血液葡萄糖定量测定

高效液相色谱法测定血清葡萄糖

高效液相色谱法测定血清葡萄糖陈忠余;张天娇;张传宝;张江涛;周伟燕;闫颖;陈文祥【摘要】目的建立一种测定血清葡萄糖(glucose,Glu)的高效液相色谱法(HPLC),探讨其能否作为血清Glu测定的参考方法.方法以D-半乳糖(D-galactose)为内标物,用无水乙醇沉淀、去除血清中的蛋白质,在pH9.1条件下与1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)反应,用HPLC测定血清Glu衍生产物、D-半乳糖衍生产物,用标准曲线法定量；对建立的方法进行方法学评价.结果本法测定血清Glu的批内变异系数(CV)为0.33％～ 0.67％,平均0.51％；批间CV为0.02％～ 0.85％,平均0.38％；总CV为0.47％～ 1.03％,平均0.68％.回收率为98.22％～ 101.96％.分析Glu 的参考物质SRM 965a,测定结果与认定值的偏差为-0.928％～0.347％,平均偏差为- 0.072％.结论初步建立了测定血清Glu的HPLC法；该法准确、精密,有望作为血清Glu测定的候选参考方法.【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2011(029)009【总页数】3页(P660-662)【关键词】葡萄糖;高效液相色谱;1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮【作者】陈忠余;张天娇;张传宝;张江涛;周伟燕;闫颖;陈文祥【作者单位】重庆市第一人民医院检验科,重庆400011;卫生部北京医院卫生部临床检验中心,北京100730;卫生部北京医院卫生部临床检验中心,北京100730;卫生部北京医院卫生部临床检验中心,北京100730;卫生部北京医院卫生部临床检验中心,北京100730;卫生部北京医院卫生部临床检验中心,北京100730;卫生部北京医院卫生部临床检验中心,北京100730【正文语种】中文目前国际上测定血清Glu的参考方法有德国临床化学会(German Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine，DGKL)[1]、美国国家标准和技术研究院(National Institute of Standards and Technology，NIST)[2]和比利时根特大学[3]的同位素稀释气相色谱质谱(isotope dilution gas chromatography-mass spectrometry，ID-GC/MS)法、美国疾病控制中心[4](Centers for Disease Control，CDC)和日本临床化学会(Japanese Society of Clinical Chemistry，JSCC)的己糖激酶法。

葡萄糖测定方法操作规程

葡萄糖（GLu）测定方法操作规程【产品名称】通用名称：葡萄糖（GLu）测定试剂盒（葡萄糖氧化酶法）使用说明书【摘要】糖是人体的主要供能物质，也是组织细胞的主要成分。

血糖浓度受神经系统和激素的调节而保持相对稳定，当这些调节失去原有的相对平衡时，则出现高血糖或低血糖症状。

1.病理性高血糖：（1）原发性糖尿病（2）内分泌疾病：嗜铬细胞瘤、甲状腺毒瘤、肢端肥大症、巨人症、Cushing综合征、高血糖素细胞瘤；（3）胰腺疾病：急性或慢性胰腺炎、流行性腮腺炎引起的胰腺炎、胰腺囊性纤维化、血色病（血红蛋白沉着症）等；（4）抗胰岛素受体抗体与有关疾病：棘皮症、Wernicke’s脑病。

2.病理性低血糖：（1）胰岛细胞瘤、高血糖素缺乏；（2）对抗胰岛素的激素分泌不足，如垂体前叶功能减退、肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使生长激素、肾上腺皮质激素和甲状腺素分泌减少；（3）严重肝病患者，肝细胞糖原储存不足及糖原异生功能低下，肝脏不能有效地调节血糖。

【预期用途】该试剂盒采用葡萄糖氧化酶法，用于体外定量测定人血清或血浆中葡糖糖的含量。

【检验原理】葡糖糖被葡萄糖氧化酶氧化后生成过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的作用下，与4-氨基安替比林和对羟基苯甲酸钠缩合，生成醌系色素，通过测定此反应的吸光度可求得葡糖糖的含量。

D-2葡萄糖氧化酶D-葡萄糖醛酮+H2O22 H2O2 + 4-APP ++ H3O+POD醌系色素+ 5H2O【主要组成成份】试剂1（R1）：磷酸盐缓冲液100 mmol/L抗环血酸氧化酶4700 U/L葡糖糖氧化酶4000 U/L试剂2（R2）：磷酸盐缓冲液100 mmol/L过氧化物酶6700U/L4-氨基安替比林0.7 mmol/L对羟基苯甲酸钠 1.3 mmol/L校准品：葡萄糖溶液。

