3分光光度计PPT
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分光光度计及其操作ppt课件
0.575
光源
单色器 吸收池 接收器
以下分别介绍各部件
6
为了规范事业单位聘用关系,建立和 完善适 应社会 主义市 场经济 体制的 事业单 位工作 人员聘 用制度 ,保障 用人单 位和职 工的合 法权益
1. 光源 用6~12V白炽灯 作用:提供光强一定的复合光(白光) 性能要求: 亮度稳定(以使入射光通量强度 故需电源电压稳定, 一般用稳压器提供稳压。
误差越小。 4.分光光度法,其他条件一定,ε越大,测定的灵
敏度越高。 5.朗伯-比尔定律不仅使用于可见分光光度法,也使
用于紫外分光光度法。 6. 透光率T与吸光物质浓度成反比。
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为了规范事业单位聘用关系,建立和 完善适 应社会 主义市 场经济 体制的 事业单 位工作 人员聘 用制度 ,保障 用人单 位和职 工的合 法权益
721型分光光度计 应用
1. 测定组分浓度与含量: 依据A= -lgT= bc
2. 测定配合物的组成
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为了规范事业单位聘用关系,建立和 完善适 应社会 主义市 场经济 体制的 事业单 位工作 人员聘 用制度 ,保障 用人单 位和职 工的合 法权益
小结
1.熟练掌握分光光度计的基本组成 部件 2.了解分光光度计的基本组成部件的作用 3.明确参比溶液的作用
作业:P232-10.12 15
自测题 为了规范事业单位聘用关系,建立和完善适应社会主义市场经济体制的事业单位工作人员聘用制度,保障用人单位和职工的合法权益 判断题 1.可见分光光度法所用参比溶液的作用是调A=0.00 2.可见分光光度法测定KMnO4时,应选紫色光为
入射光。 3.光度分析中,测定的吸光度越大,测定结果的相对
光源 参比
样品
紫外可见分光光度计的使用课件PPT
定义与工作原理
定义
紫外可见分光光度计是一种基于 物质对紫外可见光的吸收特性进 行物质定量和定性分析的仪器。
工作原理
通过测量物质在特定波长下的吸光 度,利用朗伯-比尔定律(A=εbc) 计算物质的浓度。
类型与特点
类型
单光束分光光度计、双光束分光光度 计和双波长分光光度计。
特点
具有较高的测量精度和稳定性,广泛 应用于化学、生物学、医学、环境监 测等领域。
每次使用后记录仪器使用 情况,包括测试样品、测 试波长、测试结果等,以 便后续分析。
常见故障排除
波长不准确
检查仪器是否正确设置波长,并 确保仪器没有受到强烈震动或磁
场干扰。
读数不稳定
检查样品是否均匀,仪器是否处于 稳定状态,以及是否有外界干扰。
仪器无响应
检查电源是否正常,仪器是否处于 正常工作状态,以及是否有硬件故 障。
THANKS
开始测量
点击开始按钮,仪器自动扫描并记录 数据。
数据处理
将测量数据导入计算机进行进一步处 理和分析。
实验操作技巧
保持样品池清洁
定期清洗样品池,避免残留物对测量结果的 影响。
选择合适的标准物质
选择与待测样品性质相近的标准物质进行校 准,提高测量准确性。
控制环境因素
确保实验室内温度、湿度和光照等环境因素 稳定,以减小误差。
多次测量求平均值
为减小误差,可以对同一样品进行多次测量, 取平均值作为最终结果。
常见问题及解决方案
波长校准不准确
可能是由于仪器内部棱镜或光路不干 净导致。解决方法是清洁仪器内部并 重新进行波长校准。
测量数据不稳定
数据处理软件崩溃
可能是由于计算机内存不足或软件 bug导致。解决方法是关闭不必要的 程序,释放计算机内存,或更新数据 处理软件。
UV-3型紫外分光光度计的原理及应用
紫外分光光度计应用系统
样品测定
1.在定量分析窗口中,单击“测量方法” 输入测量点数和相应的波长值及K0,K1 值,即可完成标准曲线的建立。
样品测量
2.单击“样品测量”选项进入测 试界面。
3.将参比溶液放入光路并校满刻度
紫外分光光度计应用系统
样品测定
4.将待测样品放入多联池架中,样品走到光路,单击工具栏中“ ” 弹出“样品测试”窗口,测试完成后输入样品名称,单击“确认” 添加到样品测试列表中,单击“取消”放弃本次测量值。
紫外可见分光光度计
内容导览
1
UV-3紫外可见分光光度计基本介绍
2
紫外可见分光光度计应用系统简易操作
UV-3紫外可见分光光度计
是分析试验行业中重要的质量控制仪器 之一,是常规实验室的必备仪器。
波长范围宽 190-1100nm 特 点
灵敏度高 功能强大
UV-3紫外可见分光光度计
分光光度法分析的原理
紫外分光光度计应用系统
应用系统操作(标准曲线的建立)
3.单击“标准样品”选项进入标样 测试界面.
