大肠杆菌实验
大肠杆菌实验报告
大肠杆菌实验报告大肠杆菌实验报告引言：大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的肠道细菌，广泛存在于人和动物的肠道中。
尽管大肠杆菌在正常情况下对人体没有害处，但某些菌株可能引起食物中毒和其他健康问题。
本实验旨在探究大肠杆菌的特性和其对环境的适应能力。
实验目的：1. 了解大肠杆菌的形态和结构特征；2. 探究大肠杆菌的生长条件和适应能力；3. 研究大肠杆菌在不同环境下的生长情况。
实验材料和方法：1. 实验材料：- 大肠杆菌培养基- 灭菌培养皿- 灭菌试管- 灭菌移液管- 微量移液器- 恒温培养箱- 显微镜2. 实验步骤：1. 准备培养基：将大肠杆菌培养基按照说明书配制好，并灭菌处理。
2. 接种：使用微量移液器，将大肠杆菌接种到灭菌培养皿中。
3. 培养：将接种好的培养皿放入恒温培养箱中，并设置适当的温度和湿度条件。
4. 观察生长情况：每隔一段时间，观察培养皿中大肠杆菌的生长情况，并记录下来。
5. 形态和结构观察：取一部分培养物放在载玻片上，使用显微镜观察大肠杆菌的形态和结构特征。
实验结果：1. 大肠杆菌的形态和结构特征：在显微镜下观察，大肠杆菌呈现为短杆状，长度约为2-4微米，直径约为0.5微米。
细菌的表面有许多纤毛，这些纤毛有助于细菌的运动和附着。
大肠杆菌呈现为革兰阴性菌，其细胞壁主要由脂多糖和蛋白质组成。
2. 大肠杆菌的生长条件和适应能力：大肠杆菌在适宜的环境条件下能够迅速生长和繁殖。
它对温度、pH值和营养物的要求较为宽容。
一般来说，大肠杆菌的最适生长温度为37摄氏度，pH值在6.5-7.5之间。
此外，大肠杆菌对葡萄糖等简单糖类具有较高的利用能力，能够利用这些营养物进行代谢和生长。
3. 大肠杆菌在不同环境下的生长情况：大肠杆菌在不同环境条件下的生长情况可能有所不同。
例如，在高温环境下，大肠杆菌的生长速度会加快，而在低温环境下则会减慢。
此外，在酸性环境中，大肠杆菌的生长可能受到抑制。
然而，尽管大肠杆菌对环境的适应能力较强，但在极端条件下，如高温、高盐度等，它的生长可能会受到抑制或甚至死亡。
大肠杆菌生化实验报告
一、实验目的1. 了解大肠杆菌的生化特性，掌握大肠杆菌的鉴定方法。
2. 掌握微生物生化实验的基本操作技术，提高实验技能。
3. 通过实验，加深对微生物生化反应原理的理解。
二、实验原理大肠杆菌是一种革兰氏阴性细菌，属于肠杆菌科。
在微生物学中，生化实验是鉴定细菌的重要手段之一。
通过观察细菌对特定底物的代谢能力，可以判断细菌的种类和特性。
本实验主要采用糖发酵实验、吲哚试验、甲基红试验等方法对大肠杆菌进行鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：大肠杆菌菌种、葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基、蛋白胨水培养基、吲哚试剂、甲基红试剂、卢戈氏碘液、乙醚、蒸馏水等。
2. 实验仪器：酒精灯、接种针、培养皿、试管、试管架、烧杯、量筒、德汉氏小管、电子天平、纱布、脱脂棉、灭菌锅、PH计或PH试纸、电炉、石棉网、铁架台、100ml量筒、橡皮手套、超净台等。
四、实验步骤1. 糖发酵实验（1）将大肠杆菌接种于葡萄糖发酵培养基中，37℃培养24小时。
（2）观察培养基中是否产生气泡，若有气泡产生，则说明大肠杆菌能够利用葡萄糖。
2. 吲哚试验（1）将大肠杆菌接种于蛋白胨水培养基中，37℃培养24小时。
（2）取少量培养液加入吲哚试剂，观察是否产生红色沉淀。
3. 甲基红试验（1）将大肠杆菌接种于乳糖发酵培养基中，37℃培养24小时。
（2）加入甲基红试剂，观察培养基颜色变化。
五、实验结果与分析1. 糖发酵实验：大肠杆菌在葡萄糖发酵培养基中产生气泡，说明其能够利用葡萄糖。
2. 吲哚试验：大肠杆菌在蛋白胨水培养基中产生红色沉淀，说明其具有吲哚酶活性。
3. 甲基红试验：大肠杆菌在乳糖发酵培养基中不产生红色沉淀，说明其不能发酵乳糖。
根据实验结果，可以判断该菌株为大肠杆菌。
六、实验总结通过本次实验，我们掌握了微生物生化实验的基本操作技术，加深了对微生物生化反应原理的理解。
在实验过程中，我们学会了如何观察细菌对特定底物的代谢能力，从而对大肠杆菌进行鉴定。
大肠杆菌实验报告
大肠杆菌实验报告
实验目的：研究大肠杆菌的生长规律和影响因素。
实验原理：
大肠杆菌是一种常见的革兰氏阴性菌，广泛存在于自然环境中，如土壤、水体和动物的消化道中。
大肠杆菌是一种强大的生物工程工具，被广泛用于基因克隆、蛋白表达和生物制药等领域。
大肠杆菌的生长主要受到以下因素的影响：
1. 温度：大肠杆菌的适宜生长温度一般为37℃。
过高或过低
的温度都会抑制细菌的生长。
