高效液相色谱法测定苹果中的酚类物质

( Received 16 August 2001 ; accepted 15 January 2002)
2 实验部分
2. 1 仪器和试剂 LC2Class10AG高效液相色谱分析仪 (日本岛津公司) ;lass10A 色谱工作站 (日本岛津公司) ;SPD210A
紫外检测器 。Discovery C18 柱 150 mm ×4. 6 mm ,Φ5μm (日本岛津公司) 。儿茶素 、儿茶酚 、表儿茶素 、绿 原酸 、根皮苷 、杨梅黄酮 、桑色素 、槲皮素 、山奈素 、柚苷 、芹菜素 ,所有药品购于 Sigma 公司 。 2. 2 实验材料
第7期
吴燕华等 :高效液相色谱法测定苹果中的酚类物质
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3 结果与讨论
3. 1 标准曲线的确定 配制标样的甲醇混合溶液 ,其中含有儿茶素 、儿茶酚 、绿原酸 、表儿茶素 、芦丁 、根皮苷 、杨梅黄酮 、桑
色素 、槲皮素 、山奈素 、柚苷 、芹菜素等标样 。浓度依样品含量多少而定 ,分别稀释到 1 、4 、8 、16 倍 ,进行 液相色谱分析 。 3. 2 定性分析
3. 3 定量分析
将标样配成含量已知的甲醇标准溶液 ,在相
同的色谱条件下 ,将配制的标准溶液稀释成五个
梯度的溶液 ,分别进行液相色谱分析 。根据液相
色谱中峰面积与样品中标准物质的含量关系进行
线性回归 ,通过计算相关系数 ,得出样品中的酚类
物质的含量 。在各相应的线性范围内 ,相关系数
R 均大于 0199 ,说明峰面积与浓度呈线性关系 。
将标样配成含量已知的甲醇标准溶液 ,得到图 1 ;再将苹果的样品在此色谱条件下分析 ,得到图 2 。 比较标准样品及苹果样品的色谱图及样品的相对保留值 ,将相对保留时间相同的色谱峰进行定性鉴定 。 标准样品出峰顺序的先后依次为 :儿茶酚 、儿茶素 、绿原酸 、表儿茶素 、根皮苷 、杨梅黄酮 、桑色素 、槲皮 素 、柚苷 、山奈素 、芹菜素 。
min ,分 离 出 酯 相 和 水 相 。将 水 相 用 6 molΠL 的 (phloridzin) pH 至 7. 0 ,每次加入 50 mL 的乙酸乙酯萃取两次 ,分离出酯相 。酯相在 30 ℃下旋转蒸发 ,用 N2
气吹干 ,再用 1 mL 的甲醇定容 ,进行液相色谱分析 。计算各组分的平均回收率 ,结果见表 1 。
(中国农业大学应用化学学院1 ,食品学院2 ,北京 100094)
摘 要 利用高效液相色谱法分析了红星 、秦冠 、小国光 、黄元帅和富士 5 个苹果品种果皮和果肉中小分子酚 类物质的分布情况 。色谱柱为 C18 柱 (150 mm ×4. 6 mm ,Φ5μm) ,流动相为甲醇和水 ,柱温为 30 ℃,流速为 1. 2 mLΠmin ,线性梯度洗脱 ,紫外检测器波长为 280 nm。在此色谱条件下 ,各组分均得到良好分离 。标准样品的线 性范围为 0. 9983～0. 9999 ,平均回收率为 75 %～91 %。
分析样品的制备 :苹果皮 5 g (或肉 10 g) ,加入 1 mL 6 molΠL 的 HCl ,放置于石英砂中研磨 ;加 50 mL 的蒸馏水用 1 molΠL 的 HCl 调 pH 至 2. 0 ;然后每次加入 50 mL 的乙酸乙酯 ,萃取两次 ,搅拌 5 min ,离心 , 分离出酯相和水相 ;将水相用 6 molΠL 的 NaOH 调 pH 至 7. 0 ,每次加入 50 mL 的乙酸乙酯萃取 2 次 ,分离 出酯相 。将酯相在 30 ℃下旋转蒸发 ,用 N2 气吹干 ,再用 1 mL 的甲醇定容 。
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分析化学
第 30 卷
表 1 标样的回收率 Table 1 The recovery results of standard samples
标样 Standard sample
儿茶酚 儿茶素 Catecol Catechin
绿原酸 表儿茶素 根皮苷 Chlogein Epicatechin Phloridzin
图 1 酚类物质标准样品的液相色谱图
Fig. 1 Chromatogram of standard sample of phenolics
11 儿茶酚 ( catecol ) ; 21 儿 茶 素 ( catechin) ; 31 绿 原 酸 ( chlogein) ; 41 表 儿 茶 素 ( epicatechin ) ; 51 根 皮 苷 (phloridzin) ;61 杨梅黄酮 (myricetin) ;71 桑色素 (morin) ;81 槲皮素 ( quercetin) ;91 柚苷 ( naringenin) ;101 山奈 素 (raempfro) ;111 芹菜素 (apigen) 。
50 50 25 50 10
37. 57 41. 03
19. 54
43. 25
7. 91
3. 5 结果分析 通过对苹果中的酚类物质的研究 ,得出苹果中的酚类物质主要有 :表儿茶素 、绿原酸 、杨梅黄酮 、根
皮苷 。表儿茶素和绿原酸是苹果中主要的小分子酚类物质 。 由于儿茶素 、表儿茶素 、桑色素 、槲皮素 、山奈素等均属黄酮类化合物 ,环上的氧具有弱碱性 。在强
关键词 苹果 ,酚类物质 ,高效液相色谱法
1 引 言
