梅毒的实验室检查模板

反应板及结果判 断 注释
一期敏感性 （未经治疗） 二期敏感性 （未经治疗） 晚期敏感性 （未经治疗）
74%-87% 100%
77%-88% 100%
77%-99% 100%
77%-99% 100%
98%
99%
98%
99%
检测流程（定性）
① 加样：
– 吸取50μl血清（浆）放在卡片圈中，并均匀 地涂布在整个圈内。
慢性生物学假阳性反应的疾病
• • • • • • 系统性红斑狼疮 自身免疫性溶血性贫血 盘状红斑狼疮 结节性多动脉炎 类风湿性关节炎 桥本氏甲状腺炎 • • • • • • • 风湿性心脏病 干燥综合征 毒品瘾者 慢性肾炎 肝硬化 老年 麻风 (是唯一产生慢
性生物学假阳性的感染 性 疾病)
妊娠的假阳性反应
传播途径
•
性接触是主要的传染途径 – 未经治疗的患者在感染后的1年内最具有传染性 – 随着病期的延长，传染性越来越小 – 到感染后2年，通过性接触一般无传染性 • 母婴传播 – 在妊娠7周时，梅毒螺旋体即可通过胎盘传染未经治疗 者，虽已无性传播（病期>2年），但妊娠时仍可传染给 胎儿 – 病期越长，传染性越小; • 输血传染 • 间接传播：日常用品、接吻、哺乳、医疗器械等途径（接 触部位附有梅毒螺旋体） 。
荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）
• 原理
– 将有完整形态的梅毒螺旋体作为抗原，加上经 吸收剂（用Reiter螺旋体制备而成）吸收过的 梅毒患者血清形成抗原抗体复合物，再加入异 硫氰酸荧光素（FTIC）标记的抗人免疫球蛋白， 与抗梅毒螺旋体抗体结合，形成荧光的抗原抗 体复合物。在荧光显微镜下，螺旋体显出苹果 绿色的荧光，即为阳性反应。
实验方法
• 梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)
• 梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA) • 梅毒酶联免疫吸附试验（TP-ELISA） • 梅毒免疫层析法-梅毒快速检测(RT) • 荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS） • 化学发光免疫分析法（CLIA） • 梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB）
TPPA/TPHA原理
• 阴性对照OD≤0.1，阳性对照OD＞0.8时实 验正常，否则实验无效。计算方法：cutoff(co)值=0.12+阴性对照平均OD值，s/co 值=病人OD值/ cut-off(co)值，s/co值大于 或等于1判为阳性，s/co值小于1判为阴性 • 注s/co值在0.5~2.0之间的灰区样本需复检 确认后报告
TRUST
同前+EDTA+氯化胆碱+ 甲苯胺红 稳定4℃ ～8 ℃ 保存12个月
心磷脂、卵磷脂、 同前+EDTA+氯化 胆固醇 胆碱 不稳定,1天 需灭活 玻片，肉眼或显 微镜
唯一用于检查脑脊 液的试验，诊断神 经梅毒
不需灭活 玻片，肉眼或显 微镜
不需灭活 纸卡片，肉眼 结果容易判断
不需灭活 纸卡片，肉眼 结果容易判断
结果判断
• 1.观察加未致敏颗粒的第3孔，不出现凝集 为有效试验。 • 2. 观察凝集反应强度：分级如下。
4+：颗粒光滑覆盖整个孔底，有时边缘有折 叠。 3+： 颗粒光滑覆盖大部分孔底。 2+：颗粒光滑集聚覆盖孔底，周围有一颗粒环。 1+： 颗粒光滑集聚覆盖孔底，周围有一明显颗 粒环。 ±：颗粒沉集孔底，中央形成一小点。 一：颗粒紧密沉积孔底中央。
• 曾经认为FTA-ABS试验是检测梅毒的“金 标准”试验。
TP-ELISA
• 原理
– 用重组梅毒螺旋体抗原包被固相板条，加上梅 毒血清和单克隆抗体酶标记物，形成抗原抗体 复合物与酶标记物结合，用酶联检测仪判定试 验阳性反应。
• 特点
– 本法可用于大规模血清检测。
梅毒螺旋体抗体测定(ELISA法)结果的解读
苍白螺旋体
苍白亚种 地方亚种 极细亚种
梅毒 地方性梅毒 雅司病
密螺旋体属
品他螺旋体 品他病
梅毒螺旋体的生物学特性
1、直径 0.10~0.15μm，有8~14个致密而规则的
小螺旋，两端尖直。