2. pH值：大肠杆菌对酸碱度有一定的耐受能力，适宜生长的pH范围为6.5-7.5。
3. 氧气含量：大肠杆菌是一种厌氧菌，但也可以在氧气存在的条件下进行生长。
4. 营养物质：大肠杆菌需要碳源、氮源、磷源等营养物质来进行生长。
实验步骤：
1. 准备培养基：将大肠杆菌营养琼脂混合溶解，并进行高温高压灭菌处理。
2. 用无菌移液管取一小滴大肠杆菌液，滴入含有营养琼脂的平板培养基上，轻轻摇晃平板，使细菌均匀分布于培养基上。
3. 将培养基置于恒温培养箱中，调节温度为37℃，培养一定
时间，观察菌落的形成和生长情况。
4. 在不同温度、pH值、氧气含量和营养物质条件下，重复步
骤2和3。
实验结果：
根据实验观察，大肠杆菌在37℃左右的温度下生长最好，pH 值在6.5-7.5之间时生长最快，适宜的氧气含量是气体和液体的界面。
实验结论：
大肠杆菌的生长受到温度、pH值、氧气含量和营养物质的影响。
掌握这些影响因素，能够更好地培养和利用大肠杆菌进行实验和工程应用。
微生物大肠杆菌实验报告
一、实验目的1. 了解大肠杆菌的生物学特性。
2. 掌握大肠杆菌的分离、纯化和鉴定方法。
3. 掌握大肠杆菌的培养和计数方法。
二、实验原理大肠杆菌（Escherichia coli）是肠杆菌科的一种细菌，广泛存在于人体肠道中。
本实验通过分离、纯化和鉴定大肠杆菌，了解其生物学特性，并掌握其培养和计数方法。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜粪便、营养琼脂平板、营养肉汤、无菌生理盐水、无菌棉签、无菌试管、无菌培养皿、无菌移液器、酒精灯、显微镜等。
2. 实验仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、无菌操作台等。
四、实验方法1. 大肠杆菌的分离（1）取新鲜粪便样品，用无菌生理盐水进行稀释。
（2）取适量稀释液，用无菌棉签涂布于营养琼脂平板上。
（3）将平板放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。
2. 大肠杆菌的纯化（1）观察平板上的菌落，挑选单菌落，用无菌移液器移至新的营养琼脂平板上。
（2）将平板放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。
3. 大肠杆菌的鉴定（1）观察纯化后的菌落，记录菌落特征，如大小、形状、颜色等。
（2）将纯化后的菌株接种于营养肉汤中，37℃培养24小时。
（3）取培养液，用显微镜观察细菌形态，并进行革兰氏染色。
（4）对培养液进行生化试验，如乳糖发酵试验、吲哚试验等。
4. 大肠杆菌的培养与计数（1）将纯化后的菌株接种于营养肉汤中，37℃培养24小时。
（2）用无菌移液器取适量培养液，进行系列稀释。
（3）取稀释液，涂布于营养琼脂平板上。
（4）将平板放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。
（5）观察平板上的菌落，记录菌落数，并计算大肠杆菌的浓度。
五、实验结果与分析1. 大肠杆菌的分离：在平板上观察到圆形、光滑、白色、半透明的菌落，说明已分离出大肠杆菌。
2. 大肠杆菌的纯化：经过纯化后，菌落特征与分离菌落相同，证明已得到纯化的大肠杆菌。
3. 大肠杆菌的鉴定：通过显微镜观察，发现细菌为革兰氏阴性短杆菌，生化试验结果显示该菌株能发酵乳糖，产生吲哚，表明已鉴定为大肠杆菌。
大肠杆菌的原核表达实验过程结果
大肠杆菌的原核表达实验过程结果
大肠杆菌的原核表达实验一般分为以下几个步骤：
1. 构建表达载体：将待表达的基因克隆到适当的表达载体上,如常用的pET、pGEX等载体中。
2. 转化大肠杆菌：将表达载体转化到大肠杆菌细胞中。
可以通过化学方法、电转化、冷冻复苏、热激转化等方法进行。
3. 诱导表达：在大肠杆菌细胞进行生长至适当时期后,添加适宜浓度的诱导剂,如IPTG等,诱导待表达基因蛋白的合成。
4. 细胞收获和破碎：诱导一定时间后,收获大肠杆菌细胞并进行破碎,以获得待表达蛋白。
5. 蛋白提取：对细胞破碎物进行离心、超滤等步骤,去除残余细胞构成和杂质,得到含有待表达蛋白的上清液。
6. 纯化和分析：将上清液进行分离、纯化、鉴定,以确定表达蛋白相应的分子量、酶活性等。
在以上步骤中,实验者需要进行质控和评估,确认实验步骤是否正确和表达蛋白是否达到预期,以确保实验结果的可靠性和准确性。
实验一大肠杆菌的分离和培养
细菌
2.微生物涉及五类 放线菌
真菌
原生动物
(二)培养基
• 1.分类(按物理形态分) • (1)液体培养基 • (2)固体培养基
①常用旳固体培养基: 琼脂固体培养基.
②微生物在固体培养基 表面生长,能够形成 肉眼可见旳菌落.
