水中耐热大肠菌群检测方法
大肠菌群检测(MPN法)
大肠菌群检测(MPN法)大肠菌群检测(MPN法)是一种常用的微生物学技术，可用于检测土壤、水源、食品等中的大肠菌群进行水质和食品安全监测。
本文将介绍大肠菌群及其检测方法-最可能数法(MPN法)。
一、大肠菌群概述大肠菌群是以肠道菌属为主体的一类细菌，包括肠道埃希菌、沙门氏菌、志贺菌、伤寒杆菌等成员，它们可以在人类和动物的肠道中生存并繁殖。
在自然界中，大肠菌群也是广泛存在的微生物家族，如彗星菌、副肠杆菌、耶尔森氏菌等都属于大肠菌群。
1.菌落计数法该方法主要是利用琼脂平板培养皿在水培的条件下，大肠菌群在培养基上经不同时间的生长，形成菌落来进行菌数计数。
缺点是容易受到其他微生物的干扰，只能算出概略的数值，一定误差，没有国家标准。
2. 硝酸德钠试剂法将测样加硝酸德阳试剂进行加热，最终乳黄色的镜检测前进行比色，得出含大肠菌群的细菌群落达标后延迟显色的时间。
该方法已被最可能数(MPN)法所替代。
3. 最可能数法(MPN法)该方法先将测量的样品分别稀释到不同浓度下，再将每一份稀释液添加到以琼脂平板固化培养基为基础的不同培养液中，观察哪一份培养液出现大肠菌群的生长，最后通过MPN表格计算每85ml或100ml的水样中最可能含有的大肠菌群数量，计算公式为：10^x = n / 联合效价（即dilution rate的倒数）其中，x代表最可能数，n代表测量到大肠菌群的样品数。
在实际工作中，MPN法检测显示出了较好的结果，优点是用固定方法，可重复性好，而且可以通过相关将分析获得定量值，便于与相关的标准进行比较。
三、大肠菌群的检测范围1. 水源：大肠菌群检测是办公室里检测饮用水可能携带的最佳方法。
一般情况下，检测过程是检测水中的微生物是否合乎标准。
2.食品：由于食品生产经常存在卫生要求，因此食品也是大肠菌群检测重要的一环。
例如，必须检测火腿或肉类制品中的大肠菌群是否合格以确保食品安全。
3. 其他领域：大肠菌群检测可以用于医学、农业、环境和建筑等领域，如医院污水浑浊度的检测和土壤中大肠菌群的检测。
mpn法检测大肠菌群的原理
mpn法检测大肠菌群的原理1. 什么是MPN法？大家好，今天咱们聊聊MPN法，也就是最可能数法，这可是检测水中大肠菌群的“神器”呢！MPN法的英文全名是“Most Probable Number”，翻译过来就是“最可能数”。
听起来是不是很神秘？其实它就是一种通过统计学的方法来估算水里大肠菌群的数量，通俗点说，就是看水中藏着多少小“坏蛋”。
首先，MPN法听起来有点复杂，其实它的工作原理还挺简单的。
咱们可以把它理解成一种通过“打样”的方法来找出水中的大肠菌群到底有多少。
这就好比我们去商场逛街，看到一件漂亮的衣服，试穿了几件差不多款式的，最终决定了买哪一件。
MPN法也是这样，它通过一系列的实验，来估算大肠菌群的数量。
要知道，大肠菌群这家伙可是影响水质的重要因素，所以咱们得好好了解一下它们的情况。
2. MPN法的基本步骤2.1 采样和稀释说到MPN法，首先要做的就是采样。
就像咱们去商场挑衣服一样，第一步是挑选你想要的样品。
这里咱们的样品是水，特别是那些咱们平时喝的水，或者用来洗菜、做饭的水。
这些水可得小心处理，不然大肠菌群的数量会被弄得不准确。
采样之后，我们需要把水样进行稀释。
稀释的目的是为了减少水中大肠菌群的浓度，使得后续的实验更容易操作。
这个过程就像是调配饮料时，加水稀释一样。
稀释得越多，水样中的细菌浓度就越低。
这样做是为了确保在实验时，能准确地找出大肠菌群的数量。
2.2 培养和观察接下来，我们把稀释后的水样放到培养基里去培养。
培养基是一种特殊的营养液，可以让细菌在里面繁殖。
就像给植物提供土壤一样，培养基给细菌提供了生长的环境。
这个过程需要一点时间，一般来说，细菌在培养基里待24到48小时，就可以看到结果了。
观察结果的时候，我们需要注意培养基的变化。
如果水样中有大肠菌群，它们会在培养基中产生一些气体或者改变颜色，这就像是植物长出了新芽一样。
通过观察这些变化，我们可以判断水样中是否有大肠菌群存在。
如果培养基的颜色发生了变化，那就意味着水中有大肠菌群，咱们可以进一步计算它们的数量。
水中总大肠菌群检测方法
水中总大肠菌群检测方法
水中总大肠菌群检测一般采用以下方法：
1. 高级培养基方法：将取样的水样加入适当的营养培养基中，培养出细菌，并计数大肠菌群的数量。
常用的培养基有大肠杆菌培养基、MacConkey培养基等。
2. 荧光定量PCR方法：通过PCR技术检测水中大肠菌群的DNA，使用荧光探针结构标记大肠杆菌特异性基因，通过测定荧光信号进行定量分析。
3. 流式细胞仪方法：将水样进行染色，然后通过流式细胞仪分析计数大肠菌群的数量。
常用的染色方法有DAPI染色法、荧光活菌染色法等。
4. 基于微生物生物传感器的方法：利用微生物细胞对特定细菌的识别和响应能力，设计合成生物传感器来监测水中大肠菌群的存在和数量。
