菌种甘油管保藏法
甘油冷冻保藏法
甘油冷冻保藏法本方法适合于中、长期菌种保藏，保藏时间一般为2-4年左右。
（1）用火焰灭菌的接种环取斜面菌种在平皿上划线分离单菌落。
（2）平皿倒置于30℃或37℃恒温培养箱，培养24-48小时，至单菌落的大小为3mm左右。
（3）挑取一个单菌落，接种于一个装50mL的300mL三角瓶中30℃或37℃振荡培养10-15小时，至菌密度OD600为1.0-1.5。
（4）用火焰灭菌的接种环取少量种子液，涂片后，作革兰氏染色，在显微镜下观察菌体的形态，及是否有杂菌。
（5）按30%甘油：种子液为1：1（V/V）的量加入无菌甘油，混合后分装至事先灭菌的菌种保存管（1-2mL/管），-70℃或液氮保存。
冷冻干燥保藏法（1）准备安瓿管用于冷冻干燥菌种保藏的安瓿管宜采用中性玻璃制造，形状可用长颈球形底的，亦称泪滴型安瓿管，大小要求外径6-7.5mm，长105mm，球部直径9-11mm，壁厚0.6-1.2mm。
也可用没有球部的管状安瓿管。
塞好棉塞，1.05kg/cm2，121.3℃灭菌30分钟，备用。
（2）准备菌种，用冷冻干燥法保藏的菌种，其保藏期可达数年至十数年，为了在许多年后不出差错，故所用菌种要特别注意其纯度，即不能有杂菌污染，然后在最适培养基中用最适温度培养，使培养出良好的培养物。
细菌和HYPERLINK "/Search.asp?Field=Title&ClassID=&keyword=酵母" 酵母的菌龄要求超过对数生长期，若用对数生长期的菌种进行保藏，其存活率反而降低。
一般，细菌要求24—48小时的培养物；HYPERLINK "/Search.asp?Field=Title&ClassID=&keyword=酵母" 酵母需培养3天；形成孢子的微生物则宜保存孢子；放线菌与丝状真菌则培养7-10天。
（3）制备菌悬液与分装以细菌斜面为例，用脱脂牛乳2ml左右加入斜面试管中，制成浓菌液，每支安瓿管分装0.2ml。
菌种甘油保存方法
菌种甘油保存方法
1 将要保存菌种接种于LB液体培养至对数生长期（肉眼见培养体系内浑浊即可）
2 将甘油稀释至浓度为50%（等体积蒸馏水加等体积甘油，甘油需要慢慢吸）
3 将甘油、2 ml离心管、枪头等试验用品于121℃灭菌20min
4 无菌条件下将菌液与50%浓度甘油1:1等体积混合于离心管中，甘油终浓度为25%
5 于-20℃冰箱内保存
有效期1年
再次使用钱30°水浴后接种到固体培养基上即可
正常是直接把保藏液接到液体培养基中，让后生长24-48h后，将菌液再次转接到新的液体培养基中。
新的菌液就可以划线培养了。
原始菌种不够的情况下先扩繁十个固体培养基
如果用菌液的话接种到液体培养基上
步骤是固液液用第二个实验第三个保存。
微生物菌种保藏方法
微生物菌种保藏方法1、传代保存法：有些微生物当遇到冷冻或干燥等处理时，会很快死亡，因此在这种情况下，只能求助于传代培养保存法。
传代培养就是要定期地进行菌种转接、培养后再保存，它是最基本的微生物保存法，例如酸奶等常用生产菌种的保存。
传代保存时，培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。
培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。
若为产酸菌种，则应在培养基中添加少量碳酸钙。
一般地，大多数菌种的保藏温度以5℃为好，像厌氧菌、霍乱弧菌及部分病原真菌等微生物菌种则可以使用37℃进行保存，而蕈类等大型食用菌的菌种则可以室温直接保存。
传代培养保存法虽然简便，但其缺点也很明显，如：①菌种管棉塞经常容易发霉；②菌株的遗传性状容易发生变异；③反复传代时，菌株的病原性、形成生理活性物质的能力以及形成孢子的能力等均有降低；④需要定期转种，工作量大；⑤杂菌的污染机会较多。