2.培养基内所含旳基本物质
• (1)水 • (2)碳源 • (3)氮源 • (4)无机盐
a.灼烧灭菌
注意合用范围
微生物旳接种工具 (接 种环、接种针)或其 他金属用具直接在火 焰旳充分燃烧层灼烧
b. 干热灭菌 160－170℃ ；1－2h
能耐高温旳需要保持干 燥旳物品( 玻璃器皿)
c.高压蒸汽灭菌 100kPa 121℃ 15-30min
一般用于培养基旳灭菌
二、试验操作 • （一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
• 计算－称量－溶化－灭菌－倒平板
• （二）分离纯化大肠杆菌
• 接种措施有：
• 划种未接 种旳培养基放入37℃恒温箱中培养12h 和24h后，观察并统计
三、课题延伸：菌种旳保藏
• 1、斜面保藏 • （临时保存） • 2、甘油保藏
（长久保 存）
试验1：大肠杆菌旳培养和分离
角烧瓶旳液体培养基中，三角烧瓶在37℃摇床振荡培养 12h。 • (4) 划线分离：将摇床上培养12h旳菌液在固体培养基旳 平板上连续划线，然后将盖好旳培养皿倒置，放在37℃ 恒温培养箱中进行培养。 • (5)单菌落接种培养：在无菌操作下将单菌落用接种环取 出，再用划线法接种在空白斜面上，在37℃下培养24h, 4℃冰箱保存。
设备及用具：
灭菌锅或高压锅、250ml旳三角瓶、封口膜和橡皮圈、 直径90mm旳培养皿、接种环和玻璃三角刮刀、恒温培 养箱、摇床、酒精灯和超净台、一次性塑料手套、装有 酒精棉球旳广口瓶、镊子、有棉塞旳试管 （15mm×120mm）5支
大肠杆菌检测实验报告
一、实验目的1. 掌握大肠杆菌检测的基本原理和方法；2. 学会使用国标法测定大肠杆菌样本的细菌总数；3. 提高微生物实验操作技能，为后续相关实验奠定基础。
二、实验原理大肠杆菌（Escherichia coli）是一种革兰氏阴性菌，广泛存在于人类和动物肠道中，属于条件致病菌。
本实验采用国标法测定大肠杆菌样本的细菌总数，主要利用大肠杆菌在LB培养基上生长繁殖的特性，通过计数菌落数来估算大肠杆菌的浓度。
三、实验器材1. 培养箱；2. 移液管（10只）；3. 锥形瓶（250ml，12只）；4. 大试管（5只）；5. 试管架；6. 平皿（45个）；7. 大烧杯（500ml，1个）；8. 电子天平；9. 纱布；10. 脱脂棉；11. 灭菌锅；12. pH计或pH试纸；13. 电炉；14. 石棉网；15. 铁架台；16. 量筒（100ml，1个）；17. 橡皮手套；18. 超净台。
四、实验药品1. 磷酸盐缓冲液；2. 蒸馏水；3. LB培养基；4. 琼脂；5. 5%NaOH；6. 5%HCl。
五、实验步骤1. 培养基制备（1）称取成品LB 3.1241g和琼脂1.8756g放入250ml的洁净锥形瓶中；（2）用量筒量取125ml的蒸馏水加入锥形瓶中，制成培养基；（3）用棉花堵住锥形瓶的瓶口，用牛皮纸包住瓶口，用橡皮筋扎牢；（4）将培养基放入灭菌锅中，在121摄氏度下灭菌20min；（5）灭菌后放入超净台中备用。
2. 样本处理（1）取适量样本（如食品、水等）；（2）用无菌生理盐水进行梯度稀释；（3）取适量稀释液加入平皿中，制成平板；（4）将平板放入培养箱中，在37摄氏度下培养24h。
3. 菌落计数（1）观察平板，找出菌落数在30-300之间的平板；（2）用移液管吸取适量菌液，加入锥形瓶中；（3）在锥形瓶中加入适量的5%NaOH溶液，充分振荡；（4）将锥形瓶放入培养箱中，在37摄氏度下培养24h；（5）观察锥形瓶中的菌落生长情况，记录菌落数。
大肠杆菌实验结果与分析
2、实验结果与分析2.1、细菌总数检测结果2.1.2、细菌总数的计算与报告根据菌落总数的计算方法：1、若只有一个稀释度平板上的菌落术在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每克（或毫升）中菌落总数结果。
2、若有两个连续稀释度的平均菌落数载适宜计数范围内时，按下式计算：N=∑c/[(n1+0.1n2)d]式中：N—样品中菌落数；∑C—平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；n1—第一个适宜稀释度平板上的菌落数；n2—第二个适宜稀释度平板上的菌落数；d—稀释因子（第一稀释度）为1.75x107；在浓度10—6(g/ml)的时候，大肠杆菌的细菌总数约为1.60x107；在浓度10—7(g/ml)的时候，大肠杆菌的细菌总数约为2.01x107。
分析数据可知，在浓度10—7(g/ml)的时候，细菌总数远大于其他两个梯度，这与常理不符。
那么有可能是实验过程中的错误导致，可能是稀释不够、密封不紧、没有进行无菌操作等因素有关。
2.2、大肠菌群检测结果2.1.1、初发酵各浓度梯度阳性管数统计附：检验原始记录检验原始记录检测记录与结果培养基配制：样品配制：1、 固体样品，无菌称取25g 样品加225ml 生理盐水，均质。