4.将参比溶液放入光路,点击工具栏B 图标校满刻度。
紫外分光光度计应用系统
应用系统操作(标准曲线的建立)
5.将待测标准样品放入多联池架中
6.将待测标样走到光路中,单击“启动”按钮弹出 “标准样品测试”窗口,测试完成后输入标准样品 浓度和样品名称,单击“确认”添加到结果测试列 表中,单击“取消”放弃本次测量。
7.重复步骤6 完成所有标样测试,标准 曲线建立完成.
紫外分光光度计应用系统
应用系统操作(标准曲线的建立)
8.在“拟合参数”中记录K0,K1值。 如图1 9.单击“拟合曲线”选项可查看到建立 的标准曲线和拟合方程,图二示
分光光度计的发展及趋势课件
多功能集成
除了基本的物质检测和分析,还集成 了多种功能,如光谱解析、化学计量 学等。
微型化阶段
微型化设计
分光光度计的体积逐渐减小,便 于携带和使用。
集成化传感器
集成化传感器的发展,提高了分光 光度计的测量精度和响应速度。
应用领域
在现场快速检测、野外调查等领域 得到广泛应用。
CHAPTER
03
分光光度计的未来趋势
工业生产中的分光光度计需要具备高 稳定性、可靠性和易用性,以满足工 业生产的特殊要求。
随着工业4.0和智能制造的推进,分光 光度计在工业生产中的应用将更加广 泛和深入,能够实现实时监测、智能 控制和优化生产等目标。
医疗诊断的进步
分光光度计在医疗诊断中主要用 于生化分析和免疫分析等领域, 能够对患者的血液、尿液和其他
随着科技的不断进步,分光光度 计面临技术更新换代迅速、技术 门槛高的挑战。
对策
加大研发投入,持续推进技术创 新,提高产品的技术含量和附加 值,保持竞争优势。
市场需求的挑战与对策
挑战
市场需求多样化,不同领域和行业对 分光光度计的性能、规格和功能要求 各异,导致产品定制化程度高,生产 成本增加。
对策
加强市场调研,了解客户需求,制定 差异化产品策略,提高产品适应性和 竞争力。
它利用光的吸收、反射、散射等特性,通过测量特定波长的光强衰减程度,从而确 定目标物质的浓度。
分光光度计广泛应用于化学、生物、环境监测等领域,是实验室中常用的分析仪器 之一。
分光光度计的原理
分光光度计的原理基于朗伯-比 尔定律,即物质对光的吸收程度 与物质浓度、光路长度以及光的
波长成正比。
当一束特定波长的光通过溶液时 ,一部分光被吸收,一部分光被 散射,只有小部分光能够透过溶
超微量分光光度计ppt课件.ppt
仪器应用范围
K5500型微量分光光度计可用于测量: 核酸:核酸样品的浓度和纯度,包括双链DNA,单链
DNA和RNA。 蛋白质:①A280测蛋白质样品浓度,包括1Abs =
1mg/mL,BSA,IgG,Lysozyme;②试剂盒法 (Lowry法、BCA法、Bradford法)测定蛋白质浓度, 软件自动绘制标准曲线,直接给出浓度值。 常规紫外/可见全波长扫描:可进行紫外/可见全波长 (200~850nm)扫描。 细胞溶液:细胞溶液密度的测定。
样品需要稀释,测量浓 电磁阀调节),样品无需稀释,测量
度范围小Βιβλιοθήκη 范围可达到常规分光光度计的50倍
与传统分光光度计的区别与优势
传统分光光度计
●灯源一般由氘灯(紫外) 和钨灯(可见)组成 寿命短 ●需要预热半个小时以上
K5500微量分光光度计
●氙气闪光灯为灯源 寿命长,性能稳定
●不需要预热,可随时检测
●显示吸光度值,不显示浓 度值
仪器特点
样品用量少(1~2µL)! 无需比色皿! 紫外-可见全波长扫描(200~850nm)! 无需预热,可随时检测! 检测速度快! 直接显示浓度值! 样品无需稀释,可测样品的浓度范围是常规紫外-
可见分光光度计的50倍! 数据统计软件方便容易掌握!