以上方法可根据实际需要选择使用，各自具有不同的优缺点。
在进行水环境监测时，可以结合多种方法进行检测，以获得准确和可靠的结果。
水中总大肠菌、大肠埃希氏菌和耐热大肠菌群的测定 光度法
水中总大肠菌、大肠埃希氏菌和耐热大肠菌群的测定光度法
水中总大肠菌、大肠埃希氏菌和耐热大肠菌群的测定是一项重要的环境监测工作，对于保障水质安全具有重要意义。
光度法是一种常用的测定方法，通过测定样品中细菌的光学密度来间接反映其浓度，具有操作简便、结果准确等优点。
本文将介绍水中总大肠菌、大肠埃希氏菌和耐热大肠菌群的光度法测定方法。
一、实验仪器与试剂
1. 实验仪器：分光光度计
2. 试剂：含有氯化铁的培养基、无菌水
二、样品处理
1. 取水样：从待测水体中取得一定体积的水样，使用无菌容器收集。
2. 过滤处理：将水样通过0.45μm的微孔滤膜过滤，以去除大颗粒悬浮物和杂质。
3. 稀释处理：取适量过滤后的水样，用含有氯化铁的培养基进行适当稀释，以提高细菌在培养基中的生长适应性。
三、菌落计数
1. 培养条件：将处理后的水样接种在含有氯化铁的培养基上，进行37℃培养24小时。
2. 计数方法：取适量培养好的菌落涂布在琼脂平板上，进行菌落计数。
四、光度法测定
1. 光学密度测定：取适量经过稀释处理的水样，用分光光度计在特定波长下进行吸光度测定。
2. 细菌浓度计算：根据吸光度值和标准曲线，计算出水样中细菌的浓度。
五、结果分析
根据测定得到的数据，可以对水样中总大肠菌、大肠埃希氏菌和耐热大肠菌群进行浓度分析，为水质安全评价提供参考依据。
通过光度法测定水中总大肠菌、大肠埃希氏菌和耐热大肠菌群的浓度，可以及时了解水质情况，为环境保护和公共卫生安全提供重要数据支持。
希望本文介绍的光度法测定方法对相关工作人员有所帮助。
水中大肠菌群的检测
水中大肠菌群的检测法——（多管发酵法）一、实验原理大肠菌群是评价水质好坏的一个重要的卫生指标，也是反映水体被生活污水污染的一项重要监测项目。
大肠菌群是一群以大肠埃希氏菌（Escherichia coli）为主的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，在37℃生长时，能在48小时内发酵乳糖并产酸产气。
我国生活饮用水卫生标准中规定一升水样中总大肠菌群数不超过三个。
多管发酵法包括初发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。
发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培养基，并倒置一德汉氏小套管。
乳糖能起选择作用，因为很多细菌不能发酵乳糖，而大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气。
本实验为精简实验，所以省略了平板分离和复发酵试验后两部分，直接通过第一部分初发酵试验的颜色变化进行判断是否存在大肠菌群。
初发酵试验水样接种于发酵管内，37℃下培养，24小时内小套管中有气体形成，并且培养基混浊，颜色改变，说明水中存在大肠菌群，为阳性结果。
48小时后仍不产气的为阴性结果。
二、实验器材1.水样中心湖的湖水2．试剂三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管3．仪器及其它用品移液枪，16支试管（16支德汉氏小套管）三、实验步骤初发酵试验取16支发酵管，其中10支用移液管加入10ml一倍的乳酸蛋白胨培养液，5支加入5ml三倍乳糖蛋白胨培养液，1支加入9ml自然水。
然后往16支试管各倒置一支汉氏小套管。
完成后包装好，于121℃高压灭菌锅中灭菌30min左右。
将取回来的中心湖水样稀释20倍。
待试管冷却后，在无菌操作条件下，向装有三倍的乳酸蛋白胨培养液的5支试管加入10ml水样，向装有一倍的乳糖蛋白胨培养液的5支试管中加入1ml水样，向装有一倍的乳酸蛋白胨培养液的另5支试管中加入1ml 10-1水样。
将各试管充分混均，置于37℃恒温箱中培养24h。
四、实验结果同时观察其他两组也是用中心湖水样的，其结果全都是显示为黄色。
初步得出，取回来的水样的大肠菌群严重超标，比检测表的上限还要高，已经失去检测的意义了。
水中大肠菌群的检测
水中大肠菌群的检测法——（多管发酵法）一、实验原理大肠菌群是评价水质好坏的一个重要的卫生指标，也是反映水体被生活污水污染的一项重要监测项目。
大肠菌群是一群以大肠埃希氏菌（Escherichia coli）为主的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，在37℃生长时，能在48小时内发酵乳糖并产酸产气。
我国生活饮用水卫生标准中规定一升水样中总大肠菌群数不超过三个。
多管发酵法包括初发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。