2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长，适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。
此法可防止干燥，并通过限制氧的供给而达到削弱微生物代谢作用的目的。
其具有方法简便的优点，同时也适用于不宜冷冻干燥的微生物（如产孢能力低的丝状菌）的保存，而某些细菌如固氮菌、乳酸杆菌、明串珠菌、分枝杆菌、红螺菌及沙门氏菌等和一些真菌如卷霉菌、小克银汉霉、毛霉、根霉等不宜采用此法进行保存。
3、载体保存法：即将微生物吸附在适当载体上进行干燥保存的方法。
常用的有方法包括以下几种，如：①土壤保存法：主要用于能形成孢子或孢囊的微生物菌种的保藏。
方法是在灭菌的土壤中加入菌液，立即在室温下进行干燥或使菌体繁殖后再干燥，然后冷藏或在室温下密封保存。
保存用的土壤原则上以肥沃的耕土为宜，土壤需风干、粉碎、过筛和灭菌。
使微生物在土壤中繁殖后进行干燥保存的方法是：取适量土壤（5克）置于塞有棉塞的试管中，加水或加入充分稀释的液体培养基（以含水量为土壤最大持水量的60%为宜），然后高压灭菌。
甘油管冷冻保藏方法总结
甘油冷冻保藏法本方法适合于中、长期菌种保藏,保藏时间一般为2-4年左右。
(1)用火焰灭菌的接种环取斜面菌种在平皿上划线分离单菌落。
(2)平皿倒置于30℃或37℃恒温培养箱,培养24-48小时,至单菌落的大小为3mm左右。
(3)挑取一个单菌落,接种于一个装50mL的300mL三角瓶中30℃或37℃振荡培养10-15小时,至菌密度OD600为1.0-1.5。
(4)用火焰灭菌的接种环取少量种子液,涂片后,作革兰氏染色,在显微镜下观察菌体的形态,及是否有杂菌。
(5)按30%甘油:种子液为1:1(V/V)的量加入无菌甘油,混合后分装至事先灭菌的菌种保存管(1-2mL/管),-70℃或液氮保存。
用甘油保存过细菌,酵母,霉菌和放线菌,40%-50%的甘油是它的最终浓度。
甘油浓度过低低温保存易结冰,使菌死亡。
我同学有直接将菌液-20保存的,不加任何保护剂,但保存的时间很短,他们保存过一年的,但很多有死掉的。
我们做大肠杆菌感受态,最终甘油是15%的浓度,有时结冰也会使菌死掉。
我用40%-50%的甘油最终浓度一直很好,也不结冰。
甘油一般是用那种蓝盖的小管(1毫升)灭菌,放0.7毫升左右的甘油,然后加菌悬液0.1至0.2毫升即可。
甘油菌种比列为7:1.甘油管保藏与活化:在做一丝状真菌的甘油管保藏(-80度超低温保存,以甘油做保护剂),大家提点建议。
是将菌在液体摇瓶中培养后将菌液与甘油混合、将固体培养的菌块捣碎成菌液再与甘油混合,还是直接将菌块挑至甘油中甘油与菌液的比值多少最合适,等等。
用该法保藏过的菌种,如何活化?保种的菌先接种在培养液里活化好;配置50%的甘油溶液,灭菌;1:1加入,直接放入-80度;复苏的时候,冰上融化,直接接入培养液中。
除了可以用液体培养基菌丝保藏外。
要是你要保藏的丝状真菌能产孢子的话,还可以制成孢子悬浮液保藏,这样保藏的时间能长了些,到时活化的几率也大。
制备过程大致如下:用无菌的蒸馏水将丝状真菌斜面孢子洗出,接着用带脱脂棉的漏斗过滤制备孢子悬浮,.该悬浮液与40-50%甘油溶液按1:1混合均匀后,即可。
食用菌菌种保藏的方法
食用菌菌种保藏的方法
食用菌是一种广泛使用的食品，如何保存食用菌的菌种是非常重要的。
下面介绍几种常用的菌种保藏方法。
一、冷冻法
冷冻法是将菌种置于低温下，使其处于冷冻状态以达到保藏的目的。
将菌丝均匀地涂于平板上，置于-80℃的低温冷冻柜中冷冻，或将菌丝混入15%甘油溶液中，用液氮冷冻保存。