与传统分光光度计的区别与优势
传统分光光度计
样品测量
(1) 以移液枪吸取样品(1~2µL)滴加到检测平台上。 (2 )放下取样臂。 (3) 点击软件界面上的“Measure”按钮,即可得出样品参
数(吸光度和浓度)和图表。 (4 )以干净的吸水纸擦去上下检测平台上的空白对照用溶
剂。
(5) 如需保存图表,可点击“Save Graph”按钮。
分光光度计培训课件页PPT文档
本页仅供参考,具体需详细查阅相应仪器说明书
722型分光光度计的使用操作方法
5、调节T=100% 将盛蒸馏水(或空白溶液,或纯溶剂)的比 色皿放入比色皿座架中的第一格内,并对准光路,把试样室盖子轻 轻盖上,调节透过率“100%”旋钮,使数字显示正好为“100.0”。
6、吸光度的测定 将空白液及测定液分别倒入比色杯3/4处, 用擦镜纸擦清外壁,放入样品室内,将选择开关置于“A”,盖上 试样室盖子,将空白液置于光路中,调节吸光度调节旋钮,使数字 显示为“0.000”。将盛有待测溶液的比色皿放入比色皿座架中的 其它格内,盖上试样室盖,轻轻拉动试样架拉手,使待测溶液进入 光路,此时数字显示值即为该待测溶液的吸光度值。读数后,打开 试样室盖,切断光路。
注意事项
1、该仪器应放在干燥的房间内,使用时放置在坚固平稳的工作 台上,室内照明不宜太强。热天时不能用电扇直接向仪器吹风,防 止灯泡灯丝发亮不稳定。 2、为了防止光电管疲劳,不测定时必须将试样室盖打开,使光 路切断,以延长光电管的使用寿命。 3、取拿比色皿时,手指只能捏住比色皿的毛玻璃面,而不能碰 比色皿的光学表面。 4、比色皿不能用碱溶液或氧化性强的洗涤液洗涤,也不能用毛 刷清洗。比色皿外壁附着的水或溶液应用擦镜纸或细而软的吸水纸 吸干,不要擦拭,以免损伤它的光学表面。
本页仅供参考,具体需详细查阅相应仪器说明书
722型分光光度计的使用操作方法
重复上述测定操作1-2次,读取相应的吸光度值,取平均值 (吸光度值尽可能在0.2-0.8之间)。 7、浓度的测定 选择开关由“A”旋置“C”,将已标定浓度 的样品放入光路,调节浓度旋钮,使得数字显示为标定值,将被测 样品放入光路,此时数字显示值即为该待测溶液的浓度值。 8、关机 比色完毕,切断电源,将比色皿取出洗净,并将比 色皿座架用用软布或软纸擦净。
《分光光度计培训》课件
准备待测的样品,确保样品适用于分光光度计测量。
2
2. 校准和基线
校准仪器并进行基线校正,确保准确的测量结果。
3
3. 光程、波长设置
设置适当的光程和测量波长,以获得准确的吸光度。
4
4. 测量和记录
将样品放入进样系统,测量吸光度并记录结果。
VI. 分光光度计的原理
分光光度计原理基于比较样品吸收的光线强度与参考样品或空白试验的光线强度的差异。这样可 以确定样品中特定物质的浓度。
VII. 分光光度计的应用领域
生物化学
用于测量酶活性、细胞浓度等。
环境科学
用于水质、大气等环境参数测量。
药学
用于药物配方和质量控制。
食品科学
用于食品成分和质量分析。
VIII. 分光光度计的精度和灵敏度
分光光度计具有高精度和灵敏度,可以测量微量物质的浓度和变化,从而在科学研究和质量控制 方面发挥重要作用。
II. 分光光度计的分类
紫外可见分光光度计
用于测量UV和可见光范 围内的吸光度。
红外分光光度计
用于测量红外光范围内 的吸光度。
紫外可见红外分光 光度计
同时覆盖紫外、可见和 红外光范围。
III. 常见的分光光度计
台式分光光度计
适用于实验室和教学环境,具有较高的精度和 灵敏度。
手持式分光光度计
便携、易于携带,适用于野外研究和快速测量。
《分光光度计培训》PPT 课件
这个PPT课件将向您介绍分光光度计的各个方面,包括原理、分类、工作原理 以及应用领域。让我们来一起探索这个精密仪器的世界。
I. 什么是分光光度计
