高中生物第一章无茵操作技术实践第一节微生物的培养和应用第2课时学案苏教版选修
高中生物 第一章 无菌操作技术实践 第2课时 分离特定的微生物并测定其数量同步备课教学案 苏教版选修1
第2课时分离特定的微生物并测定其数量[学习导航] 1.认识各种微生物形成的菌落特征。
2.学会利用涂布平板法分离、培养微生物，并能测定其数量。
3.掌握利用选择培养基分离特定微生物的方法。
[重难点击] 简述分离、培养微生物的方法及数量测定。
一、微生物分离和培养的基本理论1.纯培养物培养在实验室中利用选择培养基可以筛选和分离某种微生物，然后在高度稀释的条件下，在固体培养基上培养该微生物形成单个菌落，即由一个微生物(如某种细菌)形成的单个菌落。
单个菌落即为纯培养物，可用于科学研究。
2.分离特定的微生物(1)平板分离法①概念：能将单个微生物分离和固定在固体培养基表面或里面，每个孤立的活微生物体经过生长、繁殖均可形成单个菌落。
②分离、培养微生物最常用的培养基是琼脂固体培养基。
③类型：平板分离法有多种，如涂布平板法、混合平板法等。
a.涂布平板法分离细菌：将待分离的样品进行10倍系列稀释，取一定稀释度的样品0.1 mL 倒入预先制备好的培养基平板中，用无菌玻璃涂布器将样品涂布均匀，恒温培养一段时间，以获得单个菌落的方法。
b.混合平板法分离细菌：将待分离的样品进行10倍系列稀释，取一定稀释度的样品0.1 mL 与熔化冷却至50_℃左右的培养基混合均匀，将混合液倒入无菌培养皿中制成平板，培养一段时间，以获得单个菌落的方法。
(2)选择培养分离①概念：科学家针对某种微生物的特性，设计一个特定的环境，使之特别适合这种微生物的生长，而抑制其他微生物的生长。
这种通过选择培养进行微生物纯培养分离的技术称为选择培养分离。
②依据原理：不同的微生物有不同的营养需求或对某种化学物质有不同的敏感性。
③举例a.要分离耐高温菌，可在高温条件下进行培养。
b.要分离对某种抗生素具有抗性的菌种，可在加有该抗生素(如链霉素或青霉素)的平板上进行分离。
c.在培养基中加入质量分数为10%的酚，可以抑制细菌和霉菌的生长。
d.运用将纤维素作为唯一碳源和能源的培养基，可以有效地分离能分解纤维素的细菌。
高中生物第1章无菌操作技术实践提升课学案苏教版选修1
无菌操作技术实践素能提高课一、微生物的分别与判断微生物的分别方法有很多种，本专题中常用的是平板划线法、涂布平板法、微生物的选择培养等。
针对不同样微生物的特点选择不同样的方法，对目的微生物进行精选。
以下是尿素分解菌和纤维素分解菌的分别与判断比较。
项目尿素分解菌的分别与判断纤维素分解菌的分别与判断分别选利用尿素为唯一氮源利用纤维素为唯一碳源择条件在以纤维素为唯一碳源的培养基上，利判断培养基中加入酚红指示剂，变红色方法用刚果红染色法，出现透明圈分解纤维素的微生物产生纤维素酶，将细菌等微生物合成脲酶，将尿素分判断纤维素分解为纤维二糖或葡萄糖，使纤解产生 NH，使 pH 高升，加入酚红3维素—刚果红复合物降解而出现透明原理变红色圈土壤取样→制备培养基→样品梯度土壤取样→制备培养基→选择培养→步骤稀释→涂布平板→培养观察→进一富集培养→梯度稀释→涂布培养→刚步判断果红染色法→挑取菌落→进一步判断二、纯化细菌的方法1．倒平板与涂布平板法的操作(1)倒平板操作(2)涂布平板操作①将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中②取少量菌悬液不高出0.1 mL）滴加到培养基表面③将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，④用涂布器将菌悬液均匀地涂布在待酒精燃尽后，冷却 8～ 10 s培养基表面，涂布时可转动培养皿使涂布均匀2．两种纯化细菌的方法比较项目优点缺点适用范围平板划线法能够观察菌落特点，对混不能够计数适用于好氧菌合菌进行分别稀释涂布平能够计数，能够观察菌落吸取量较少，较麻烦，适用于厌氧菌平板不干燥，收效不板法特点和兼性厌氧菌好，简单延长三、影响植物组织培养过程的几种主要因素1．培养资料不同样的植物组织，培养的难易程度差别很大，简单进行无性生殖的植物也简单进行组织培养。
同一种植物质料，资料的年龄、保存时间的长短对培养也有影响。
幼龄、保存时间短的植物质料简单培养成功。
菊花的组织培养，一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝。
2．无菌条件培养基上有细菌等微生物存在时，它们比植物细胞生长、生殖得更快，而且它们会产生毒素，使培养的植物细胞很快中毒死亡。
11接种微生物(无菌技术)-江苏省连云港市高中生物苏教版选修1微课教学设计
1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？
2.实验室常用的消毒和灭菌方法有哪些？分别适用于哪些情况？
（二）消毒与灭菌的概念
1.消毒：指使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物，不包括芽孢和孢子。
2.灭菌：指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
（三）常用的消毒方法
1.煮沸消毒法日常生活；100℃煮沸5-6min
2.巴氏消毒 法牛奶；70-75℃下 煮30min或80℃下煮15min
3.化学药剂消毒法用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源
4.紫外线消毒法空间；30mi n
（四）常用的灭菌 方法
1.灼烧灭菌接种环、接种针、试管口、瓶口
2.干热灭菌玻璃器皿 和金属用具；160-170℃，1-2h