2、 液体样品，需稀释的，吸取25ml 于225生理盐水，混匀。
菌落总数：检验依据：GB/T4789.2-2008大肠杆菌：检验一句GB/T4789.3-2003大肠杆菌：检验一句GB/T4789.3-2003注：“P ”表示阳性结果，“N ”表示阴性结果检验起止时间：2011年09月25日至2011年09月27日检测人:复核人：。
大肠杆菌培养实验报告
一、实验目的1. 学习大肠杆菌的培养方法，掌握其生长规律。
2. 掌握无菌操作技术，培养纯化大肠杆菌。
3. 了解大肠杆菌在食品、环境及医学等领域中的应用。
二、实验原理大肠杆菌（Escherichia coli）是一种革兰氏阴性杆菌，广泛存在于人和动物的肠道中。
在实验室条件下，大肠杆菌可以通过人工培养获得纯化菌株。
本实验采用LB培养基培养大肠杆菌，通过观察菌落形态、显微镜观察等方法，了解大肠杆菌的生长特点。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）大肠杆菌菌种；（2）LB培养基；（3）无菌水；（4）无菌试管、培养皿、移液管、镊子、酒精灯等。
2. 实验仪器：（1）恒温培养箱；（2）显微镜；（3）酒精灯；（4）高压蒸汽灭菌器。
四、实验步骤1. 菌种复苏（1）将大肠杆菌菌种接种于LB培养基中，置于37℃恒温培养箱中培养18-24小时。
（2）待菌液生长旺盛后，取适量菌液，用无菌水进行稀释。
2. 培养基制备（1）按照LB培养基配方，称取相应的成分，加入去离子水溶解。
（2）将溶液煮沸，去除其中的氧气。
（3）将溶液冷却至50-55℃，加入适量的无菌水。
（4）用无菌滤膜过滤除菌。
3. 接种与培养（1）将制备好的LB培养基倒入培养皿中，待凝固后，用无菌移液管吸取菌液，均匀涂布于培养基表面。
（2）将培养皿倒置，置于37℃恒温培养箱中培养18-24小时。
4. 观察与鉴定（1）观察菌落形态，记录菌落颜色、大小、边缘等特征。
（2）用无菌镊子挑取菌落，制成涂片。
（3）将涂片置于显微镜下观察，观察细菌的形态、排列等特征。
5. 结果与分析（1）菌落形态：大肠杆菌菌落呈圆形、光滑、湿润，颜色为乳白色。
（2）显微镜观察：大肠杆菌为革兰氏阴性杆菌，菌体短粗，两端钝圆，呈杆状。
五、实验结果1. 菌落形态：大肠杆菌菌落呈圆形、光滑、湿润，颜色为乳白色。
2. 显微镜观察：大肠杆菌为革兰氏阴性杆菌，菌体短粗，两端钝圆，呈杆状。
六、实验讨论1. 在实验过程中，无菌操作非常重要，以免污染菌种。
大肠杆菌检测实验报告
大肠杆菌检测实验报告一、实验目的掌握大肠杆菌的检测方法，了解其在水质检验中的重要性。
二、实验原理1. 大肠杆菌大肠杆菌是一种常见的肠道杆菌，是一类嗜热性、厌氧性以及革兰阴性杆菌。
该菌种常常是肠道菌群的组成部分，同时也是水污染的重要指示菌之一。
（1）标准培养基法经过富营养培养基的生长，大肠杆菌会形成显性和隐性的群体。
这种检测方法适用于水质样本、地球样品以及饮用水。
（2）膜过滤法样品通过过滤器滤过后，将过滤后的膜放入培养基上培养。
这种方法既适合于生物质量较小的样品，也适用于分析浓度高的样品。
（3）MPN法通过使用3组不同浓度的小管，并观察哪个浓度的小管有生长曲线的所有格子都被满足，来计算菌落形成单位的浓度。
可以适用于样品浓度较低的环境。
三、实验操作1. 实验材料大肠杆菌标准菌株、优化阳性对照菌株、培养基、蒸馏水、实验器材、滤纸、吸管、离心机、洗涤液和细胞硬度试剂。
2. 实验步骤（1）制备纯菌液：将大肠杆菌基配合缓冲液跳接种到营养琼脂平板上，并在37℃的恒温培养箱中培养过夜。
将菌落划入脱色水中，通过洗涤和离心的方式，获得纯化的细胞菌悬液。
（2）制备样品：将需要检测的水样分别过滤，过滤膜使用巨孔滤纸。
滤膜被慢慢放在脱色水上U型板中间的孔里，然后浸泡（3）培养过程: 将U型板接入温度为37℃的有氧培养箱内，在24 - 48小时内观察细菌进行生长，并做出相应的计数和检测。
四、实验结果与分析按照实验操作规程进行样品处理和培养后，确认样品中是否存在大肠杆菌。
如果在实验中产生的试样中出现了大肠杆菌生长，且其生长优于阳性对照；或者在某些水样中不能检测出大肠杆菌，说明该水质品质不满足相关规范的要求。
五、实验结论本实验通过不同的大肠杆菌检测方法，较为全面地了解了大肠杆菌的检测方法及其在水质检验中的重要性。
在实验的基础上，我们有理由相信，通过科学准确的操作，人们可以更好地保证饮用水的健全和安全。
大肠杆菌生化鉴定实验报告
大肠杆菌生化鉴定实验报告
实验目的：鉴定样品中是否存在大肠杆菌，并确定其特性和代谢途径。
实验步骤：
1.选择大肠杆菌鉴定常用的生化试验，包括甲烷氧化、尿素加水
解、氧化/发酵葡萄糖、氧化/发酵乳糖、氧化/发酵葡萄糖醇、胱氨酸脱羧等试验。
2.在实验室条件下，将样品分别接种到不同的培养基中，进行上
述生化试验。
3.根据不同试验的结果，判断样品中是否存在大肠杆菌，并确定
其特性和代谢途径。
实验结果：
1.甲烷氧化试验：阴性，说明大肠杆菌无法利用甲烷进行代谢。