分光光度计是一种用于测量物质溶液中吸光度的仪器。它可以通过分析样品对特定波长的光线的 吸收情况,来确定样品中特定物质的浓度。
分光光度计的使用课堂PPT
透 光 窗
然后盖上盖子。
*
按 MODE 键
(3)调节投射比为 0.000
至投射比(T)灯亮
*
T 方式
“0%”键
按一下“0%”键,此时仪器自动校正后显示 “0.000”。 (有的分光光度计没有黑体,需要在打开试样 室盖(起黑体的作用)的情况下调 T = 0.000)
*
(4)调透射比为 100% 将手柄向操作者方向拉出一档(听到“咔嚓”一 声),此时参比(0 号)溶液进入光路。 按一下“100% T”键, 此时仪器显示“BLA” 表示仪器正在自动校 正,校正完毕后显示 “100.0”。
编 号
0
1
2
3
4
5
6
V标准液/mL
0.00
1.00
2.00
3.00
4.00
5.00
0.00
V试液/mL
0.00
0.00
0.00
0.00
0.00
0.00
5.00
4
4
4
4
4
4
4
V磺基水杨酸/mL
2.00
2.00
2.00
2.00
2.00
2.00
2.00
滴加氨水至黄色后再多加 4 mL 。定容、摇匀,测吸光度。
100% T
B L A
100.0
*
(5)重复(验证)(3)、(4)两步,直至透 射比为 0.000 和 100% 不变。 按“MODE”键至“ABSORBANCE”灯亮(此 时转换到测吸光度功能上)。
*
将手柄向操作者方向再拉出一档(听到“咔嚓” 一声),此时被测(1 号)溶液进入光路。 此时仪器所显示的数值即为 1 号被测溶液的吸光 度值(记录下来)。
分光光度计与分光光度法
γ-射线排成一列,即组成电磁波的波谱,如下图所示。
2.2.1 分光光度计的 光谱范围
包括波长范围为400~760 nm的可见光区和波长范围 为200~400 nm的紫外光区。不同的光源都有其特有的 发射光谱,因此可采用不同的发光体作为仪器的光源。
钨灯的发射光谱:钨灯光源所发出的400~760nm 波长的光谱,光通过三棱镜折射后,可得到由红、橙、 黄、绿、蓝、靛、紫组成的连续色谱;该色谱可作为可 见光分光光度计的光源。
防止有色配合物离解。有效的方法是加入缓冲 溶液(考虑干扰)
在pH=2~3 Fe(ssal)+
紫红色
在pH=4~7 在pH=8~10 在pH>12
Fe(ssal)22Fe(ssal)3 Fe(OH)3
棕橙色 黄色 沉淀
3、温度 4、时间 5、溶剂 6、共存干扰离子的影响及消除
(a) 控制酸度; (b) 加入掩蔽剂; (c) 改变干 扰离子价态; (d) 分离干扰离子。
分
nm的红外光区
光
光
度 计
可见光分光光度计: 测定波长范围为400~760
的
nm的可见光区
分
类
测定波长范围为200~400 紫外分光光度计:
nm的紫外光区
2.2 分光光度计工 作原理
人眼可见的光只占电磁波谱的很小—部分
(400~760nm)。它是一种频率较大的电磁波。电磁
波按频率大小,从频率最小的无线电波到频率最大的
主讲教师:徐文俊 成都大学生物工程系
2005年6月
教学目的:
1. 掌握分光光度法的定义和在实践中的应用; 2. 掌握分光光度计的基本结构和工作原理; 3. 掌握可见光分光光度计的正确使用方法; 4. 掌握紫外分光光度计正确使用方法;
2.2.1 分光光度计的 光谱范围
包括波长范围为400~760 nm的可见光区和波长范围 为200~400 nm的紫外光区。不同的光源都有其特有的 发射光谱,因此可采用不同的发光体作为仪器的光源。
钨灯的发射光谱:钨灯光源所发出的400~760nm 波长的光谱,光通过三棱镜折射后,可得到由红、橙、 黄、绿、蓝、靛、紫组成的连续色谱;该色谱可作为可 见光分光光度计的光源。
防止有色配合物离解。有效的方法是加入缓冲 溶液(考虑干扰)