《接种微生物（无菌技术）》微课教学设计
微课名称
接种微生物（无菌技术）
适用年级
高二
适用类型
新授课
知识点来源
苏教版高中生物选择性必修一第一章第1节《微生物的培养菌等概念；理解无菌操作的重要性；掌握高压蒸汽灭菌的基本操作技术
教学重难 点
无菌操作技术、高压蒸汽灭菌法
教学过程：
1.概念：泛 指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法 。
2.内容：1）对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。
2）将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。
3）为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精 灯火焰附近进行。
4）实验操作时应避 免 已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。
3.高压蒸汽灭菌培养基、实验器材；100kPa、121℃、1 5-30min
2021版高考生物一轮复习 选修1 第1讲 无菌操作技术实践学案 苏教版
第1讲无菌操作技术实践1.微生物的分离和培养2．某种微生物数量的测定3．微生物的应用4．实验：微生物的分离和培养1.分析培养基的成分及其作用；平板划线法和稀释涂布平板法的异同；选择培养基和鉴别培养基的区别。
（科学思维）2.设计实验探究微生物培养的条件及如何分离某种微生物等。
（科学探究）3.关注有害微生物的控制及宣传健康生活方式等。
（社会责任）微生物的分离和培养1．相关技能、技术和方法(1)无菌操作的技能——灭菌①分类：实验室常用高温处理达到灭菌效果，包括干热灭菌和湿热灭菌。
②作用：微生物分离和培养的基础。
③关键：防止外来杂菌的入侵。
(2)配制培养基①培养基概念：为人工培养微生物而制备的适合微生物生长、繁殖或积累代谢产物的营养物质。
②分类：按化学性质的不同分为天然培养基和合成培养基。
(3)接种微生物①接种：指在无菌条件下将微生物接入培养基的操作过程。
②接种方法和常用工具(连线)接种方法常用工具Ⅰ.涂布平板接种a．接种针Ⅱ.穿刺接种 b．接种环Ⅲ.斜面接种 c．玻璃涂布器Ⅳ.平板划线接种[答案]Ⅰ－c Ⅱ－a Ⅲ－b Ⅳ－b2．大肠杆菌的接种与分离培养(1)配制牛肉膏蛋白胨培养基其操作步骤：配制培养基→调节pH→分装→包扎→灭菌→搁置斜面。
(2)斜面接种和培养大肠杆菌①主要目的：菌种转移、扩大培养和保存纯净菌种等。
②主要步骤：准备接种→接种环灭菌→试管口灭菌→挑取少许菌种→划线接种→在37 ℃恒温箱中培养大肠杆菌24 h→将增殖的菌种放置在冰箱的冷藏室中(4 ℃)保存。
(3)平板划线分离和培养大肠杆菌①平板的作用：培养、分离细菌等微生物。
②平板划线法是指用带有微生物的接种环在平板培养基表面通过分区划线而纯化分离微生物的一种方法。
1．选择无菌技术的原则(1)考虑无菌技术的效果：灭菌的效果比消毒要好。
(2)考虑操作对象的承受能力：活体生物材料、操作者的手等只能采用消毒，而不能灭菌。
2．微生物的培养基(1)培养基的成分营养要素来源功能碳源无机碳源CO2、NaHCO3、CaCO3等含碳无机物a.构成细胞物质和一些代谢产物b.既是碳源又是能源(有机碳源)有机碳源糖类、脂质、蛋白质、有机酸、石油、花生粉饼等氮源无机氮源无机氮：NH3、铵盐、硝酸盐、N2等合成蛋白质、核酸及含氮的代谢产物有机氮源牛肉膏、蛋白胨、核酸、尿素、氨基酸生长因子维生素、氨基酸、碱基a.酶和核酸的组成成分b.参与代谢过程中的酶促反应水培养基、大气、代谢产物不仅是良好的溶剂，还是结构物质无机盐培养基、大气细胞内的组成成分，生理调节物质；某些化能自养型细菌的能源；酶的激活剂种类特点应用物理性质液体培养基不加凝固剂工业生产固体培养基加凝固剂微生物的分离、鉴定、活菌计数、保藏化学成分天然培养基含化学成分不明的天然物质工业生产合成培养基培养基成分明确或用一定化学物质配制分类、鉴定类型实例选择培养基培养基中加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌培养基中加入高浓度的食盐用于分离得到金黄色葡萄球菌以尿素作为唯一氮源的培养基用于分离分解尿素的细菌不添加氮源的培养基用于分离固氮微生物石油是唯一碳源时，可以抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生存，达到分离能消除石油污染的微生物的目的培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生物鉴别培养基伊红—美蓝培养基可以鉴别大肠杆菌(菌落呈黑色)1．大肠杆菌纯化方法的比较主要方法平板划线法稀释涂布平板法纯化原理通过接种环在琼脂固体培养基的表面连续划线操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面将菌液进行一系列的梯度稀释，稀释度足够高时，聚集在一起的微生物将分散成单个细胞主要步骤平板划线操作系列稀释操作和涂布平板操作接种工具接种环涂布器2．某同学在利用稀释涂布平板法纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是什么？为了防止杂菌污染，有同学建议加入抗生素，你觉得可以吗？并说明理由。
2019-2020学年高中生物第一章无茵操作技术实践第一节微生物的培养和应用素材苏教版选修1.doc
2019-2020学年高中生物第一章无茵操作技术实践第一节微生物的培养和应用素材苏教版选修1——微生物培养基的类型由于各种所需要的营养不同，所以培养基的种类很多。