这种方法保存的菌种质量较好，保藏时间较长。
二、干燥法
将菌丝培养在无菌环境下，培养到菌丝生长至顶部时，用无菌石英砂或无菌滤纸吸干培养皿内的水分，再将石英砂或滤纸中的菌种置于无菌条件下进行干燥，然后密封保存。
这种方法使用简单，保存时间较长，但保存的菌种易受到氧气、温度和湿度等因素的影响。
三、冷藏法
冷藏法是将培养好的菌种置于低温环境下进行保存。
将培养好的菌种涂于平板上，进行初步培养，再将平板用无菌纸包好，置于4℃的冰箱中保存。
这种方法保存的菌种质量较好，但保存时间较短。
四、液氮保存法
将培养好的菌种混入15%甘油溶液中，用液氮冷冻保存。
这种方法保存的菌种质量较好，保存时间长达数年，但需要液氮存储设备。
五、糖分保藏法
将培养好的菌种混入10%蔗糖水溶液中，用常温保存。
这种方法保存的菌种质量较好，保存时间长达数年，但需要注意保藏容器的密封性。
不同的菌种保藏方法适用于不同的情况，我们需要根据实际情况选择合适的方法。
同时，在进行菌种保藏时，需要注意保藏容器的密封性、温度、湿度等因素，以确保保存的菌种质量。
食用菌菌种保藏的6种方法
食用菌菌种保藏的6种方法
菌种保藏的目的是通过降低菌种的代谢活力，使其处于休眠状态，减缓衰亡速度，保持菌种原有优良性状，防止杂菌污染；当恢复生活条件时，菌种能在很短时间内恢复生机，迅速生长繁殖。
母种的保藏有如下方法：
1.斜面冰箱保藏法：把生长丰满健壮的斜面母种，把棉塞在管口剪平，用蜜蜡封口或换用胶塞，存放于摄氏4度冰箱内保存。
高温菌在16摄氏度为宜。
有效期3—6个月。
2.石蜡油保藏法：斜面母种注入经二次灭菌后，在摄氏40度温箱2天蒸发水分而冷却了的石蜡油至斜面顶尖1—1.5厘米处，再用蜜蜡封管口或换用胶塞，直立于摄氏4度冰箱或室温存放。
保存期可1—2年。
3.孢子保藏法：用2×0.5×0.8厘米经灭菌的滤纸条吸附上孢子，可参考孢子分离法，然后把带孢子的纸条放入无菌试管内，置干燥器内2—3天吸干水分，再改用胶塞。
在冰箱或室温内可保存多年。
4.菌丝球保藏法：常用经灭菌的生理盐水、无菌水、蒸馏水、营养液等装入试管约5毫升作媒介，把经过液体培养至对数生长期的菌丝球4—5个，移入媒介内，用胶塞封口，冰箱摄氏4度或室温可保存1—2年。
5.液氮保藏法：常用经灭菌10%甘油蒸馏水或10%二甲基亚砜蒸馏水为保护剂，注入斜面母种管，刮下菌丝体成悬浮液或孢子液，吸取菌液0.5—0.8毫升注入已灭菌安瓿管，
熔封管口，置液氮冷冻器内，每分钟降摄氏1度，1小时内使其温度降至摄氏负35度，其后迅速降至气相摄氏负150度，液相摄氏负196度保存。
保存期可超过10年。
6.自然基质保藏法：此法多用于原种保藏。
在一些欠设备的地区，也可作母种保藏法。
菌种甘油保存方法
菌种甘油保存方法
Company Document number：WUUT-WUUY-WBBGB-BWYTT-1982GT
菌种甘油保存方法1 将要保存菌种接种于LB液体培养至对数生长期（肉眼见培养体系内浑浊即可）
2 将甘油稀释至浓度为50%（等体积蒸馏水加等体积甘油，甘油需要慢慢吸）
3 将甘油、2 ml离心管、枪头等试验用品于121℃灭菌20min
4 无菌条件下将菌液与50%浓度甘油1:1等体积混合于离心管中，甘油终浓度为25%
5 于-20℃冰箱内保存
有效期1年
再次使用钱30°水浴后接种到固体培养基上即可
正常是直接把保藏液接到液体培养基中，让后生长24-48h后，将菌液再次转接到新的液体培养基中。
新的菌液就可以划线培养了。
原始菌种不够的情况下先扩繁十个固体培养基
如果用菌液的话接种到液体培养基上
步骤是固液液用第二个实验第三个保存。
实验室最常用的五种菌种保藏方法
在现代生物学研究和生物技术应用中，菌种保藏是至关重要的环节。
