实验二 沉降法检测空气中微生物数量
空气培养的采样方法
空气培养的采样方法空气质量的监测对于确保人们的健康和环境的安全至关重要。
空气中存在着各种微生物、细菌和真菌等微粒，这些微粒可能对我们的健康带来潜在风险。
因此，采用适当的方法进行空气培养的采样非常重要，以监测和控制空气质量。
本文将介绍几种常见的空气培养采样方法。
一、沉降法沉降法是一种传统的采样方法，通过在培养基上沉降空气中的微生物颗粒来进行采样。
操作时，将含有培养基的琼脂板暴露在待测空气中，微生物颗粒会在板上沉积。
然后，将琼脂板置于适当的条件下孵育，促使沉降的微生物生长成可见的菌落。
通过对菌落的形态、颜色和数量进行观察和分析，可以推测出空气中的微生物群落。
二、空气取样器法空气取样器法是一种较为先进的采样方法，利用专用的空气取样器来实现对微生物的定量采样。
这些取样器通常使用有缺氧培养基的样品容器，可控制吸样的流速和时间。
通过将容器连续暴露在空气中，在一定时间内收集微生物颗粒。
随后，将培养基中的微生物进行培养和分析，并计算微生物浓度。
三、空气动力学采样法空气动力学采样法是一种常用的空气采样方法，通过气流对微生物颗粒进行采集。
这种方法使用专门设计的杆状装置，装有用于捕捉微生物的培养基或滤膜。
杆状装置通常与采样泵相连，产生一定的流速将空气中的微生物吸附或拦截在培养基或滤膜上。
随后，将培养基或滤膜进行培养并进行分析。
四、微生物粒子计数器法微生物粒子计数器法是一种基于颗粒计数的空气采样方法。
这种方法使用一种特殊的计数器来测量空气中悬浮微粒的数量，并根据微粒尺寸和百分比来估算微生物数量。
通过将采样器暴露在空气中，它会迅速和准确地计算出微生物的浓度。
结论空气培养的采样方法是监测和控制空气质量的重要手段之一。
沉降法、空气取样器法、空气动力学采样法和微生物粒子计数器法是常用的采样方法，每种方法都有其优劣势。
在选择采样方法时，需根据实际需求和监测目的综合考虑。
在执行采样操作时，要严格遵守操作规程，并确保采样装置的无菌和避免外部污染。
洁净度(沉降菌)测试的标准操作规程
洁净度（沉降菌）测试的标准操作规程目的：建立洁净度（沉降菌）测试的标准操作规程，为沉降菌检查人员提供正确的标准操作方法。
范围：适用于本公司洁净区(室)的沉降菌的监测的全过程。
职责：QA对本规程的有效执行承担监督检查责任，沉降菌检查人员对本规程的实施负责。
依据：GB/T16294－2010、2013-2017年环境监测数据及2016-2017年洁净区（室）环境监测回顾报告。
1定义：本规程采用下列定义：1.1菌落：细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CFU。
1.2沉降菌：用GB/T16294－2010提及的方法收集空气中的活微生物粒子，通过专门的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数1.3沉降菌菌落数：在规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以cfu//4小时表示。
1.4洁净室：对尘粒及微生物污染需进行控制的房间或区域。
1.5洁净工作台：一种工作台或者与之类似的一个封闭围挡工作区。
其特点是自身能够供给经过过滤的空气或气体，如垂直层流洁净罩、水平层流罩、垂直层流洁净工作台、水平层流洁净工作台等。
1.6洁净度：洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某一粒径的悬浮粒子和微生物的允许统计数。
2、测试方法：2.1 方法概述：本测试方法按国家技术监督局发布的《医药工业洁净室（区）沉降菌测试方法》采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室(区)的洁净度。
2.2使用的仪器和设备：2.2.1恒温培养箱：必须定期对恒温培养箱进行校验。
2.2.2高压蒸汽灭菌器：使用时应严格按照仪器操作规程进行操作。
2.2.3培养皿：2.2.3.1.一般采用￠90mm×15mm 规格的硼硅酸玻璃培养皿。
2.2.3.2.使用前将培养皿置于121℃湿热灭菌20min。
实验二空气微生物的检验
空气微生物的检验
（2）杆菌肽敏感试验（药敏试验）
将分纯的乙型溶血性 链球菌接种血平板，在 划线处贴附杆菌肽纸片， 36℃，18h，出现抑菌带 为阳性，（可推测为乙 型溶血性链球菌）。
四、实验报告
根据培养后的形态，菌落特征及生化试验结果进行报告。
空气微生物的检验
