鸡传染性法氏囊病抗体检测诊断方法。

鸡传染性法氏囊病抗体检测诊断方法。

原理：

可溶性抗原和抗体的可以在琼脂凝胶中扩散，当抗原、抗体相遇时发生特异性结合，在最适处发生沉淀，此沉淀物因颗粒较大而不扩散，形成肉眼可见的白色沉淀带。

材料与试剂

普通琼脂平板、打孔器、针头、加样枪、枪头、V型血凝板、玻璃板、生理盐水

鸡法氏囊阳性血清、法氏囊标准抗原、待检卵黄抗体/血清

方法

1.琼脂板的制备：

1g优质琼脂溶于含0.1%石炭酸的8%氯化钠溶液100ml。用时倒在平皿内或置于玻片上，琼脂厚度2.5~3mm。

2.打孔：

用打孔器在琼脂平板上打孔，中央1个孔,周围6个孔，形成梅花形图案。

要求：孔径4mm，孔距3mm。

3.挑出孔内琼脂。

4. 封底：在火焰上缓缓加热，使孔底的琼脂略熔化封底，避免加样后液体从孔底渗漏。

5.卵黄液进行倍比稀释。

V型板先在第一排每孔加生理盐水50μl，再在第一孔加50μl的卵黄液, 反复吹吸3次后，吸50μl混和液加入第2孔，吹吸混匀，依次倍比稀释至第4孔……最后一孔吸50μl弃去，这样1至4孔的抗体稀释倍数依次为1:2、1:4、1:8和1:16……。

6.加样：

在中心孔加法氏囊标准抗原约50μl。第1孔加法氏囊标准阴性血清；第2孔加法氏囊标准阳性血清。3、4、5、6孔分别加原液、1:2、1:4、1:8、1:16……的待检卵黄液。每孔以加满为度。

7.加毕后，盖上平皿盖，将平皿翻过来，置湿盘中，在37℃下自由扩散24-48小时。

结果判定：

若待检血清与抗原孔之间出现白色沉淀线，则表示阳性，若不出现沉淀线，为阴性。

若用于检测血清效价，则以出现沉淀线的血清最高稀释倍数表示（2n）。

用于两种抗原比较时，沉淀线有多种情形，应具体分析。

注意事项

1. 做好标记，防止顺序混乱。

2. 挑剔琼脂时注意不要挑破琼脂边缘。

3.加样时，注意不要产生气泡，以加满为度。否则影响反应结果。