*不同批号试剂盒各组分请勿混用。

【试剂准备】R1：即用液体试剂R2：即用液体试剂【储存条件与有效期】未开启的试剂盒避光保存于无腐蚀性气味和通风良好的室内，在2℃~8℃有效期为一年。

血清葡萄糖浓度的测定

2. 葡萄糖氧化酶法(GOD-POD法)
葡萄糖氧化酶GOD (glucose oxidase) 将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。过氧化物酶POD (peroxidase)将过氧化氢分解为水和氧，并将无色的4氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的醌类化合物(Trinder反应)，其红色深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比。
• 空腹血糖损害IFG (impaired fasting glucose) 和糖耐量减退IGT (impaired
glucose tolerance) 是正常向糖尿病的过渡状态，这部分人虽然现在还不是糖尿
病，但是将来发生2型糖尿病的危险性非常高，可以说是糖尿病的后备军。据
有关研究报道，每年5-8%的 IGT者将发展成为2型糖尿病。
人体对糖的耐受现象 OGTT为口服葡萄糖负荷试验，可了解人体进食葡萄糖后的血
糖调节能力，早期发现糖代谢异常，早期诊断糖尿病，是一种简
单、快捷的诊断方法。 OGTT重复性差，操作繁琐，并非必需的糖尿病诊断方法，因此不推荐临床常规应用。
方法：试验前三天，受试者每日食物中糖含量不应低于150 g，且维持正常活动。影响试验的药物应在三天前停用，受试前应空腹10-16 h。空腹取血后，5 分钟内饮入250 mL含75 g无水葡萄糖的糖水(妊娠妇女用量为100 g，儿童按1.75
实验步骤
B S T
工作液 dH2O
葡萄糖标准液血清
1.00 mL 10 uL
-
1.0 mL 10 uL -
1.0 mL 10 uL
混匀， 37C， 15 mins dH2O 0.50 mL 0.50 mL 0.50 mL 混匀，以B管调零，在510nm波长处读取S管和T管的吸光度. 计算:

葡萄糖含量的测定方法

葡萄糖含量的测定方法摘要：一、葡萄糖含量测定的意义二、葡萄糖含量测定方法概述1.氧化还原法2.酶法3.高效液相色谱法4.红外光谱法5.荧光光谱法三、各种测定方法的优缺点比较四、实际应用中的注意事项正文：一、葡萄糖含量测定的意义葡萄糖是生物体内重要的能量来源，其在生物体内的含量对于生物体的正常生理功能具有重要意义。

葡萄糖含量的测定对于糖尿病的诊断、治疗和监测具有重要意义。

此外，葡萄糖含量测定在食品、医药等领域也具有广泛的应用。

二、葡萄糖含量测定方法概述目前，葡萄糖含量的测定方法主要有氧化还原法、酶法、高效液相色谱法、红外光谱法和荧光光谱法等。

1.氧化还原法：通过测定葡萄糖在氧化还原反应中的电子转移，从而确定其含量。

该方法操作简便，但精度较低，适用于初步筛查。

2.酶法：利用葡萄糖氧化酶或葡萄糖酸化酶与葡萄糖反应生成物的水解酶活性变化来测定葡萄糖含量。

该方法灵敏度高，特异性强，但操作复杂，对酶的活性要求较高。

3.高效液相色谱法：通过测定葡萄糖与其他成分在液相色谱柱上的保留时间差异，从而实现定量分析。

该方法准确度高，但仪器设备较昂贵，对样品处理要求较高。

4.红外光谱法：利用葡萄糖在红外光谱上的特征吸收峰，通过谱图分析测定其含量。

该方法快速、简便，但对样品纯度要求较高。

5.荧光光谱法：通过测定葡萄糖在荧光光谱上的发射强度，从而确定其含量。

该方法灵敏度高，但仪器设备较昂贵，对样品处理要求较高。

三、各种测定方法的优缺点比较氧化还原法：优点——操作简便，成本低；缺点——精度较低，适用于初步筛查。

酶法：优点——灵敏度高，特异性强；缺点——操作复杂，对酶的活性要求较高。

高效液相色谱法：优点——准确度高，定量性强；缺点——仪器设备较昂贵，对样品处理要求较高。

红外光谱法：优点——快速、简便；缺点——对样品纯度要求较高。

荧光光谱法：优点——灵敏度高；缺点——仪器设备较昂贵，对样品处理要求较高。

四、实际应用中的注意事项1.选择合适的测定方法：根据实际应用场景和需求，选择具有较高准确度和灵敏度的测定方法。

葡萄糖的测定实验报告

葡萄糖的测定实验报告葡萄糖的测定实验报告引言：葡萄糖是一种重要的生物化学物质，是生命活动的主要能源来源之一。

因此，准确测定葡萄糖的含量对于理解生物体代谢过程和健康状况具有重要意义。

本实验旨在通过一系列实验步骤，探究葡萄糖的测定方法，以及不同条件下葡萄糖的反应特性。

实验材料与方法：1. 实验材料：- 葡萄糖标准溶液- 硫酸铜溶液- 碱性铜胺试剂- 蒸馏水- 试管、移液管、烧杯等实验器具2. 实验步骤：1) 准备一系列不同浓度的葡萄糖标准溶液，并标明其浓度。