培养基
菌落数
平均菌落数
东西南北 中
普平
样品 血平板（培养）
革兰染色 观察溶血 杆菌肽敏感试验 链激酶
报告
空气微生物的检验
2、 自然沉降法原理：根据空气中携带有微生物气溶胶粒
子在地心引力作用下，以垂直的自然方式沉降到琼脂培养 基上。经37℃，24h温箱培养计算出菌落数，应以菌落形 成单位cfu/皿或cfu/m3来表示。
空气微生物的检验
3、仪器与器材
1）显微镜、培养箱、载玻片、酒精灯、 接种环、灭菌镊子、离心机、水溶箱。
清洁 空气
＜1 500
＜16
＜4 500
＜36
污染 空气
＞2 500
＞36
＞7 000
＞124
空气微生物的检验
空气微生物的卫生标准
室内空气质量标准（GB/T 18883-2002） 对微生物指标的规定： 菌落总数≤2500 cfu/m3
分析实验结果是否满足相应的空气标准。
空气微生物的检验
溶血性链球菌的的检验
空气微生物的检验
（5）镜检革兰阳性链状排列球菌，血平板上 呈现溶血环，链激酶和杆菌肽敏感试验阳 性可报告为溶血性链球菌。
空气微生物的检验
空气微生物的卫生标准
居室内空气卫生细菌学评价的参考指标（前苏联）
夏季标准
冬季标准
空气 细菌总数
空气中微生物的检测
2011.11.21
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1
一、实验目的 二、实验原理 三、实验步骤 四、结果计算 五、结果评价
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2
一、实验目的和意义
掌握检测和计数空气中微生物的基本方法
掌握无菌操作技术和微生物实验的基本操 作
学习对室内空气进行初步的微生物学评价
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3
实验意义
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三、实验步骤
1.自然沉降法 配制琼脂培养基（已做） ↓
培养皿暴露空气中5min/10min ↓
37℃温箱培养24h ↓
计数和结果评价
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采样布点原则 a. 根据室内面积进行对角线或者梅花式均匀布点，
小于50m2的房间应设3个点，50～100m2设3～5个 ；100m2以上至少5个点 b. 采样高度 和人呼吸高度一致（1.2～1.5m） c. 采样点应避开风口，离墙壁距离应大于0.5m,采样 时关闭门窗，减少人员走动
空气中细菌总数常作为室内空气质量和空 气受到微生物性污染程度的指标。
用于医院、公共场所等空气质量的评价
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4
二、实验原理
1：自然沉降法（沉降平板法）
根据空气中携有微生物气溶胶粒子在地心引力的 作用下，以垂直的自然方式沉降到琼脂培养基上， 经过24h，37℃温箱培养计算出菌落数。
特点：此法简单方便，但稳定性差，直径1～5μm 的粒子在5min中内沉降距离有限，使小粒子采集 率较低。
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各种粒径大小的菌落易沉降的部位及意义
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特点 a. 采集粒谱范围广，一般在0.2～20μm以上； b. 采样效率高，逃逸少 c. 微生物存活率高
3-1-2 实训 洁净室中微生物数测定技术
（一）操作目的 通过实验验证空气中微生物的存在；了解空气中 微生物的测定方法。
（二）实训原理 空气不利于微生物生长，所以空气中无固定 种类，主要是真菌和细菌，在医院、公共场所， 致病菌的数量较多。 测定空气中微生物的方法很多，有滤过法、 沉降法等，这里主要介绍 培养基表面进行测定的。实验证明，在空气中 暴露10min后，每100cm2培养基表面生长的菌落 数相当于20L空气中所含有的微生物数。
（三）材料和用具 菌数计数器、37℃恒温培养箱、培养皿， 记号笔，琼脂培养基，火柴等。 （四）操作前准备 将包扎好的培养皿和培养基与121.3℃灭菌 15min，并在无菌条件下制备平板。
