2015版药典微生物限度微生物无菌方法学验证流程

微生物限度/无菌方法学验证流程

1.：提交单位购买申请菌种的购买：需要1.5个月

单位介绍信证明工作用途等文件，并向中检院网站提交申请，接到申请后一个月后中检院会把有的菌种邮寄到使用单位，中检院菌种经常缺货并不是很齐全，不能一次买齐所需要的8种菌一次性买齐，

2.每种从菌复活、分离、纯化复壮：共需要30天

药典规定进行药品检验所需8种标准阳性菌，购买中检院冻干菌粉后进行复活与保藏1大肠埃希菌

2金黄色葡萄球菌

3枯草芽孢杆菌

4生孢梭菌

5铜绿假单胞菌

6沙门菌

（细菌每种冻干菌粉复活到分离纯化保藏各需要3-4天时间）

7白色念珠菌

8黑曲霉菌

（霉菌酵母菌冻干菌粉从复活到分离纯化制备孢子菌悬液需要至少7天时间）

3.培养基适用性/灵敏度验证：需要60-80天

实验中使用的培养基需要进行与中检院提供的标准培养基进行培养基适用性验证

每种培养基不同批号之间也需要进行验证之后方可以进行微生物检验用

药检室现有培养基种类20余种，每种培养基验证需要3-4天，完成所有培养基适用性验证需要60-80天。

恩替卡韦分散片微生物限度方法学适用性验证：

1.回收率验证：回收率验证实验共需要26天

（若回收率达不到药典规定需要重新选用另一种方法进行验证）

五种实验菌分别验证

1金黄色葡萄球菌

2铜绿假单胞菌

3枯草芽孢杆菌

4白色念珠菌

5黑曲霉菌

五种阳性菌的回收率验证需使标准阳性菌回收率在阳性对照组计数达到50％-200％之间

假设验证一次成功

3种细菌回收率各需要4天时间，2霉菌酵母菌各需要7天时间

2.控制菌适用性验证：共需要20天

大肠埃希菌控制菌方法：需要5天时间

其他制剂含药材原粉的中药制剂需要检查沙门菌、耐胆盐革兰式阴性菌各需要7天时间共1周实验室消毒实验用具灭菌，实验细菌培养物灭活处理，实验用具洗涮等

方法学验证一次顺利完成共需要46天，验证方法过程需要重复一遍作为方法学适用性确认

复方茵陈注射液无菌方法学适用性验证：

1.方法适用性验证：验证实验共需要30天

（若回收率失败或达不到药典规定回收率需要重新选用方法进行验证）

五种实验菌分别验证

1金黄色葡萄球菌

2大肠埃希菌菌

3枯草芽孢杆菌

4生孢梭菌

5白色念珠菌

6黑曲霉菌

6种实验组阳性菌需与对照管组进行对照,含供试品的实验菌均生长良好则说明方法可行

假设验证一次成功

每种菌分别按规定温度培养，培养时间不得超过5天

实验室消毒实验用具灭菌，实验细菌培养物灭活处理，实验用具洗涮等，

方法学验证一次顺利完成共需要30余天，验证方法过程需要重复一遍作为方法学适用性确认