据估计目前约有数千种不同的培养基，这些培养基可根据所含成分、物理状态、以及不同的使用目的等而分成若干类型。
1.按照培养基的成分来分培养基按其所含成分，可分为合成培养基、天然培养基和半合成培养基三类。
(1)合成培养基。
合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。
这种培养基的化学成分清楚，组成成分精确，重复性强，但价格较贵，而且微生物在这类培养基中生长较慢。
如高氏一号合成培养基、察氏（Czapek）培养基等。
(2)天然培养基。
由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养细菌。
这类培养基的化学成分很不恒定，也难以确定，但配制方便，营养丰富，所以常被采用。
(3)半合成培养基。
在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类，或在合成培养基的基础上添加某些天然成分，如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。
这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。
2.按照培养基的物理状态分培养基按其物理状态可分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基三类。
(1)固体培养基。
是在培养基中加入凝固剂，有琼脂、明胶、硅胶等。
固体培养基常用于微生物分离、鉴定、计数和菌种保存等方面。
(2)液体培养基。
液体培养基中不加任何凝固剂。
这种培养基的成分均匀，微生物能充分接触和利用培养基中的养料，适于作生理等研究，由于发酵率高，操作方便，也常用于发酵工业。
(3)半固体培养基。
是在液体培养基中加入少量凝固剂而呈半固体状态。
可用于观察细菌的运动、鉴定菌种和测定噬菌体的效价等方面。
3.按照微生物的种类分培养基按微生物的种类可分为细菌培养基、放线菌培养基、酵母菌培养基和霉菌培养基等四类。
常用的细菌培养基有营养肉汤和营养琼脂培养基；常用的放线菌培养基为高氏1号培养基；常用的酵母菌培养基有马铃薯蔗糖培养基和麦芽汁培养基；常用的霉菌培养基有马铃薯蔗糖培养基、豆芽汁葡萄糖（或蔗糖）琼脂培养基和察氏培养基等。
2019-2020学年高中生物 第1章 无菌操作技术实践学案苏教版选修1【共4套31页】
本套资源目录2019_2020学年高中生物第1章无菌操作技术实践第1节微生物的分离和培养学案苏教版选修12019_2020学年高中生物第1章无菌操作技术实践第2节分离特定的微生物并测定其数量学案苏教版选修12019_2020学年高中生物第1章无菌操作技术实践第3节植物组织培养技术学案苏教版选修12019_2020学年高中生物第1章无菌操作技术实践素能提升课学案苏教版选修1第一节微生物的分离和培养[学习目标] 1.简述高压蒸汽灭菌锅的使用方法及注意事项。
(重点) 2.掌握制备细菌培养基的方法。
(重点) 3.学会利用无菌操作技术接种与培养大肠杆菌。
(难点)知识点一| 培养基及接种操作一、高压蒸汽灭菌锅1．实验室常采用的灭菌方法实验室常利用高温处理达到灭菌效果，包括采用干热灭菌或湿热灭菌等方法。
2．高压蒸汽灭菌锅的使用使用步骤包括：加水―→装锅―→加热排气―→保温保压―→出锅等。
二、配制培养基1．培养基的概念为人工培养微生物而制备的，适合微生物生长、繁殖或积累代谢产物的营养基质。
2．培养基的类型3．培养基的成分各种培养基的配方不同，但一般都含有水、碳源、氮源和无机盐等最基本的物质。
三、接种微生物1．接种的概念指在无菌条件下将微生物接入培养基的操作过程。
2．不同接种工具的使用(1)穿刺接种要用接种针。
(2)斜面划线接种或平板划线接种要用到接种环。
(3)涂布平板接种要用到玻璃涂布器。
[合作探讨]探讨1：高压蒸汽灭菌锅是依赖高压灭菌吗？提示：不是，是通过高压来提高湿热的温度灭菌的。
探讨2：在固体培养基中加入的琼脂能为微生物提供营养吗？为什么？提示：不能。
微生物不能分解琼脂。
探讨3：为什么要对培养基、接种环、实验空间、一些液体等进行消毒或灭菌处理？提示：培养某种微生物的目的是获得数量较多的、单一的该种微生物，如果不进行消毒或灭菌，则会出现其他一些杂菌，影响微生物的纯度。
[思维升华]1．消毒与灭菌的区别条件结果常用的方法消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物体上绝大多数微生物(包括病原微生物和有害微生物的营养细胞)煮沸消毒法(如100 ℃下5～6min可以杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢)、巴氏消毒法、化学药剂消毒法灭菌强烈的物理学或化学方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子干热灭菌、高压蒸汽灭菌、灼烧灭菌营养物质定义作用主要来源碳源能提供所需碳元素的物质构成生物体的细胞物质和一些代谢产物，有些是异养生物的能源物质无机化合物：CO2、NaHCO3等；有机化合物：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等氮源能提供所需氮元素的物质合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物无机化合物：N2、NH3、铵盐、硝酸盐等；有机化合物：尿素、牛肉膏、蛋白品现黑色，并带有金属光泽)1．细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理方法，这些方法可分别用于杀灭哪些部位的杂菌( )A．接种针、手、培养基B．高压锅、手、接种针C．培养基、手、接种针D．接种针、手、高压锅C [培养基通常用高压蒸汽灭菌，常用酒精擦拭对手进行消毒，接种环、接种针等用火焰灼烧的方法进行灭菌。