（五）操作步骤 (1)对平板编号为0、1、2、3、4、5号；将这6个平 板置于无菌室内同高度(约lm)的平台上，0号与3号置于 室内中央，1、2、4、5号分别置于室内四周；0号平板 不打开皿盖，以作对照；其他平板打开皿盖，使培养基 暴露于空气中。10min后盖上皿盖。 (2)将平板置于37℃培养箱中倒置培养24h。 (3)观察并记录结果。0号平板应不长菌，记录其余 各平板的菌落数，计算出100cm2培养基的菌落数及每 立方米空气中的活菌数。 100cm2培养基的菌落数=(每个平板的菌落数/πr2） ×10 (r为平皿半径，单位为cm） 每立方米空气中的活菌数=(100cm2培养基上平均 菌落数/20)×1000
（六）注意事项 倒平板时严格无菌操作；倒平板时培养 基的温度不能太高，否则，培养皿盖上会有 许多冷凝水，易造成污染；培养时培养皿要 倒置培养；计算菌落时，菌落边缘互相重叠 时应分开计算。 （七）思考题 洁净室中微生物数测定操作时需注意些 什么，影响测定结果准确性的因素有哪些？
空气细菌数量的检测
空气细菌数量的检测引言：与外界相通的各个空间的空气中均有大量的细菌存在，且种类繁多，而这些微生物中绝大多数对我们人体来讲都是有益的，但其中也有一部分微生物往往是实验室各种实验材料、实验菌种污染的祸根，也是引起人类各种传染性疾病的祸根。
因此，对空气进行细菌学检验，目的在于调查气溶胶扩散的范围、滞留时间及浓度；确定空气中病原体种类；研究呼吸道传染病传播机制及气雾免疫的应用；考核空气卫生学及消毒效果，树立“处处有菌”和严格的消毒与灭菌观念。
而处于学院的我们来说，学院空气质量的好坏与师生们的生活与学习息息相关，通过沉降法检测细菌总数来判断空气中的卫生状况与污染程度并了解空气质量显得至关重要。
材料与方法：（一）仪器与材料1、普通营养琼脂平板（由中山大学新华学院医学实验室提供）2、恒温培养箱（中山大学新华学院医学实验室提供）（二）采样地点按照《室内空气质量标准》的要求进行采样布点，选取新华学院的图书馆、西门口、校道、教学楼以及微生物实验室。
（三）采样时间及方法采样时间为2014年9月1日下午两到四点，采样天气为晴朗无雨，采样方法为自然沉降法。
沉降法是以微生物在空气中能随尘粒下降的原理，将平板平放在空气中暴露一定时间，使空气中的细菌直接沉降至培养基表面，然后置37摄氏度孵育24小时，计算菌落数。
实验方法：a.取用普通营养琼脂平板5个（直径7cm），在皿底做上标记；b.采用自然沉降法收集细菌，采用地点为新华学院的各个指定地方。
将平板打开，平板盖朝下放置在平板旁，分别暴露于空气中20分钟，然后盖好。
并注明采样的地点和暴露的时间；c.平板放置于37℃的恒温培养箱培养24小时后取出后观察，计算出所生长的菌落数和数量。
（四）菌落数计算按下列公式可得出空气中细菌总数。
每立方米细菌数=50,000N/ATA:所用平板面积（平方厘米）；T:平板暴露于空气中的时间（分钟为单位；N：平板上的菌落数实验结果使用实验室提供的营养琼脂平板，在学校各个地方收集空气中的细菌，培养空气中的细菌，并经过实验室的空气细菌培养24h后，得出以下数据：样本号12345678 采样地点图书馆西门口校道微生物实验室厕所微生物实验室楼梯教学楼微生物实验室微生物实验室办公室采样时间/min2020202515202015平板上菌落数2515123471、由上述数据可知校园内的空气质量较好；2、各采样点的空气菌落对比：校道>微生物实验室厕所>微生物实验室>西门口>教学楼>微生物实验室楼梯>图书馆>微生物实验室办公室。
自然沉降法实验报告
实验名称：空气中微生物数量的检测实验目的：1. 了解自然沉降法在空气中微生物数量检测中的应用。
2. 掌握自然沉降法的操作步骤及注意事项。
3. 分析实验结果，评估空气中微生物数量的分布。
实验原理：自然沉降法是一种用于检测空气中微生物数量的常用方法。
其原理是利用空气中的微生物在空气中沉降到采样平皿上的特性，通过培养和计数平皿上的菌落数来估算空气中的微生物数量。
实验材料：1. 空气采样平皿（直径9cm）2. 营养琼脂3. 灭菌棉塞4. 移液器5. 培养箱6. 空气采样器7. 计时器8. 计数器实验步骤：1. 准备工作：将营养琼脂加热融化后，待其冷却至45℃左右，倒入采样平皿中，使其厚度均匀。
2. 灭菌：将采样平皿置于超净工作台中，用灭菌棉塞封口，进行灭菌处理。
3. 空气采样：将灭菌后的采样平皿置于采样器下，开启采样器，对空气进行采样。
采样时间根据实验需求设定，一般为30分钟。
4. 沉降：关闭采样器，将采样平皿放置在培养箱中，使微生物自然沉降。
5. 培养与计数：将沉降后的采样平皿置于37℃培养箱中培养24小时，待菌落生长成熟后，用计数器对菌落数进行计数。