2) 取一定量的葡萄糖标准溶液，加入硫酸铜溶液，进行加热反应。

3) 在反应过程中，观察溶液的颜色变化，并记录下反应时间。

4) 反应结束后，加入碱性铜胺试剂，观察溶液的颜色变化，并记录下反应时间。

5) 重复以上步骤，测定不同浓度的葡萄糖标准溶液。

实验结果与分析：根据实验步骤所得的数据，我们可以绘制出葡萄糖浓度与反应时间的关系图。

从图中可以明显看出，随着葡萄糖浓度的增加，反应时间逐渐减少。

这是因为葡萄糖与硫酸铜溶液反应生成氧化葡萄糖，反应速度与葡萄糖浓度成正比。

在加入碱性铜胺试剂后，溶液的颜色会发生明显的变化，由蓝色变为红色。

这是因为氧化葡萄糖与碱性铜胺试剂反应生成红色络合物，其颜色强度与葡萄糖浓度成正比。

因此，通过测定红色络合物的颜色强度，可以间接测定葡萄糖的浓度。

实验中还可以引入其他测定葡萄糖的方法，例如酶法和光度法。

酶法利用葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化生成过氧化氢，再通过染色反应测定过氧化氢的含量来间接测定葡萄糖浓度。

光度法则是利用葡萄糖与某些试剂反应后产生有色物质，通过测定有色物质的吸光度来测定葡萄糖浓度。

结论：通过本实验的探究，我们了解了葡萄糖的测定方法以及不同条件下葡萄糖的反应特性。

葡萄糖浓度与反应时间和颜色强度呈正相关关系，可以利用这些关系进行葡萄糖的定量测定。

同时，我们也了解到了其他测定葡萄糖的方法，这些方法在不同场合下可以选择使用。

实验的过程中，我们还发现了一些实验误差和不确定性。

用GOD法测定血清中葡萄糖浓度

酶法：葡萄糖氧化酶法
（一）化学法
方法
磷钼酸法（Folin-Wu）
类型
原理
定量 G+Cu2+→Cu2O↓ 分光 Cu2O +磷钼酸试剂 →蓝色钼化合物
（430nm）
用途及备注
稳定、准确、但对葡萄糖无特异性，
受血中非糖还原物质的影响。
邻甲苯胺法
定量
G+邻甲苯胺→蓝绿色的席弗(Schiff)碱（630nm）
思考题：
a) 本实验原理为酶促化学反应，为何未加终止剂终止酶的反应？
b) 本实验涉及显色反应，该反应与血清碱性磷酸酶活力测定中的显色反应有何异同？
c) 为何不同检测方法所提供的空腹正常血糖参考值存在差异？
葡萄糖氧化酶法： 3.89~6.11mmol/L Folin-Wu法： 4.4~6.7mmol/L 邻-甲苯胺法： 3.89~6.11mmol/L
③ 严重黄疸、溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白血滤液，然后再进行测定。
临床意义：
生理性高血糖：摄入高糖食物，情绪紧张
病理性高血糖：
①糖尿病
②内分泌腺功能障碍
③颅内压增高
④脱水引起高血糖
生理性低血糖：见于饥饿和剧烈运动
病理性低血糖：特发性功能性低血糖，依次是药源性，
肝源性和胰岛素瘤等。
❖调节血糖水平的激素：胰岛素、胰高血糖素、糖皮质激素和肾上腺素。
血糖的来源、去路
血糖水平恒定的生理意义
保证重要组织器官的能量供应，特别是某些以葡萄糖供能的组织器官。 ➢ 脑组织不能利用脂酸，正常情况下主要以来葡萄糖供能； ➢ 红细胞没有线粒体，完全通过糖酵解获能； ➢ 骨髓及神经组织代谢活跃，经常利用葡萄糖供能。

血糖的定量测定(葡萄糖氧化酶法)

血糖的定量测定（葡萄糖氧化酶法）血糖是指血液中葡萄糖的含量。

葡萄糖是人体主要的能量来源，血糖的测定是检查人体内部能量代谢状态的重要项目之一。

这篇文章将介绍血糖定量测定的实验原理、方法以及实验注意事项。

一、实验原理血糖的定量测定方法主要是利用葡萄糖氧化酶将血液中的葡萄糖在催化反应下转化为过氧化氢和D-酮糖酸，利用过氧化氢的比色法来测定血糖的含量。

具体反应式为：(1)葡萄糖+O2+H2O→葡萄糖氧化酶 D-酮糖酸+H2O2(2)2H2O2+Fe2+→2H2O+Fe3++O2(3)Fe3++TSC(三硝基苯胺)→FeTSC3（红色化合物）其中，TSC（三硝基苯胺）为过氧化氢的比色试剂，用Fe2+作催化剂促进反应进行，所生成的红色化合物FeTSC3与过氧化氢的浓度呈线性关系。