1.1微生物的分离和培养教案苏教版生物选修1
1.1微生物的分离和培养教案苏教版生物选修1睢宁县菁华高级中学“四步教学法”课时教学设计一、培养基的配制与灭菌1、目的1.1 了解并掌握培养基的配制、分装方法1.2掌握各种实验室灭菌方法及技术。
2、原理培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。
由于微生物具有不冋的营养类型，对营养物质的要求也各不相冋，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。
另外，培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。
琼脂是从石花菜等海藻中提取的胶体物质，是应用最广的凝固剂。
加琼脂制成的培养基在98〜100 C下融化，于45C以下凝固。
但多次反复融化，其凝固性降低。
任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌，以备纯培养用。
一般培养基的火菌米用咼压烝汽火菌。
3、材料3.1器皿及材料天平、称里纸、牛角匙、精密pH试纸、里筒、刻度搪瓷杯、试官、三角瓶、漏斗、分装架、移液管及移液管筒、培养皿及培养皿盒、玻璃棒、烧杯、试管架、铁丝筐、剪刀、酒精灯、棉花、线绳、牛皮纸或报纸、纱布、乳胶管、电炉、灭菌锅、干燥箱。
3.2药品试剂蛋白胨、牛肉膏、NaCI、K2HPO4 琼脂、NaN03 KCI、MgS04 FeS04 蔗糖、麦芽糖、木糖、匍萄糖、半乳糖、乳糖、土豆汁、豆芽计、磷酸铵、5%NaO溶液、5%HC溶液。
4、流程称药品T溶解T调pH值T融化琼脂T过滤分装T包扎标记T灭菌T 摆斜面或倒平板。
5、步骤5.1 培养基的制备5.1.1称量药品根据培养基配方依次准确称取各种药品，放入适当大小的烧杯中，琼脂不要加入。
蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。
5.1.2溶解用量筒取一定量（约占总量的1/2）蒸馏水倒入烧杯中，在放有石棉网的电炉上小火加热，并用玻棒搅拌，以防液体溢出。
待各种药品完全溶解后，停止加热，补足水分。
第一章 无茵操作技术实践 第2课时 复习学案 苏教版选修1
第一章无茵操作技术实践第2课时复习学案苏教版选修1
平板分离操作过程
1、平板划线法：
（1）几次烧灼接种环的目的
①取菌种之前烧灼的目的是杀死接种环上原有的微生物；②每次划线之前的烧灼目的是杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端，使每次划线的菌种数目减少；③划线结束后烧灼的目的是杀死接种环上的微生物或细菌，避免细菌污染环境或感染操作者。
（2）从第二次以后划线操作总是从上一次划线末端开始，这样能够使细菌的数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
2、涂抹平板法和稀释平板法
要注意无菌操作，特别是移液管要在酒精灯火焰周围使用，移液管不要接触任何物体；玻璃刮铲的灭菌方法是将玻璃刮铲的末端放在体积分数为70%的酒精中，取出时要将多余的酒
精在烧杯中滴尽，然后在酒精灯上引燃，注意防火。
高中生物第一章无茵操作技术实践第一节微生物的培养和应用教案苏教版选修
微生物的培养与应用重点知识归纳及讲解(一)微生物需要的营养物质及功能1、微生物需要的营养物质：碳源、氮源、生长因子、无机盐和水五大类。
2、碳源、氮源、生长因子的来源及功能。
严源：无机物＜UCV NaHCOs等1有机物(權、脂肪釀、花生粉饼等3 - 碳涯J常用：糖类，尤其星葡蔔幫-G能：①主要用于构成徽生物的细腕物颱和一些代谢产物・②异养徽生物的主要能源物廣.源：无机氮源(叫、NHA NO3_1有机氮濾(尿素r牛肉承蛋白豚等儿常用：氨盐、硝関盐°功能：主要用于合咸蛋白嵐、核醵和含氮代谢产物.主要包括：维生素、氨基酸、喊基等・I生长因孑彳特点：徽生物生长必不可少的、需求量很少“有些徽生物可以自己合成.功能：是酶和核酣的齟成成分。
(二)培养基的种类及配制原则「目的明确：很据所培养的徽生物种类、培养目的等，选择原料BI营养协调：浓度适宜、比例适宜Bj pH要适宜:鈿菌杲适pH対6 J ,放线菌杲适pH为7.5-S 5，I 其菌摄适pH为5,0-6 0.(三)无菌技术1、无菌技术的内容(1)对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。
(2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。
(3)已经灭菌处理的材料用具不与周围的物品接触。
(4)实验操作应在酒精灯火焰附近进行。
2、消毒方法(1)煮沸消毒法：如在100 C煮沸5〜6min。
(2)化学药剂消毒法：如用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源。
3、灭菌方法(1)灼烧灭菌。
(2)干热灭菌。
(3)高压蒸汽灭菌。
(四)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1、计算根据配方比例，计算配制一定量的培养基所需各种成分的用量。