实验结果与分析：1. 通过自然沉降法，我们共检测出空气中的微生物数量为X个。
2. 实验结果显示，空气中微生物数量分布不均，可能与采样时间、采样地点、采样环境等因素有关。
3. 由于自然沉降法只能检测到部分微生物，实验结果可能存在偏差。
为了提高检测精度，可以考虑采用多种检测方法相结合的方式。
实验结论：1. 自然沉降法是一种简单、实用的空气中微生物数量检测方法。
2. 通过实验，我们了解到空气中微生物数量的分布特点，为相关研究提供了数据支持。
3. 在实际应用中，应根据具体需求选择合适的检测方法，以提高检测精度。
注意事项：1. 在操作过程中，应注意无菌操作，避免污染。
2. 采样时间、采样地点、采样环境等因素会影响实验结果，应尽量保持一致。
3. 在计数过程中，应注意区分不同类型的菌落，避免误计。
空气中微生物检测
空气中微生物检测一、实验目的本实验用灭菌后的培养皿在空气中采样后并培养一段时间，测定空气中的微生物，其实验意义在于：(1)了解空气中微生物的分布状况。
(2)比较普通实验室和无菌室空气中存在的微生物的数量和种类。
(3)验证无菌操作法在微生物学实验中的重要性。
二、实验原理空气是人类保持正常活动的物质条件，并与人类键康有着极为密切的关系，随着社会进入信息时代，空气微生物采样检测也得到了飞速发展，已研制出快速、敏感、特异，自动化程度高的各类仪器，为保持高质量的空气环境，应使用正确先进的空气监测方法。
在我们周围的环境中存在着种类繁多、数量庞大的微生物。
空气中也不例外。
虽然空气不是微生物栖息的良好环境。
但由于气流、灰尘和水沫的流动，人和动物的活动等原因，仍有相当数量的微生物存在。
空气中微生物的采集方法很多，主要有用空气微生物采样器采样监测和用自然沉降采样法进行采样。
本文就各类采样方法的性能做了介绍，使能正确选用各类采样方法。
空气微生物采样主要涉及采样器、采样介质、采样方法及检验程度4 个方面。
空气微生物采样器主要有：撞击式采样器、过滤式空气采样器、离心式空气采样器、气旋式采样器、静电沉降采样器等等。
当空气中个体微小的微生物落到适合于它们生长繁殖的固体培养基的表面时，在适温下培养一段时间后，每一个分散的菌体或孢子就会形成一个个肉眼可见的细胞群体即菌落。
观察大小、形态各异的菌落，就可大致鉴别空气个存在的微生物的种类。
本实验通过检测普通实验室和消毒后的无菌室空气中存在的微生物，从而判断无菌室的消毒效果，了解空气中常见的微生物类群。
三、实验装置与仪器1.实验仪器(1)无菌平皿，数量若干套(2)酒精灯，数量×1(3)培养箱，数量×2(4)高压蒸汽灭菌器(5)干热灭菌器(6)冰箱(7)平皿（直径9cm）(8)量筒(9)三角烧瓶(10)p H计2.实验所需试剂(1)蛋白胨，数量10g(2)牛肉膏，数量3g(3)氯化钠5g(4)琼脂15-20g(5)蒸馏水1000mL四、实验步骤1.琼脂培养基制作方法：将蛋白胨、牛肉膏、氯化钠、琼脂和蒸馏水混合，加热溶解，校正pH至7.4，过滤分装，121oC 20min分钟高压灭菌，用自然沉降法测定时，倾注约15mL于灭菌平皿内，制成营养琼脂平板。
洁净室沉降菌测试方法
洁净室沉降菌测试方法
洁净室沉降菌测试是对洁净室环境中空气中悬浮微粒的数量和种类进行评估的方法之一。
沉降菌测试是通过将培养基暴露在空气中，使空气中的微生物落到培养基上生长，然后计数和鉴定这些微生物来评估洁净室的微生物污染。
以下是一般的洁净室沉降菌测试方法：
1. 准备培养基：选择适用于微生物生长的培养基，如营养琼脂培养基。
按照培养基说明制备培养基。
2. 制备沉降皿：将培养基倒入锅中，加热至液态，然后倒入含有适量培养基的沉降皿中。
3. 安置沉降皿：在洁净室中的代表性位置放置沉降皿，如工作台面、天花板等。
4. 收集样品：根据需要和测试目的，选择适当时间段收集样品。
可以采用定期采样或连续采样的方式。
5. 培养：将采集的样品放置在培养箱中，以合适的温度和湿度条件孵育。
通常情况下，温度为30-37摄氏度，孵育时间为24-48小时。
6. 计数和鉴定：在孵育结束后，观察培养皿中的菌落形成情况，并进行计数。
可以根据菌落的形态和特征，使用显微镜和生化试剂等进行鉴定。
7. 报告结果：根据实验结果，记录沉降菌的数量和种类，并参考相关标准，如ISO 14698等，评估洁净室的微生物污染级别。
需要注意的是，洁净室沉降菌测试方法可能因测试目的、要求和标准的不同而有所差异。
在进行实际测试之前，最好参考相关的测试标准和指南，并根据具体情况进行适当的调整和验证。
实验二空气微生物的检验
革兰染色 观察溶血 杆菌肽敏感试验 链激酶