在pH=2~3 Fe(ssal)+
紫红色
在pH=4~7 在pH=8~10 在pH>12
Fe(ssal)22Fe(ssal)3 Fe(OH)3
棕橙色 黄色 沉淀
3、温度 4、时间 5、溶剂 6、共存干扰离子的影响及消除
(a) 控制酸度; (b) 加入掩蔽剂; (c) 改变干 扰离子价态; (d) 分离干扰离子。
分
nm的红外光区
光
光
度 计
可见光分光光度计: 测定波长范围为400~760
的
nm的可见光区
分
类
测定波长范围为200~400 紫外分光光度计:
nm的紫外光区
2.2 分光光度计工 作原理
人眼可见的光只占电磁波谱的很小—部分
(400~760nm)。它是一种频率较大的电磁波。电磁
波按频率大小,从频率最小的无线电波到频率最大的
主讲教师:徐文俊 成都大学生物工程系
2005年6月
教学目的:
1. 掌握分光光度法的定义和在实践中的应用; 2. 掌握分光光度计的基本结构和工作原理; 3. 掌握可见光分光光度计的正确使用方法; 4. 掌握紫外分光光度计正确使用方法;
分光光度计的使用课件
光的衍射
当光通过障碍物或狭缝时,光线会发生衍射现象。衍射现象会导致光线的方向发 生变化,形成类似于干涉的明暗相间的条纹。分光光度计中的衍射光栅利用光的 衍射原理来分离不同波长的光线。
光的偏振与极化
光的偏振
当光通过某些介质时,其电矢量会相对于传播方向以一定角 度振荡,导致光的偏振现象。偏振现象可用于分析物质的晶 体结构和光学性质。
分光光度计的使用课件
汇报人:
日期:
• 分光光度计基本原理 • 分光光度计基本构造 • 分光光度计使用方法 • 分光光度计实验技术 • 分光光度计应用实例 • 分光光度计维护保养与安全防护
01 分光光度计基本原理
光的吸收与散射
光的吸收
当光通过介质时,介质中的分子或原 子会吸收特定波长的光,导致光的强 度减弱。这种吸收现象可用于分析物 质中的特定成分。
药物代谢研究
通过测量药物在人体内的 吸收和代谢过程,可以研 究其动力学。
医学诊断
某些疾病可以通过测量人 体组织在特定波长下的透 射或反射光谱来进行诊断 。
06 分光光度计维护保养与安全防护
仪器维护与保养
01
02
03
04
仪器表面清洁
保持仪器表面清洁,避免使用 腐蚀性液体擦拭,以免对仪器
造成损害。
光学元件清洁
信号处理器
信号处理器是将检测器输出的电信号进行放大、处理和转换的装置,以便进行后续的数据处理和分析 。
03 分光光度计使用方法
样品制备与测量前的准备
01 02
样品制备
在开始测量之前,需要将待测样品进行适当处理,以适应分光光度计的 测量需求。例如,对于液体样品,可能需要摇匀、稀释或过滤以消除误 差。
误差来源 1. 比色皿不干净,导致吸光度测量值不准确。
当光通过障碍物或狭缝时,光线会发生衍射现象。衍射现象会导致光线的方向发 生变化,形成类似于干涉的明暗相间的条纹。分光光度计中的衍射光栅利用光的 衍射原理来分离不同波长的光线。
光的偏振与极化
光的偏振
当光通过某些介质时,其电矢量会相对于传播方向以一定角 度振荡,导致光的偏振现象。偏振现象可用于分析物质的晶 体结构和光学性质。
分光光度计的使用课件
汇报人:
日期:
• 分光光度计基本原理 • 分光光度计基本构造 • 分光光度计使用方法 • 分光光度计实验技术 • 分光光度计应用实例 • 分光光度计维护保养与安全防护
01 分光光度计基本原理
光的吸收与散射
光的吸收
当光通过介质时,介质中的分子或原 子会吸收特定波长的光,导致光的强 度减弱。这种吸收现象可用于分析物 质中的特定成分。
药物代谢研究
通过测量药物在人体内的 吸收和代谢过程,可以研 究其动力学。
医学诊断
某些疾病可以通过测量人 体组织在特定波长下的透 射或反射光谱来进行诊断 。
06 分光光度计维护保养与安全防护
仪器维护与保养
01
02
03