2.尿素加水解试验：阳性，说明大肠杆菌能够加水解尿素，产生
氨。
3.氧化/发酵葡萄糖试验：发酵，说明大肠杆菌能够利用葡萄糖进
行发酵代谢。
4.氧化/发酵乳糖试验：发酵，说明大肠杆菌能够利用乳糖进行发
酵代谢。
5.氧化/发酵葡萄糖醇试验：发酵，说明大肠杆菌能够利用葡萄糖
醇进行发酵代谢。
6.胱氨酸脱羧试验：阳性，说明大肠杆菌能够脱羧胱氨酸，产生
氨和二氧化碳。
根据上述结果，样品中存在大肠杆菌，并且其代谢途径主要包括葡萄糖、乳糖和葡萄糖醇的发酵代谢，以及尿素的加水解和胱氨酸的脱羧代谢。
结论：样品中存在大肠杆菌，其代谢途径主要包括葡萄糖、乳糖和葡萄糖醇的发酵代谢，以及尿素的加水解和胱氨酸的脱羧代谢。
大肠杆菌的生化反应鉴定
大肠杆菌的生化反应鉴定大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的肠道细菌，对人类和动物的肠道具有重要的生理功能。
在实验室中，通过对大肠杆菌的生化反应进行鉴定，可以帮助我们了解其特定的生理特征和代谢途径。
下面将按照步骤逐步介绍大肠杆菌的生化反应鉴定方法。
第一步：培养大肠杆菌首先，需要从一个纯培养的大肠杆菌菌落开始。
这可以通过在含有适宜营养物质的琼脂平板上接种一小部分细菌样本，并在37°C的恒温箱中培养过夜。
第二步：氧需求测试大肠杆菌是一种革兰氏阴性细菌，对氧的需求具有一定的特征。
将大肠杆菌接种到含有牛肉膏和葡萄糖的气体管中，观察细菌生长的情况。
如果细菌在管内生长，并形成红色沉淀物，则说明大肠杆菌是一种兼性厌氧菌；如果细菌只在管的液体上层生长，则说明大肠杆菌是一种兼性好氧菌。
第三步：产气反应测试大肠杆菌是一种发酵菌，通过产生气体来转化底物。
将大肠杆菌接种到含有果糖、葡萄糖、乳糖等碳源的培养基中，观察培养液中是否有气泡产生。
如果有气泡产生，则说明大肠杆菌具有相应的发酵酶。
第四步：酸碱反应测试大肠杆菌的代谢产物可以使培养基的pH值发生变化。
将大肠杆菌接种到含有葡萄糖、乳糖等碳源的菌落鉴定培养基上，观察培养基颜色变化。
如果培养基变为黄色，则说明大肠杆菌产生酸性代谢产物；如果培养基变为红色或粉红色，则说明大肠杆菌产生碱性代谢产物。
第五步：氧化反应测试大肠杆菌可以通过氧化代谢来利用一些特定的底物。
将大肠杆菌接种到含有柠檬酸盐、酒石酸等底物的特定培养基上，观察培养液的颜色变化。
如果培养液变为蓝色，则说明大肠杆菌产生了相应的酶。
通过以上步骤的生化反应鉴定，我们可以初步确定大肠杆菌的一些特征，如氧需求、产气能力、酸碱代谢和氧化代谢等。
这些特征对于帮助我们了解大肠杆菌的生理功能和代谢途径非常重要。
当然，这些方法只是初步的鉴定方法，还可以进一步通过分子生物学技术和其他生化试验来确认大肠杆菌的特征和身份。
大肠杆菌检测方法
大肠杆菌检测方法一：进入无菌室步骤1、进入无菌室前应打开紫光灯进行灭菌，时间为0。
5—1小时。
2、关灯后0•5小时后放可进入。
3、进入更衣间更换衣服，佩带口罩、帽子、鞋套。
二：实验步骤1、进入无菌室后，先把酒精灯点燃，然后在用酒精棉进行手部消毒。
（酒精棉是用75%的酒精加入脱脂棉中制成）。
2、准备双料管3根，单料管6根，培养皿7个。
3、直接从原液中吸取10ml放入双料管，（3根每根各10ml）。
4、再吸取原液1ml放入单料管中（3根每根各1ml）。
5、再吸取原液1ml放入培养皿中（2个培养皿各1ml）。
6、再吸取原液1ml放入盐水管中制成－1梯度的样液。
7、更换一根吸管，从－1梯度的样液吸取1ml样液放入单料管中（3根每根各1ml）8、再吸取－1梯度样液1ml放入培养皿中（2个培养皿各1ml）9、再把每个培养皿中到入营养琼脂平铺底部摇允（注另作3个培养皿：空气空白，把培养皿打开十分钟倒入营养琼脂平铺底部摇匀。
琼脂空白，把培养皿中倒入营养琼脂平铺底部摇匀。
盐水空白，吸1ml生理盐水放入培养皿中，倒入营养琼脂平铺底部摇匀）。
10、把全部作好的放入培养箱中，温度36C＋－1×C，大肠24H ＋－2H，菌落48H＋－2H，（待培养皿中的琼脂凝固后反转过来放入培养箱中）11、梯度：－1梯度为1ml原液加入9ml生理盐水配成－2梯度为1ml－1梯度样液加入9ml生理盐水配成－3梯度－4梯度配制方法和－1、－2梯度的配制方法一样。
12、如果大肠初发酵产生气泡，用接种笔沾一个产气的液在伊红美兰平板上画之字形然后放入培养箱中36C，24H＋－2H 。
（接种笔在每次使用前必须在酒精灯上消毒。
所画之形不能划破伊红美兰琼脂表面）。
13、取出后在用接种笔在伊红美兰平板之字形上挑菌，放入乳糖复发酵管中，然后再培养36C＋－1C，24H＋＋－2H。
14、再在伊红美兰平板之字形上挑菌，放到载玻片上作镜检。
（方法见标准）。
大肠杆菌生化实验报告
大肠杆菌生化实验报告大肠杆菌生化实验报告引言：大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的肠道细菌，广泛存在于人类和动物的消化系统中。