恰当的菌种保藏方法能够确保菌种的活性、遗传稳定性和可用性，为科学研究的持续开展以及相关产业的发展提供坚实的基础。
本文将重点介绍实验室中最常用的五种菌种保藏方法，深入探讨它们各自的特点、适用范围以及操作要点。
一、低温冷冻保藏法低温冷冻保藏法是目前最为广泛应用且效果较为可靠的菌种保藏方法之一。
其基本原理是将菌种置于超低温环境（通常为液氮温度，即-196℃）下，使菌种细胞处于极度冷冻的状态，从而抑制其代谢活动，达到长期保存的目的。
该方法具有诸多显著优点。
低温能够极大地减缓细胞的生理活动，几乎使其处于完全停滞状态，从而有效地延长菌种的存活时间。
低温冷冻保藏对菌种的遗传稳定性影响较小，经过长期保存后，菌种的特性通常能够较好地保持。
操作相对简单，只需将菌种制备成适宜的冷冻保存液，然后置于液氮罐中即可。
在具体操作时，首先要选择合适的冷冻保存液。
常用的冷冻保存液一般含有一定比例的保护剂，如甘油、二甲基亚砜等，它们能够降低细胞内冰晶的形成对细胞的损伤。
制备好冷冻保存液后，将菌种接种到冷冻保存液中，制成菌悬液。
将菌悬液分装到合适的冷冻管中，迅速放入液氮罐中进行保存。
在液氮罐中，要定期检查液氮的液位，确保菌种始终处于适宜的低温环境中。
低温冷冻保藏法适用于大多数微生物菌种的长期保存，尤其对于那些对温度敏感、容易变异的菌种，如细菌中的一些致病菌、真菌中的丝状真菌等，具有良好的保藏效果。
然而，该方法也存在一些不足之处，例如液氮的成本较高，液氮罐的储存空间有限，以及在取出菌种进行复苏时可能存在一定的风险等。
二、干燥保藏法干燥保藏法是利用菌种在干燥环境下代谢活动受到抑制的原理来实现保藏的方法。
常见的干燥保藏法包括沙土管保藏法、滤纸保藏法等。
沙土管保藏法是将菌种接种到无菌的沙土中，然后将沙土管置于干燥器中进行干燥保存。
该方法具有操作简便、成本低廉的特点。
在干燥过程中，菌种细胞内的水分逐渐散失，代谢活动减缓，从而达到保藏的目的。
甘油保藏菌种活化步骤
甘油保藏菌种活化步骤
嘿，你问甘油保藏菌种活化步骤？那咱就来好好聊聊。
要活化甘油保藏的菌种啊，首先得准备好东西。
得有干净的培养皿、培养基啥的，就像做饭得先把锅碗瓢盆准备好一样。
然后呢，从冰箱里把保藏的菌种拿出来。
这时候可不能太着急，得慢慢拿，别把菌种给弄坏了。
就像拿宝贝一样，小心翼翼的。
接着，在无菌操作台上进行操作。
把菌种轻轻地取一点，放到培养基上。
这就像给小种子找个家一样。
放好菌种后，把培养皿放在合适的温度下培养。
不能太热也不能太冷，就像人睡觉要找个舒服的温度一样。
在培养的过程中，要经常观察菌种的生长情况。
看看有没有长出来，长得好不好。
就像照顾小婴儿一样，得时刻关注着。
如果菌种长得不好，就得找找原因。
是不是温度不合适
啊，是不是培养基有问题啊。
就像医生看病一样，得找到病根才能治好。
我给你讲个事儿吧。
我有个朋友，他在实验室里做菌种活化。
一开始他不太会，弄得手忙脚乱的。
后来他按照正确的步骤来，先准备好东西，然后小心地取出菌种，放到培养基上，再放在合适的温度下培养。
他每天都认真观察，最后菌种长得可好了。
他可高兴了，觉得自己的努力都没有白费。
所以啊，甘油保藏菌种活化要准备好东西，小心取出菌种，放在培养基上培养，经常观察。
只要你认真做，肯定能活化出好的菌种。
加油吧！。
菌种保藏方法
一、石蜡油低温保藏法本方法的原理是在长好的斜面菌上覆盖灭菌的液体石蜡，达到菌体与空气隔绝，使菌处于生长和代谢停止状态，同时石蜡油还防止水分蒸发，在低温下达到较长期的保藏菌种的目的。
保藏温度要求在-4～4℃下。
液体石蜡法适用于不产孢子的菌种。