发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培养基，并倒置一德汉氏小套管。
乳糖能起选择作用，因为很多细菌不能发酵乳糖，而大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气。
本实验为精简实验，所以省略了平板分离和复发酵试验后两部分，直接通过第一部分初发酵试验的颜色变化进行判断是否存在大肠菌群。
初发酵试验水样接种于发酵管内，37℃下培养，24小时内小套管中有气体形成，并且培养基混浊，颜色改变，说明水中存在大肠菌群，为阳性结果。
48小时后仍不产气的为阴性结果。
二、实验器材1.水样中心湖的湖水2．试剂三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管3．仪器及其它用品移液枪，16支试管（16支德汉氏小套管）三、实验步骤初发酵试验取16支发酵管，其中10支用移液管加入10ml一倍的乳酸蛋白胨培养液，5支加入5ml三倍乳糖蛋白胨培养液，1支加入9ml自然水。
然后往16支试管各倒置一支汉氏小套管。
完成后包装好，于121℃高压灭菌锅中灭菌30min 左右。
将取回来的中心湖水样稀释20倍。
待试管冷却后，在无菌操作条件下，向装有三倍的乳酸蛋白胨培养液的5支试管加入10ml水样，向装有一倍的乳糖蛋白胨培养液的5支试管中加入1ml水样，向装有一倍的乳酸蛋白胨培养液的另5支试管中加入1ml 10-1水样。
将各试管充分混均，置于37℃恒温箱中培养24h。
四、实验结果同时观察其他两组也是用中心湖水样的，其结果全都是显示为黄色。
初步得出，取回来的水样的大肠菌群严重超标，比检测表的上限还要高，已经失去检测的意义了。
水中耐热大肠菌群检测方法
水中耐热大肠菌群检测方法水中耐热大肠菌群检测是一种用于评估水质和判断水域环境卫生安全的重要方法。
下面是关于水中耐热大肠菌群检测的10条基本信息以及详细描述：1. 流式细胞术：流式细胞术是一种通过将水样中的细菌标记并通过流式细胞仪进行检测和计数的方法。
适用于快速分析水样中的大肠菌群含量。
2. 膜过滤法：膜过滤法通过将水样通过膜滤器，筛选并集落大肠菌群，并在适当的培养基上进行培养，可用于定量检测水样中的大肠杆菌。
3. PCR技术：PCR技术通过引物对大肠菌群的DNA进行扩增，从而快速检测水样中的大肠菌群的数量和种类。
可以利用PCR技术进行快速筛选和检测水质。
4. 培养方法：传统的培养方法通过将水样中的细菌在适当的培养基上进行培养，进行形态和生理特性的观察，并通过计数菌落形成单位(CFU)来评估水样中大肠菌群的含量。
5. 颜色指示法：这种方法通过将水样与专门的指示剂配合使用，观察颜色变化以识别大肠菌群污染。
可以通过比较颜色的深浅程度来估计水样中大肠菌群的含量。
6. 微生物生化方法：利用大肠菌群的特定生化反应，如气体产生、酶反应等来判断水样中是否存在大肠菌群污染。
适合用于水样中大肠菌群含量的快速筛查。
7. 荧光显微镜技术：荧光显微镜技术利用特定的荧光探针标记细菌，通过显微镜观察细菌的形态和分布情况，可以用来定性检测大肠菌群。
8. 免疫学检测方法：免疫学检测方法通过检测水样中的大肠菌群特异性抗原或抗体来判断细菌的存在与否。
可以利用快速免疫层析法或ELISA法进行大肠菌群的快速检测。
9. 流动细胞技术：流动细胞技术将水样通过流动细胞仪，利用荧光标记的细胞特异性探针检测水中的大肠菌群。
可用于快速检测水质中大肠菌群的含量和分布。
10. 分子生物学方法：分子生物学方法可以通过分析水样中的DNA或RNA序列，利用特定的引物对大肠菌群进行特异性检测。
使用16S rRNA基因扩增子测序技术可以鉴定水样中的大肠菌群种类和丰度。
耐热大肠菌群粪大肠菌群快速检测（酶底物法）
耐热⼤肠菌群粪⼤肠菌群快速检测（酶底物法）1 适⽤范围本⽅法适⽤于⽣活饮⽤⽔及其⽔源⽔、地表⽔、污⽔、废⽔等⽔中粪⼤肠菌群（耐热⼤肠菌群）的定性检测、定量检测2 ⽅法原理固定底物酶底物法（DST）采⽤⼤肠菌群细菌能产⽣β-半乳糖苷酶分解ONPG使培养液呈黄⾊的原理，来判断⽔样中是否含粪⼤肠菌群（耐热⼤肠菌群），粪⼤肠的培养温度是44.5℃。
3 仪器设备3.1 程控定量封⼝机3.2电热恒温培养箱3.3 冰箱3.4 51孔定量盘、97孔定量盘3.5 100ml⽆菌⽔样瓶3.6 ⾼压蒸汽灭菌锅3.7 ⼲热灭菌器3.8 量筒3.9 吸管3.10 试管4 培养基和试剂4.1 科⽴得（固定底物技术酶底物法）检测试剂：MMO-MUG培养基4.2 ⽆菌⽔5 样品的采集和保存5.1采样前准备：5.1.1 采样瓶：采⽤IDEXX公司科⽴得系统配套的灭菌100毫升消毒带刻度容器。
5.2 样品采样及注意事项5.2.1将已灭菌和封包好的采样瓶，⽆论在什么条件下采样时，均要⼩⼼开启包封纸和瓶盖，避免瓶盖及瓶⼦颈部受杂菌污染，并注意在使⽤船只或附带的采样绳等附加设备采样时可能造成的污染。