由于其简单的生长条件和高度适应性，大肠杆菌成为了许多生化实验的理想模型。
本报告旨在介绍大肠杆菌在生化实验中的应用和结果。
实验一：酶活性测定酶活性是衡量细胞代谢活跃程度的重要指标之一。
在本实验中，我们选择了大肠杆菌中的一种酶，β-半乳糖苷酶（LacZ），来进行酶活性测定。
实验步骤：1. 培养大肠杆菌细胞。
2. 采集细胞样品，并进行离心。
3. 悬浮细胞样品，并加入底物。
4. 反应一段时间后，停止反应，并测定底物的降解程度。
结果与讨论：通过测定底物的降解程度，我们可以得到β-半乳糖苷酶的酶活性。
实验结果显示，在不同培养条件下，大肠杆菌中的β-半乳糖苷酶酶活性存在差异。
这表明培养条件对细菌酶活性有一定的影响。
进一步的研究可以探究这些影响因素，并优化培养条件，提高酶活性。
实验二：代谢产物分析大肠杆菌是一种典型的乳酸菌，其代谢途径复杂多样。
在本实验中，我们选择了大肠杆菌中的乳酸代谢途径作为研究对象，通过代谢产物分析来了解细菌的代谢特征。
实验步骤：1. 培养大肠杆菌细胞。
2. 采集细胞样品，并进行离心。
3. 提取细胞内代谢产物。
4. 使用色谱或质谱等技术，对代谢产物进行分析。
结果与讨论：通过代谢产物分析，我们可以了解大肠杆菌在不同培养条件下的代谢特征。
实验结果显示，大肠杆菌在不同培养基中产生的代谢产物有所差异。
这表明培养基成分对细菌代谢途径的选择有一定的影响。
进一步的研究可以探究这些影响因素，并优化培养基配方，调控代谢途径，提高产物产量。
实验三：抗生素敏感性测试抗生素敏感性测试是评估细菌对抗生素的耐药性的重要方法之一。
在本实验中，我们选择了几种常用的抗生素，对大肠杆菌进行敏感性测试。
实验步骤：1. 培养大肠杆菌细胞。
2. 制备不同浓度的抗生素溶液。
3. 在琼脂平板上涂布细菌样品。
大肠实验报告
实验名称：大肠杆菌的培养与鉴定一、实验目的1. 掌握大肠杆菌的培养方法。
2. 学习大肠杆菌的鉴定方法。
3. 培养学生严谨的科学态度和实验操作技能。
二、实验原理大肠杆菌（Escherichia coli），是一种革兰氏阴性短杆菌，广泛存在于人和动物的肠道中。
本实验通过培养大肠杆菌，观察其菌落特征，并进行鉴定，以掌握大肠杆菌的培养与鉴定方法。
三、实验材料1. 实验试剂：营养肉汤、琼脂、酚红指示剂、盐酸、生理盐水等。
2. 实验仪器：恒温培养箱、无菌操作台、接种环、酒精灯、培养皿等。
3. 实验菌株：大肠杆菌标准菌株。
四、实验方法1. 菌种活化（1）将大肠杆菌标准菌株从冷冻保存的甘油管中取出，接种于营养肉汤中，37℃恒温培养箱中培养18-24小时。
（2）将培养好的菌液用无菌生理盐水稀释至适宜浓度。
2. 菌落培养（1）将稀释后的菌液接种于琼脂平板上，用无菌接种环均匀涂布。
（2）将平板倒置于37℃恒温培养箱中培养18-24小时。
3. 菌落特征观察（1）观察菌落的大小、形状、颜色、边缘等特征。
（2）记录菌落特征。
4. 鉴定实验（1）将培养好的菌落用无菌接种环挑取，接种于含有酚红指示剂的营养肉汤中。
（2）37℃恒温培养箱中培养24小时，观察酚红指示剂的颜色变化。
（3）若酚红指示剂变为黄色，则说明该菌为产酸菌，可能为大肠杆菌。
五、实验结果1. 菌落特征：菌落呈圆形、光滑、湿润、红色，边缘整齐。
2. 鉴定实验：酚红指示剂变为黄色，说明该菌为产酸菌，可能为大肠杆菌。
六、实验讨论1. 本实验成功培养了大肠杆菌，并观察到了其菌落特征，为后续的鉴定实验奠定了基础。
2. 在菌落培养过程中，无菌操作至关重要，要严格按照无菌操作规程进行，以避免杂菌污染。
3. 鉴定实验中，酚红指示剂的颜色变化可以作为判断菌种的一个依据，但还需结合其他实验结果进行综合判断。
七、实验总结本实验通过培养大肠杆菌，观察其菌落特征，并进行鉴定，使学生掌握了大肠杆菌的培养与鉴定方法。
大肠杆菌计数实验报告
1. 掌握大肠杆菌的计数方法。
2. 了解大肠杆菌在不同环境下的生长状况。
3. 学习使用标准平板计数法进行微生物计数。
二、实验原理大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的革兰氏阴性菌，广泛存在于自然界和人类肠道中。
本实验采用标准平板计数法，通过在培养基上接种一定量的样品，观察形成的菌落数量，从而估算样品中大肠杆菌的浓度。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 大肠杆菌标准菌株- 琼脂培养基- 蒸馏水- 碘液- 灭菌器材- 移液器- 平板计数器2. 实验仪器：- 高压蒸汽灭菌锅- 灭菌操作台- 电子天平- 烧杯- 玻璃棒- 离心机1. 样品制备：- 称取适量大肠杆菌标准菌株，加入适量的蒸馏水，制成菌悬液。
- 将菌悬液用移液器稀释至适当浓度。
2. 琼脂培养基制备：- 称取适量的琼脂，加入适量的蒸馏水，溶解后加入琼脂培养基。
- 将溶解后的培养基加入高压蒸汽灭菌锅中，在121℃下灭菌20分钟。