04
仪器表面清洁
保持仪器表面清洁,避免使用 腐蚀性液体擦拭,以免对仪器
造成损害。
光学元件清洁
信号处理器
信号处理器是将检测器输出的电信号进行放大、处理和转换的装置,以便进行后续的数据处理和分析 。
03 分光光度计使用方法
样品制备与测量前的准备
01 02
样品制备
在开始测量之前,需要将待测样品进行适当处理,以适应分光光度计的 测量需求。例如,对于液体样品,可能需要摇匀、稀释或过滤以消除误 差。
误差来源 1. 比色皿不干净,导致吸光度测量值不准确。
酶标仪、分光光度计实验课件 (2)
紫外分光光度计的基本结构—单色器
它是分光计的心脏部分,是一种将来自于 光源的混合光分解为单色光,并能任意改 变波长的装置,包括分光系统、光路狭缝、 波长调节器等部件。
分光系统-有棱镜和光栅两种,使光源色 散产生宽广光谱。
16
紫外分光光度计的基本结构—单色器
a、棱镜:有玻璃和石英制成, b、光栅:在石英或玻璃上刻上许多等距离
27
紫外吸收法测定蛋白质的含量
由于核酸在280nm也有吸收,对蛋白质测 定有干扰作用,但核酸的最大吸收峰在 260nm若同时测定260nm的光吸收,则通 过计算可消除核酸对蛋白质的影响。
28
紫外吸收法测定蛋白质的含量
其缺点是当待测蛋白质与标准蛋白质中的骆氨 酸和色氨酸残基含量差异较大时会产生一定的 误差,
12
利用标准管计算测定物含量;
将标准与样品分别在相同条件下显色,测定 其吸光度,因是相同物质在相同条件下测定, 故可按下式计算样品的浓度;A样/A标=KC 样L/KC标L A样/A标=C样 /C标
此法适和A-C线性关系良好且通过原点的情 况。
13
紫外分光光度计的基本结构
光源 单色器 吸收池 检测器 信号显示系统
1) 波长扫描功能:用于定性分析。 2)波长编程功能:可同时测量2-8个波长点的
OD值。 3) 时间扫描功能:用于动力学研究。
4)浓度测定功能:用于定量分析。
22
紫外吸收法测定核酸含量
原理:核苷、核苷酸、核酸的组成成分中 都含有嘌呤、嘧啶碱基,这些碱基都具有 共轭双键 (-C=C-C=C- ),能强烈吸收 250 - 290nm 的 紫 外 光 , 其 最 大 吸 收 在 260nm左右。
其主要作用是接受透射光信号变成电能, 必要时加以放大。
相关主题
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主要内容
1 2 3
光谱分析法
分光光度计
实验步骤和要求
722型分光光度计
722型分光光度计操作步骤
1、开机,打开盖板,预温30min;
2、将转换旋钮转至“T”,用“0”旋钮以“空白”调透光度至零; 3、盖上盖板,光路自动打开,用“100”旋钮调透光度至100%, 若不能 调至100%,可调节灵敏度旋钮; 4、将转换旋钮转至“A”,此时吸光度A应为零,若非零,调节“消光零” 旋钮至零;
A
对末知浓度物质测定 时,无需再作标准管 ,据测定管吸光度从
0.8 0.6
●
标准曲线上即可求得
测定物的浓度。
0.4
●0Βιβλιοθήκη 2C标准曲线(浓度-吸光度曲线)
②对比法: 将标准品与待测样品在相同条件下显 色并测定各自的吸光度:
As = abCs; Ax = abCx 由于测定体系温度、厚度及入射光波 长一致,故标准与待测样品a&b值相等, 可用下式比较计算待测样品浓度: Cx=Cs Ax / As
Beer定律:当一适当波长的单色光通过溶液时,若液层厚 度一定,透射光的强度随着溶液浓度的增加而成指数函数 减少,即 It=Io*10-k2c 其吸光度与溶液浓度成正比。 式中c为物质的量浓度(或质量浓度),k2为与吸光物质种 类、溶剂、入射光波长、液层厚度和溶液温度有关的常数。 Beer定律仅适用于单色光。