报告
α型溶血（草绿色链球菌）：
空气微生物的检验
β 溶血平板观察
空气微生物的检验
生化 鉴定
1、革兰氏染色，阳性，G+链状排列，符合者可做生 化鉴定。 2、生化鉴定
（1）链激酶试验（溶纤维蛋白酶试验） 吸取草酸钾血浆0.2mL，加0.8mL灭菌生理盐水， 混匀，再加入链球菌18-24h36±1℃肉浸液肉汤培养物 0.5mL及0.25%氯化钙0.25mL，混匀，置于36±1℃水 浴10min,血浆混合物自行凝固，观察凝块重新完全溶 解的时间，完全溶解为阳性，如24h后不溶解即为阴 性。同时用肉浸液肉汤做阴性对照，用已知的链激酶 阳性的菌株做阳性对照。
2）血琼脂平板、匹克肉汤、灭菌生理 盐水、革兰染色液、杆菌肽纸片。
空气微生物的检验
三、实验步骤
1、样品的采集 5个采样点，离地面高度为1.5米，东、西、南、北、
中各放置一个平皿，揭开盖子暴露15min,扣好盖子。
2、培养观察 36±1℃培养24h。
3、菌落形态观察及镜检 血平板：圆形突起，针尖状，灰白色半透明/不透明，
清洁 空气
＜1 500
＜16
＜4 500
＜36
污染 空气
＞2 500
＞36
＞7 000
＞124
空气微生物的检验
空气微生物的卫生标准
室内空气质量标准（GB/T 18883-2002） 对微生物指标的规定： 菌落总数≤2500 cfu/m3
分析实验结果是否满足相应的空气标准。
空气微生物的检验
溶血性链球菌的的检验
空气微生物的检验
（2）杆菌肽敏感试验（药敏试验）
室内空气中细菌的测定
原理： 空气中附着于尘埃或飞沫小滴上的细菌，经过一段时间，可自然沉降于培养基的表面上，经培养后，计数其生长的菌落数，再按公式推算出每立方米空气中的细菌数。
实验准备：
仪器与设备： 高压蒸汽灭菌器 电热恒温干燥箱 恒温培养箱 电冰箱 玻璃平皿及制备培养基用的一般设备
1
2
营养琼脂培养基：
（二）试剂与材料：
操作步骤： 制作营养琼脂平板（无菌操作） 操作者面前点燃酒精灯 打开已灭菌处理的平皿 倾注适量营养琼脂培养基（15～20毫升） 冷凝（大约15分钟）
（二）选择采样点的要求：
（二）选择采样点的要求： 1．采样点的数量 根据监测室内面积大小和现场情况而确定，以期能正确反映室内空气污染物的水平。原则上小于50㎡的房间应设（1～3）个点；50㎡～100㎡设（3～5）个点；100㎡以上至少设5个点。在对角线上或梅花式均匀分布。 2．采样点应避开通风口，离墙壁距离应大于0.5m。 3．采样点的高度：原则上与人的呼吸带高度相一致。相对高度0.5m～1.5m之间。
演讲人姓名
——平皿暴露沉降法
202X
室内空气中细菌的测定
A
B
学习和掌握平皿暴露沉降法测定公共场所空气中细菌的总数。
A
评价居室的卫生状况
B
目的：
理论依据和实际应用： 室内空气中的微生物主要来源是人们在室内的生活和活动，使微生物随飞沫与悬浮颗粒物飞扬于空气中。所以室内空气中的微生物数量的多少取决于室内卫生状况、居住密度、居民健康情况、人们的活动情况、室内通风效果等。居住密度大、活动频繁、通风不良时，细菌总数就多。所以它可以代表居室一般卫生状况的意义；
（三）采样方法
选择好采样点后，将营养琼脂平板置于这些选测的部位，并将皿盖揭开，使平皿内营养琼脂培养基表面暴露于空气中5分钟。盖上皿盖，将平板倒转，置于37℃恒温培养箱中培养24小时后计数菌落数。
空气中微生物的测定实验报告
空气中微生物的测定实验报告本实验旨在测定空气中微生物的数量及种类，探究影响空气质量的因素，并采取相应的预防措施，保证工作场所和生活环境的卫生安全。
一、实验方法1.1 采样器准备准备采样器，将采样器杆插入采样器中心孔内，调整均衡压力，将收集微生物的借腔安装于采样器杆顶部，并使其紧密固定。
1.2 环境样本采集每个采样点进行三次采样，取样位置应保持固定，并在同一时间段进行采集。
1.3 样本处理将收集到的样本传送到实验室，放置在恒温箱内，保持25℃恒温72小时。
每24小时将培养基旋转45度以均匀涂布，并保持培养箱湿度适中。
1.4 微生物分类鉴定与计数于72小时后将培养基取出，用称量器进行称量，计算出微生物的数量，并进行分类鉴定。
二、结果与分析在实验中，对于不同环境样本采集了三次，并将结果取平均值。
结果表明，空气中微生物的数量与环境因素密切相关。
在工厂产生的空气中，微生物数量较高，尤其是在生产车间、食品加工车间和卫生间等空间中，微生物数量更为显著。
而在更干燥、通风良好的办公室和教学楼内，微生物数量较低。
根据鉴定，空气中微生物主要包括真菌、细菌和病毒等。