3. 接种：- 取适量菌悬液，用移液器接种于琼脂培养基平板上。
- 将平板倒置，放入培养箱中，在适宜的温度下培养24小时。
4. 计数：- 观察平板上形成的菌落，用平板计数器进行计数。
- 根据计数结果，计算样品中大肠杆菌的浓度。
五、实验结果与分析1. 样品制备：- 制备的菌悬液呈均匀浑浊状，未见明显的絮状沉淀。
2. 琼脂培养基制备：- 制备的琼脂培养基呈透明状，未见明显的杂质。
3. 接种：- 接种后的平板在培养箱中培养24小时，平板上形成大量菌落。
4. 计数：- 平板上形成的菌落数为30个，根据计数结果，样品中大肠杆菌的浓度为10^6 CFU/mL。
六、实验讨论1. 本实验采用标准平板计数法进行大肠杆菌计数，操作简单，结果准确可靠。
2. 实验过程中，应注意操作规范，避免污染。
3. 本实验结果与理论值基本一致，说明实验方法可行。
七、实验结论通过本实验，我们掌握了大肠杆菌的计数方法，了解了大肠杆菌在不同环境下的生长状况。
大肠杆菌实验结果与分析
大肠杆菌实验结果与分析大肠杆菌（Escherichia coli）是常见的肠道菌群中的一种细菌，在许多实验室中被用作模式生物来进行研究。
在本篇文章中，我将会对实验结果和分析进行详细描述。
实验目的：本实验的目的是研究大肠杆菌对不同环境条件的生长和生存能力，并分析与这些条件相关的影响因素。
实验材料和方法：1.实验菌种：采用常见的大肠杆菌菌株。
2.实验培养基：采用LB琼脂糖平板培养基。
3.不同环境条件：在不同实验组中设置不同的环境条件，包括：温度、pH值、营养浓度等变量。
4.实验过程：将大肠杆菌接种到LB琼脂糖平板培养基上，按照设定好的条件进行培养，并记录生长情况。
实验结果：根据实验数据，我们得到了以下实验结果：1.温度影响实验：在不同温度条件下培养大肠杆菌，我们观察到以下现象：-在低温条件下（例如4°C），大肠杆菌生长缓慢，呈现抑制状态。
-在适温条件下（例如37°C），大肠杆菌生长繁殖迅速，形成较大的菌落。
-在高温条件下（例如50°C），大肠杆菌生长受到抑制，甚至可能死亡。
2.pH值影响实验：在不同pH值条件下培养大肠杆菌，我们观察到以下现象：-在酸性环境中（pH值低于7），大肠杆菌生长受到一定程度的抑制，菌落变小。
-在碱性环境中（pH值高于7），大肠杆菌生长繁殖迅速，菌落变大。
-在极端酸性或碱性环境中（pH值过低或过高），大肠杆菌生长受到严重抑制甚至死亡。
3.营养浓度影响实验：在不同营养浓度条件下培养大肠杆菌，我们观察到以下现象：-在低营养浓度条件下，大肠杆菌生长缓慢，菌落较小。
-在高营养浓度条件下，大肠杆菌生长迅速，菌落变大。
实验分析：基于以上实验结果1.温度对大肠杆菌的生长有重要影响。
适宜温度范围内，大肠杆菌生长繁殖迅速。
过低或过高温度会对其生长产生不利影响。
这是因为温度影响了大肠杆菌的代谢物质转运速率和酶活性，进而影响它们的生长速度。
2.pH值对大肠杆菌的生长也具有重要影响。
大肠杆菌培养实验报告.doc
大肠杆菌培养实验报告.doc
第一部分：实验目的
本次实验旨在了解细菌培养的基本原则和方法，掌握培养基的配制、灭菌和保存方法。
同时，培养并观察大肠杆菌的生长规律和形态特征，为后续实验打下基础。
1. 消毒方法
采用高压灭菌器进行消毒，其原理是利用压力和高温来杀灭菌体和孢子，常用于灭菌
培养基、器具和试剂等。
2. 培养基的配制
培养基是为了满足菌体生长所需要的全部营养物质和生长因子而设计的，用于培养、
繁殖和检测微生物。
常见的培养基有肉汤培养基、营养琼脂培养基、霍乱弧菌选择性富营
养琼脂培养基等。
3. 大肠杆菌的生长规律
大肠杆菌是一种革兰氏阴性杆菌，是一种重要的肠道菌群。
大肠杆菌的正常生长温度
为37℃，最适生长温度为42℃，pH值最适范围为6.8-7.2。
取营养琼脂粉30克，加入蒸馏水1000毫升中，调整pH值至7左右。
将混合溶液煮沸，加热消毒15分钟，制成琼脂培养基。
将琼脂培养基加入试管中，压紧塞子，放入高压灭菌器中，灭菌条件为121℃，压力
为0.1MPa，时间为20分钟。
取一小块纯培养的大肠杆菌菌群，放入琼脂培养基中，摇晃均匀，倒入无菌平皿中。
标记培养皿，放在恒温培养箱中，培养温度为37℃，观察24小时内的生长情况。
经过24小时的培养，观察到在琼脂培养基中，大肠杆菌呈现出乳白色半透明的菌落状，形态大小比较均匀，边缘光滑，质地较软。
各菌落之间并没有合并，整个培养皿表面布满
了菌落。
总之，本次实验使我们更好地了解了微生物学中的基础知识，并为我们的科学研究和
医学应用提供了基础和支持。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
大肠杆菌感受态细胞制备与质粒DNA的转化
一、实验目的
1）掌握用CaCl2法制备感受态细胞的原理和方法。
2）学习和掌握质粒DNA的转化和筛选方法及操作步骤。
二、实验原理
本实验以E.coli DH 5α菌株为受体细胞，并用CaCl2处理，使其处于感受态，然后与pBS质粒共保温实现转化。
