02遗传密码——三联子
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AA-tRNA合成酶及其它蛋白质因子的细胞抽提物中加入 mRNA或人工合成的均聚物作为模板以及ATP、GTP、氨基 酸等成分时又能合成新的肽链,新生肽链的氨基酸顺序由外 加的模板来决定。
1961年,Nirenberg等以poly(U)作模板时发现合成了多 聚苯丙氨酸,从而推出UUU代表苯丙氨酸(Phe)。以poly (C)及poly(A)做模板分别得到多聚脯氨酸和多聚赖氨酸。
二. 遗传密码—wenku.baidu.com三联子
▪ mRNA上每3个核苷酸翻译成蛋白质多肽链上的一个 氨基酸,这3个核苷酸就称为一个密码,也叫三联 子密码。翻译时从起始密码子AUG开始,沿 mRNA5’→3’的方向连续阅读直到终止密码子,生成 一条具有特定序列的多肽链。
▪ mRNA中只有4种核苷酸,而蛋白质中有20种氨 基酸,若以一种核苷酸代表一种氨基酸,只能代表 4种(41=4)。若以两种核苷酸作为一个密码(二联 子),能代表42=16种氨基酸。而假定以3个核苷酸 代表一个氨基酸,则可以有43=64种密码,满足了 编码20种氨基酸的需要。
UAG UAG UAG UAG…3’ 或5’…AGU AGU AGU AGU AGU…3’由第二种读码 方式产生的密码子UAG是终止密码,不编码任何氨 基酸,因此,只产生GUA(Val)或AGU(Ser)。
▪ 实验6: 以随机多聚物指导多肽合成。Nirenberg等
及Ochoa等又用各种随机的多聚物作模板合 成多肽。例如,以只含A、C的多聚核苷酸作 模板,任意排列时可出现8种三联子,即 CCC、CCA、CAC、ACC、CAA、ACA、 AAC、AAA,获得由Asn、His、Pro、Gln、 Thr、Lys等6种氨基酸组成的多肽。
50-60年代破译遗传密码方面的三项重要成果: (1)Paul Zamecnik等人证实细胞中蛋白
质合成的场所。他们把放射性标记的氨基酸
注射到大鼠体内,经过一段时间后收获其肝
脏,进行蔗糖梯度沉淀并分析各种细胞成份 中的放射性蛋白质。
如果注射后经数小时(或数天)收获肝脏,
所有细胞成份中都带有放射性标记的蛋白质; 如果注射后几分钟内即收获肝脏,那么,
▪ 实验4: 以特定序列的共聚物为模板指导多肽的合成。以多聚二核
苷酸作模板可合成由2个氨基酸组成的多肽, 5'…UGU GUG UGU GUG UGU GUG…3',不管读码从U开 始还是从G开始,都只能有UGU(Cys)及GUG(Val)两 种密码子。
▪ 实验5: 以共聚三核苷酸作为模板可得到有3种氨基酸组
成的多肽。如以多聚(UUC)为模板,可能有3种 起读方式:
5’…UUC UUC UUC UUC UUC…3’或 5’…UCU UCU UCU UCU UCU…3’或 5'…CUU CUU CUU CUU CUU…3'分别产生UUC(Phe)、UCU(Ser) 或CUU(Leu).
多聚三核苷酸为模板时也可能只合成2种多肽: 5’…GUA GUA GUA GUA GUA…3’或5’…UAG
以人工合成的三核苷酸如UUU、UCU、UGU 等为模板,在含核糖体、AA-tRNA的反应液中保温 后通过硝酸纤维素滤膜,只有游离的AA-tRNA因相 对分子质量小而通过滤膜,而核糖体或与核糖体结 合的AA-tRNA则留在滤膜上,这样可把已结合与未 结合的AA-tRNA分开。
当体系中带有多聚核苷酸模板时,从大肠杆菌
放射性标记只存在于含有核糖体颗粒的细胞 质成份中。
▪ 2)Francis Crick等人第一次证实只有用三联子密码 的形式才能把包含在由AUGC四个字母组成遗传信 息(核酸)准确无误地翻译成由20种不同氨基酸组 成的蛋白质序列,实现遗传信息的表达。
实验1: 用吖啶类试剂(诱导核苷酸插入或丢失)处理T4
中提取的核糖体经常与特异性氨基酰-tRNA相结合。 如果把核糖体与poly(U)和Phe-tRNAPhe共温育, 核糖体就能同时与poly(U)和Phe-tRNAPhe相结 合。
4种核苷酸组成61个编码氨基酸的密码子 和3个终止密码子,它们不能与tRNA的反密 码子配对,但能被终止因子或释放因子识别, 终止肽链的合成。由一种以上密码子编码同 一个氨基酸的现象称为简并(degeneracy), 对应于同一氨基酸的密码子称为同义密码子 (synonymous codon)。
▪ (3)氨基酸的“活化”与核糖体结合技术。 如果把氨基酸与ATP和肝脏细胞质共培养,氨
基酸就会被固定在某些热稳定且可溶性RNA分子 (transfer RNA,tRNA)上。现将氨基酸活化后的 产物称为氨基酰-tRNA(aminoacyl-tRNA),并把 催化该过程的酶称为氨基酰合成酶(aminoacyltRNA Synthetase)。
噬菌体rII位点上的两个基因,使之发生移码突变 (frame-shift),就生成完全不同的、没有功能的 蛋白质。
实验2: 研究烟草坏死卫星病毒发现,其外壳蛋白亚基由
