紫外分光光度计ppt课件
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紫外可见分光光度计的使用课件PPT
定义与工作原理
定义
紫外可见分光光度计是一种基于 物质对紫外可见光的吸收特性进 行物质定量和定性分析的仪器。
工作原理
通过测量物质在特定波长下的吸光 度，利用朗伯-比尔定律（A=εbc） 计算物质的浓度。
类型与特点
类型
单光束分光光度计、双光束分光光度 计和双波长分光光度计。
特点
具有较高的测量精度和稳定性，广泛 应用于化学、生物学、医学、环境监 测等领域。
每次使用后记录仪器使用 情况，包括测试样品、测 试波长、测试结果等，以 便后续分析。
常见故障排除
波长不准确
检查仪器是否正确设置波长，并 确保仪器没有受到强烈震动或磁
场干扰。
读数不稳定
检查样品是否均匀，仪器是否处于 稳定状态，以及是否有外界干扰。
仪器无响应
检查电源是否正常，仪器是否处于 正常工作状态，以及是否有硬件故 障。
THANKS
开始测量
点击开始按钮，仪器自动扫描并记录 数据。
数据处理
将测量数据导入计算机进行进一步处 理和分析。
实验操作技巧
保持样品池清洁
定期清洗样品池，避免残留物对测量结果的 影响。
选择合适的标准物质
选择与待测样品性质相近的标准物质进行校 准，提高测量准确性。
控制环境因素
确保实验室内温度、湿度和光照等环境因素 稳定，以减小误差。
多次测量求平均值
为减小误差，可以对同一样品进行多次测量， 取平均值作为最终结果。
常见问题及解决方案
波长校准不准确
可能是由于仪器内部棱镜或光路不干 净导致。解决方法是清洁仪器内部并 重新进行波长校准。
测量数据不稳定
数据处理软件崩溃
可能是由于计算机内存不足或软件 bug导致。解决方法是关闭不必要的 程序，释放计算机内存，或更新数据 处理软件。
紫外分光光度计PPT课件
紫外分光光度计的定义
描述紫外分光光度计的基本原理和结 构组成。
简要介绍紫外分光光度计的发展历程 和应用领域。
解释紫外分光光度计在光谱分析中的 重要地位和作用。
02
紫外分光光度计的原理
吸收光谱的基本概念
01
02
03
吸收光谱
物质与辐射能相互作用时， 物质对不同波长的光吸收 程度的特性曲线。
吸收光谱的产生
土壤和固体废弃物分析
通过测量土壤和固体废弃物中有机污染物的紫外 光谱，可以评估其对环境和生态的影响。
05
结论
紫外分光光度计的重要性和应用前景
重要性
紫外分光光度计是一种用于测量物质对紫外线的吸收或发射的仪器，广泛应用于化学、生物学、医学等领域。它 能够提供定性和定量的分析结果，对于物质成分的鉴定、含量测定以及化学反应的动力学研究等方面具有重要作 用。
物质中的电子在不同能级 间跃迁时，会吸收特定波 长的光，形成吸收光谱。
吸收光谱的形状
由电子跃迁的类型、能级 差以及物质的组成和结构 决定。
紫外吸收光谱的产生
紫外吸收光谱
物质在紫外波段产生的 吸收光谱。
电子跃迁
分子中的电子在不同能 级间跃迁，产生紫外吸
收光谱。
跃迁类型
伸缩振动跃迁、弯曲振 动跃迁、电子跃迁等。
THANKS
紫外分光光度计ppt 课件
目 录
• 引言 • 紫外分光光度计的原理 • 紫外分光光度计的种类和用途 • 紫外分光光度计的应用实例 • 结论
01
引言
目的和背景
介绍紫外分光光度计 在科学研究中的应用 和重要性。
强调本课件对于了解 和使用紫外分光光度 计的重要意义。
分析当前紫外分光光 度计市场和技术发展 趋势。
紫外-可见分光光度法 PPT课件
若化合物在某波长处有强的吸收峰，而所含杂质在该波长处 无吸收或吸收很弱，则化合物的吸光系数将降低，若杂质在
该波长有比此化合物更强的吸收，将会使化合物的吸光系数
增大，且会使化合物的吸收光谱变形。（举一个间接的例子
吧，前一段时间快检车抽到一批吗叮啉，红外快检认定是假
药，送到所里以后，我们用薄层法做了一下，发现样品也显
百分吸收系数 377
吸收度值 277nm 0.461
0.461×0.2609×100.00×200.00
含量=-----------------------------------×100%=96.97%
377×0.0658×5.00×0.2×100
二、多组分定量测定 解线性方程组法 等吸收双波长消去法 系数倍率法 导数光谱法
