匀适中，避免过薄或过厚。 ➢ 瑞氏染液染色时间不能过长以免染色过重。
A 红细胞 B 、H 淋巴细胞 C 、E、I 中性粒细胞 D 嗜酸性粒细胞 F 单核细胞 G 血小板 J 嗜碱性粒细胞
实验原理
植物血凝素(PHA)
T淋巴细胞
增殖分化 淋巴母细胞
体积变大 胞浆增多、空炮 核染色质疏松 核仁明显 有丝分裂
试剂与器材 ■1. RPMI1640 培养液。包含:小牛血清10%、 青霉素100u/m1 、链霉素100ug/m1,用无菌 的3% NaHCO3调pH 至7. 2~7.4。 ■2.植物血凝素(PHA)。用含10%小牛血清 的RPMI培养液稀释至500~ 1000ug/ml.
检测指标：
实验八中性粒细胞吞噬功能检测PPT课件
• 中性粒细胞具有吞噬细菌和异物颗粒的能力。 此法操作简便，不需特殊设备，省时，费用低廉。
参考区间：吞噬率（91 + 5. 恒温箱、显微镜等。 实验八中性粒细胞吞噬功能检测 计数的中性粒细胞吞噬细菌总数 准备被检测标本：枸橼酸钠抗凝血1ml。 制备细胞推片，瑞-吉染色：
参准考备区 被间检：测吞标•噬本率：在（枸橼9体1酸+钠5外.抗凝将血1m中l。 性粒细胞与细菌或异物颗粒共同孵育后，
此法操作简便，不需特殊设备，省时，费用低廉。 准备被检测标本：枸橼酸钠抗凝血1ml。
准备被检测标本：枸橼酸钠抗凝血1ml。
但光学显微镜分辨率低，有时难以计数吞入的细菌
颗粒。
五、结果判断
中性粒细胞核深染且分叶，胞浆淡红色，细菌呈紫色
-
吞噬细菌的中性粒细胞数
吞噬百分率（%）=
×100％
计数的中性粒细胞总数
吞噬指数=
计数的中性粒细胞吞噬细菌总数 计数的中性粒细胞总数
参考区间：吞噬率（91 +- 5.8）%；吞噬指数大于1
六、注意事项
准备被检测标本：枸橼酸钠抗凝血1ml。
实验八中性粒细胞吞噬功能检测
实验八 中性粒细胞吞噬功能检测
临床微生物及免疫学检验教研室
一、实验目的
1. 掌握中性粒细胞吞噬功能试验的原理。 2. 熟悉中性粒细胞吞噬功能试验的操作方法。
二、实验原理
被吞噬物 ： 金黄色葡萄球菌 试剂：瑞－吉氏染液、无菌生理盐水 试剂：瑞－吉氏染液、无菌生理盐水 准备被检测标本：枸橼酸钠抗凝血1ml。
被吞噬物 ： 金黄色葡萄球菌
参考区间：吞即噬率可（91被+ 5. 中性粒细胞吞噬、摄入，显微镜观察可见中
性粒细胞内有细菌或异物颗粒。
参考区间：吞噬率（91 + 5. 恒温箱、显微镜等。 实验八中性粒细胞吞噬功能检测 计数的中性粒细胞吞噬细菌总数 准备被检测标本：枸橼酸钠抗凝血1ml。 制备细胞推片，瑞-吉染色：
参准考备区 被间检：测吞标•噬本率：在（枸橼9体1酸+钠5外.抗凝将血1m中l。 性粒细胞与细菌或异物颗粒共同孵育后，
此法操作简便，不需特殊设备，省时，费用低廉。 准备被检测标本：枸橼酸钠抗凝血1ml。
准备被检测标本：枸橼酸钠抗凝血1ml。
但光学显微镜分辨率低，有时难以计数吞入的细菌
颗粒。
五、结果判断
中性粒细胞核深染且分叶，胞浆淡红色，细菌呈紫色
-
吞噬细菌的中性粒细胞数
吞噬百分率（%）=
×100％
计数的中性粒细胞总数
吞噬指数=
计数的中性粒细胞吞噬细菌总数 计数的中性粒细胞总数
参考区间：吞噬率（91 +- 5.8）%；吞噬指数大于1
六、注意事项
准备被检测标本：枸橼酸钠抗凝血1ml。
实验八中性粒细胞吞噬功能检测
实验八 中性粒细胞吞噬功能检测
临床微生物及免疫学检验教研室
一、实验目的