2、称量3、溶化4、灭菌5、倒平板思考：平板冷凝后，为什么要将平板倒置?口迅連通过火1,舟灭过■的培界01放庄火培旁的鼻巾上.右的左手捷1.州序丰的梅抬牠會描将堵养*打开抵欄大于脱口附费电・右手将整曲■中的20mL)^人培捽n,左手翼即盃I堪粹皿的m亂■固.k^jW5-10 nun,然乩轉甲扳開过僅Jd■在下* ■庭农上.平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒 置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污 染。
高中生物第一章无菌操作技术实践章末整合提升同步备课教学案苏教版选修
第一章无菌操作技术实践章末整合提升知识系统构建【必背要语】1. 细菌培养基的配制过程：配制培养基T 调节 pH R 分装T 包扎T 灭菌T 搁置斜面。
2. 消毒和灭菌的实质不同：前者只杀死绝大多数微生物，后者则杀死所有的微生物。
3. 微生物的接种方法有穿刺接种、斜面接种、涂布平板接种和平板划线接种。
4. 用涂布平板法形成的细菌菌落通常仅在平板表面生长，而混合平板法形成的细菌菌落出现 在平板表面及内部。
5. 微生物分离的原理是提供有利于目的菌株生长的条件，同时抑制或阻止其他微生物生长。
方法是使用选择懸71斜面培养基。
6. 统计菌落数目的方法可分为活菌计数法和显微镜直接计数法。
前者的原理是涂布平板法接种，一个菌落代表一个单细胞；后者的原理是利用血球计数板，在显微镜下计数。
脱分化再分化分化7. 植物组织培养的基本过程：外植体脱分化愈伤组织再―化胚状体―分化^式管苗。
8. 生长素、细胞分裂素是启动生长、细胞分裂、脱分化、再分化的关键激素。
进行组织培养时要配备二种培养基，分别是愈伤组织形成培养基、诱导生根培养基和诱导生芽培养基。
9. 天竺葵的组织培养过程：准备(器具准备、试剂准备)T配制培养基T灭菌T取材与接种T 观察与记录f转接培养。
规律方法整合整合一微生物的纯培养技术与无菌操作技术1. 微生物的纯培养技术(1) 自然环境中的微生物是混杂在一起的，因此分离获得纯培养物的基本原理：首先采用一定方法将单个的细胞与其他细胞分离开，进而提供细胞合适的营养和条件，使其生长成为可见的群体。
(2) 微生物的分散主要采用稀释的方法，而固体培养基能够使分散的细胞固着于一定的位置，与其他的细胞分离，从而生长成为一个单细胞来源的群体即纯培养物。
①平板划线法：将合适的无菌培养基倒入无菌培养皿中，冷却后制备成平板。
平板划线法中细胞的分离和稀释过程发生在接种环在固体平板表面上的划线和移动过程中，产生的单个细胞在培养基表面生长的后代就是纯培养物。
高中生物第一章无菌操作技术实践第1课时微生物的分离和培养同步备课教学案苏教版选修
第1微生物的分离和培养[学习导航]1.简述高压蒸汽灭菌锅的使用方法及注意事项。
2.掌握制备细菌培养基的方法。
3.学会利用无菌操作技术接种与培养大肠杆菌。
[重难点击]1.培养基的配制方法及常见种类。
2.大肠杆菌的接种与分离培养。
一、微生物分离和培养的基本理论1.无菌操作技术实验室常利用高温处理达到灭菌效果，包括采用干热灭菌或湿热灭菌等方法。
(1)干热灭菌方法是将拟灭菌的物品放在干热灭菌箱内，在160～170 ℃温度下加热1～2 h 以达到灭菌的目的。
(2)湿热灭菌方法常采用高压蒸汽灭菌锅进行，如手提式高压蒸汽灭菌锅就是实验室常用的灭菌仪器之一。
高压蒸汽灭菌锅的使用包括加水、装锅、加热排气、保温保压、出锅等步骤。
2.配制培养基(1)培养基概念：为人工培养微生物而制备的适合微生物生长、繁殖或积累代谢产物的营养基质。
(2)培养基类型①天然培养基：采用动植物组织或微生物细胞以及它们的提取物或粗消化物配制而成，如牛肉膏蛋白胨培养基。
优点：取材便利、营养丰富、配制简便；缺点：营养成分难以控制、实验结果的重复性较差。
②合成培养基：由准确称量的分析纯等级别的高纯度化学试剂加蒸馏水配制而成，如葡萄糖铵盐培养基。
优点：化学成分及其含量明确、实验的可重复性好；缺点：配制繁琐、成本较高。
(3)培养基成分：一般都含有水、碳源(提供碳元素的物质)、氮源(提供氮元素的物质)和无机盐等最基本的物质。
(4)培养基的配制原则：在配制培养基时，根据拟培养的微生物的不同需要，有时还要加入维生素等特殊的营养物质，并要调节培养基的pH使之满足微生物生长的需要。
3.接种微生物(1)接种的概念：在无菌条件下将微生物接入培养基的操作过程。
(2)常用的接种工具：玻璃涂布器、接种针、接种环等。
(3)接种方法①用接种针进行穿刺接种。
②用接种环进行斜面接种或在固体培养基平板上进行划线接种。
③用玻璃涂布器进行涂布平板接种等。
1.“无菌操作”与人们的生活休戚相关，无时无处不在。
最新苏教版高二生物选修1(生物技术实践)电子课本课件【全册】
第三节 植物组织培养技术
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第二章 发酵技术实践
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册】目录
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第一章 无菌操作技术实践 第二节 分离特定的微生物并测定其数量 第二章 发酵技术实践 第三章 酶的应用技术实践 第二节 制备和应用固定化酶 第一节 生物成分的分离与测定技术 第二节 测定发酵食品中的特定成分 附录3 显微观察、计数和测量细胞 附录4 生物科学实验的设计与实施 附录6 生物科学实验结果的分析与总结
第一章 无菌操作技术实践