5.2.2 在采集江、河、湖、库、地表⽔样时，可握住瓶⼦底部直接将采样瓶插⼊⽔中，约距⽔⾯10~15厘⽶处，瓶⼝朝来⽔⽅向，使⽔样灌⼊瓶内。
如果没有⽔流，可握住瓶⼦⽔平前推，直⾄充满⽔样为⽌。
采好样后，迅速盖上瓶盖和包装纸。
采样后，采样瓶内上部应留有⼀些空隙，以便检验前充分混匀⽔样。
5.2.3 ⽤采样器采样时，将⽆菌的⽔样瓶放⼊架内。
将采样装置放⼊⽔中。
到达预定深度后，打开瓶塞，待⽔样灌好后，松开瓶塞的软绳，盖上瓶盖。
再将整个装置提出⽔⾯。
5.2.4 从⾃来⽔龙头采集样品时，不要选⽤漏⽔的龙头，采⽔前可先将⽔龙头⽤酒精灯⽕焰灼烧灭菌或⽤70%的酒精溶液消毒⽔龙头及采样瓶⼝，然后将⽔龙头完全打开，放⽔数分钟后除去⽔管中的滞留杂质。
采⽔时控制⽔流速度⼩⼼接⼊瓶内。
水中耐热大肠菌群检测方法
水中耐热大肠菌群检测方法水中耐热大肠菌群是指在水体中生存繁殖的耐热性强的大肠杆菌及其近缘菌种。
这些菌群可以引起水污染，可能对人类健康造成潜在风险。
因此，水中耐热大肠菌群的检测对于水质评估和公众健康至关重要。
本文将介绍一种常用的水中耐热大肠菌群检测方法。
传统方法：1.涂标法：将水样涂于大肠杆菌选择性琼脂培养基的表面，培养并检测菌落形成。
2.溶解法：将水样固体沉淀后，培养在大肠杆菌选择性琼脂培养基中，培养并检测菌落形成。
这些传统方法的主要优点在于简单易行，但也存在着一些缺点，如操作时间长，对菌种的选择性不够明确，容易产生假阳性和假阴性结果等。
随着生物技术的不断发展，现代分子生物学技术的应用广泛，水中耐热大肠菌群的检测方法也得到了很大的改进和完善。
现代方法：1.PCR法：PCR（聚合酶链式反应）是一种高灵敏度的核酸检测方法，可以直接从水样中检测到耐热大肠菌的DNA。
通过PCR扩增特定的基因序列，如16SrRNA基因序列，来进行耐热大肠菌的检测。
这种方法具有高度的特异性和灵敏度，可以快速准确地检测到耐热大肠菌的存在。
2.荧光原位杂交法：荧光原位杂交（FISH）是一种直接在原位上检测特定细菌群落的方法。
通过标记具有亲缘关系的细菌的特定DNA序列，然后在水样中进行原位杂交，通过荧光显微镜观察，并计数特定菌群的数量。
这种方法不仅可以定量，还可以确定细菌群落的分布情况。
3.基于纳米技术的检测方法：近年来，基于纳米技术的检测方法也得到了广泛的应用。
例如，通过使用有特定响应于耐热大肠菌存在的纳米材料，如金纳米颗粒，可以实现对耐热大肠菌的快速检测和定量，并且具有高灵敏度和良好的选择性。
综上所述，水中耐热大肠菌群的检测是十分重要的，可以通过传统方法如涂标法和溶解法，也可以通过现代方法如PCR法、荧光原位杂交法和基于纳米技术的检测方法来进行。
这些方法各有优缺点，需要根据实际需要来选择合适的检测方法。
随着技术的发展和进步，相信将会有更多更高效的水中耐热大肠菌群检测方法被开发出来，为水质监测和公众健康保护提供更好的支持。
水中大肠菌群的测定
实验水中大肠菌群的测定及结果分析一、目的要求1、学习测定水中大肠菌群检测程序、方法.2、掌握大肠菌群检测结果的报告方式.二、实验原理大肠菌群是评价水质好坏的一个重要的卫生指标,也是反映水体被生活无水污染的一项重要监测项目。
大肠菌群是一群以大肠埃希氏菌为主的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌,在37℃生长时，能在48小时发酵乳糖并产酸才产气。
食品中大肠菌群数是以每100mL（g)检样内大肠菌群最近似数(The most probable number，简称MPN）表示。
据此含义，所有食品卫生标准中所规定的大肠菌群均以100mL(g）食品内允许含有大肠菌群的实际数值为报告标准。
检查大肠菌群数,一方面能表明食品中有无粪便污染，另一方面还可以根据数量的多少，判定食品受污染的程度。
我国生活饮用水卫生标准中规定一升水样中总大肠菌群数不超过3个。
多管发酵法包括初发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。
发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培养基，并倒置一德汉氏小套管.乳糖能起选择作用，因为很多细菌不能发酵乳糖，而大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气。
三、实验器材1、培养基：乳糖胆盐发酵管、伊红美蓝琼脂、乳糖发酵管2、器皿：1ml吸管、10ml吸管、试管（15×150）、三角锥瓶500ml、三角锥瓶500ml（内装蒸馏水250ml）3、其他：酒精灯，牛皮纸或报纸,棉花，高压蒸汽菌锅，水浴锅，显微镜，香柏油，二甲苯等四、操作方法1、水样的采取池水、河水或湖水应取距水面10—15㎝的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中,然后翻转过来,除去玻璃塞，水即流入瓶中,盛满后,将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查,否则需放入冰箱中保存.2、检样稀释（1)以无菌操作，将检样25mL放于含有225mL灭菌蒸馏水水的三角锥瓶中，摇匀,做成1：10的均匀稀释液。