面神经麻痹的病理变化早期主要为面神经水肿髓鞘和轴突有不同程度的变性以在茎乳突孔和面神经管内的部分尤为显著w五测定时除另有规定外应以配制供试品溶液的同批溶剂为空白对照测定吸光度实际上是透光率而在测定光强弱时不只是由于被测物质的吸收所致还有溶剂和容器的吸收光的色散和界面反射等因素都可使透射光减弱用空白对照可排除这些因素的干扰
由上图可以看出吸收光谱的特征： ⑴曲线上“A”处称最大吸收峰，它所对应的波长称 最大吸收波长，以λmax表示。 ⑵曲线上“B”处有一谷，称最小吸收，所对应的波 长，称最小吸收波长，以λmin 表示。 ⑶曲线上在最大吸收峰旁边有一小峰“C”，形状像 肩的部位，称肩峰，以λsh表示。
⑷在吸收曲线的波长最短的一端，曲线上“D”处， 吸收相当强，但不成峰形，此处称为末端吸收。
利用物质的吸收光谱进行定量、定性及结构 分析的方法称为吸收光谱分析法。紫外－可 见吸收光谱是一种分子吸收光谱，它是由于 分子中原子的外层电子跃迁而产生的。
紫外分光光度计分析PPT课件
④重复打开样品盖调“0”和盖上样品盖 “100%”，直至仪器稳定。
⑤ 盖上样品盖，拉动拉杆，测量待测液并记录 读数。
⑥ 测量完毕后，取出吸收池，洗净后倒置晾干， 各旋钮归位，关闭电源。
（2）754型紫外-可见分光光度计 ① 开机 打开样品室暗箱盖，接通电源，仪器
进入自检状态，预热20min后，仪器进入工 作状态。
写在最后
成功的基础在于好的学习习惯
The foundation of success lies in good habits
42
谢谢聆听
·学习就是为了达到一定目的而努力去干, 是为一个目标去 战胜各种困难的过程,这个过程会充满压力、痛苦和挫折
Learning Is To Achieve A Certain Goal And Work Hard, Is A Process To Overcome Various Difficulties For A Goal
2）在吸收池中装入相同的溶剂，吸光度相同 即可成套，若不同可求出修正值后使用。
分光光度计的使用
（1）721型可见分光光度计 ① 检查各调节钮处于起始位置，接通电源，打
开样品室暗箱盖，预热20min。
② 选择调节至所需用波长，并调节相关波长的 灵敏档。
③ 用调“0”电位器调整电表于T=0%，安放 参比溶液（第一格）和待测液，盖上样品 室盖，拉动拉杆，使参比溶液在光路上时 调节“100%”电位器，使电表指针在 T=100%
第二节 紫外-可见分光光度计
1 仪器的基本组件
五大部件：
光源 单色器
样品装置钨丝灯：最常用的可见光光源，发射波长：
325nm～2500nm；
使用范围：320nm～1000nm。
⑤ 盖上样品盖，拉动拉杆，测量待测液并记录 读数。
⑥ 测量完毕后，取出吸收池，洗净后倒置晾干， 各旋钮归位，关闭电源。
（2）754型紫外-可见分光光度计 ① 开机 打开样品室暗箱盖，接通电源，仪器
进入自检状态，预热20min后，仪器进入工 作状态。
写在最后
成功的基础在于好的学习习惯
The foundation of success lies in good habits
42
谢谢聆听
·学习就是为了达到一定目的而努力去干, 是为一个目标去 战胜各种困难的过程,这个过程会充满压力、痛苦和挫折
Learning Is To Achieve A Certain Goal And Work Hard, Is A Process To Overcome Various Difficulties For A Goal
2）在吸收池中装入相同的溶剂，吸光度相同 即可成套，若不同可求出修正值后使用。
分光光度计的使用
（1）721型可见分光光度计 ① 检查各调节钮处于起始位置，接通电源，打
开样品室暗箱盖，预热20min。
② 选择调节至所需用波长，并调节相关波长的 灵敏档。
③ 用调“0”电位器调整电表于T=0%，安放 参比溶液（第一格）和待测液，盖上样品 室盖，拉动拉杆，使参比溶液在光路上时 调节“100%”电位器，使电表指针在 T=100%
第二节 紫外-可见分光光度计
1 仪器的基本组件
五大部件：
光源 单色器
样品装置钨丝灯：最常用的可见光光源，发射波长：
325nm～2500nm；
使用范围：320nm～1000nm。
紫外可见分光光度PPT(完整版)课件
因此，可能的跃迁为σ → σ*、π→ π*、n→ σ* n→ π*等。
2023/10/14
10
Wavelength
2023/10/14
11
て
~104 10～100 100～300
k
~200 200～800