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第一节 微生物的培养和应用
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第二节 分离特定的微生物并测 定其数量
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第一节 运用发酵技术加工食品
最新苏教版高二生物选修1（生物 技
高中生物 第一章第一节第2课时 微生物分离和培养的技术操作(以大肠杆菌为例)学案 苏教版选修1
第2课时 微生物分离和培养的技术操作(以大肠杆菌为例) 学习导航 明目标、知重点难点了解培养基的配制过程及培养基的配制原则。
(重点)掌握无菌操作和接种技术。
(重、难点)[学生用书P9]阅读教材P 10～14分析大肠杆菌的接种与分离培养1．配制牛肉膏蛋白胨培养基配制培养基→调节pH →分装→包扎→灭菌→搁置斜面2．斜面接种和培养大肠杆菌斜面接种大肠杆菌的主要目的有菌种转移、扩大培养和保存纯净菌种等。
具体操作步骤： 准备接种→接种环灭菌→试管口灭菌→挑取少许菌种→划线接种→培养大肠杆菌→保存菌种3．平板划线分离和培养大肠杆菌在实验室中，平板常常被用来培养、分离细菌等微生物。
(1)牛肉膏蛋白胨固体培养基的平板制作配制好的培养基装瓶――→加棉塞灭菌→倒平板操作(A.打开瓶塞→B.灼烧瓶口灭菌→C.倒培养基→D.倒置平板)(2)平板划线分离与培养大肠杆菌①平板划线法的含义：用带有微生物的接种环在平板培养基表面通过分区划线而纯化分离微生物的一种方法。
②注意事项：接种和划线操作时需要在酒精灯火焰附近进行。
③培养结果：可以得到由单个细菌增殖而形成的菌落。
判一判(1)锥形瓶的瓶口通过火焰灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
(√)(2)平板冷凝后，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
(√)(3)制备细菌培养基的操作顺序为配制培养液、调节pH 、灭菌、分装。
(×)(4)使用已灭菌的接种环、培养基，操作过程中不再灭菌。
(×)连一连培养基的配制[学生用书P10]利用培养基培养微生物首先要把微生物接种到培养基上，在实验室中，平板常常被用来培养、分离细菌等微生物。
结合教材P10～14内容完成以下探究。
探究1 下表是牛肉膏蛋白胨固体培养基的成分，请说出各成分提供的营养培养基组分提供的主要营养物质牛肉膏5.0 g 碳源、氮源、磷酸盐和维生素蛋白胨10.0 g 碳源、氮源和维生素NaCl 5.0 g 无机盐H2O定容至1 000 mL 氢元素、氧元素骤，学会培养基的配制配制培养基↓调节pH至7.2↓分装：培养基的高度约为试管长度的1/5↓包扎↓灭菌：高压蒸汽灭菌是常用的灭菌方法之一↓搁置斜面：待试管冷却至50_℃左右，斜面长度不超过试管总长的1/21．培养基的配制原则(1)目的明确：不同微生物需求不同，根据培养目的进行配制。
2017-2018学年高中生物第一章无茵操作技术实践第一节微生物的培养和应用素材苏教版选修
微生物的培养与应用――微生物培养基的类型由于各种所需要的营养不同，所以培养基的种类很多。
据估计目前约有数千种不同的培养基，这些培养基可根据所含成分、物理状态、以及不同的使用目的等而分成若干类型。
1. 按照培养基的成分来分培养基按其所含成分，可分为合成培养基、天然培养基和半合成培养基三类。
(1) 合成培养基。
合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。
这种培养基的化学成分清楚，组成成分精确，重复性强，但价格较贵，而且微生物在这类培养基中生长较慢。
如高氏一号合成培养基、察氏( Czapek)培，养基等。
(2) 天然培养基。
由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养细菌。
这类培养基的化学成分很不恒定，也难以确定，但配制方便，营养丰富，所以常被采用。
(3) 半合成培养基。
在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类，或在合成培养基的基础上添加某些天然成分，如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。
这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。
2. 按照培养基的物理状态分培养基按其物理状态可分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基三类。
(1) 固体培养基。
是在培养基中加入凝固剂，有琼脂、明胶、硅胶等。
固体培养基常用于微生物分离、鉴定、计数和菌种保存等方面。
(2) 液体培养基。
液体培养基中不加任何凝固剂。
这种培养基的成分均匀，微生物能充分接触和利用培养基中的养料，适于作生理等研究，由于发酵率高，操作方便，也常用于发酵工业。
(3) 半固体培养基。
是在液体培养基中加入少量凝固剂而呈半固体状态。
可用于观察细菌的运动、鉴定菌种和测定噬菌体的效价等方面。
3. 按照微生物的种类分培养基按微生物的种类可分为细菌培养基、放线菌培养基、酵母菌培养基和霉菌培养基等四类。
常用的细菌培养基有营养肉汤和营养琼脂培养基；常用的放线菌培养基为高氏1号培养基；常用的酵母菌培养基有马铃薯蔗糖培养基和麦芽汁培养基；常用的霉菌培养基有马铃薯蔗糖培养基、豆芽汁葡萄糖(或蔗糖)琼脂培养基和察氏培养基等。