(2）取一支lmL吸管插入吸取1∶10稀释液1mL注入含有9mL灭菌水的试管内，振摇试管,混合均匀，做成1∶100稀释液。
GBT5750.12-2023-6.2耐热大肠菌群测定滤膜法方法验证报告
方法验证报告项目名称：生活饮用水耐热大肠菌群的测定（滤膜法）方法名称：《生活饮用水标准检验方法第12部分：微生物指标》GB/T 5750.12-2023 / 6.2滤膜法报告编写人：参加人员：审核人员：报告日期：1 实验室基本情况1.1 人员情况表1参加验证的人员情况登记表1.2 检测仪器/设备情况表2使用仪器情况登记表1.3 检测用试剂情况表3使用试剂登记表1.4 环境设施和条件情况实验室具有检定合格的温湿度计，环境可以控制在温度18⁓26℃，湿度45%⁓65%的要求范围内，满足检测环境条件，实验室人员每天对环境条件进行监控。
另外实验室配备了洗眼器、喷淋设施、护目镜、灭火器等的安全防护措施，符合实验室安全内务的要求。
2 实验室检测技术能力2.1适用范围本方法适用于生活饮用水及低浊度水源水中耐热大肠菌群的的测定。
2.2试验步骤 2.2.1准备工作2.2.1.1滤膜灭菌：将滤膜放入烧杯中，加入纯水，置于沸水浴中煮沸灭菌3次，每次15分钟。
前两次煮沸后需更换纯水洗涤2-3次，以除去残留溶剂。
或使用符合要求的一次性无菌滤膜。
2.2.1.2滤器灭菌：用点燃的酒精棉球火焰灭菌。
也可用高压蒸汽灭菌器121℃高压蒸汽灭菌20min 。
2.2.2过滤水样用镊子夹取无菌滤膜边缘部分，将粗糙面朝上，贴放在已灭菌的滤床上，固定好滤器，将100ml 水样（如水样含菌数较多，可减少过滤水样量，或将水样稀释）注入滤器中，打开滤器阀门，在-5.07×104pa （-0.5大气压）下抽滤。
2.2.3培养过滤完水样后再抽气5s ，关上滤器阀门，取下滤器，用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分，移放在MFC 培养基上，滤膜截留细菌面朝上，滤膜应与培养基完全贴紧，两者间不得留有气泡，然后将培养皿倒置，放入恒温培养箱内，（44.5±0.5）℃培养24h ±2h 。
耐热大肠菌群在此培养基上菌落为蓝色，非耐热大肠菌群菌落为灰色或奶油色。
水中大肠菌群的检测
（2）于37℃恒温培养箱中培养24小时。
4.2.2乳糖复发酵：
（1）取上述经培养24小时后产气之发酵管，用接种环接种于乳糖复发酵管中。
（2）于37℃恒温培养箱中培养24小时，产酸产气者表明该管有大肠菌群存在。
1.原理：定义或目的
大肠菌群系指能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。
食品中大肠菌群数系以100ml（g）检样内大肠群最可能数（MPN）表示。
2.仪器设备与器具：
2.1干热灭菌器：玻璃用具等之来菌用，其内部之中心温度须达170℃以上，及维持1小时以上者或160℃内2小时以上；
2.7显微镜：
2.8天平；
2.9稀释瓶：(A)250ml三角瓶；
(B)15×150mm试管；
2.10玻璃培养皿或一次性无菌培养皿；
2.11广口瓶：250ml,体附盖，灭菌后作为取样用。
2.12玻璃吸管：1ml及10ml之刻度吸管，应有0.1ml之刻度，或定量移液器（1~5ml）及（1~10ml）；
2.13三角瓶：250ml，500ml，1000配制培养基用；
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水的大肠菌群检测方法
水的大肠菌群检测方法水是生命的重要组成部分，也是人类日常生活中不可或缺的资源。
然而，水源的安全性和水质的卫生问题一直备受关注。
其中，水中的大肠菌群含量是衡量水质卫生程度的重要指标之一、大肠菌群是指肠道中的一类细菌，其中的分支肠杆菌是最常见的一种。
高含量的大肠菌群在水中存在，可能表明水源受到了粪便或下水道污染。
因此，检测水的大肠菌群含量对评估水源卫生问题至关重要。
以下是一些常见的水的大肠菌群检测方法：1. 集菌法（Most Probable Number Method，MPN）：这是一种传统的大肠菌群检测方法，常用于饮用水和游泳池水的监测。
该方法通过在不同稀释度的水样中进行培养，并观察菌落形成的情况来估算大肠菌群的含量。
这种方法的优点是简单易行，可以适用于一定量的水样，但需要较长的培养时间和专业实验室。
2. 膜过滤法（Membrane Filtration Method）：这是一种常用的水质检测方法，也常用于大肠菌群的检测。
该方法通过过滤水样，将其中的微生物捕捉在膜上，然后将膜转移到含有营养物质的培养基上进行培养。
