猪瘟疫苗的研究进展

猪瘟疫苗的研究进展

刘萍

(中农威特生物科技股份有限公司,兰州　730046)

摘要:猪瘟(classical swine fever,CSF)是危害世界养猪业的主要传染病之一,以很强的传染性和高致死率为特征。目前猪瘟的流行趋势发生了很大变化,呈现典型猪瘟和非典型猪瘟共存、持续感染与隐性感染共存、免疫耐受和带毒综合征共存等现象,给猪瘟的防制带来新的挑战。目前,免疫接种依然是猪瘟防制的主要措施,因而开发新型、高效、稳定的猪瘟标记疫苗具有重要的现实意义。

关键词:猪瘟;标记疫苗

中图分类号:S852.65+1 文献标识码:B 文章编号:167127236(2008)0720095204

猪瘟是由猪瘟病毒(classical swine fever virus, CSFV)引起的一种高度接触性传染病,它对全世界的养猪业构成巨大威胁。不同年龄、性别和品种的猪均能感染,死亡率高达80%～90%。近年来,该病在美洲、亚洲、欧洲等国家和地区呈现复发的趋势,一些宣布已消灭猪瘟的国家(如法国、荷兰、德国、比利时等)又见猪瘟复发的报道。在我国,猪瘟流行呈现典型猪瘟和非典型猪瘟共存、持续感染与隐性感染共存、免疫耐受和带毒综合征共存等现象。猪瘟新的流行形式给全世界养猪业提出了新的挑战,在我国,免疫接种仍是防制猪瘟的重要措施,疫苗对预防猪瘟起重大作用。因而研制新型、安全、高效、稳定的猪瘟疫苗对于预防和控制猪瘟具有重要意义(仇华吉等,2005;Morilla2 G onzfih,2002)。

1　猪瘟疫苗的现状

当前使用的猪瘟疫苗均是用兔化弱毒株C株生产的活疫苗,根据生产工艺的不同分为:猪瘟活疫苗(细胞源),即猪瘟细胞苗;猪瘟活疫苗(兔源),即猪瘟组织苗,猪瘟组织苗又根据生产用成年兔还是乳兔分为猪瘟脾淋苗和猪瘟乳兔苗。世界公认中国C株兔化弱毒的突出优点是,用其接种的猪不产生

收稿日期:2008201208病毒血症和脑炎病变,可以安全地免疫接种任何怀孕期的母猪和哺乳仔猪,不影响受精率及存活率,不引起流产、死胎,可安全地用于建立种猪群(Tesmer 等,1973)。常用的还有日本GPE株、法国Thiver2 val株等都是广泛应用的CSFV疫苗株,一般均可提供终生免疫。

由于近年来猪瘟流行和发病特点在世界范围内发生了很大变化,出现呈周期性、波浪形的地区性散发流行的温和型猪瘟,其特点是:无名高热、症状不典型,持续性感染,新生仔猪先天性震颤和母猪繁殖障碍。用传统疫苗免疫常常造成免疫失败,甚至免疫次数增加和免疫剂量加大到600个兔体反应(我国规定是150个兔体反应)也不能预防其感染,且有蔓延之势。在妊娠早期接种疫苗常可通过胎盘感染胎儿,造成死胎或弱仔并成为持续性带毒者,成为新疫源。因此,必须研制安全有效的新型疫苗来加强猪瘟的免疫防制(Uttenst hal等,2001;Stegeman 等,2000)。弱毒疫苗已延用了近40年,在长期的免疫压力下,猪瘟流行毒株已向远离疫苗毒的方向演化,这种流行毒株的变化趋势在国内外情况基本一致,所以研制针对当前流行毒株的新型疫苗迫在眉睫(Dong等,2002)。

另外,注射普通弱毒疫苗已影响到国际贸易,因为在美国、欧盟等国家停止了弱毒疫苗免疫,他们采

肺炎的直接原因。仔猪的抵抗力较弱,许多外界刺激(如长途运输、天气变化、冲洗降温以及转栏等因素),极易造成散发性的仔猪感冒,在饲养员忽视的情况下,极易继发肺炎。建仪养猪场在饲养过程中,重视外界因素引起的致病环节,以免造成损失。

地塞米松具有抗炎、抗病毒和抗过敏的作用,与青霉素配伍,可产生较大的药物协同作用,治疗效果显著增强。银翘柴芩汤、鱼腥草水煮液合用,具有较好的抗炎、抗病毒效果,主要用来治疗猪风热性感冒和由感冒引起的继发性肺炎,辨证加减对预防仔猪的流行性感冒和肺炎,也可以产生较好的预防作用。

取扑杀的办法净化疫区。由于担心在普通免疫的“保护伞”下隐藏有猪瘟野毒,所以,美国、加拿大、欧盟等发达国家,严密关注其他国家的疫情,不从任何有猪瘟和注射猪瘟弱毒疫苗的国家进口猪类制品,主要原因是不能用血清学方法鉴别诊断感染猪和注苗猪。有必要研究和开发新型的免疫效果良好的新型猪瘟疫苗。最近国际上兴起的标记疫苗有助于从疫苗接种猪群中筛查出野毒感染猪,从而有可能监测CSFV在猪群中的传播和再度传入。因此,研究能区别感染猪和免疫猪的标记疫苗势在必行(Bot u2 na等,2000;Steget ran等,2000)。