二、实验材料1.血糖标准品：10mmol/L2.葡萄糖氧化酶3.三硝基苯胺（TSC）、醋酸钠、乙二胺四醋酸盐二水合物（EDTA•2H2O）、氢氧化钠（NaOH）4.0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.5）5.准确量杯、试管、离心管、吸光度计、恒温水浴器、移液管三、实验步骤1.制备血清样品：将血液放置静置后离心取血清，制成5mmol/L、10mmol/L、15mmol/L、20mmol/L的葡萄糖标准品。

2.实验组织：3个组别，每组3个试管。

A组：加1mL的10mmol/L葡萄糖标准品；B 组：加1mL的血清标本；C组：加入1mL的磷酸盐缓冲液作为对照组。

注意，每组要做三个平行实验。

3.反应体系准备：①将实验组织中的标准品、血清样本和磷酸盐缓冲液分别加入3毫升离心管中。

②分别加入1mL葡萄糖氧化酶。

③分别加入1mL EDTA全部气泡排除。

⑤每组混合后放置在37℃下反应20分钟。

⑥在上述反应过程中，加入2毫升0.1mol/L的NaOH溶液使溶液呈碱性，使催化反应更为稳定。

4.吸光测定：将反应充分混合后，吸取适量的样品，放到吸光度计槽，设定波长为505nm，用对照组值进行比较，计算出各组的吸光度，并根据标准曲线计算出各样本的葡萄糖含量。

血糖定量检测实验报告

一、实验目的1. 熟悉血糖定量检测的原理和方法。

2. 掌握血糖定量检测的实验操作流程。

3. 了解血糖水平与人体健康的关系。

二、实验原理血糖定量检测是通过测定血液中葡萄糖的浓度来评估人体血糖水平的一种方法。

常用的检测方法包括葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法和氧化还原法等。

本实验采用葡萄糖氧化酶法进行血糖定量检测。

葡萄糖氧化酶法的基本原理是：葡萄糖在葡萄糖氧化酶的催化作用下，与氧气反应生成葡萄糖酸和过氧化氢。

过氧化氢在过氧化物酶的作用下，将色原物质氧化，产生颜色变化，通过比色法测定吸光度，从而计算出葡萄糖的浓度。

三、实验材料与试剂1. 实验材料：新鲜家兔血液、抗凝剂（如肝素钠）、蒸馏水、生理盐水、玻璃试管、移液器、离心机、分光光度计等。

2. 试剂：葡萄糖标准溶液、葡萄糖氧化酶试剂、过氧化物酶试剂、色原物质试剂、pH缓冲液、空白试剂等。

四、实验步骤1. 采集血液：取新鲜家兔血液，加入适量的抗凝剂，充分混匀，制成抗凝血。

2. 分离血浆：将抗凝血置于离心机中，以3000转/分钟的速度离心5分钟，分离出血浆。

3. 标准曲线绘制：分别取不同浓度的葡萄糖标准溶液，按照实验步骤进行检测，记录吸光度值，以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。

4. 样品检测：取分离出的血浆，按照实验步骤进行检测，记录吸光度值。

5. 计算血糖浓度：根据标准曲线，计算出样品中的葡萄糖浓度，即为血糖浓度。

五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：绘制标准曲线，线性范围为0.1-1.0mmol/L。