如果同时考虑溶液浓度C 和液层厚度b对光吸收的影响, 将Lambert和Beer定律合并,用a取代k1和k2 两个常数则可以 推出 It=Io*10-k1b It=Io*10-k2c
It=Io.10-abc
a为吸光系数,与入射光的波长和溶液的性质有关,为常数;
b为液层厚度;
c为溶液浓度。
入射光 I0
E=hu=hc/l
近红外光
中红外光 远红外光 微波 无线电波
0.76~2.5um
2.5~5.0um 5.0~1000um 0.1~100cm 1~1000m
物质的颜色与光的关系
完全吸收
完全透过
吸收黄色光
对溶液来说,溶液呈现不同的颜色,是由于
溶液中的质点(分子或离子)选择性的吸收某种颜
色的光所引起的。如果各种颜色的光透过程度
光源: 可见和紫外分光光度计装有两种光源灯泡: 钨丝灯,产生可见光; 氢弧(氘)灯,产生紫外线。
由于玻璃吸收紫外线,所以氢弧灯的灯管多用石英制成, 或在灯管上设有石英窗。
色散元件(棱镜或光栅)
单色器:
光狭缝 单色器的作用是将混合光分解(色散),并 可根据需要使一定波长的单色光投射至比色 槽。
1、比色杯应相匹配性(对光的吸收和反射应一致),不得随意挪用。
2、比色杯应持其侧壁的毛玻璃面。
3、盛液时达到比色杯的3/4即可,不能太满,外壁如有液体, 只能用滤纸沾去水份,再用擦镜纸擦干净。 4、测毕,比色液一般应倒回原试管中,直至计算无误后方可倒掉。 5、测量完毕,比色皿用蒸馏水洗干净。
思考题: 722型分光光度计为什么每变换一次波长都需要重新调零? 由于比色仪光电管对不同波长和频率的光的敏感度是不 同的,所有每一次调换波长后都需要再次调零,是光电 管检测的灵敏度调制适当的范围。
[例11.1]已知某化合物的相对分子质量为251,将此化合 物用乙醇作溶剂配成浓度为0.150mmol×L-1的溶液,在 480nm波长处用2.00cm吸收池测得透光率为39.8%,求该化 合物在上述条件下的质量吸光系数a。 解:由Lambert-Beer定律可得 已知c = 0.150*10-3mol×L-1,b = 2.00cm,T = 0.398
5、拉动横杆,读取吸光度。
实验一 可见分光光度计波长校正
原理:镨铷玻璃是一种含有稀有金属镨和铷的 玻璃制品,在可见光波长范围内,具有特征性 的吸收光谱,吸收峰的波长固定,可作为校对 仪器波长正确性的一个依据。
操作步骤:
用镨铷玻璃与空白光路作对照,每隔2nm, 在529nm附近每隔1nm,以波长为横坐标,吸光 度为纵坐标,测出波长从524nm~538nm的镨铷 玻璃吸收吸光度,查找吸收峰的极值。
实验二 血红蛋白及衍生物吸收光谱测定
原理:血红蛋白在不同条件下可以形成不同的衍生物, 如血红蛋白溶液在空气中与氧气充分接触可形成氧合血 红蛋白HbO2 ,与一氧化碳反应则会合成碳氧血红蛋白HbCO ,高铁 氰化钾能使血红蛋白中的二价铁氧化成三价铁,形成高 铁血红蛋白(MHb)。
HbO2 HbCO MHb
相同,这种物质就是无色透明的。如果只让一
部分波长的光透过,其他波长的光被吸收,则 溶液就呈现出透过光的颜色,也就是溶液呈现 的是与它吸收的光成互补色的颜色。例如硫酸 铜溶液因吸收了白光中的黄色光而呈蓝色;
2、光吸收的基本定律(Lamber-Beer定律)
单色光通过吸光溶液后,吸光度与溶液 的浓度和厚度之间呈正比关系。
比色杯: 形状大多为矩形。 比色杯的光径(溶液厚度)愈大,吸收的光能 愈多,灵敏度愈高。
光电元件:光电管或光电倍增管
作用:将光能转变成电能。
光电管产生光电流的大小,与光强度和波长有关。
光电管对弱光的灵敏度大,光照过强或长时间曝光灵敏 度显著下降,即“疲劳” 现象。 温度对光电管的灵敏度有影响。
混合光:具有不同能量(不同波长)的光复合在
一起。
将光(电磁波)按波长(或频率)顺序排列,即得电磁波 谱。 200nm 400nm 760nm 1mm 紫外线 可见光 红外线 不同波长的光具有不同能量,波长越长 (频率越低),能量越小。