1. 掌握中性粒细胞吞噬功能试验的原理。 2. 熟悉中性粒细胞吞噬功能试验的操作方法。
二、实验原理
被吞噬物 ： 金黄色葡萄球菌 试剂：瑞－吉氏染液、无菌生理盐水 试剂：瑞－吉氏染液、无菌生理盐水 准备被检测标本：枸橼酸钠抗凝血1ml。
被吞噬物 ： 金黄色葡萄球菌
参考区间：吞即噬率可（91被+ 5. 中性粒细胞吞噬、摄入，显微镜观察可见中
性粒细胞内有细菌或异物颗粒。
小吞噬细胞实验幻灯片课件
2. 个体差异、年龄、健康状况的不同，其吞噬能 力亦不同。
3. 掌握好细菌与中性粒细胞的作用时间。中性粒 细胞对细菌的吞噬是一个非常迅速的过程，吞 噬5min时吞噬率达45%，10min时接近80%， 20min 即达饱和。
4. 取“细菌－全血”涂片时，要混匀后再取；制 作血涂片要求推出尾部，过厚或过薄，均不利 观察。
料
pH6.4PB、酒精棉球、采血针等。
1、取样
2、孵育
3、制片
4、镜检
实 验 步 骤
① 3.8%枸橼酸钠或肝素 0.4ml ② 无菌采血 0.2ml ③ 菌液 0.02-0.04ml
单凹玻片
370C孵育30-45min
湿盒
孵箱
制 片
1. 取一小滴上述混合液，置于载玻片上，用另一载玻片推 成薄血片，自然干燥。
小吞噬实验
一．掌握血液中的中性粒细胞体外吞
实 噬异物能力的测定方法。 二．观察机体的非特异性免疫现象。
验 目 的
一．人外周血中性粒细胞吞噬功能检
实 测（体外实验）。 二．小鼠腹腔中性粒细胞吞噬功能的
验
检测（体内实验）。
内
容
• 来 源： 骨髓。
• 存在部位： 血液 、 炎症部位（全
小 身）。 吞 • 功能基础：溶酶体，过氧化物酶及
1. 诱导：实验前一天给小白鼠腹腔注射无菌肉汤0.51.0ml，轻揉腹部。
2. 实验前4-5h给小白鼠腹腔注射无菌肉汤0.5-1.0ml，
轻揉腹部。
实 3. 注射：实验时给小白鼠腹腔内注射表皮葡菌菌液
验
0.5ml，轻揉腹部。
步 4. 取样： 注射后35 -45min处死小白鼠，用毛细吸管 骤 抽取腹腔液滴片或直接涂片
大吞噬小吞噬实验PPT课件
油镜检查：寻找中性粒细胞，如果染色结果正确，可见细胞核 及被吞噬的细菌染成紫色，而粒细胞的细胞浆则为淡红色。
2019/11/15
22
实验报告
画图：
• 大吞噬（巨噬、 鸡红细胞） 小吞噬（中性粒、 细菌、 红细胞及其他细胞） 小吞噬实验方法
注：画图要注意视野、比例、颜色、背景、标注
纸入盆，双凹片、针入瓷缸（前面），油片入玻璃缸（后面）, 泡手
称为嗜中性物质。
•
原始红细胞、早幼红细胞胞质、核仁含较多酸性物质，染成较浓厚的蓝色；中幼红细胞既含
酸性物质，又含碱性物质，染成红蓝色或灰红色；完全成熟红细胞，酸性物质彻底消失后，染成
粉红色。
•
•
3.pH的影响 （pH6.4～pH6.8）
•
细胞各种成分均属蛋白质，因蛋白质系两性电解质，所带电荷随溶液pH而定，在偏酸性环
2019-11-15
12
2019/11/15
吞噬过程
13
示教片
• 大吞噬:单核巨噬细胞吞噬大颗粒异物
2019/11/15
14
示教片
大吞噬现象
1、淀粉溶液注入豚鼠腹腔内 2、次日再注入淀粉溶液，1小时后腹腔注入鸡血 球悬液 3、血球注入后1小时吸取豚鼠腹腔液，瑞氏染色 4、油镜观察，可见巨噬细胞内吞噬有鸡血球
油片 入玻璃缸（后面） 泡手
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20