2. 样品检测：对分离出的血浆进行检测，得到吸光度值为0.45。

3. 血糖浓度计算：根据标准曲线，计算出样品中的葡萄糖浓度为0.3mmol/L。

六、实验讨论1. 实验过程中，血液采集、分离血浆、样品检测等环节要保证操作规范，避免误差产生。

2. 实验结果与正常血糖水平（3.9-6.1mmol/L）相比，本次实验测得的血糖浓度为0.3mmol/L，说明家兔血糖水平处于正常范围内。

葡萄糖检验方法化学

葡萄糖检验方法化学葡萄糖是一种重要的碳水化合物，它在人体内起着供能和调节血糖浓度的重要作用。

葡萄糖的检验方法在临床诊断和生物学研究中具有重要意义。

本文将介绍葡萄糖检验的化学方法，包括常用的尿糖试纸法、酶法和光度法，以及其原理、操作步骤和应用范围。

首先介绍尿糖试纸法。

尿糖试纸法是一种简便快捷的葡萄糖定性定量检测方法。

其原理是利用尿液中的葡萄糖和在酸性条件下氧化还原反应产生的色素进行检测。

操作步骤包括取一小片试纸，用尿液浸湿后与容器边缘擦拭，然后在规定的时间内观察试纸颜色变化，并用试纸上的标度比色确定尿糖含量。

其次介绍酶法。

酶法是一种常用的葡萄糖定量检测方法，通过将葡萄糖与葡萄糖氧化酶反应产生过氧化物，并与酶标底物反应产生发光，利用光强度与葡萄糖浓度成正比的关系进行定量分析。

操作步骤包括将标本与反应试剂混合，允许酶促反应进行一段时间后，通过光度计测定发光强度并据此获得葡萄糖含量。

最后介绍光度法。

光度法是一种常用的葡萄糖定量检测方法，通过测定葡萄糖与某种特定试剂发生的反应产生的吸收、荧光或发光信号来定量分析葡萄糖。

其操作步骤包括将样品与试剂混合后，允许反应一段时间，然后通过光度计测定吸收、荧光或发光强度，并根据标准曲线确定葡萄糖浓度。

葡萄糖检验方法化学的应用范围非常广泛，包括但不限于临床糖尿病筛查、胰岛素抵抗检测、葡萄糖代谢疾病诊断、食品和饮料质量检验等。

葡萄糖检验方法化学在医学和生物学领域中具有重要意义，不断的技术革新和方法优化将进一步提高葡萄糖检测的准确性和灵敏性，有利于更好地指导临床诊断和治疗。

葡萄糖含量检测方法

葡萄糖含量检测方法引言：葡萄糖（Glucose）是一种重要的碳水化合物，广泛存在于生物体内，是维持人体正常生理功能所必需的能量来源。

因此，准确测定葡萄糖含量对于食品工业、医药领域以及科学研究具有重要意义。

本文将介绍几种常用的葡萄糖含量检测方法。

一、巴尔沃法巴尔沃法是一种经典的葡萄糖含量检测方法，其原理基于葡萄糖与酚类物质如苯酚反应，产生有色物质，通过比色测定葡萄糖含量。

该方法操作简单，准确可靠，广泛应用于食品工业和医药领域。

二、酶法酶法是目前常用的葡萄糖含量检测方法之一。

酶法利用葡萄糖氧化酶将葡萄糖与辅酶NAD+反应，生成葡萄糖酸和还原型辅酶NADH。

通过测定NADH生成的吸光度变化，可以间接测定葡萄糖含量。

酶法具有高灵敏度和高选择性的特点，广泛应用于生化分析和临床诊断。

三、高效液相色谱法高效液相色谱法（HPLC）是一种基于分离和定量分析的葡萄糖含量检测方法。

该方法利用色谱柱对复杂的样品进行分离，通过检测葡萄糖在柱上的保留时间和峰面积来定量分析葡萄糖含量。

HPLC法具有高分辨率、高灵敏度和高准确性的优点，被广泛应用于食品、医药和环境等领域。

四、红外光谱法红外光谱法是一种无损的葡萄糖含量检测方法。

该方法利用葡萄糖分子的特定振动频率与红外光的相互作用，通过检测样品吸收红外光的强度来定量分析葡萄糖含量。

红外光谱法具有快速、无损和准确的特点，被广泛应用于食品质量控制和生化分析领域。

五、电化学法电化学法是一种基于电化学原理的葡萄糖含量检测方法。

该方法利用葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化反应，产生电流信号。

通过测量电流信号的强度，可以定量分析葡萄糖含量。

电化学法具有快速、灵敏度高和选择性好的优点，被广泛应用于食品安全检测和环境监测等领域。

结论：根据以上介绍，我们可以看出，葡萄糖含量的检测方法多种多样，每种方法都有其特点和适用范围。

在具体应用中，需要根据实际需要和要求选择合适的方法。

为了保证检测结果的准确性和可靠性，建议在操作过程中严格遵守实验操作规范，并进行合理的质控措施。

实验三、血液葡萄糖的测定

• 用公式表示为： • T = I／I0 • 则 A = lg（1／T） =Kbc • 式中 T — 透光率 • I — 透过光强度 • I0 — 入射光强度 • A — 吸光度 • K — 比例常数 • b — 溶液的厚度 • c — 溶液的浓度
7200分光光度计
分光光度计的组成分光光度计种类很多，一般包括光源、单色器、吸收池、检测器和指示器五大部件组成。
3、加入磷钼酸后迅速比色。 4、分光光度计的使用。
五、结果计算
葡萄糖（mg/100ml
）
=
测定管吸收度 ×0.1 ×
标准管吸收度
100 0.1
六、分析讨论
1、分光光度计的原理
• 分光光度计是根据物质对光的选择性吸收来测量微量物质浓度的仪器，具有灵敏度、准确度高，操作方便、快速等特点。其工作原理为光的吸收定律（朗伯—比尔定律）：一束单色光(强度为I0)通过某吸光物质的溶液时，其光能量的被吸收与该物质浓度的关系符合朗伯—比尔定律，即当入射光波长、温度和溶液的厚度一定时，吸光度与溶液的浓度成正比。
5.注意事项：
① 使用前，使用者应该首先了解本仪器的结构和原理，以及各个旋钮之功能。仪器接地要良好，否则显示数字不稳定。
② 如果大幅度改变测试波长时，在调整“00.0”和“100”后稍等片刻（因光能量变化急剧，光电管受光后响应缓慢，需一段光响应平衡时间），当稳定后，重新调整“00.0”和100” 。
浓度方式(C)和已知标样浓度斜率(K)方式; ④ 波长选择：用波长调节旋钮设置所需的单色光波长; ⑤ 放样顺序：打开样品室盖，在1~4号放置比色皿槽
中，依次放入%T校具(黑体)，参比液，样品液1和样品液2.
7200型分光光度计的使用方法