可
见
光
三、吸收光谱与分光光度法
1、吸收光谱(Absorption 原子吸收光谱 spectrum)
吸收光谱(absorption spectrum)
所谓吸收光谱就是用各种不同波长光线测定物质溶液的吸光 度,然后按其结果描出吸光度与波长关系的曲线。 吸收光谱是物质的特征性曲线,一种物质在一定的PH、温度、 浓度等条件下,具有的一定形状的吸收光谱曲线
吸收光谱
吸收光谱曲线, 在浓度一定的条件下,以波长 为横坐标,以吸光度为纵坐标, 所绘制的曲线。 曲线上吸光度最大的地方称为 最大吸收峰,它所对应的波长 称为最大吸收波长,用1max 表示。最大吸收波长处测定吸 光度,则灵敏度最高 溶液浓度愈大,吸收光谱的峰 值愈高,两者成正比关系。
吸收光谱
可见、紫外分光光度法 原子吸收分光光度法 红外分光光度法 荧光分析法 火焰发射光谱法 比浊法
发射光谱
散射光谱
分光光度法
分光光度法(Absorption Photometry)是一种 基于物质对光的选择性吸收而建立起来的一种分析方 法。包括可见吸光光度法、紫外-可见吸光光度法和 红外光谱法等。
2009年3月
一、概述
利用各种物质所具有的发射、吸收或散射的特性以确定物 质的结构和化学成分的分析方法称为光谱分析法。 英文为spectral analysis或spectrum analysis。各种结 构的物质都具有自己的特征光谱,光谱分析法就是利用特 征光谱研究物质结构或测定化学成分的方法。
吸收光谱曲线绘制
以波长为横坐标,吸光度为纵坐标,描出所有测量的点 ,用曲线连接 在坐标轴上标出 波长、吸光度以及单位 标出最大吸收峰处的波长及吸光度 在上方注明曲线的名称 “血红蛋白及其衍生物吸收光谱曲线” 在曲线旁边标注曲线对于的物质 把姓名序号标注在空白处
2009年3月
注意事项
/
KMnO4吸收光谱曲线
吸收光谱体现了物质的特性,是进行定性、定 量分析的基础。lmax是定性分析的依据,而溶 液的浓度愈大,则吸光度A愈大,是进行定量分 析的依据。
主要内容
1 2 3
光谱分析法
分光光度计
实验步骤和要求
分光光度计
0.20 8
光源
单色器
比色杯
检测器 (光电元件)
读数单元
紫外-可见分光光度计的基本结构示意图
入射光
C
透射光
I0 b
I1t
I a 被物质吸收的光
(1)Lambert定律: 说明吸收与溶液液层厚度间的关系
入射光
透射光
入射光
透射光
I0 L1
I1
I0 L2
I2
L2 > L1
,I 1
> I2
Lambert定律:当一适当波长的单色光通过一固 定浓度的溶液时,其透射光强度随液层厚度的增 加而成指数函数减少,即It=Io*10-k1b
V= c / λ
光的微粒性
光量子,具有能量。
E=hv
h-普朗克(Planck)常数 6.626×10-34J·s -频率 E-光量子具有的能量
单位:J(焦耳),eV(电子伏特)
V=E/h
波粒二象性
V=c / λ c / λ= E / h
v=E/h
E=hc/ λ
结论:一定波长的光具有一定的能量,波长越 长(频率越低),光量子的能量越低。 单色光:具有相同能量(相同波长)的光。
分子吸收光谱
当光辐射通过某种物质时,组成该物质
的分子与光子发生“碰撞”,光子的能量就转
移至分子上,使它们由基态(低能态)跃迁到
激发态(高能态)。
吸光光度法基本原理
光谱名称 波长范围
当光子的能量与分子的E匹配时, 就会吸收光子
X射线
远紫外光 近紫外光 可见光
0.1~10nm
10~200nm 200~400nm 400~760nm
分光广度法的优点: 灵敏度高
测定简便快速,仪器设备简单。
不破坏样品
(1) 光的基本性质:电磁波的波粒二象性
波动性
光的传播速度:
c=λXν