由于所用pBS质粒带有长那霉素抗性基因。
因此可以通过长那霉素抗性来筛选转化子。
如果受体细胞没有转入pBS，则在含长那霉素的培养基上不能生长。
能在长那霉素培养基上生长的受体细胞肯定已经导入了pBS。
转化子扩增后，可将转化的质粒提取出，进行电泳酶切等进一步鉴定。
三、仪器及试剂
仪器：恒温摇床、CO2细胞培养箱、台式高速冷冻离心机、超净工作台、低温冰箱、恒温水浴锅、制冰机、分光光度计、移液枪、Eppendrof管。
试剂：LB培养基(在950mL水中加入10g胰蛋白胨、5g酵母提取物、10gNaCl、用1mol/L NaOH调制pH=7.2.加入至1L，121℃高压灭菌20min)
长那霉素储存液：100mg/mL
含长那霉素的LB固体培养基：(1L LB液体培养基中加入20g琼脂粉，将配好的LB固体培养基高压灭菌后，冷却至60℃左右，加入长那霉素储存液，使其终浓度为50μg/mL。
摇匀后铺板，每皿倒15mL，室温放置过夜至冷凝水挥发干净)
1mol/L CaCl2储存液质粒DNA10ng/Μl
四、实验步骤
1 感受态细胞的制备
1）从LB平板上挑选新活化的E.coli DH 5α单菌株，接种于3~5mL LB液体培养基中，37℃下震荡过夜培养，12h左右，直至对数生长后期。
2）将该菌悬浮液以1:50的比例接种于5mL LB液体培养基中，37℃振荡培养2~3h至OD600为0.5左右。
3）将5mL培养液转入4个1.5mL离心管中，冰上放置10min，然后于4℃下，5000rpm离心5min。
4）弃去上清液，用预冷的1mL 0.1 mol/L CaCl2溶液轻轻悬浮细胞，冰上放置15~20min后，40℃下5000rpm离心5min。
2 铺平板
将配好灭菌的LB固体培养基加热融化，待冷却至60℃左右后，加入长那霉素储存液，使其终温度为50μg/mL，摇匀后铺板，每皿倒约15mL。
室温放置过夜至冷凝水挥发干净。
3 感受态细胞的转化
1）取100μl感受态细胞悬浮液，加入5μLpBS质粒DNA溶液，轻轻摇匀，冰上放置30min。
2）42℃水浴热激70s，热激后迅速置于冰上冷却3~5min。
3）向管中加入400μl LB液体培养基（不含抗生素），混匀后37℃震荡培养1h。
使细菌恢复到正常生长状态，并表达质粒编码的抗生素抗性基因。
4）将上述菌液摇匀，取200μl涂布于含长那霉素的筛选平板上，正面放置0.5h。
待菌液完全被吸收后倒置培养皿，37℃培养16~24h，
5）对照实验：
对照组1：以同体积的无菌二次水代替DNA溶液，其他操作与上面相同。
此组正常情况下在含抗生素的LB平板上应没有菌落出现。
对照组2：以同体积的无菌二次水代替DNA溶液，取5μl菌液，稀释100万倍，涂布于不含抗生素的LB平板上，此组正常情况下应产生大量菌落。
五、实验数据记录处理
转化后在含抗生素的平板上长出的菌落即为转化子，各培养皿中的菌落数如下表所示：
平板序号DNA溶液无菌水抗生素稀释倍数菌落数
1+—+134
2+—+144
3—++10
4—+—1*106145
表 1 各平板数据记录
① 转化子总数=菌落数*稀释倍数*转化反应原液总体积/涂板菌液总体积
1号平板：转化子总数=34*1*505/200=86
2号平板：转化子总数=44*1*505/200=111
② 转化频率（转化子数/每毫DNA）=转化子总数/质粒DNA加入量(mg)
1号平板：转化频率=86/(50*10-6)=1.72*106
2号平板：转化频率=111/(50*10-6)=2.22*106
③ 感受态细胞总数=对照组2的菌落数*稀释倍数*菌液总体积/涂板菌液体积
4号平板：感受态细胞总数=145*106*505/200=3.66*108
④ 感受态细胞转化效率=转化子总数/感受态细胞总数
对1号平板：感受态细胞转化效率=86/(3.66*108)*100%=2.35*10-5%
对2号平板：感受态细胞转化效率=111/(3.66*108)*100%=3.03*10-5%
3号平板上没有菌落生成，说明未转化的细胞在有抗生素的环境中完全不能生存。
六、思考题讨论
1）感受态细胞：细菌收诱导后产生的一种短暂的、易于摄取外源DNA的状态。
2）CaCl2法制备感受态细胞的原理：细菌处于0℃的CaCl2低渗溶液中，细胞膨胀成球形。
转化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羟基钙磷酸复合物黏附于细胞表面，在经42℃短时间热休克处理，可制备成感受态细胞，促进细胞吸收DNA复合物。
3）制备感受态和转化细胞时注意事项（提高效率方法）：倒平板时应避免培养基温度过高，否则加入的抗生素会失效；OD600值需合适，即细菌应处于对数前期，对数中期；热激时间，热激温度需合适，且热激前加入相当于转化液体积1/10的DMSO可提高效率100倍左右，加入DMSO后不要剧烈振荡；实验过程中需
保证无菌操作、避免引入杂菌；涂板时应小心，防止细胞死亡。