血清中葡萄糖含量的测定方法及其研究进展

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化学分析计量
2008年 , 第 17 卷 , 第 3 期
血清中葡萄糖含量的测定方法及其研究进展
戴新华齐韬杨梦瑞徐蓓方向
100013) ( 中国计量科学研究院化学计量与分析科学研究所 , 北京
*
摘要关键词
阐述了血清中葡萄糖的检测在临床诊断研究方面的重要意义 , 较全面地综述了血清葡萄糖常用的检测血清葡萄糖检测方法 20. 0 mm ol/L ) [ 5] 。葡萄糖氧化酶对葡萄糖溶液中有需要型到型及 D 葡萄糖高度敏感。
* 国家科技基础条件平台项目标准物质资源共享平台建设 ( 2005DKA 21501 )与十一五国家科技支撑计划重点项目科研用高纯有机试剂核心单元物质及共性关键技术的研制与开发 ( 2006BA F07B03) 收稿日期 : 2008 03 05
型两种葡萄糖 , 葡萄糖的完全氧化
型的转化。新配制的葡萄糖标准液主要是
型葡萄糖 , 必须放置 2 h 以上 ( 最好过夜 ) 待其变旋平衡后方可应用 [ 6] 。 1. 2 微电流法微电流法的检测原理是在电极表面固化 GOD, 当血液滴到电极上时 , 葡萄糖氧化酶可氧化血液中的葡萄糖产生葡萄糖内酯和 H 2 O2, 同时释放出电子。所产生的电子被导电介质转移给电极 , 在一定电压作用下 , 流过电极的电流将发生变化 , 通过检测电流变化与葡萄糖浓度的线性关系达到检测血糖浓度的目的 [ 7] 。 1. 3 氧速率法氧速率法又称氧电极法 , 其原理是测定溶液中氧的消耗 , 根据从酶反应开始至结束的氧浓度差 , 求得标本中葡萄糖浓度。葡萄糖 + O2 + H 2 O 葡萄糖酸 + H 2 O2 氧电极置于含有适量葡萄糖氧化酶的溶液中 , 当加入样品后 , 样品中的葡萄糖被氧化而消耗氧。由于氧消耗量与血清中的葡萄糖浓度成正比 , 而电极的极限扩散电流 ( I M )又与溶液中氧含量成正比 , 因此 , 氧电极 I M 值即可反映样品中血清葡萄糖的浓度 [ 8] 。氧速率法的精密度好、准确性高 , 且具有极高的抗特异性。该法中氧电极只监测高度特异的葡萄糖氧化酶催化反应 , 且电极检测到的是样本的最大氧消耗速率 , 因而它不受大气中氧的干扰 , 也不受溶血黄疸、乳糜和其它代谢物的干扰 , 其测定结果与参考方法最接近 [ 9] ; 由于氧速率法的使用 , 血糖的结果可以在加入样本 20 s 后获得 , 大大地提高了检测速度。该法的不足之处是需要特殊仪器反应槽和电极 , 只能测定葡萄糖含量 , 不能测定其它项目 ; 由于氧电极膜具有一定寿命 , 使用一段时间后 , 膜的老化使其对氧通透性降低 , 灵敏度下降 , 检测结果的准确度也随之下降 [ 10] 。

葡萄糖的含量测定方法

葡萄糖的含量测定方法
葡萄糖的含量测定方法有很多种，以下列举几种常用的方法：
1. 麦芽糖法：将待测样品经过酶解、酸化、有机溶剂萃取等处理后，使用酶促反应使麦芽糖水解为葡萄糖，再经过比色或滴定的方法测定葡萄糖的含量。