细菌是空气中最常见的微生物，包括葡萄球菌、耳塞子菌、链球菌等。
此外，还能够检测到黄曲霉、毛霉以及酵母等真菌。
三、结论与建议通过实验结果可得知，维护空气干净的重要性，特别是在工业和生产领域。
对于空气中的微生物，建议加强通风措施，增加房间内过滤空气的方式，定期清洗空调过滤器和通风系统，并且尽可能地避免有机质的堆积。
对于员工应进行健康教育，增强自我卫生防护意识，勤洗手，保持房间干净，预防各种疾病的发生。
此外，空气中微生物数量的变化还与季节、气候条件密切相关，因此，建议每季度进行一次空气微生物测量，及时发现问题并采取相应的防护和治理措施。
这样，才能确保我们的工作和生活场所都能成为一个安全健康的环境。
微生物实验指导书11
《微生物学实验》实验指导书广东工业大学环境科学与工程学院实验一显微镜的使用、细菌革兰氏染色法及细菌特殊结构的观察（一）实验目的1.了解普通光学显微镜的基本构造和工作原理2.学习并掌握油镜的原理和使用方法。
3. 在油镜下观察细菌几种基本形态4．掌握细菌革兰氏染色法（二）实验原理1．显微镜的基本结构及油镜的工作原理现代普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像，故又常被称为复式显微镜。
它们由机械装置和光学系统两大部分组成。
在显微镜的光学系统中，物镜的性能最为关键，它直接影响着显微镜的分辨率。
而在普通光学显微镜通常配置的几种物镜中，油镜的放大倍数最大，对微生物学研究最为重要。
与其他物镜相比，油镜的使用比较特殊，需在载玻片与镜头之间加滴镜油，这主要有如下二方面的原因：1. 增加照明亮度油镜的放大倍数可达100 Χ，放大倍数这样大的镜头，焦距很短，直径很小，但所需要的光照强度却最大。
从承载标本的玻片透过来的光线，因介质密度不同（从玻片进入空气，再进入镜头），有些光线会因折射或全反射，不能进入镜头，致使在使用油镜时会因射入的光线较少，物像显现不清。
所以为了不使通过的光线有所损失，在使用油镜时须在油镜与玻片之间加入与玻璃的折射率（n=1.55 ）相仿的油镜（通常用香柏油，其折射率n=1.5 2）。
2. 增加显微镜的分辨率显微镜的分辨率或分辨力(resolution or resolving power) 是指显微镜能辨别两点之间的最小距离的能力。
从物理学角度看，光学显微镜的分辨率受光的干涉现象及所用物镜性能的限制，分辨力D可表示为：D=λ/2N.A，式中λ= 光波波长；NA= 物镜的数值孔径值。
光学显微镜的光源不可能超出可见光的波长范围（0.4--0.7 μ m ），而数值孔径值则取决于物镜的镜口角和玻片与镜头间介质的折射率，可表示为：NA=n × sin α式中α为光线最大入射角的半数。
它取决于物镜的直径和焦距，一般来说在实际应用中最大只能达到120 O ，而n 为介质折射率。
沉降法检测空气中微生物数量
环境科学与工程学院 生物工程10（1）班 叶智源 3110007848实验二 沉降法检测空气中微生物数量（一） 实验目的1．学习并掌握用沉降法检测空气中的微生物 2．了解空气中微生物的分布状况 （二）实验原理在我们周围的环境中存在着种类繁多、数量庞大的微生物。
空气中也不例外。
虽然空气不是微生物栖息的良好环境。
但由于气流、灰尘和水沫的流动，人和动物的活动等原因，仍有相当数量的微生物存在。
当空气中个体微小的微生物落到适合于它们生长繁殖的固体培养基的表面时，在适温下培养一段时间后，每一个分散的菌体或孢子就会形成一个个肉眼可见的细胞群体即菌落。
观察大小、形态各异的菌落，就可大致鉴别空气个存在的微生物的种类。
（三)实验器材1． 试剂牛肉蛋白胨培养基配方：牛肉膏 5.0g, 蛋白胨 10.0g ，NaCl 5g, 水1000ml ，pH 7.2~7.4 马铃薯培养基配方：马铃薯 200g, 蔗糖 20g, 水1000ml ， pH 7.2 高氏一号培养基配方：淀粉 20g, 硝酸钾 1.0g, 磷酸氢二钾 0.5g, 硫酸镁0.5g, 氯化钠0.5g, 硫酸亚铁0.01g, 水1000ml, pH 7.2~7.4 2. 仪器及其他用品高压灭菌锅，操作工作台，三角瓶，培养皿，酒精灯，培养箱等（四）实验方法1．倒平板：按常法配置上述培养基，分装于三角瓶中，高压灭菌备用。
临用前将培养基熔化，冷却至50℃左右，各倒16个平板备用。
2．暴露取样在指定的地点草地，一层楼，三层楼，七层楼各放4皿，将平板皿盖打开，在空气中暴露5min 和10min,时间一到，立即合上皿盖。
3． 培养观察： 细菌置于37℃培养，放线菌培养基平板和真菌培养基平板置于28℃培养。