2、原生质圆柱体上紧绕着3~4根周浆鞭毛，故运 动活跃，运动方式多样。 3、G-，但不易着色。Fantana镀银染色呈棕褐色。 4、在无活细胞的人工培养基中难培养，生长慢。 5、抵抗力极弱，对温度和干燥特别敏感；对青霉 素、四环素、红霉素等抗生素敏感。在干燥条件下不易 生存。肥皂水和一般消毒剂以及加温42℃以上均极易将其 杀灭。
假阳性问题
• 假阳性：非梅毒患者的血清反应呈阳性 ①技术性假阳性
– 由于标本的保存不当（如细胞污染或溶血）、 试剂质量差或过期、或实验室操作错误所造成。
②生物学假阳性
– 是由于患者有其他疾病或生理状态发生变化， 使梅毒血清试验出现阳性
急性生物学假阳性反应的疾病
风疹 水痘 传染性单核细胞增多症 传染性肝炎 上呼吸道感染 肺炎球菌性肺炎 病毒性肺炎 牛痘疹
临床意义
• 作为RPR初筛阳性标本的确证试验。 • 不能作为疗效观察的指标。 • 阳性不能区分既往感染和现症感染，应结 合RPR结果进行诊断。
假阳性问题
• 存在交叉反应的抗体 • 处理方法：用Reiter株吸收血清中交叉反应 的抗体。
老年人抗体阳性的问题
• 1、真阳性 • 2 、假阳性：这些老年患者所患的基础疾病 可能使机体释放诱导产生抗类脂抗体和/或 抗T.pallidum抗体的交叉抗原；
梅毒螺旋体抗原血清试验
（1）FTA-ABS
（2）TPPA/ TPHA （3）TP-ELISA （4）发光法 （5）胶体金法
暗视野显微镜检查
• 标本类型：梅毒硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等 皮损的渗出液、淋巴结穿刺液 • 方法：暗视野显微镜下查找梅毒螺旋体。 • 结果：典型的梅毒螺旋体呈白色发光, 其螺旋 较密而均匀。运动方式： ①伸缩其螺旋间距离 而移动（主要方式）②蛇行式③旋转式 • 评价：
非梅毒螺旋体抗原血清学试验
• 原理（抗心磷脂抗体）：
– 人体感染了梅毒螺旋体后，组织受到破坏，释放出来 的一种类脂成分，与梅毒螺旋体结合形成完全抗原， 刺激机体产生类脂质抗体（反应素）。 – 主要是IgM和IgG混合抗体。 • 抗体产生时间
– 感染3周-4周，硬下疳出现1周-2周 – 一般在感染后5～7周（或硬下疳出现后2～3周）产生。
①. 简单、可靠。 ②. 早期：硬下疳（梅毒血清学试验仍阴性）。 ③. 阴性不能排出患梅毒的可能性
暗视野显微镜下的梅毒螺旋体
镀银染色检查
• 基本原理：梅毒螺旋体具有亲银性，可被银溶 液染色，从而可以在镜下观察到梅毒螺旋体 • 结果：棕褐色的梅毒螺旋体
病原学检查的临床意义
• 病原学方法直接镜检到梅毒螺旋体，在临 床可确诊梅毒，且具有快速、方便、易操 作的特点。 • 螺旋体检查是诊断早期现症梅毒的最佳方 法，对于患者的早期诊断、及时治疗、预 后和尽早切断传染源都有十分重要的意义。 • 如未见到梅毒螺旋体，并不能排除患梅毒 的可能性。
这是一种生理情况下的生物学假阳性
假阳性发生率较低有报告为0.4%，滴度低。
假阳性问题
• 梅毒假阳性反应的处理
– 技术性假阳性反应一般是由于操作错误引起的 假阳性反应，经过重复试验即可除外。 – 对急性生物学假阳性反应，应做TPHA （TPPA）等试验进行排除。
前带现象
• 原理
– 指二期梅毒患者非梅毒螺旋体抗原血清试验中， 有时血清中存在高浓度的抗体时出现的弱阳性、 不典型或阴性反应的结果。
② 加抗原：
– 将抗原轻轻摇匀，用试剂盒提供的针头加1滴 抗原。
③ 反应：
– 将卡片置梅毒自动旋转仪8分钟立即在亮光下 观察结果。
检测流程（定量）
① 稀释液准备：
– 在圈内加入50μl生理盐水（根据需要确定稀 释度），勿将盐水涂开。
② 加样：
– 吸取50μl血清(浆)与各圈中盐水作系列稀释， 并涂布满整个圈内。
免疫性
• 特异性抗体
–感染2周后产生特异性IgM抗体, 不能通过胎盘 –感染4周后出现特异性IgG抗体,可通过胎盘
• 非特异性抗体
–刺激机体产生抗心磷脂抗体/反应素 –RPR 和 TRUST等方法可检出：5～7周或硬下疳后 2～3周
• 完全治愈的早期梅毒可再感染
梅毒的分期
梅毒的诊断
• 梅毒的诊断
• TPPA试验原理与TPHA试验基本相同
– TPPA试验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒 – TPHA试验中梅毒螺旋体致敏羊红细胞