2. 高效液相色谱法（HPLC）：将待测样品经过预处理后，采用高效液相色谱技术进行分离和定量分析，根据葡萄糖在色谱柱中的保留时间和峰面积来测定葡萄糖的含量。

3. 空间滴定法：将待测样品与一定浓度的溴酸溶液反应生成溴分子，并滴加碘化钾溶液进行滴定，直至出现持久的黄棕色终点，根据滴定液的用量计算葡萄糖的含量。

4. 加热滴定法：将待测样品与酚酸缓冲液和硝酸铜溶液混合，加热至70-80C，然后滴加碘化钠溶液进行滴定，根据滴定液的用量计算葡萄糖的含量。

这些方法的选择取决于实验条件、样品性质以及需要的精确度和灵敏度等因素。

在实际应用中，可以根据需要选择适合的方法进行葡萄糖含量测定。

便携式血糖仪血液葡萄糖测定标准操作程序

便携式血糖仪血液葡萄糖测定标准操作程序适用于罗氏活力血糖检测系统1.检验目的：定量分析末梢毛细血管全血中的葡萄糖浓度。

2.临床意义：血糖专指血液中的葡萄糖而言。

每个个体全天血糖含量随进食，活动等情况会有波动。

一般在空腹时血糖水平较为恒定。

血糖浓度受神经系统和激素的调节而保持相对稳定。

当这些调节失去原有的相对平衡时，则出现高血糖或低血糖。

3.测定方法：分光光度法4.试验原理：试纸检测区的化学试剂与血液中的葡萄糖分子反应形成有色物质，有色物质吸收光——血样中葡萄糖越多，反射光越少。

检测器捕捉反射光，将其转化为一个电信号，转换成相应的葡萄糖浓度。

5.标本要求：1)病人准备：采血前应轻轻按摩采血部位，并进行局部清洗或用75%乙醇擦拭采血部位，待干后进行皮肤穿刺。

2)标本类型：新鲜毛细血管全血，含抗凝剂肝素锂或肝素铵或EDTA抗凝的静脉血。

如果采用机外采血的方式，还可适用于动脉和新生儿血。

不用使用含有氟化物作为糖酵解抑制剂的静脉血。

3)标本采集与处理：使用血糖仪配套的采血笔在指尖或耳垂部位取血，轻轻挤压形成一小滴血样，但应避免因过度挤压导致的组织液渗出。

4)标本量：所需标本体积为1—2μL。

6.仪器和试剂：1) 仪器：罗康全活力型血糖仪2) 试剂准备：罗康全活力型血糖试纸。

打开一盒新的罗康全活力型血糖试纸后，请先将血糖仪上的旧密码牌取出，用包装盒内的新密码牌替换。

将密码牌安装并保留在血糖仪的密码牌插槽中直至更换另一筒新试纸。

确认密码牌与试纸筒标签上印刷的三位密码号相匹配。

每次测试前检查：请翻转试纸，将质控窗与试纸筒标签上的色阶”0”区域进行比较，颜色需一致。

如指控窗的颜色不同，则此试纸不能使用，请将其丢弃，否则将导致错误的测量结果。

3) 试纸储存和稳定性：试纸需保存在：+2~+30℃的干燥环境中，避免阳光直射。

取出试纸后请立即使用配套筒盖盖严试纸筒。

这样可以确保试纸在标签标明有效期内完全有效。

4)试剂反应成份：每条试纸含有（每平方厘米最小含量）：葡萄糖染色氧化还原酶0.7单位，双—（2—羟乙基）—（4—羟亚胺环己基—2,5—二烯炔）氯化铵8.3μg，2,18磷钼酸0.18mg。

血清中葡萄糖浓度的测定

实验器材与试剂
（一）器材 5ml移液管，50或100ul微量可调式移液管,721E 型分光光度计，1比色皿，37度恒温水浴锅。（二）试剂（1）0.1磷酸盐缓冲液（Ph=7.0称取无水磷酸二氢钾5.3g，溶于蒸馏水800ml中，调节pH=7.0, 定容至1L （2）酶试剂：取过氧化物酶1200U，4-氨基安替比林10mg，叠氮化钠100mg，溶入磷酸盐缓冲液80ml中，调节pH值至7.0，用磷酸盐缓冲液定容至100ml，置于4度保存，可稳定存在3个月。
（3）生理性低血糖：见于饥饿和剧烈运动时。（4）病理性低血糖特发性功能性低血糖最多见，依次是药源性，肝源性和胰岛素瘤等。
注意事项（1）葡萄糖氧化酶对β-D-葡萄糖高度特异，溶液中的葡萄糖约36%α型，64%为β型。葡萄糖的完全氧化需要α型到 β型的变旋反应。新配制的葡萄糖标准液主要是α型，故须放置2h以上，待变旋平衡后方可应用。（2）葡萄糖氧化酶法可直接用于测定脑脊液葡萄糖含量，但不能直接测定尿液葡萄糖含量。因为尿液中尿酸等干扰性物质浓度过高，可干扰氧化酶反应，造成结果假性偏低。（3）因红细胞的酵解将导致测定结果偏低，建议测定样品以草酸钾-氟化钠为抗凝剂以抑制糖酵解。取草酸钾6g，氟化钠4g，加水溶解至100ml，吸取0.1ml到试管内，在 80℃以下烤干使用，可使2到3ml血液在3到4天内不凝固并抑制糖分解。（4）严重黄疸，溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白血滤液，然后在进行测定。

思考题（1）标准葡萄糖储存液与应用液中都含有苯甲酸钠，苯甲酸钠起什么作用？（2）查文献，列举几种血清葡萄糖测定的方法与原理。（3）本实验原理为酶促化学反应，为何未加终止剂终止酶的反应？（4）本实验涉及显色反应，该反应在设计上存在缺陷，指出存在的缺陷与改进方案。