通过计数培养基上的菌落数量，可估算出水样中的大肠菌群含量。
这种方法的优点是可以对大体积的水样进行检测，并且具有较高的准确性和灵敏度。
3. PCR法（Polymerase Chain Reaction）：PCR法是一种基于DNA分子的检测方法，可以快速检测和测定大肠菌群的含量。
该方法通过提取水样中的DNA，然后使用特定的引物和DNA聚合酶，在反应管中进行一系列温度变化的循环，扩增目标DNA片段。
最后通过凝胶电泳等技术，可以直接观察到扩增产物，从而判断水样中的大肠菌群含量。
PCR法具有高效快速、高灵敏度和高特异性等优点。
同时，PCR法还可以结合实时荧光定量PCR技术，通过测量荧光强度来定量水样中的大肠菌群含量。
4. 流式细胞仪法（Flow Cytometry Method）：流式细胞仪是一种高效、灵敏的细胞计数和分类技术。
水中粪大肠菌群(耐热大肠菌群)两种检测方法的比较研究
水中粪大肠菌群(耐热大肠菌群)两种检测方法的比较研究摘要：本文采用固定底物酶底物法与传统多管发酵法对水中粪大肠菌群进行比对试验，比较两者检测结果的一致性。
结果表明，两种方法在结果一致性方面相关性好，无统计学意义上的显著性差异，与多管发酵法相比，酶底物法具有简便快速、结果准确、特异、实验过程污染的可能性低、无二次污染等优点。
关键词：固定底物酶底物法多管发酵法粪大肠菌群中图分类号： tq92文献标识码： a 文章编号：comparative study on two detection methods of fecal coliform in water (thermotolerant coliforms )luo yun liuzhou environmental protection monitoring station, guangxi 545001abstract: this paper conducts a comparative test on fecal coliform in water with defined substrate technology(dst) enzyme substrate technique and traditional multiple-tube fermentation technique and compares the consistency of detection results. the result shows that both methods have a good correlation in the consistency of results and there is no significant difference in statistical sense. compared to multiple-tube fermentation technique, enzyme substrate technique has such advantages as simplicity, rapidness,accurate result, specificity, low possibility of pollution in the experimental process and secondary pollution avoided.key words: defined substrate technology(dst) enzyme substrate technique; multiple-tube fermentation technique; fecal coliform粪大肠菌群（耐热大肠菌群）是水质污染的重要指标之一。
水中大肠菌群的测定
水中大肠菌群的测定水中大肠菌群的测定一、实验目的1、了解和学习大肠菌群落的测定原理和测定意义2、学习和掌握大肠菌群数量与饮水卫生质量的关系和检测方法二、实验原理大肠菌群是一群能在37℃培养、48h内发酵乳糖产酸、产气的需氧或兼氧格兰氏染色阴性无芽孢杆菌。
在正常情况下，肠道中主要有大肠菌群等多种细菌，这些细菌都可以随人畜排泄物进入水源。
一些水中的肠道病原菌如沙门氏菌，也存在于人的粪便中，它们的致病能力强，存活能力差，数量有限，而且培养的条件苛刻，分离和鉴别比较困难，样品监测即使为阴性，也不能保证没有病原微生物的存在。
而大肠菌群存活能力强，数量庞大，检测方法比较简易。
此外，大肠菌群细菌在水中的存活时间、对消毒剂和水体中不良因素的抵抗力与病原菌相似，可以作为人畜粪便污染的指示菌。
目前，国际上已经公认大肠菌群的存在是粪便污染的指标。
因而对饮用水必须进行大肠菌群落的检查。
《生活饮用水卫生标准》（GB 5749-2006）规定：生活饮用水总大肠菌群数规定为MPN/100mL或CFU/100mL不得检出。
MPN 为最大可能适用于测定在一个混杂的微生物群落中虽不占优势，但却具有特殊生理功能的类群。