<200 ~150(<200)
Amax(nm)
<U<M<M<xD<U<*0<1<*1<0<*0<0
(red shift 或bathochromic
shift) 指取代基或溶剂效应引起吸收带 向长波方向的移动；
蓝移 ( blue shift 或 hypsochron sh ift) 或紫移： 吸收带向短
波方向移动
2023/10/14
16
常见助色团及其助色效应(红移)λ
-F<-Cl<-Br<-OH<-OCH₃<-N NHCH₃<-N(CH₃)₂<-NHC₆H₅<
6
分子中电子能级、振动能级和转动能级示意图
2023/10/14
不是任一波长的 光都可以被某一物质 所吸收，由于不同物 质的分子其组成结构 不同，它们所具有的 特征能级也不同，故 能级差不同，而各物 质只能吸收与它们内 部能级差相当的光辐 射，所以，不同物质 对不同波长的光吸收 具有选择性。
7
物质颜色与光吸收的关系
2023/10/14
29
四、 无机化合物的吸收光谱
金属离子 金属离子
配位体
d-d配位场跃迁
配位体
配位体π- π*
金属离子
配位体
电荷转移
2023/10/14
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Wavelength
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11
て
~104 10～100 100～300
k
~200 200～800
<200 ~150(<200)
Amax(nm)
<U<M<M<xD<U<*0<1<*1<0<*0<0
(red shift 或bathochromic
shift) 指取代基或溶剂效应引起吸收带 向长波方向的移动；
蓝移 ( blue shift 或 hypsochron sh ift) 或紫移： 吸收带向短
波方向移动
2023/10/14
16
常见助色团及其助色效应(红移)λ
-F<-Cl<-Br<-OH<-OCH₃<-N NHCH₃<-N(CH₃)₂<-NHC₆H₅<
6
分子中电子能级、振动能级和转动能级示意图
2023/10/14
不是任一波长的 光都可以被某一物质 所吸收，由于不同物 质的分子其组成结构 不同，它们所具有的 特征能级也不同，故 能级差不同，而各物 质只能吸收与它们内 部能级差相当的光辐 射，所以，不同物质 对不同波长的光吸收 具有选择性。
7
物质颜色与光吸收的关系
2023/10/14
29
四、 无机化合物的吸收光谱
金属离子 金属离子
配位体
d-d配位场跃迁
配位体
配位体π- π*
金属离子
配位体
电荷转移
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差示分光光度法
• 普通分光光度法一般只适于测定微量组分， 当待测组分含量较高时，将产生较大的误差 。需采用示差法。 • 即提高入射光强度，并采用浓度稍低于待 测溶液浓度的标准溶液作参比溶液。 • 设：待测溶液浓度为cx，标准溶液浓度为 cs(cs < cx)。则： • Ax= εb cx As = εb cs • ΔＡ＝Ａx －Ａs =εb(cx － cs ）=εbΔc • 测得的吸光度相当于普通法中待测溶液与 标准溶液的吸光度之差ΔＡ。示差法测得的 吸光度与Δc呈直线关系。由标准曲线上查得 相应的Δc值，则待测溶液浓度cx ： • cx = cs + Δc
紫外-可见分光光谱的应用
1、在鉴别中的应用 （1）对比吸收光谱特征参数； （2）比较吸收度比值的一致性； （3）对比吸收光谱的一致性。 2、在杂质检查中的应用 3、在含量测定中的应用 （1）对照品比较法； （2）吸收系数法； （3）计算分光光度法。
1.对照品比较法
Cx—供试品溶液的浓度 CR—对照品溶液的浓度 Ax —供试品溶液的吸收度 AR —对照品溶液的吸收度 2.吸收系数法
双波长分光光度法
• 不需空白溶液作参比；但需要两个单色器获得两 束单色光(λ1和λ2)；以参比波长λ1处的吸光度Aλ1 作为参比，来消除干扰。在分析浑浊或背景吸收 较大的复杂试样时显示出很大的优越性。灵敏度 、选择性、测量精密度等方面都比单波长法有所 提高。 • ΔＡ＝A λ2 －A λ1 ＝（ελ2 －ελ1 ) b c • 两波长处测得的吸光度差值ΔＡ与待测组分浓度 成正比 • （例子：课本366页）