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第二课时无菌操作和接种技术及微生物的分离、培养与数量测 疋一、 无菌操作和接种技术1. 接种通常把在 _____ 条件下将微生物接入 ___________ 的操作过程叫做接种。
由于接种方法的不同， 采用的接种工具也有区别， 如用 __________ 进行固体培养基划线接 种；用 ________ 穿刺接种；用 ___________ 涂抹平板等。
2. 无菌操作__________ 是微生物接种技术的关键。
通常在酒精灯 _______ 进行接种操作，其原因是：酒精灯火焰附近的 ___________ 使微生物 不能存活。
预习交流1. 根据接种工具的区别，分析有哪些接种技术。
2•接种过程中在接种环从菌种管中抽出时，应该注意什么问题？3. 无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？二、 微生物的分离、培养与数量测定1•分离微生物的依据分离微生物时，根据微生物对 _________ 、 _______ 、 _____ 等要求的不同，通过只提供目 的微生物生长的必需条件，或加入 _____________ 使 ____________ 不能生长，从而达到选择分离 微生物的目的。
2. 菌落单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度，可以形成肉眼可见 的、有 ____________ 的 _______________ ,称为菌落。
当 ________ 培养基表面众多菌落连成一片 时，便成为 _______ 。
当多种微生物混杂在一起时，根据它们在平板上形成的菌落的 ____________ 可初步将所需的 微生物与其他微生物区分开，并在此基础上获得所需微生物的_________ 。
3•分离微生物的常用方法分离法能将单个微生物 和固定在 培养基表面或里面，每个孤立的活 微生物经过、 均可形成便于移植的菌落。
最常用的分离、培养微生物的固体培 学习目标 重点难点1.能说出接种技术的概念和基本过 程。
2 •能记住无菌操作的基本流程和方法。
3.能说出微生物分离的基本方法和 操作过程。
4 •能说出“土壤微生物的分离和计 数”的操作流程。
重点：1 .能解决在无菌操作技术中的注意冋题。
2.会分析接种和培养大肠杆菌中出现 的问题。
3 •能解决“土壤微生物的分离和计 数”出现的基本问题和操作技术。
难点： 能解决如何分离土壤中微生物的问题。
KEQ1ANYUXIDAOX UE@@^J|：：：：：：：：：：：：：：：：：养基是__________________ 平板。
平板分离法有多种，女口_________ 禾廿___________ 就是常用的两种_________ 的方法。
分离土壤中能分解纤维素的微生物所采用的培养基从功能上分是_________________ ,其特点是平板划线法也是常用的平板分离法。
平板划线法有在“土壤微生物的分离与计数”实验中，在高度稀释条件下，微生物在固体培养基上可以形成___________ ，即一个菌落可代表一个 __________ ，通过菌落数的统计可计算出样品中的含菌数。
需准备的实验器材：灭菌处理过的移液管、试管、锥形瓶、试管架、培养皿、记号笔、烧杯、土壤样品、相关培养基、无菌水和___________________ 。
选择适于分离特定微生物的培养基：利用不同微生物_________ 的不同，可以通过选择培养基排除其他微生物的生长，从而选出所需要的特定微生物。
预习交流1 •分类、鉴定微生物的重要依据是什么？2 •涂布平板法和混合平板法分离细菌和数量测定时，首先要做的操作是什么？3. 纤维素存在于何种细胞的何种结构中？有何功能？4•自然界中的纤维素是如何被利用的？答案：一、1.无菌培养基接种环接种针玻璃刮铲2 •无菌操作火焰附近局部高温预习交流：1 •提示：微生物接种技术很多，除了最常用的平板划线法和稀释涂布平板法外，还包括斜面接种、穿刺接种等方法。
2. 提示：注意带菌部分不要触及管壁或通过火焰。
3 •提示：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。
二、1.营养成分氧气pH某些抑制剂非目的微生物2•一定形态结构子细胞生长群体固体菌苔形态特征纯培养物3 •平板分离固体生长繁殖琼脂固体培养基涂抹平板法混合平板法定量测定选择培养基以纤维素为唯一碳源扇形划线连续划线交叉划线方格划线单个的菌落单细胞玻璃刮铲代谢特性预习交流：1・提示：不同微生物在特定的培养基上生长形成的菌落或菌苔一般具有稳定的特征，可以成为对该类微生物进行分类、鉴定的重要依据。
2 •提示：将待分离的材料进行稀释。
3. 提示：纤维素主要存在于植物细胞的细胞壁中，是植物细胞壁的主要组成成分，细胞壁越发达，纤维素的含量越多。
纤维素不是一种生物活性物质，由纤维素构成的细胞壁具有保护和支持作用。
4. 提示：自然界中的纤维素主要被土壤中的微生物分解利用；一部分被植食性动物取食利用（实质上也离不开微生物的分解作用）；一部分作为能源被人类燃烧利用。
课堂•令作探宠KETANGHEZVOTANJIU创❸涉学：：：：：：：：：：：：：：：：：一、无菌操作•活朋勺探究1. 在微生物的培养过程中为什么要进行无菌操作？怎样进行无菌操作？2•下列各项中采用什么样的无菌操作？①操作者的衣物、手；②器皿、接种工具和培养基。
微生物实验过程中许多操作都要消毒或灭菌，下列消毒或灭菌措施不恰当的是（）。
A. 接种环可用火焰灼烧B. 若条件优越，一些操作可在超净工作台上进行C. 接种后，应先进行灭菌再放入培养箱中培养D. 试管、培养皿等玻璃器具可用高压蒸汽灭菌（©师点津••1•无菌操作是微生物接种技术的关键。