MPN是水的标准分析法，适用于各种水样，包括初发酵、平板分离和复发酵三部分。
三、实验材料1、水样：400mL2、培养基：乳糖蛋白胨半固体培养基、3倍浓缩乳糖蛋白胨培养液、EMB培养基。
3、灭菌水：作阴性对照用。
4、接种大肠埃希菌的水样：做阳性对照用。
5、试剂和染色剂：草酸铵结晶紫染液，碘液，泛红染液，脱色液。
6、仪器设备：超净工作台，恒温培养箱，显微镜等。
7、其他：无菌移液管、无菌锥形瓶、发酵用试管、杜氏小管、培养皿、移液枪、酒精灯等。
四、操作步骤1、初发酵在3倍浓缩乳糖培养基中加入稀释度为10^-1、10^-2、10^-3的被检样品10mL，每个稀释度5个重复，混合均匀置于37℃培养24h。
2、平板分离培养24h后如果不产酸(乳糖发酵液变黄色)，产气（小指管底部有气泡）和不变浑浊者为阴性反应，产酸、产气或者仅产酸的乳糖发酵管为阳性反应，将阳性反应划线接种在伊红美兰平板上并且进行划线接种，37℃培养24h。
水体中大肠菌群的检测步骤
水体中大肠菌群的检测步骤试验原理所谓大肠菌群，是指在37℃培育24h 内能发酵乳糖产酸、产气的兼性厌氧的革蓝氏阴性无芽孢杆菌的总称。
主要由肠杆菌科中四个属内的细菌组成，即埃希氏杆菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯氏菌属和肠杆菌属。
水的大肠菌群数是指100 mL水检样内含有的大肠菌群实际数值，以大肠菌群最近似数(MPN)表示。
在正常状况下，肠道中主要有大肠菌群、粪链球菌和厌氧芽孢杆菌等多种细菌。
这些细菌都可以随人畜排泄物进入水源，由于大肠菌群在肠道内数量多，所以，水源中大肠菌群的数量，是直接反映水源被人畜排泄物污染的一项重要指标。
目前，国际上已公认大肠菌群是粪便污染的指标。
因而对饮用水必需进行大肠菌群的检查。
水中大肠菌群的检测方法，常用多管发酵法和滤膜法。
多管发酵法可适用于各种水样的检验，但操作繁琐，需要的时间较长。
滤膜法仅适用于自来水和深井水，操作简洁、快速，但不适用于杂质较多、易于堵塞滤孔的水样。
材料与器皿()培育基1、一般乳糖蛋白胨培育液蛋白胨 10g，牛肉膏 3g，乳糖5g，氯化钠 5g，1.6%溴甲酚紫乙醇液 1.0mL，蒸馏水 1000mL，pH 7.2~7.4。
将蛋白胨、牛肉膏、乳糖、氯化钠加热溶解于1000mL蒸馏水中，调整pH为7.2~7.4，再加入1.6%溴甲酚紫乙醇液1.0mL，充分混匀，分装于有杜汉氏小管的试管中，每管10mL，115℃灭菌20min。
2、三倍浓缩乳糖蛋白胨培育液按上述一般乳糖蛋白胨培育液浓缩三倍配制，分装于有杜汉氏小管的试管中，每管5mL。
3、品红亚硫酸钠培育基(供平板分别用)蛋白胨 10g，乳糖 10g，K2HPO4 3.5g，琼脂 15-20g，蒸馏水1000mL，无水亚硫酸钠 5g，5%的碱性品红乙醇溶液 20mL，pH7.2~7.4。
4、伊红美蓝培育基(EMB培育基)(供发酵法平板分别用，3和4可任选一种)蛋白胨10g，乳糖10g，K2HPO4 2.0g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，2%伊红(曙红)水溶液 20mL，5%美蓝(亚甲蓝)水溶液13mL，pH7.2~7.4。
水质 粪大肠菌群的测定 滤膜法HJ 347.1-2018
中华人民共和国国家环境保护标准HJ 347.1-2018部分代替HJ/T 347-2007水质粪大肠菌群的测定滤膜法Water quality—Determination of fecal coliform—Membrane filtration（发布稿）本电子版为发布稿。
请以中国环境出版集团出版的正式标准文本为准。
2018-12-26 发布2019-06-01 实施生态环境部发布目次前言 (ii)1适用范围 (1)2规范性引用文件 (1)3术语和定义 (1)4方法原理 (1)5干扰和消除 (1)6试剂和材料 (2)7仪器和设备 (2)8样品 (3)9分析步骤 (3)10结果计算与表示 (5)11精密度和准确度 (6)12质量保证和质量控制 (6)13废物处理 (7)14注意事项 (7)附录A（资料性附录）粪大肠菌群检验记录及报告格式 (8)i前言为贯彻《中华人民共和国环境保护法》和《中华人民共和国水污染防治法》，保护生态环境，保障人体健康，规范水中粪大肠菌群的测定方法，制定本标准。
本标准规定了测定地表水、地下水、生活污水和工业废水中粪大肠菌群的滤膜法。
本标准是对《水质粪大肠菌群的测定多管发酵法和滤膜法（试行）》（HJ/T 347-2007）滤膜法部分的修订。
本标准首次发布于2007年，原起草单位为中国环境监测总站。
本次为第一次修订。
本次修订的主要内容如下：——完善了方法原理的表述；——增加了检出限；——增加了规范性引用文件、术语和定义、干扰和消除、仪器和设备、样品采集、样品保存、精密度和准确度、质量保证和质量控制、废物处理等章节；自本标准实施之日起，《水质粪大肠菌群的测定多管发酵法和滤膜法（试行）》（HJ/T347-2007）废止。