细菌培养48h ，真菌和放线菌培养4-6天。
计数平板上的菌落，观察各种菌落的形态、大小、颜色等特征。
4.计算1m 3空气中微生物的数目奥梅染斯基（Омелянский）曾建议：如面积为100㎝2的平板培养基，暴露在空气中5分钟，置于37℃培养24小时后所生长的菌落数，相当于10L 空气中的细菌数。
空气中细菌含量的测定
空气中细菌含量的测定
采用沉降法测定空气中的细菌数
1．培养基的配制。
称取10克蛋白陈、3克牛肉浸膏、5克氯化钠、20克琼脂，充分混合后，加入到1000毫升蒸馏水中，用盐酸和氢氧化钠调节溶液的pH值为7.4～7.6，过滤除去沉淀后，分装在5个250毫升三角烧瓶中，放入高压蒸汽灭菌锅中，在121摄氏度下灭菌15分钟。
取出后置于暗处备用。
2．制作平皿。
加热使测定所用的培养基融化，待冷至50～60摄氏度时，倾注入培养皿，每皿注入15～20毫升，一共制作5块。
盖上皿盖。
3．细菌含量的测定。
（l）利用微生物在空气中能随尘粒下沉的原理,将盛有培养基的平皿平放，移去平皿盖，在空气中暴露五分钟，培养皿距地面1米，距墙壁最近不可小于30厘米，室内中央及周角各放一平皿。
（2）培养：放入37摄氏度恒温箱中培养24小时。
（3）计算：每立方米细菌数=50000N/（At）
其中：A是所用平皿面积（cm2）；t是平皿暴露的时间（min）；N是培养后平皿的菌落数。
空气中细菌含量测定记录
4．判断标准
100,000级生产区≤10个/碟(平均值)
5．注意事项：
1．本实验结果易受环境影响，因此采样时不要使空气流动。
2．平皿和其他器材须作高压灭菌处理。
沉降菌计数方法
沉降菌计数方法嘿，朋友们！今天咱来聊聊沉降菌计数方法，这可真是个有趣又重要的事儿呢！你想想看啊，空气中到处飘着各种小不点儿，有些是无害的，但有些可能就不那么友好啦。
那我们怎么知道有多少这些小家伙落在了我们关心的地方呢？这就用到沉降菌计数啦！就好像我们去沙滩上数贝壳一样，得有个方法。
首先呢，我们得准备好专门的培养皿，这就像是给小菌菌们准备的小房子。
然后把这些小房子放在合适的地方，让它们安安静静地待上一段时间，等着菌菌们来“入住”。
这时候可别心急哦，得给它们足够的时间。
就好像你等朋友来家里做客，总不能人家还没到就开始催吧！等时间到了，再把培养皿小心翼翼地拿到实验室去。
在实验室里呀，就像我们给贝壳分类一样，要仔细观察培养皿里长出来的菌菌。
看看有多少，是什么样子的。
这可需要耐心和细心呢，不能马马虎虎的。
有时候我就想啊，这菌菌们也挺神奇的，就那么悄悄地落在培养皿里，然后就开始生长啦。
这不就像种子发芽一样嘛，给点合适的条件，就能长成一片呢！而且啊，做这个沉降菌计数还得注意环境呢。
不能在一个脏兮兮、乱糟糟的地方做，那不是乱套了嘛。
就好比你在一个满是灰尘的房间里数星星，那能数得清楚吗？肯定不行呀！咱还得保证操作规范，每一步都不能马虎。
要是不小心把培养皿打翻了，或者污染了，那可就前功尽弃啦！这就跟搭积木似的，一个不小心碰倒了，就得重新开始。
说真的，沉降菌计数虽然看起来简单，但是里面的学问可大着呢！每一个细节都关乎着结果的准确性。
这可不是闹着玩的，要是结果不准确，那可就会影响很多事情呢，比如药品生产、食品加工啥的。
咱可不能小瞧了这些小小的菌菌，它们有时候能惹出大麻烦呢！所以沉降菌计数就像是我们的小卫士，帮我们把关，让我们能放心地生活和工作。
总之呢，沉降菌计数是个很重要很实用的方法，我们得认真对待，用心去做。
只有这样，我们才能准确地了解我们身边的菌菌情况，才能更好地保护自己和他人呀！你们说是不是呢？原创不易，请尊重原创，谢谢!。
空气中微生物的检测沉降法
五、结果
• 用钢笔于平板底点数每块平板上的菌落数，再计 算出1落数=每块平板数÷πr2×100。再将5个部 位所得菌落数相加除以5求平均数，并换算出室内 每立方米空气的细菌总数。由于100cm2培养基暴 露于空气中10min相当于接受20L空气中的活菌， 又因1m3等于1000升。所以每立方米空气中的活 菌数＝100cm2培养基上菌落平均数÷20×1000。 计算菌落时，凡二个或几个菌落边缘有相互重叠 者，均分别计算为二个或几个。沉降法检查出的 活菌总数，客观地反映了空气污染的程度和卫生 通风状况，是判断空气污染的指标之一，亦常用 于评价空气消毒除菌的效果。
六、思考题
1.通过微生物的分布实验，说明什么？ 2.微生物在自然界与人体的分布，与医 药卫生工作有什么关系？尤其对药品 的生产和微生物学检查有何重要意义？
三、材料
• 1.培养基：普通琼脂平板。 • 2.仪器：培养皿.三角瓶.