具体操作是：菌种为斜面培养菌种，斜面不宜过长；选择纯净优质石蜡油，置三角烧瓶中经过121℃高压蒸汽灭菌1～2h，将其放烘箱中(160℃左右)干热处理，去除灭菌时渗入的水分，待石蜡油变得清澈透明后冷却即可加入斜面，斜面上不能出现气泡，液蜡添加量以高出斜面顶部约1cm为宜。
二、甘油管冷冻保藏法1．试验方法介绍本法也是利用微生物在甘油中生长和代谢受到抑制的原理达到保藏目的。
其方法是，将80%的甘油高压蒸汽灭菌待用。
将培养好的斜面菌种用无菌水制成高浓度的菌悬液(108～1010/ml)。
取1ml灭菌甘油放入与甘油充分混匀，使甘油浓度约为10%-30%，于-70℃下冻存。
-20℃保存时间较短。
或采用体积比为8：2的甘油－生理盐水，加入新鲜培养的菌体肉汤，混合均匀后至-20℃冰箱保存。
2．效果该法适用于一般细菌的保存，同时也适用于链球菌、弧菌、真菌等需特殊方法保存的菌种，适用范围广，操作简便，效果好，无变异现象发生。
甘油－生理盐水保存液保存菌种优于甘油原液，其原因可能是加入生理盐水适当降低了甘油的高渗作用，且有肉汤培养物适量增加保存液的营养成分，从而更好地保护了待保存的菌株。
三、真空冷冻干燥法1．试验原理真空冷冻干燥保藏法是兼具低温、干燥、除氧三方面菌种保藏的主要因素，除不宜于丝状真菌的菌丝体外，对病毒、细菌、放线菌、酵母及丝状菌孢子等各类微生物都适用，不宜用冻干法保存的微生物不到2%。
冷冻干燥法是在低温下快速将细胞冻结，然后在真空条件下干燥，使微生物的生长和酶活动停止。
为了防止在冷冻和水分升华过程中对细胞的损害，要采用保护剂来制备细胞悬液，使菌在冻结和脱水过程中起到保护作用的溶质，通过氢键和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。
菌种甘油保存方法
菌种甘油保存方法文件编码（008-TTIG-UTITD-GKBTT-PUUTI-WYTUI-8256）
菌种甘油保存方法1 将要保存菌种接种于LB液体培养至对数生长期（肉眼见培养体系内浑浊即可）
2 将甘油稀释至浓度为50%（等体积蒸馏水加等体积甘油，甘油需要慢慢吸）
3 将甘油、2 ml离心管、枪头等试验用品于121℃灭菌20min
4 无菌条件下将菌液与50%浓度甘油1:1等体积混合于离心管中，甘油终浓度为25%
5 于-20℃冰箱内保存
有效期1年
再次使用钱30°水浴后接种到固体培养基上即可
正常是直接把保藏液接到液体培养基中，让后生长24-48h后，将菌液再次转接到新的液体培养基中。
新的菌液就可以划线培养了。
原始菌种不够的情况下先扩繁十个固体培养基
如果用菌液的话接种到液体培养基上
步骤是固液液用第二个实验第三个保存。
严格厌氧菌菌种保藏方法
严格厌氧菌菌种保藏方法以下为本实验严格厌氧细菌的保藏方法，如果是兼性厌氧菌可参照好氧菌保藏方法保藏。
一、厌氧细菌的甘油保藏方法：1、厌氧甘油的制备：厌氧瓶或厌氧管中放置一定量的甘油，甘油的量根据需要加入，不要多加，因为厌氧甘油制备好以后不能反复灭菌，反复灭菌甘油会变性而呈黄色，且有一股芳香味道。
加入终浓度为0.04 %的L-cysteine和 1 %的5 %的N2S母液。
往厌氧瓶中通N2，通气时间和配制培养基时时间相同。
盖上塞子和盖子。
121 ℃，20 min 灭菌后备用。
2、取新鲜菌液（对数期），在通N2的情况下，用针筒和针头往有菌液的厌氧管中加入终浓度为15-20 %的厌氧甘油，再通一会N2，目的是赶走在转移甘油过程中带进去的O2。
盖上塞子和盖子，混匀，冻于-80℃。
3、活化：用针头和针头吸取一定甘油保藏的菌液，加到培养基当中，加的量一般要多于1 %，因为厌氧菌的生物量比较小，一般2到5 %左右。
目测加完甘油菌液的培养基是否浑浊，并作记录。
如果加入的菌液太多，造成一开始培养基就比较浑浊，会干扰我们对菌是否生长的判断，而且甘油太多也会抑制菌的生长。