高效液相色谱法测量葡萄糖浓度实验报告

高效液相色谱法测量葡萄糖浓度实验报告一、实验目的本实验旨在利用高效液相色谱法（HPLC）准确测量样品中的葡萄糖浓度，熟悉并掌握高效液相色谱仪的操作流程和数据分析方法，为相关领域的研究和应用提供可靠的检测手段。

二、实验原理高效液相色谱法是一种基于混合物中各组分在固定相和流动相之间分配系数的差异，实现分离和定量分析的技术。

在本实验中，采用反相色谱模式，使用 C18 色谱柱，以适当的流动相（通常为含一定比例有机溶剂的水溶液）携带样品通过色谱柱。

葡萄糖分子在色谱柱中的保留时间取决于其与固定相和流动相的相互作用，通过与已知浓度的葡萄糖标准品的保留时间和峰面积进行对比，可实现对样品中葡萄糖浓度的定量分析。

三、实验仪器与试剂1、仪器高效液相色谱仪（配备紫外检测器）色谱柱：C18 柱（250mm×46mm，5μm）微量进样器超声波清洗器离心机容量瓶（100mL、50mL）移液器2、试剂葡萄糖标准品（纯度≥99%）甲醇（色谱纯）超纯水磷酸（分析纯）四、实验步骤1、溶液配制标准储备液：准确称取适量的葡萄糖标准品，用超纯水溶解并定容至 100mL 容量瓶中，配制成浓度为 1000mg/L 的标准储备液。

标准工作液：用移液器分别吸取一定体积的标准储备液，用超纯水稀释成一系列不同浓度（如 10mg/L、20mg/L、50mg/L、100mg/L、200mg/L）的标准工作液，备用。

样品溶液：将待测样品经过适当的预处理（如离心、过滤等）后，用超纯水稀释至适当浓度。

2、色谱条件设置流动相：甲醇水（体积比 15:85），其中含 01%磷酸。

流速：10mL/min柱温：30℃检测波长：245nm进样量：20μL3、仪器调试与平衡打开高效液相色谱仪的电源，按照仪器操作手册设置各项参数。

用流动相冲洗色谱柱，直至基线稳定。

4、标准曲线绘制依次进样不同浓度的标准工作液，记录各浓度下葡萄糖的峰面积。

以葡萄糖浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。

葡萄糖标准曲线

葡萄糖标准曲线葡萄糖标准曲线是用来测定血液中葡萄糖浓度的一种重要方法。

葡萄糖是人体内最主要的能量来源，对于维持人体的正常代谢和功能具有重要作用。

因此，了解血液中葡萄糖的浓度对于诊断糖尿病、监测糖尿病患者的治疗效果以及其他相关研究具有重要意义。

葡萄糖标准曲线通常是通过在一定条件下，将不同浓度的葡萄糖溶液进行测定，然后绘制出葡萄糖浓度与测定值之间的关系曲线。

这条曲线可以用来将未知浓度的葡萄糖溶液进行定量分析，从而得出其浓度。

因此，葡萄糖标准曲线在临床医学、生物化学实验以及食品工业等领域都有着重要的应用价值。

在进行葡萄糖标准曲线的测定时，需要注意一些关键的实验步骤。

首先，要准备一系列不同浓度的葡萄糖溶液，通常是通过将已知浓度的葡萄糖标准溶液进行稀释得到。

其次，需要使用一种特定的试剂来进行葡萄糖的定量分析，比如氧化葡萄糖的试剂。

然后，将不同浓度的葡萄糖溶液与试剂混合，并在一定温度和时间条件下进行反应。

最后，通过测定反应后的溶液的吸光度或其他相关性质，可以得到葡萄糖浓度与测定值之间的关系。

葡萄糖标准曲线的绘制是通过将测得的各个葡萄糖浓度对应的测定值进行绘图得到的。

通常情况下，葡萄糖浓度作为自变量，测定值作为因变量，可以得到一条曲线。

这条曲线通常是一个标准的曲线，可以用来对未知浓度的葡萄糖溶液进行定量分析。

在绘制曲线时，要注意选择适当的比例尺，保证曲线在图纸上能够清晰、准确地表示出来。

葡萄糖标准曲线的应用范围非常广泛。

在临床医学中，医生可以通过测定患者血液中的葡萄糖浓度，然后将测定值代入葡萄糖标准曲线中，从而得出患者血液中葡萄糖的浓度，以帮助诊断糖尿病或监测糖尿病患者的治疗效果。

在生物化学实验中，研究人员可以利用葡萄糖标准曲线对实验中未知浓度的葡萄糖溶液进行定量分析，从而得到准确的实验结果。

在食品工业中，葡萄糖标准曲线可以用来测定食品中葡萄糖的含量，保证食品质量和安全。

总之，葡萄糖标准曲线是一种重要的定量分析方法，具有广泛的应用价值。