GC法测定丁香罗勒油中丁香酚的含量

GC法测定丁香罗勒油中丁香酚的含量

摘要：目的建立用GC法测定丁香罗勒油中丁香酚的含量。方法OV-1弹性石英毛细管色谱柱（30m×0.32mm×0.25μm）为固定相，FID检测器，进样口温度230℃，检测器温度250℃，采用程序升温，柱温100℃，保持1min，然后以15℃/min的速率升至220℃保持8min；载气为氮气，以正十八烷为内标，按内标法计算丁香酚含量。结果丁香酚进样量在0.5～4.5 mg /ml 范围内其峰面积与进样量呈良好线性关系。y=0.1311x-0.054，（r=0.9994）；加样回收率为100.96%，RSD为0.74%（n=9）。结论该方法灵敏、简便，结果准确可靠，可作为控制丁香罗勒油质量的方法。

关键词：GC法；丁香罗勒油；丁香酚

丁香罗勒油为唇形科植物丁香罗勒Ocimum gratissimum L. 的全草经水蒸气蒸馏提取的挥发油[1]。

参照《中国药典》2010年版一部丁香罗勒油标准，考虑到生产和检验实际，我们在方法中使用了毛细管柱，测定法为内标法。丁香罗勒油中成分复杂，成分有三十多种以上[2]，使用了毛细管柱相对填充柱更能有效分离丁香酚，更具专属性，有效缩短了检验时间。

经实验证明该毛细管柱内标法的峰分离度、理论塔板数都符合《中国药典》2010年版要求，且优于（药典）填充柱法，本毛细管柱内标法的准确度、重复性、精密度、线性均符合要求；两方法相比：采用毛细管柱方法提高了准确度和工作效率，分析时间短、专属性强、色谱峰形良好。

1 仪器与材料

Agilent GC1790F 气相色谱仪，氢离子火焰检测器（FID）；sartorius BP211D 电子天平，丁香酚对照品批号：110725-200610，购于中国药品生物制品检定所；正己烷为分析纯（广州市化学试剂厂），正十八烷内标物[东京化成工业株式会社（TCI）]，丁香罗勒油（佛山市南海中南药化厂提供，批号：060701、060702、060703）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性

气相色谱条件：30m×0.32mm×0.25μm OV-1石英毛细管柱；程序升温：起始温度100℃，保持1min，15℃/min升温至220℃，保持8min，FID检测器温度250℃，进样器温度230℃。理论板数按丁香酚峰计算应不低于30000（见图1）。

图1 丁香罗勒油空白溶剂、系统适用性、对照品GC图谱、供试品GC图谱

A.空白溶剂色谱图；

B.系统适用性色谱图；

C.丁香酚对照品和内标正十八烷色谱图；

D.丁香罗勒油供试品色谱图

2.2 内标液的制备

取正十八烷适量，精密称定，加正己烷溶解并稀释成每1ml含25mg的溶液，作为内标溶液。

2.3 对照品溶液的制备

取丁香酚对照品约50mg，精密称定，置10ml量瓶中，精密加入内标溶液2ml，用正己烷稀释至刻度，摇匀，取1μl注入气相色谱仪。

2.4 供试品溶液的制备

取供试品约60mg，精密称定，置10ml量瓶中，精密加入内标溶液2ml，用正己烷溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取1μl注入气相色谱仪，测定，即得。

2.5 线性关系考察

分别取丁香酚5.00mg、15.00mg、25.0mg、35.0mg、45.0mg于10ml量瓶，并按本标准加入2ml内标液，用正己烷定容至10ml作供试品，取1μl注入气相色谱仪，计算丁香酚与正十八烷峰面积比值。以丁香酚浓度（C）为横坐标，丁香酚与正十八烷峰面积比值（Y）为纵坐标绘制标准曲线，进行线性回归，结果得回归方程：y=0.1311x-0.054（r=0.9994）。结果表明，丁香酚进样量在0.5～4.5 mg /ml范围内线性关系良好。

2.6 重复性试验

取同批样品6份（批号060701），按供试品溶液制备方法处理，在上述色谱条件下测定含量，测得丁香酚的平均值为86.73%，RSD=0.14%，结果表明本方法重复性良好。

2.7 稳定性试验

取批号060701丁香罗勒油供试品溶液在0、2、4、6、8、10小时进样，测得丁香酚与正十八烷峰面积比值，RSD为0.89%（n=6），结果表明样品溶液在10小时内稳定。

2.8 回收率试验

精密称取批号060701丁香罗勒油（本品已知丁香酚含量：86.7%）分别30.0mg 于9只10ml容量瓶中，分别加入19.0mg、19.0mg、19.0mg、24.0mg、24.0mg、24.0mg、29.0mg、29.0mg、29.0mg丁香酚对照品，分别加入2ml内标溶液，按上述色谱条件测定，结果见表1。平均加样回收率为100.96%，RSD为0.74%。

表1 回收率实验测定结果（n=9）

取本品量mg 本品含丁香酚mg 加入丁香酚mg 实际测得总量mg 回收率% 平均回收率% RSD

%

1 29.78 25.8

2 18.87 44.68 99.95 100.96 0.74

2 29.67 25.72 19.15 44.94 100.37

3 29.89 25.91 19.06 45.1

4 100.89

4 30.43 26.38 24.43 50.81 100.00

5 30.68 26.60 24.30 51.24 101.40

6 30.78 26.69 24.28 51.36 101.61

7 29.62 25.68 28.99 54.91 100.838 29.58 25.65 29.38 55.60 101.94

9 29.70 25.75 29.03 55.26 101.65

2.9 样品测定

分别取3个批号的丁香罗勒油适量，精密称定制备供试品溶液，依法测定丁香酚含量，结果见表2。

表2 丁香油中丁香酚的含量

批号含量（%）

060701 88.0

060702 86.8

060703 86.2

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