油镜的使用
• 保护：拿取手式
• 对光：升聚光器 打开光栅 反光镜采 光
• 观察：标本固定载物台上 低倍镜找到标 本 低倍镜移开 滴香柏油 换油镜 目 镜观察，细调至清晰
• 使用完毕立即用擦镜纸擦干镜头上的油
• 原理
2019/11/15
2019/11/15
22
实验报告
画图：
• 大吞噬（巨噬、 鸡红细胞） 小吞噬（中性粒、 细菌、 红细胞及其他细胞） 小吞噬实验方法
注：画图要注意视野、比例、颜色、背景、标注
纸入盆，双凹片、针入瓷缸（前面），油片入玻璃缸（后面）, 泡手
称为嗜中性物质。
•
原始红细胞、早幼红细胞胞质、核仁含较多酸性物质，染成较浓厚的蓝色；中幼红细胞既含
酸性物质，又含碱性物质，染成红蓝色或灰红色；完全成熟红细胞，酸性物质彻底消失后，染成
粉红色。
•
•
3.pH的影响 （pH6.4～pH6.8）
•
细胞各种成分均属蛋白质，因蛋白质系两性电解质，所带电荷随溶液pH而定，在偏酸性环
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吞噬过程
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示教片
• 大吞噬:单核巨噬细胞吞噬大颗粒异物
2019/11/15
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示教片
大吞噬现象
1、淀粉溶液注入豚鼠腹腔内 2、次日再注入淀粉溶液，1小时后腹腔注入鸡血 球悬液 3、血球注入后1小时吸取豚鼠腹腔液，瑞氏染色 4、油镜观察，可见巨噬细胞内吞噬有鸡血球
油片 入玻璃缸（后面） 泡手
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油镜的使用
• 保护：拿取手式
• 对光：升聚光器 打开光栅 反光镜采 光
• 观察：标本固定载物台上 低倍镜找到标 本 低倍镜移开 滴香柏油 换油镜 目 镜观察，细调至清晰
• 使用完毕立即用擦镜纸擦干镜头上的油
• 原理
2019/11/15
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1、取样
2、孵育
3、制片
4、镜检
实 验 步 骤
①
② ③
3.8%枸橼酸钠或肝素 0.4ml 无菌采血 0.2ml 菌液 0.02-0.04ml
单凹玻片
370C孵育30-45min
湿盒
孵箱
1. 取一小滴上述混合液，置于载玻片上，用另一载玻片推 成薄血片，自然干燥。 2. 滴加甲醇固定5min，水洗。 3. 置瑞特液1min，置pH6.4PB中3min，置吉姆萨液染5-
————————————
X 100%
100
吞噬指数=
100个吞噬细胞吞噬的细菌总数 ——————————————
100
1. 人类白细胞的吞噬活性在37℃时最好，温度过 高过低均会使其吞噬能力减低。
注 意 事 项
2. 个体差异、年龄、健康状况的不同，其吞噬能 力亦不同。
3. 掌握好细菌与中性粒细胞的作用时间。中性粒 细胞对细菌的吞噬是一个非常迅速的过程，吞 噬5min时吞噬率达45%，10min时接近80%， 20min 即达饱和。
4. 取“细菌－全血”涂片时，要混匀后再取；制 作血涂片要求推出尾部，过厚或过薄，均不利 观察。
二.小鼠腹腔中性粒细胞吞噬功能检测（体外检测）
材 料
1. 2. 3. 4.