四、实验步骤
• 1.取普通琼脂平板5个，分别在其底 部标记1、2、3、4与中。 • 2.将标有1、2、3、4的平板分别放置 于室内四角，标有“中”字的平板放 于室内中央，均离地面约1m高，打 开平皿盖，使培养基暴露于空气中， 10min后盖好平皿盖。同时放一普通 琼脂平板于桌面上不启盖，以作对照。 • 3.将上述6个平皿置37℃恒温箱中培 养24h后取出观察结果。
空气中微生物的检测沉降法
李能能
微生物沉降法检测仪器
一、目的要求
• 1.通过实验证明自然环境的空气 存在大量的微生物。 • 2.熟悉检测空气中细菌的方法
二、实验原理
• 检查空气中细菌中的方法很多， 沉降法是其中常用的一种，它是 利用含有细菌的尘粒或液滴因重 力自然下降至培养基表面来进行 检查。根据推算，每100cm2培 养基在空气中暴露5min，其表 面接受自然沉降的细菌相当于 10L空气中所含的细菌数
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环境科学与工程学院 生物工程10（1）班 叶智源 3110007848
实验二 沉降法检测空气中微生物数量
（一） 实验目的
1．学习并掌握用沉降法检测空气中的微生物
2．了解空气中微生物的分布状况 （二）实验原理
在我们周围的环境中存在着种类繁多、数量庞大的微生物。
空气中也不例外。
虽然空气不是微生物栖息的良好环境。
但由于气流、灰尘和水沫的流动，人和动物的活动等原因，仍有相当数量的微生物存在。
当空气中个体微小的微生物落到适合于它们生长繁殖的固体培养基的表面时，在适温下培养一段时间后，每一个分散的菌体或孢子就会形成一个个肉眼可见的细胞群体即菌落。
观察大小、形态各异的菌落，就可大致鉴别空气个存在的微生物的种类。
（三)实验器材
1． 试剂
牛肉蛋白胨培养基配方：
牛肉膏 5.0g, 蛋白胨 10.0g ，NaCl 5g, 水1000ml ，pH 7.2~7.4 马铃薯培养基配方：
马铃薯 200g, 蔗糖 20g, 水1000ml ， pH 7.2 高氏一号培养基配方：
淀粉 20g, 硝酸钾 1.0g, 磷酸氢二钾 0.5g, 硫酸镁0.5g, 氯化钠0.5g, 硫酸亚铁0.01g, 水1000ml, pH 7.2~7.4 2. 仪器及其他用品
高压灭菌锅，操作工作台，三角瓶，培养皿，酒精灯，培养箱等 （四）实验方法
1．倒平板：按常法配置上述培养基，分装于三角瓶中，高压灭菌备用。
临用前将培养基熔化，冷却至50℃左右，各倒16个平板备用。
2．暴露取样
在指定的地点草地，一层楼，三层楼，七层楼各放4皿，将平板皿盖打开，在空气中暴露5min 和10min,时间一到，立即合上皿盖。
3． 培养观察： 细菌置于37℃培养，放线菌培养基平板和真菌培养基平板置于28℃培养。
细菌培养48h ，真菌和放线菌培养4-6天。
计数平板上的菌落，观察各种菌落的形态、大小、颜色等特征。
4.计算1m 3空气中微生物的数目
奥梅染斯基（Омелянский）曾建议：如面积为100㎝2的平板培养基，暴露在空气中5分钟，置于37℃培养24小时后所生长的菌落数，相当于10L 空气中的细菌数。
X=
X ：每m 3空气中的细菌数
N ：平板暴露5分钟，置37℃培养24小时后生长的菌落数 r ：平皿底半径（㎝）
N ×100×100
πｒ2
（五）实验结果
1．列表比较不同放置地点空气菌落种类以及数量的差异？
用沉降法计算1m 3空气环境中所含菌数。
（六）思考题
1．对沉降测定法的结果，进行分析。
分析：从沉降测定法的结果看出，空气中的细菌数是从低到高呈现逐渐减少的趋势。
当然，由于实验组数较少的原因，实验结果不太理想。
菌落平均数 环境
菌落数
细菌数/m 3 1楼 5min 3 472 1楼 5min 4 629 3楼 5min 2 314 3楼 5min 2 314 5楼 5min 0 0 5楼 5min 0 0 7楼 5min 2 314 7楼
5min。