在苹果汁加工过程中 ,酚类物质与果汁中的蛋白质结合 ,形成大分子的聚合物 ,从而使苹果汁产生 沉淀 ,影响苹果汁的产品质量 。酚类物质是果实在生长代谢中的次生产物 ,它对植物的生长发育和调 节 、基因的诱导表达 、信号转导 、紫外辐射的吸收 、果蔬产品的褐变 、生物固氮有一定的影响1 ～4 。本实 验研究了不同品种的苹果中酚类物质的情况 ,利用高效液相色谱分析酚类物质 ,采用反相 C18 柱 ,具有快 速 、操作简单 、分离效果好和同时能将不同酚类物质分开等优点 。
果汁样品的制备 :苹果汁 50. 0 mL 用 1 molΠL 的 HCl 调 pH 至 2. 0 ,然后每次加入 50 mL 的乙酸乙酯 萃取两次 ,搅拌 5 min ,离心 ,分离出酯相和水相 。酯相和水相的处理方法与分析样品的制备方法一样 。
2001208216 收稿 ;2002201215 接受
第 30 卷
分析化学 (FENXI HUAXUE) 研究简报
第7期
2002 年 7 月
Chinese Journal of Analytical Chemistry
826～828
高效液相色谱法测定苹果中的酚类物质
吴燕华1 刘文力2 阎 红2 李 楠 3 1 蔡同一2
小国光和富士购于北京市昌平区南口镇 ;红星和金帅购于山东省德州市 ;秦冠购于北京市大钟寺市 场 。以上原料均为无病虫害且具有该品种典型特征 ,适宜成熟的果实 ,购得后储藏于 0 ℃冷库中 ,一周 内全部处理完毕 。 2. 3 色谱分析条件
色谱柱 :C18 柱 150 mm ×4. 6 mm ,Φ5μm ;流动相 :甲醇和水 ;柱温 :30 ℃;流速 :1. 2 mLΠmin ;进样量 :10 μL ;检测器 :紫外检测器 ,波长 :280 nm。线性梯度洗脱 :0～35 min 98 %甲醇和水 ;35～65 min 68 %甲醇和 水 ;65～70 min 98 %甲醇和水 。 2. 4 样品的制备
含量 Content (mgΠL)
检测值 Found (mgΠL)
25 50 50 25 50
18. 92 45. 33 39. 51
22. 12
38. 77
杨梅黄酮 Myricetin
42. 5
38. 89
桑色素 槲皮素 柚苷 山奈素 芹菜素 Morin Quercetin Naringenin Raempfro Apigen
3. 4 标样的回收率测定
图 2 小国光苹果果肉酚类物质液相色谱图
样品 50. 0 mL 用 1 molΠL 的 HCl 调 p H 值为 2. Fig. 2 Chromatogram of phenolics of apple pulp
0 ,加入 50 mL 的 乙 酸 乙 酯 , 搅 拌 5 min , 离 心 10 1. 绿 原 酸 ( chlogein) ; 2. 表 儿 茶 素 ( epicatechin ) ; 3. 根 皮 苷
Determination of the Phenolic Compounds in Apple Juice by High Performance Liquid Chromatography
Wu Yanhua1 , Liu Wenli2 , Yan Hong2 ,Li Nan 3 1 , Cai Tongyi2 ( College of Applied Chemistry1 , Food College2 , China Agricultural University , Beijing 100094)
酸 (如 HCl) 条件下 ,形成正离子从而增加了水溶性 ,在酯中的分配系数相对降低 。这类化合物在中性条 件下水溶性降低 ,此时用乙酸乙酯萃取可增加其在酯中的溶解度 。
References 1 Chen Wei (陈 伟) . Journal of Fujian Agricultural University (福建农业大学学报) ,1997 , 4 :502～508 2 Zhang Xuejun(张学俊) . Chinese J . Anal . Chem. (分析化学) ,1998 , 12 :1523 3 Burd S , Oleszek W , Lee C Y. J . Agric. Food Chem. , 1990 ,38 :945～948 4 Spanos G A , Wrolstad R , Heartherbell D. J . Agric. Food. Chem. , 1990 , 38 :1572～1579
Abstract The change of the phenolics in apple juice was studied by high performance liquid chromatography ( HPLC) on a C18 column (5μm , 150 mm ×4. 6 mm i . d) . The mobile phase of methanolΠwater , flow rate of 1. 2 mLΠmin , column temperature of 30 ℃ and 280 nm wavelength of detector were used. The compositions were separated completely under this chromatographic conditions. The average recoveries were from 75 % to 91 %. It is a simple and rapid method with good reproducibility. Keywords Apple , phenolics , high performance liquid chromatography