二、厌氧细菌的冷冻干燥保藏方法：1、厌氧牛奶的制备：先配置10 % Difco Skim Milk（BD）的母液。
和厌氧甘油配制方法一样，转移到厌氧瓶中，加入加入终浓度为0.04 %的L-cysteine和 1 %的5 %的N2S母液。
通N2，盖上塞子和盖子。
113℃，15 min 灭菌后放置过夜，于4℃放置备用。
放置过夜后牛奶不结块，溶液均匀，不沉淀才可以用，否则牛奶变性，需要重新配制。
同样，厌氧牛奶只能灭菌一次，反复灭菌牛奶会变性。
2、准备冷冻干燥用的安瓿管，管口要用棉花封住，棉花缠在牙签上，这样拔出比较方便，灭菌并烘干后备用。
3、新鲜菌液离心，尽量除去上清，根据菌量加入10 % 的厌氧牛奶，一般大拇指盖大小的菌体能做15-20支安瓿管左右。
将菌体打散后，迅速分装到安瓿管中，每支安瓿管0.2 ml，并用棉花封住管口，防止杂菌污染。
医学微生物菌种保藏管理方法
医学微生物菌种保藏管理方法一、菌种保藏的基本原则1.保鲜原则：菌种在采集和分离过程中应尽量保持其原汁原味，避免外源菌的混入和污染。
2.单株原则：保藏时应保证每支菌株是单株，以保证其纯度和稳定性。
3.多种原则：对同一种微生物的不同菌株应采取多中多位保藏，以增加菌种的多样性。
4.全程可控原则：采取全程可追溯和可控制的管理方法，确保菌种的安全保藏和利用。
5.国际标准原则：按照相关国际标准和规范进行菌种保藏和管理，以提高交流和合作的效率。
二、菌种保藏的方法1.冷冻保存法：将纯菌株悬浮液或细胞片通过添加保护剂如甘油或DMSO等，将菌株冷冻保存在低温下，通常是-70°C或液氮中。
此方法简单易行，适用于细菌和真菌的保存。
2.干燥保存法：将菌落或菌株通过无菌技术处理后，放在无菌培养基上晾干后保存。
此法适用于真菌和酵母菌等耐干燥的菌种，保存条件较为简单。
3.血清冻干保存法：将微生物菌株通过添加保护剂的方法制备成冻干粉末，然后放置在低温干燥器中冻干保存。
此法适用于需长时间保存且具有较高生物学活性的病毒和细菌。
4.深层培养保存法：将纯菌株制备成深层培养基中的斜面培养或沉淀法保存。
此法适用于常规保存，保存条件较为简单。
5.液体亚培养保存法：将菌种接种到液体培养基中，通过调整培养基成分，采取亚培养保存的方式，保持菌种的生存状态。
此法适用于对菌株的要求较高的特殊菌株。
2.制度规范：建立菌种保藏和管理的工作制度和操作规范，明确工作流程和责任分工，保证工作的科学性和规范性。
3.定期检测：对保存的菌种进行定期检测，保证其纯度、活性和遗传稳定性，及时发现和处理菌种变异和污染等问题。
4.定期更新：对长时间保存的菌种进行定期更新，保持菌种的活力和可持续利用能力，与其他菌种资源中心进行流通和交换。
5.安全保障：建立菌种保藏和管理的安全保障制度，包括物理安全、信息安全和生物安全等方面的管理措施，保证菌种和研究人员的安全。
综上所述，医学微生物菌种保藏管理是一项综合性较强的工作，需要遵循基本原则，采用适合的保存方法，并且进行科学的管理和规范的操作，以确保菌种的质量和可持续利用能力。
发酵菌种的保藏方法
发酵菌种的保藏方法
一、长期保藏方法：
1.冷冻保藏：将菌种培养物接种在培养基上，培养至菌液平台期，然
后将菌液搅拌均匀后，加入等体积的甘油或酵母浸渣，混匀后分装至无菌
冻结管中，用-80℃冷冻保存。
2.干燥保藏：将菌种培养物接种在培养基上，培养至菌液平台期，用
无菌纱布将菌液吸干，然后将纱布放入无菌干燥器中进行干燥，干燥至完
全失去水分后，将纱布收入无菌试管中，封口后保存于冰箱中。
3.液态氮保藏：将菌种培养物接种在培养基上，培养至菌液平台期，
然后用冷冻管将菌液分装好，将冷冻管插入液态氮中保藏。
二、短期保藏方法：
1.酸性保藏：将菌种接种在适宜培养基上，培养至平台期，然后加入