本标准的附录A为资料性附录。
本标准由生态环境部生态环境监测司、法规与标准司组织制订。
本标准起草单位：辽宁省环境监测实验中心。
本标准验证单位：大连市环境监测中心、丹东市环境监测中心站、锦州市环境监测中心站、辽阳市环境监测站、铁岭市环境保护监测站和沈阳市疾病预防控制中心。
多管发酵法测定水中大肠菌群
多管发酵法测定水中大肠菌群
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多管发酵法测定水中大肠菌群
一、试验目标 二、试验原理 三、试验材料 四、试验步骤 五、试验汇报
多管发酵法测定水中大肠菌群
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一、试验目标
1、学习测定水中大肠菌群数量多管发酵法。 2、了解大肠菌群数量在饮水中主要性。
多管发酵法测定水中大肠菌群
划线接种于伊红美蓝琼脂平板上，再于37 ℃培养 18～24 h，将符合以下特征菌落进行染色镜检。
深紫黑色，有金属光泽；
紫黑色，不带或略带金属光泽；
淡紫红色，中心颜色较深。
多管发酵法测定水中大肠菌群
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（3）复发酵试验 将镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌菌株重复初
步发酵试验。并依据初发酵管试验阳性管查表， 即得大肠菌群数。
多管发酵法测定水中大肠菌群
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2）平皿分离（证实试验）
水中除大肠菌群外，还有其它细菌可能引 发糖类发酵，所以需要深入证实。
将初发酵管中已发酵菌液接种于伊红美兰 培养基，37 ºC培养24 h，依据菌落特征（带关 键、有金属光泽深紫色菌落），挑取可能为大 肠菌群菌落制片，经革兰氏染色，深入证实是 否为大肠菌群。
水样稀释： 10-1与10-2
接种：分别吸收1ml 10-2 、 10-1和原水样接入装 有10ml普通浓度乳糖蛋白胨发酵管 ；另取10ml原 水样接入装有5ml三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管 ， 混匀后，37 ℃培养24 h，24 h未产气继续培养48 h。
多管发酵法测定水中大肠菌群
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（2）平板分离 将经24 h和48 h培养后产酸产气发酵管，分别
2.思索题
（1） 何谓大肠菌群，它主要包含哪些细菌属？
水中总大肠菌、大肠埃希氏菌和耐热大肠菌群的测定 光度法 -回复
水中总大肠菌、大肠埃希氏菌和耐热大肠菌群的测定光度法-回复水中总大肠菌、大肠埃希氏菌和耐热大肠菌群的测定- 光度法1. 引言水是生命中不可或缺的重要资源，然而水中存在着许多潜在的细菌污染。
其中，大肠菌群中的大肠埃希氏菌在水体中的检测尤为重要，因为它们可以作为病原体或指示性微生物，反映水体是否受到了粪便污染。
耐热大肠菌群的测定则是为了评估水体中存在的耐热菌的数量，以考察水体的卫生质量。
2. 实验步骤2.1 样品收集与处理从水源中收集所需样品，并确保样品容器是消毒干净的。
将水样转移到试管中，透过120目的筛布过滤以去除杂质。
将筛布冲洗，大肠埃希氏菌和耐热大肠菌群的检测要求分别使用两个筛布。
2.2 媒介培养基的制备大肠埃希氏菌的培养基制备：使用大肠埃希氏菌选择液增殖大肠埃希氏菌菌种，然后按照制造商的说明添加适量的大肠埃希氏菌生长培养基。
将培养基搅拌均匀后，分装到培养皿中，并进行灭菌处理。
耐热大肠菌群的培养基制备：使用耐热大肠菌选择液增殖耐热大肠菌菌种，然后按照制造商的说明添加耐热大肠菌生长培养基。
将培养基搅拌均匀后，分装到培养皿中，并进行灭菌处理。
2.3 样品处理与菌落计数取一定体积的水样（一般为10ml），均匀地加入到含有大肠埃希氏菌和耐热大肠菌群培养基的两个培养皿中。
在分发前使用三倍无微生物水进行稀释，确保每个培养皿中的细菌数量适合计数。
将含样品的培养皿进行培养，在适当的温度条件下孵育一定的时间（一般为37摄氏度，大肠埃希氏菌为48小时，耐热大肠菌群为24小时）。
之后，观察并数计培养皿中的菌落形成单位（CFU）。
3. 结果与数据分析根据菌落计数的结果，可以得到大肠埃希氏菌和耐热大肠菌群在水样中的数量。
将每个培养皿中的菌落计数相加，并乘以稀释倍数，即可计算出水中大肠菌的浓度。
4. 结论光度法是一种常用的快速测定水中总大肠菌、大肠埃希氏菌和耐热大肠菌群的方法。
通过观察和计数菌落形成单位，我们可以得到这些细菌在水中的相对数量。