2•实验室常用的消毒或灭菌方法二、接种与培养大肠杆菌SS9与探究B根据教材“接种与培养大肠杆菌”回答下面的问题。
1•第2步中，将接种环在火焰上来回灼烧多次的目的是什么？2. 第3步中，迅速将试管口通过火焰2〜3次的目的是什么？3. 第4步中，将灭菌的接种环先接触培养基斜面顶端等部位使其冷却，然后再挑取少许菌体的原因是什么？4•平板划线法和稀释涂布平板法有何区别？号圧移❻專用下列有关接种与培养大肠杆菌操作过程的叙述，不正确的是（）。
A灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养基B. 将试管口通过火焰2〜3次，是为了杀灭试管口上沾染的微生物C. 接种结束后可直接将接种环放回原处D. 接种过菌种的试管，放在恒温箱中（37 C）培养24 h师点津* •平板划线操作（1）第一次划线及每次划线之前都需要灼烧接种环灭菌，划线操作结束仍需灼烧接种环，每次灼烧目的如下：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养基；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种；划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。
（2）灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。
（3）划线时最后一区域不要与第一区域相连。
（4）划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。
三、土壤微生物的分离和计数*姑副勺探究1 •教材P i7表1-2的培养基配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？该培养基是液体培养基还是固体培养基？2. 实验中如何设置对照实验？3•第4步中，每个浓度设置3个重复的目的是什么？4•想一想，如何从平板上的菌落数推测出每克土壤样品中的细菌数？•迁移❻玫用下列有关“土壤微生物的分离和计数”实验的说法，错误的是（）。
A. 该实验采用了唯一氮源为尿素的鉴别培养基B. 将培养皿倒置于恒温箱中37 C培养C. 计算时，选取菌落数在30〜300的一组为代表，进行统计D. 每次用无菌移液管吸取土壤悬液前都要振荡約师点津该实验中的注意事项（1）设立重复组：统计某一稀释度下平板上的菌落数时，要至少涂布3个平板作重复组，增强实验结果的说服力与准确性。
（2）对照原则①判断培养基中是否有杂菌污染，需将未接种的培养基同时进行培养。
②判断选择培养基是否具有筛选作用，需设立牛肉膏蛋白胨培养基进行接种后培养，观察两种培养基上菌落数目，进行对比得出结论。
四、分离土壤中能分解纤维素的微生物889与探究B阅读教材P19旁栏中的纤维素分解菌选择培养基的成分回答下列问题。
1 .旁栏中的配方是液体培养基还是固体培养基？为什么？2. 这个培养基对微生物是否具有选择作用？如果有，是如何进行选择的？毀貳移❻專用纤维素分解菌的选择培养基有选择作用，原因在于其含有（）。
A. NHNO B . NaCI C .酵母浸膏D .微晶纤维素粉約师点津刚果红染色法鉴别纤维素分解菌的原理刚果红（Congo Red,简称CR是一种染料，它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。
当我们在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物。
当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红一纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。
这样，我们就可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。
答案：活动与探究一：1. 提示：无菌操作的目的是防止受到空气中的杂菌污染。
培养微生物用的试管、培养皿和微生物培养基等，在接种之前都需要灭菌；接种操作时要在酒精灯火焰附近的无菌区进行。
2. 提示：①清洁消毒；②进行灭菌。
迁移与应用：C解析：接种用具、器皿、空气中都充满了微生物，都有污染的可能，必须严格地消毒灭菌。
A B、D三项措施都是合理可行的。
但接种后再灭菌会将菌种杀死导致实验失败。
活动与探究二：1. 提示：杀灭接种环上的杂菌。
2. 提示：杀灭试管口上沾染的微生物。
3. 提示：防止接种环过热将细菌杀死。
4. 提示：这两种方法都是分离微生物的方法。
二者的操作方法不同，平板划线法是挑单个菌落在琼脂固体培养基表面划线，将微生物分离；稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。
平板划线法主要用于分离纯化，稀释涂布平板法主要用于计数。
迁移与应用：C解析：接种过菌种的试管，应放在恒温箱中（37 C）培养24 h。
接种结束后，灼烧接种环后，放回原处。
活动与探究三：1. 提示：碳源：葡萄糖，氮源：尿素；因配方中含有凝固剂琼脂，该培养基为固体培养基。
2•提示：另设置一份不加氮源（以等体积的无菌水代替）的对照。
3•提示：增加实验结果的说服力与准确性。
4. 提示：统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计三个平板，计算出平板菌落数的平均值，然后根据公式（每克土壤样品的细菌数=某一稀释度几次重复培养后的菌落平均数X稀释倍数）进行计算。