适量的无菌稀盐酸，使培养液酸化到pH2-3左右，保存于冰箱中。
2.盐浸保藏：将菌种培养物接种在适宜培养基上，培养至菌液平台期，然后加入适量的无菌富含NaCl的液体培养基，浸泡菌种，保存于冰箱中。
3.生理盐水保藏：将菌种培养物接种在培养基上，培养至菌液平台期，然后加入生理盐水，将菌液稀释至适宜的浓度，保存于冰箱中。
无论何种保藏方法，都具备相应的优点和限制，具体应根据具体菌种
的特性和实验需求进行选择和调整。
同时，保藏前需确保菌种纯度高，无
杂菌污染，并进行相应的质量控制措施，以保证保藏的可行性和有效性。
甘油保菌
甘油冷冻保藏法本方法适合于中、长期菌种保藏，保藏时间一般为2-4年左右。
（1）用火焰灭菌的接种环取斜面菌种在平皿上划线分离单菌落。
（2）平皿倒置于30℃或37℃恒温培养箱，培养24-48小时，至单菌落的大小为3mm左右。
（3）挑取一个单菌落，接种于一个装50mL的300mL三角瓶中30℃或37℃振荡培养10-15小时，至菌密度OD600为1.0-1.5。
（4）用火焰灭菌的接种环取少量种子液，涂片后，作革兰氏染色，在显微镜下观察菌体的形态，及是否有杂菌。
（5）按30%甘油：种子液为1：1（V/V）的量加入无菌甘油，混合后分装至事先灭菌的菌种保存管（1-2mL/管），-70℃或液氮保存。
1. 20%甘油保存菌种是指甘油:菌液=20:80,800ul菌液加200u灭菌l甘油后的甘油后,充分混匀后,-70度保藏.(注意甘油要慢慢吸)2. 将一般细菌的菌种纯化后接种于普通肉汤管，4～6h增菌后，加入适量甘油一生理盐水保存液，-20℃冰箱保存；链球菌属和奈瑟氏菌属的菌株纯化后接种于血清肉汤管，在5％～10％CO2中经8～10h增菌后，加入适量保存液，80℃低温冰箱保存；真菌菌种纯化后直接取菌洗入肉汤，不做培养，加入保存液后，-20℃冰箱保存。
结果在连续3年实验期内，各菌种保存效果良好，且其形态结构、染色特性、生化反应等与标准株相符。
结论使用甘油生理盐水保存法来保存菌种，各菌种保存时间长，方法简便，特别是使链球菌、奈瑟氏菌和弧菌等需特殊保存方法保存的菌株在一般实验室得以保存。
3. 常用的是终浓度10-30% 的甘油。
由于纯甘油十分粘稠，很难定量，一般配成终浓度50% 的水溶液，高压灭菌后室温保存即可。
使用时按50% 甘油:菌液= 1:1 混合均匀，然后迅速冻结。
A. 先把甘油稀释成50%，然后灭菌这样20%的终浓度用400微的菌体加600微的50%甘油混合不就可以啦纯的甘油太粘稠啦，用枪不好吸的B 终浓度15%。
甘油保藏菌种的原理
甘油保藏菌种的原理
甘油保藏菌种是一种常用的方法，用于在低温下保存细菌菌种。
其原理基于甘油对细菌细胞具有保护作用的特性。
首先，甘油具有很强的渗透压调节能力。
当细菌在培养基中暴露在低温环境下时，温度的下降会导致细胞内水分结冰，形成冰晶，而冰晶的出现会导致细胞膜的破裂，从而对细胞造成损害甚至死亡。
而甘油在低温下具有降低水的结冰温度的作用，可以有效防止细胞内部的冰晶形成，从而保护细胞完整性。
其次，甘油还可以作为一种保护剂。
细菌在低温下容易受到氧化损伤，导致DNA、RNA和蛋白质的降解和损伤。
甘油可以
通过与细胞内部的分子相互作用，形成一种稳定的保护层，减少氧化应激对细胞的影响，防止DNA、RNA和蛋白质的降解
和损伤。
最后，甘油还可以提供能量和碳源。
在低温下，细菌的新陈代谢速度下降，细胞内能量储备减少。
甘油可以作为有机碳源和能量的供应者，为细菌提供所需的能量和营养物质，维持菌种的活力和存活。
因此，甘油保藏菌种的原理是通过甘油的渗透压调节、保护作用以及提供能量和碳源的功能，来保护细菌在低温环境下的完整性和存活能力。
菌种的甘油冷冻保存法