2　新型标记疫苗

2.1　亚单位标记疫苗　亚单位标记疫苗就是应用化学方法从病毒粒子中分离出保护性抗原制成亚单位疫苗。不含有核酸,即不含有感染性组分,因而无需灭活,也无致病性,非常安全。实际上也就是猪瘟病毒E2、E2B/C区或E2A区亚单位疫苗,同时建立了相应的区别疫苗接种猪和自然感染猪的诊断方法,目前所建立的诊断方法多是以猪瘟病毒E0基因表达蛋白为抗原,因为疫苗接种猪不会产生针对E0的抗体,而自然感染猪则产生针对E0的抗体,从而达到区别诊断的目的(朱良全等,2005)。其产品已被载入《欧洲药典》。Van等(1999)在实验室利用杆状病毒表达了CSFV E2(不包括跨膜区),E2的A区及E2的B/C区制成亚单位标记疫苗,结果均能使免疫猪产生抵抗强毒攻击的保护。随后, Moormann等(2000)报道以CSFV E2亚单位标记疫苗1次鼻内接种免疫猪,结果免疫后3周及6个月攻毒免疫猪不表现临床症状,不散毒;免疫后1周攻毒免疫猪死亡,散毒,能使哨兵猪感染;免疫后2周攻毒免疫猪部分散毒,不能使哨兵猪感染;同时以此疫苗免疫怀孕母猪,结果1次免疫1/9母猪发生垂直传播而2次免疫则无。Smit等(2001)利用E2亚单位标记疫苗1次免疫猪得到了相似的结果,免疫期可长达13个月,但免后13个月攻毒时,1/4免疫猪中和抗体阴性,攻毒后死亡。Uttent hal等(2001)利用E2蛋白标记疫苗1次免疫哺乳仔猪的结果与Moormann等的结果相似,免后21d及14d 攻毒组免疫猪不表现临床症状,但可传播病毒给哨兵猪,其中25%免疫后21d攻毒免疫猪可从白细胞中分离到病毒,而免疫后14d攻毒50%的免疫猪可从白细胞中分离到病毒;免疫后10d及7d攻毒免疫猪均可分离到病毒,其中免疫后10d攻毒及7d 攻毒免疫猪出现慢性感染的分别为5%和30%,致死率分别为20%和20%～80%。而Dewulf等(2001)利用E2亚单位标记疫苗2次免疫怀孕母猪的结果与Moormann的结果不同,免后10d攻毒, 3/8怀孕母猪可发生垂直传播,造成胎儿感染。Ah2 rens等(2000)报道利用CSFV标记疫苗Porcilis Pesti免疫母猪,免疫次数为2次,免疫间隔为4周,首免后35d所有免疫猪E2中和抗体水平为5.0～7.5log2,首免后125d低毒力毒株攻毒,免疫组2/ 10猪在攻毒后第5d出现中等程度白细胞数减少,所有猪均不表现临床症状,血中及鼻拭子中不能分离到病毒,9/10免疫母猪所产仔猪未发生感染,血样、淋巴结和骨髓病毒检测阴性。

由于该疫苗具有安全、稳定、可规模化生产等优点,同时又根据流行毒株的变化,可更换合适的E2基因,因此具有广阔的应用前景。

2.2　猪瘟C株突变株疫苗　对猪瘟兔化弱毒进行改造,使其缺失或替换某一段基因,而其免疫原性不改变,缺失或替换的基因所表达的蛋白则可作为诊断抗原,从而达到疫苗接种猪和自然感染猪相区别的目的。目前所研究的猪瘟C株突变株标记疫苗多是对猪瘟兔化弱毒E2或E0基因的进行部分缺失、全缺失或替换(Dep rer等,2001;Ahrens等, 2000)。

2.2.1　缺失标记疫苗　构建猪瘟兔化弱毒株的感染性克隆,在cDNA水平上缺失某些与病毒复制无关的毒力或毒力相关基因后,其毒力丧失或明显减弱,但病毒复制能力并不丧失,同时保持着良好的免疫原性。因此,通过基因工程技术使病毒基因组中负责毒力的基因缺失,可获得基因缺失型弱毒疫苗株。人为地将病毒的毒力基因切除,往往不可能完全自行修复,发生返祖现象的概率较低,在遗传特性上比较稳定,是今后弱毒疫苗的研究方向之一。

采用缺失的方法可能会制造出免疫原性好,且在安全性上更有保证的弱毒疫苗株。K idjojoat2 modjo等(2000)报道利用猪瘟C株感染性克隆在S K6细胞系上连续传代制备了2株E rns基因突变株,F1c22突变株是在E rns内缺失了66个氨基酸, F1c23突变株只包括E rns最C端和最N端氨基酸,缺失了215个氨基酸。以此突变株免疫猪能抵抗强毒Brescia株的致死性感染。另外,Gennip等