紫外分光光度计使用注意事项 • 1 仪器的校正和检定 • 1.1 波长 • 由于温度变化对机械部分的影响，仪器的 波长经常会略有变动，因此除应定期对所 用的仪器进行全面校正检定外，还应于测 定前校正测定波长。
紫外分光光度测定方法
• 普通测定分光光度法
• 1.单组分的测定 • 通常采用 A-C 标准曲线法定量测定。 • 2.多组分的同时测定 • ⑴若各组分的吸收曲线互不重叠，则可在各自 最大吸收波长处分别进行测定。这本质上与单组 分测定没有区别。 • ⑵若各组分的吸收曲线互有重叠，则可根据吸 光度的加合性求解联立方程组得出各组分的含量 。 • Aλ1= εaλ1bca ＋ εbλ1bcb • Aλ2= εaλ2bca ＋ εbλ2bcb
导数分光光度法
• 导数分光光度法在多组分同时测定、浑浊样品分析 、消除背景干扰、加强光谱的精细结构以及复杂光 谱的辨析等方面，显示了很大的优越性。 • 利用吸光度(或透光度)对波长的导数曲线来进行分 析： • Ｉ＝Ｉ0 e-εbc • 假定入射光强度Ｉ0 在整个波长范围内保持恒定： • dI 0 /dλ＝0 • 则：dI/dλ＝－Ｉ0 bc e -εbc dε/dλ • ＝－Ｉ0 bc dε/dλ • （例子：课本233页）
1 = lo g = Beer-Lambort 定律 A E c l T *A为吸收度；
*T为透光率； *E为吸收系数（以 E *c为溶液浓度； *l为样品总厚度。
1% 1cm
表示，溶液浓度为1%（g/ml），厚度为1cm时的吸光度值）
适用条件：入射光为单色光 溶液是稀溶液 固体、 液体和气体样品在同一波长 下，各组分吸光度具有加和性
紫外分光光度计基本原理仪器源自要部件主要应用基本原理
• 概述：紫外-可见分光光度法是通过被测物 质在紫外-可见光区的特定波长或一定波长 范围内光的吸收度，对该物质进行定性和 定量分析的方法。主要用于药品的鉴别、 检查和含量测定。 • 范围： 紫外光区（200~400nm）
可见光区（400~760nm）
例 苯磺舒：用含盐酸的乙醇[取盐酸溶液（9-1000）2ml，加乙醇制 成100ml]制成没1ml中含20ug的溶液，在225nm与249nm的波长 处有最大吸收，在249nm波长处的吸收度为0.67 。
甾体激素类药物：丙酸倍氯米松的乙醇溶液（20ug/ml），在 239nm的波长处应有最大吸收，吸光度为0.57~0.60;在239nm与 263nm波长处的吸光度比值应为2.25~2.45
①杂质的无关吸收再310~340nm的波长范围内几乎呈一条直 线，且随波长的增大吸光度下降。
②物质对光吸收呈加和性的原理，即在某一样品的吸收曲线 上，各波长的吸光度是维生素A与杂质吸光度的代数和，因而吸收 曲线也是二者吸收的叠加。
3、药物的鉴别
对比吸收光谱特征数据 对比吸收度（或吸收系数）的比值 对比吸收光谱的一致性
2、药物的含量测定
如巴比妥类药物的含量测定（巴比妥类药物在碱性介质中 电离为具有紫外吸收特征的结构）、芳酸及其脂类药物含量测定、 维生素A含量测定（在325~328nm的波长范围内有最大吸收）等。
三点校正法
本方法是在三个波长处测得吸光度，根据校正公式计算吸光 度校正值后，再计算含量。其原理主要基于以下两点：
仪器主要部件
光源 单色器 吸收池 检测器
信号显 示系统
光
源: 常采用氘灯和钨卤灯 钨灯最适宜的使用波长范围为320～1000nm。 氘灯能发出光的波长范围一般为190～400nm 单色器：棱镜或光栅 吸收池：玻璃或石英吸收池 检测器：光电池、光电管、光电倍增管及二极管阵列检测器
仪器分类
• • • • 单光束紫外可见分光光度计 准双光束紫外可见分光光度计 双光束紫外可见分光光度计 双波长紫外可见分光光度计
C=A/（E1%1cm· L）
Cx=（Ax/AR）CR
主要应用
1、药物的杂质检查
利用药物与杂质对光的选择性吸收性质的差异，若药物在杂质的 最大吸收波长处没有吸收，则可在此波长处测样品溶液的吸收度，通 过控制样品溶液吸收度来控制杂质的量。 例：地蒽酚中二羟基蒽醌的检查 二羟基蒽醌的三氯甲烷溶液 在432nm处有最大吸收，而 地蒽酚在该处几乎无吸收。
4.结构分析
• 1.判别物质的异构体，如互变异构体， 顺反异构体，开链和成环异构体，旋 光异构体，空间异构体等。反式异构 体空间位阻小，共轭程度较完全。最 大吸收峰波长，最大摩尔吸收系数， 大于顺式。 • 2.推测物质的共轭体系和部分骨架 • 一般需与色谱，红外，质谱，波谱等 多种仪器联合作物质的结构分析。