菌种的甘油冷冻保存法382文章编号:1007—6611c2000】04—0382—01菌种的甘油冷冻保存法山西医科大学(JShanxiMedUniv)2000,31(4d一郭淑清.田锋(山西医科大学微生物学与免疫学教研室,太原030001) ….‟一●..‟..——一摘要:以体积分数为0.8的甘油生理盐水为保存液,在一20℃保存军团苗,葡萄球苗等35个苗株.观察9年,教果良好.关键诃:墅芭苎竺堕堡堡‟{牧}缸l中圉分类号:Q93—336文献标识码:13‟..“苗种”一词有两个不同的概念.一是细苗类微生物的种(species),是生物分类学名称之一.另一为我国的习惯用法,指用于实验室操作的某些苗株,相当于西方实验室中的stockcuItu.本文菌种”系后一含义.菌种是所有与微生物有关的专业教学,科研,质控,以至生产的必要条件.自从上一世纪微生物学创始来.苗种保存便一直是一项重要的实验技术,并不断得到发展.笔者近年来试用我校谢哲子教授从美国南卡罗来纳大学医学院引进的甘油冷冻苗种保存法.效果良好.报告如下.1材料和方法11实验菌株不同种,型军团菌共23株.美国南卡罗来纳医学院惠赠;金黄色葡萄球菌,枯草杆菌,绿脓杆苗,痢虞杆菌,伤寒杆苗(TO,TH),甲型副伤寒杆苗,变形杆菌,产碱杆菌,大肠杆菌,炭疽杆菌,卡他球苗共L2株.均购自中国生物制品药品捡定所苗种中心.1.2液体培养基按不同细苗的营养要求制备.1.3苗种保存液——体积分数为0.8的甘油生理盐水:甘油(分析纯)8Om1.生理盐水2Om1.混匀;102.963kPa(1_05kg/cm2)蒸汽压下(温度121.3℃)维持15～20min灭苗.1.4菌种保存管原法用带螺盖的专用菌种保存管,因难于购到.改用连盖小塑料管,包装后高压蒸汽灭苗,压力及时间同上;蜞干.1.5苗种处理及保存将献保存的菌种接种于适宜的渡体培养基.按苗种生长要求.在适宜的气体条件及温度下孵育过夜或更长时间.直至生长良好.取此类培养物5份,加菌种保存液2份,混匀.分装于已作好标记的苗种保存管,每管约0.2ml,盖紧.立即放入一20℃冰箱.次日每种苗取一管融化.接种于适宜培养基,确证生长良好且无污染.所余各管即可长期保存.保存过程中切忌融化.2结果和讨论实验苗种按上述方法保存后,于1年末,2年末,9年末分别取样培养,全部生长良好,性状与保存前一致.在基础微生物学,医学微生物学,卫生J散生物学,兽医微生物学,食品微生物学,工业微生物学,农业微生物学,环境科学,分子生物学,毒理学,酶学,疫苗制备,药品生产等等领域.都需应用储备的标准菌株,参考菌株,特殊苗株.并常需保存新分离苗株.已报告的菌种保存方法有多种.如半固体培养基普通冰箱保存法…,渡体石蜡保存法_】,脱脂牛乳低温保存法…,脱纤维动物血液低温保存法I2-】.虽经不同实验室应用.但效果均不满意.Flosdort与Mudd创立的冷冻真空干燥法经历近一十世纪.技术有所改进.是迄今最佳的苗种保存法_3】,但所需专用仪器一般实验室难以配备.我室历来沿用普通冰箱保存半固体培养物菌种.该法虽然条件要求不高,然而必须每月传代一次,操怍包括无菌器材准备,实验动物血液采集,培养基制作及分装,细菌接种及孵育,旧苗种管的灭苗及清洗等等,消耗大量人力物力.更严重的问题是频繁的传代接种容易导致杂菌污染及苗种变异.甘油冷冻保存法则可免除上述缺点.笔者也曾试用美国疾病控制中心推荐的脱纤维血液法保存军团菌苗种(该法要求保存温度一8O℃,我们限于条件,改为～2O℃),未获成功.应用本文方法,则保存包括不易人工培养的军团菌在内的各类苗种.均获满意结果.南卡罗来纳大学医学院原法要求苗种保存于一70℃冰箱.我室缺此设备.只能使用一20℃条件,苗种保存期限能否如同一70℃一样达L0年上,有待进[标签:快照]。