• 特点
– 梅毒螺旋体(Nichols株)全抗原
操作步骤
1. 试剂准备：试验前将试剂和待检标本恢复到室温。 2. 加稀释液：每份样本做4孔，加标本稀释液加至微量反应 板孔内，第1孔100微升，第2～4孔各25微升。 3. 样本稀释：取血清25微升加至第1孔，混匀后取25微升至 第2孔，混匀后取25微升至第3孔，混匀后取25微升至第4 孔，混匀后弃去25微升。 4. 加对照液：第3孔加未致敏颗粒25微升，第4孔加致敏颗粒 25微升。 5. 混合：将反应板置振荡器振荡30秒。 6.反应：置有盖湿盒，孵育2 h，或放4℃冰箱过夜观察结果。
③ 重复定性试验后两步。
凝集反应强度分级：
3+～4+：圆圈内出现中到大的红色絮状物， 液体清亮。
2+：圆圈内出现小到大的红色絮状物，液体 较清亮。 1+：圆圈内出现小的红色絮状物，液体浑浊。
—：圆圈内仅见红色集中于中央一点或均匀 分散。
RPR定量ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ验
• 中等至大的凝块为阳性（圈4和7）有明确 但很小的凝块为弱阳性（圈2和3）颗粒均 匀分布（圈1,5,8-10）或稍粗糙（圈6）为 阴性
免疫层析
临床应用
• 梅毒螺旋体试验的作用是作为证实试验 • 它们可以帮助确定非梅毒螺旋体试验阳性 反应是真阳性还是假阳性。 • 一旦这些试验呈阳性，则患者终身阳性。
方法特点
• 特异性强，敏感性高
– 很少出现假阳性。据统计，在普通人群中，有 1%的生物学假阳性发生。 ① 如系统性红斑狼疮患者血清可使FTA-ABS试 验呈假阳性反应，但大多数病例中螺旋体呈串 株状荧光。 ② 传染性单核细胞增多症，可能由于嗜异性抗体 所致，可使TPHA呈假阳性。 ③麻风患者也可使特异试验呈阳性。
临床意义
• 早期梅毒（一期、二期）经足量规则抗梅毒治疗 后3个月，VDRL试验抗体滴度下降2个稀释度，6 个月下降4个稀释度。
– 一期梅毒1年后转为阴性 – 二期梅毒2年后转为阴性。 – 晚期梅毒治疗后血清滴度下降缓慢，2年后约50%病人 血清反应仍为阳性
• 早期梅毒硬下疳出现1周-2周后，血清可呈阳性。 • 经治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为疗效 观察、判愈、复发或再感染的指征。
• 处理
– 将血清稀释后再进行试验。
血清固定
• 耐血清性（血清固定）
– 指经抗梅毒治疗后，非梅毒螺旋体抗原血清试 验在一定时期内不阴转。早期的耐血清性常与 治疗量不足或不规则治疗、复发、再感染或有 神经系统梅毒等因素有关。
梅毒螺旋体抗体血清学试验：
• 检测血中特异性抗梅毒螺旋体特异蛋白为 抗原的抗体（ IgG 和IgM ）。 • 特异性IgM型抗梅毒螺旋体抗体，感染2周 后即可测出。
L/O/G/O
梅毒的实验室检查
梅毒的定义
梅毒是一种慢性传染性疾病。 是由梅毒螺旋体（苍白螺旋体）引 起，患病后病程漫长，早期侵犯生 殖器和皮肤， 晚期侵犯全身各器 官，并生多种多样的症状和体征， 病变几乎能累及全身各个脏器。
病原体
• 为梅毒螺旋体，属于密螺旋体属，苍白密螺 旋体苍白亚种(Treponema pallidum subspecies pallidum)
• 抗体作用
– 无保护作用，治疗监测。未经治疗的病人，其血清内的反应素可 长期存在。经正规治疗后，反应素可以逐渐减少至转为阴性。
梅毒自动旋转仪
四种非特异性试验方法比较
VDRL
抗原成分 抗原稳定性
血清试验前处理
USR
稳定4℃ ～8 ℃ 保存12个月
RPR
同前+EDTA+氯化 胆碱+活性炭
稳定4℃ ～8 ℃ 保存12个月
– 早期梅毒（一期、二期和早期隐性梅毒）和晚 期梅毒（三期和晚期隐性梅毒） – 必须依靠病史、症状及实验检查进行综合分析
• 梅毒的实验室检查
– 结果对诊断有决定性意义
常用梅毒实验室检测方法
• 病原学检测法：
（1） 暗视野显微镜检查 （2） 镀银染色检查
• 血清学检测法：
非梅毒螺旋体抗原血清试验
（1）VDRL(性病研究实验室试验)：需灭活 （2）USR（不加热血清反应素试验） （3）RPR(加速血浆反应素环状卡片试验) （4）TRUST(甲苯胺红不加热血清试验)