15-20g小白鼠。 表皮葡萄球菌菌液（9亿/ml）。 瑞特-吉姆萨染液。 注射器及针头、无菌肉汤、解剖板、 剪刀、镊子、碘酊、乙醇。
实 验 原 理
小 吞 噬 细 胞
• 来 源： 骨髓。 • 存在部位： 血液 、 炎症部位（全 身）。 • 功能基础：溶酶体，过氧化物酶及 杀菌物质。 • 功 能：具有吞噬细菌和清除溃 残物质等防御功能。 • 反应时间及寿命：反应时间快,数分 钟到几小时，寿命短.平均数小时。
实 验 材 料
1. 菌液：表皮葡萄球菌菌液（9亿/ml） 2. 抗凝剂：3.8%枸橼酸钠或肝素 （25U/ml） 3. 毛细吸管、凹玻片、载玻片、 牙签、甲醇、瑞特-吉姆萨染液、 pH6.4PB、酒精棉球、采血针等。
小吞噬实验
实 验 目 的
一．掌握血液中的中性粒细胞体外吞 噬异物能力的测定方法。 二．观察机体的非特异性免疫现象。
实 验 内 容
一．人外周血中性粒细胞吞噬功能检 测（体外实验）。 二．小鼠腹腔中性粒细胞吞噬功能的 检测（体内实验）。
一.人外周血中性粒细胞吞噬功能检测（体外实验）
血液中的中性粒细胞即小吞噬细胞，通过趋化、 调理、吞入和杀菌等步骤，能吞噬和消化衰老， 死亡细胞即病原微生物等异物，是机体固有免疫 的重要组成部分。将白细胞悬液与细菌混合，保 持一定时间后，取样涂片染色镜检，可以测定中 性粒细胞吞噬细菌的百分率和吞噬指数。本实验 有助于诊断疑有吞噬细胞障碍的疾病。 在某些情况下，小吞噬细胞也参与某些超敏反应 和自身免疫疾病的组织损伤和炎症过程，因此， 测定小吞噬细胞的功能可在一定程度上反映机体 的免疫状态，也可作为判定疗效的一种指标。
2. 注意掌握好染色时间
1. 诱导：实验前一天给小白鼠腹腔注射无菌肉汤0.51.0ml，轻揉腹部。 2. 实验前4-5h给小白鼠腹腔注射无菌肉汤0.5-1.0ml， 轻揉腹部。 3. 4. 注射：实验时给小白鼠腹腔内注射表皮葡菌菌液 0.5ml，轻揉腹部。 取样： 注射后35 -45min处死小白鼠，用毛细吸待干。
红细胞
镜 检
中性粒细胞
葡萄球菌
油镜观察下，中性粒细胞细胞质呈淡蓝色，细菌 呈深蓝色，红细胞呈褐色，细胞核呈紫色。
结 果 观 察
计数100个中性粒细胞，同时计数吞噬细菌的中 性粒细胞数以及被吞噬的细菌总数，计算吞噬 百分率或吞噬指数。
表 示 法
吞噬百分率=
吞噬细菌的中性粒细胞数
实 验 步 骤
5. 染色：标本干燥后瑞氏染-吉姆萨染液染色。（染 色同体外法） 6. 镜检，观察中性粒细胞吞噬表皮葡萄球菌的现象。
结 果 观 察 及 表 示 法
结果观察：油镜检查，先寻找白细 胞，观察细胞质中有无被吞噬的细 菌。 结果表示法同体外实验。
注 意 事 项
1. 注射菌液时不要注射到皮下或腹 腔脏器内，注射后轻揉腹部，使 液体在腹腔内分散均匀