苹果蠹蛾颗粒体病毒新株的毒力测定

苹果蠹蛾颗粒体病毒(CpGV)新株的毒力测定

摘要在甘肃省张掖市试验场李家园，通过收集，研磨感染苹果蠹蛾颗粒体病毒Cydia pomonella granulovirus（CpGV）的幼虫尸体得到苹果蠹蛾颗粒体病毒悬浊液，提纯悬浊液得到CpGV原液。将原液稀释至四个浓度梯度：1⨯105PIB/ul、0.5⨯105PIB/ul、0.25⨯105PIB/ul、1.0⨯104PIB/ul。用沾过不同浓度的苹果块喂食苹果蠹蛾幼虫，经五天左右幼虫大量死亡。校正死亡率最低是13.11%，最高的是78.23%。在与病毒的浓度对数和校正死亡率回归方程为Y=2.63x-11.95的该LD50为3.43⨯104 PIB/ul。

关键词苹果蠹蛾颗粒体病毒毒力测定新毒株

苹果蠹蛾Cydia pomonella（L.）是一种蛀果类害虫, 属鳞翅目Lepidoptera 卷蛾科Tortricidae，主要危害苹果、沙果、梨、桃、杏、石榴、核桃等果树[1]，使果品质量下降。是一种重要的检疫性害虫，原产于欧洲东南部，在全世界除韩国、日本外的苹果产区均有分布。在欧洲，未防治的苹果园，苹果蠹蛾危害率达到95%以上，成为当地危害苹果最重要的害虫。在中国主要分布于新疆、甘肃省张掖市以西等地[2˜5]。

苹果蠹蛾颗粒体病毒Cydia pomonella granulovirus（CpGV）40年前发现于墨西哥[6]，初期在加拿大与美国有所发展。直到2001年只有美国使用CpGV防治苹果蠹蛾，2003年以后才在美国大量生产[7˜9]。目前，各国均致力于CpGV的应用研究。但在我国尚无有关苹果蠹蛾颗粒体病毒新株的报道，本研究通过收集被感染幼虫尸体，研磨、分离、提纯、镜检等过程，确认发现CpGV新毒株。并通过室内实验测定其毒力。

1 材料与方法

1.1 病毒的收集、分离与提纯

在甘肃省张掖市试验场苹果园发现被感染致死的苹果蠹蛾幼虫，经收集、研磨和镜检，发现一种致死因子是颗粒体病毒。经扩毒，收集、研磨、提纯得到苹果蠹蛾颗粒体病毒原液。

1.2试虫来源

实验用虫采集于新疆喀什市疏勒县一荒废的苹果园内，在第一代幼虫三龄高发期采摘大量有虫果，剥出幼虫后进行饲养。选取三龄幼虫放到1.5ml离心管内，

用新鲜的苹果块进行饲养。

1.3室内毒力测定

该实验设1个对照，5个浓度梯度：1⨯105PIB/ul、0.5⨯105PIB/ul、0.25⨯105PIB/ul、1.0⨯104PIB/ul、6.25⨯103PIB/ul。每个处理三个重复，每个重复需三龄幼虫70只左右，供需1000只幼虫［10］。把三龄幼虫放入消毒的1.5ml离心管中，饿24h后喂毒。将苹果切成3⨯3mm的小块，用移液器分别吸取不同浓度的病毒液，每一小块苹果滴1ul液体，将其放入离心管中喂毒。对照每个苹果块滴1ul水。1d后喂食新鲜的苹果块（5⨯15mm）。

2 结果与分析

喂毒后每隔24h观察记录各处理浓度死亡数，计算平均死亡率和校正死亡率。利用SPSS统计分析软件对下列数据分析，求得毒力回归方程。并将已死幼虫收集放入5ml离心管中，待以后提纯。经9d后喂毒幼虫大部分已经死亡。观察喂毒5天后试虫校正死亡率，由表1可知最大校正死亡率为78.23%，最小为13.11%。

表1 不同浓度的CpGV对苹果蠹蛾的死亡率

浓度（PIB/ul）死亡数（只）平均死亡率（%）校正死亡率（%）

X1 X2 X3

CK 0 0 0 0

1⨯105PIB/ul. 55 53 56 78.23 78.23

0.5⨯105PIB/ul 41 40 43 59.12 59.12

2.5⨯104PIB/ul 30 31 28 42.38 42.38

1.25⨯104PIB/ul 16 16 15 2

2.37 22.37

6.25⨯103PIB/ul 10 9 9 13.11 13.11

其它相关数据如表2所示，可知其5天后的LC50为3.43⨯104 PIB/ul，相关系数为0.937。

表2 CpGV对苹果蠹蛾的毒力效果

95% 置信限度回归方程LD50（PIB/ul）Pearson相关性

下限上限

Y=2.63x-11.95 3.43⨯1040.937 2.88⨯104 4.16⨯104

得到Logit-浓度的对数的回归方程：Y=2.63x-11.95（图1）。

图1 Logit-浓度的对数与校正死亡率的关系曲线

由以上数据可以推出，CpGV对苹果蠹蛾三龄幼虫毒力效果较为显著，能有效的应用防治苹果蠹蛾。8天后，处理浓度为1⨯105 PIB/ul的幼虫100%死亡，浓度为6.25⨯103PIB/ul的幼虫死亡率不到60%。

3 讨论

从本文的研究结果可知，苹果蠹蛾颗粒体病毒对苹果蠹蛾三龄幼虫有较强的致病性，初次利用离心管饲养幼虫效果较好。据国外相关报道，苹果蠹蛾颗粒体病毒对低龄幼虫具有更强的致病性，在防治应用上施药时间最好在幼虫低龄期。该病毒具有长效性，可以通过雨水、灰尘等进行传播。但病毒产生效果需要的时间较长，应结合物理防治通过诱集成虫，掌握其幼虫发生高峰期，提前喷药防治。

苹果蠹蛾幼虫对CpGV易产生抗性，国外已有相关报道，但在我国CpGV 尚未应用于防治苹果蠹蛾，故苹果蠹蛾幼虫对CpGV较为敏感［10˜11］。另外，CpGV 对紫外线较为敏感，应选择傍晚或阴天时喷药；若在炎热和阳光充足的季节施用次数应增加[12]。为使所得数据更加准确，更能证明CpGV新株的致病显著性，需在今后进行田间试验来补充说明。

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