400个氨基酸组成,相应的RNA片段长1200个核苷 酸,与密码三联子体系正好相吻合。
▪ 实验3: 以均聚物为模板指导多肽的合成。 在含有tRNA、核糖体、
1961年,Nirenberg等以poly(U)作模板时发现合成了多 聚苯丙氨酸,从而推出UUU代表苯丙氨酸(Phe)。以poly (C)及poly(A)做模板分别得到多聚脯氨酸和多聚赖氨酸。
二. 遗传密码—wenku.baidu.com三联子
▪ mRNA上每3个核苷酸翻译成蛋白质多肽链上的一个 氨基酸,这3个核苷酸就称为一个密码,也叫三联 子密码。翻译时从起始密码子AUG开始,沿 mRNA5’→3’的方向连续阅读直到终止密码子,生成 一条具有特定序列的多肽链。
▪ mRNA中只有4种核苷酸,而蛋白质中有20种氨 基酸,若以一种核苷酸代表一种氨基酸,只能代表 4种(41=4)。若以两种核苷酸作为一个密码(二联 子),能代表42=16种氨基酸。而假定以3个核苷酸 代表一个氨基酸,则可以有43=64种密码,满足了 编码20种氨基酸的需要。
UAG UAG UAG UAG…3’ 或5’…AGU AGU AGU AGU AGU…3’由第二种读码 方式产生的密码子UAG是终止密码,不编码任何氨 基酸,因此,只产生GUA(Val)或AGU(Ser)。
▪ 实验6: 以随机多聚物指导多肽合成。Nirenberg等
及Ochoa等又用各种随机的多聚物作模板合 成多肽。例如,以只含A、C的多聚核苷酸作 模板,任意排列时可出现8种三联子,即 CCC、CCA、CAC、ACC、CAA、ACA、 AAC、AAA,获得由Asn、His、Pro、Gln、 Thr、Lys等6种氨基酸组成的多肽。
50-60年代破译遗传密码方面的三项重要成果: (1)Paul Zamecnik等人证实细胞中蛋白
质合成的场所。他们把放射性标记的氨基酸
注射到大鼠体内,经过一段时间后收获其肝
脏,进行蔗糖梯度沉淀并分析各种细胞成份 中的放射性蛋白质。
如果注射后经数小时(或数天)收获肝脏,
所有细胞成份中都带有放射性标记的蛋白质; 如果注射后几分钟内即收获肝脏,那么,
▪ 实验4: 以特定序列的共聚物为模板指导多肽的合成。以多聚二核
苷酸作模板可合成由2个氨基酸组成的多肽, 5'…UGU GUG UGU GUG UGU GUG…3',不管读码从U开 始还是从G开始,都只能有UGU(Cys)及GUG(Val)两 种密码子。
▪ 实验5: 以共聚三核苷酸作为模板可得到有3种氨基酸组
成的多肽。如以多聚(UUC)为模板,可能有3种 起读方式:
5’…UUC UUC UUC UUC UUC…3’或 5’…UCU UCU UCU UCU UCU…3’或 5'…CUU CUU CUU CUU CUU…3'分别产生UUC(Phe)、UCU(Ser) 或CUU(Leu).
多聚三核苷酸为模板时也可能只合成2种多肽: 5’…GUA GUA GUA GUA GUA…3’或5’…UAG
以人工合成的三核苷酸如UUU、UCU、UGU 等为模板,在含核糖体、AA-tRNA的反应液中保温 后通过硝酸纤维素滤膜,只有游离的AA-tRNA因相 对分子质量小而通过滤膜,而核糖体或与核糖体结 合的AA-tRNA则留在滤膜上,这样可把已结合与未 结合的AA-tRNA分开。
当体系中带有多聚核苷酸模板时,从大肠杆菌
放射性标记只存在于含有核糖体颗粒的细胞 质成份中。
▪ 2)Francis Crick等人第一次证实只有用三联子密码 的形式才能把包含在由AUGC四个字母组成遗传信 息(核酸)准确无误地翻译成由20种不同氨基酸组 成的蛋白质序列,实现遗传信息的表达。
实验1: 用吖啶类试剂(诱导核苷酸插入或丢失)处理T4
中提取的核糖体经常与特异性氨基酰-tRNA相结合。 如果把核糖体与poly(U)和Phe-tRNAPhe共温育, 核糖体就能同时与poly(U)和Phe-tRNAPhe相结 合。
4种核苷酸组成61个编码氨基酸的密码子 和3个终止密码子,它们不能与tRNA的反密 码子配对,但能被终止因子或释放因子识别, 终止肽链的合成。由一种以上密码子编码同 一个氨基酸的现象称为简并(degeneracy), 对应于同一氨基酸的密码子称为同义密码子 (synonymous codon)。
▪ (3)氨基酸的“活化”与核糖体结合技术。 如果把氨基酸与ATP和肝脏细胞质共培养,氨
基酸就会被固定在某些热稳定且可溶性RNA分子 (transfer RNA,tRNA)上。现将氨基酸活化后的 产物称为氨基酰-tRNA(aminoacyl-tRNA),并把 催化该过程的酶称为氨基酰合成酶(aminoacyltRNA Synthetase)。
噬菌体rII位点上的两个基因,使之发生移码突变 (frame-shift),就生成完全不同的、没有功能的 蛋白质。
实验2: 研究烟草坏死卫星病毒发现,其外壳蛋白亚基由
400个氨基酸组成,相应的RNA片段长1200个核苷 酸,与密码三联子体系正好相吻合。
▪ 实验3: 以均聚物为模板指导多肽的合成。 在含有tRNA、核糖体、