菌种甘油保存方法

甘油灭菌方法

甘油灭菌方法
甘油是一种常用的保存剂，通常用于保存菌种或进行样品保藏。

关于
甘油灭菌方法，可以参考：
1. 甘油真空灭菌：使用真空干燥箱进行灭菌，具体步骤如下：将甘油
样品袋放入真空干燥箱中，设置温度不超过60摄氏度，时间视样品量
而定，灭菌后不要立即打开袋子，应等袋子自然冷却后再打开，以保
持甘油质量。

2. 环氧乙烷气体灭菌：适用于大规模、大量菌种保存的甘油样品。

先
将甘油与一定比例的环氧乙烷混合气体通过一个管道，混合气体在压
力作用下，经过一个有孔的板进入一个灭菌室。

在一定温度和压力下，混合气体中环氧乙烷可以杀死微生物。

建议根据实际情况选择合适的灭菌方式。

同时，需要注意的是，在使
用甘油保存菌种时，应确保甘油的质量，避免影响菌种的活性。

甘油冷冻保藏法

甘油冷冻保藏法本方法适合于中、长期菌种保藏，保藏时间一般为2-4年左右。

（1）用火焰灭菌的接种环取斜面菌种在平皿上划线分离单菌落。

（2）平皿倒置于30℃或37℃恒温培养箱，培养24-48小时，至单菌落的大小为3mm左右。

（3）挑取一个单菌落，接种于一个装50mL的300mL三角瓶中30℃或37℃振荡培养10-15小时，至菌密度OD600为1.0-1.5。

（4）用火焰灭菌的接种环取少量种子液，涂片后，作革兰氏染色，在显微镜下观察菌体的形态，及是否有杂菌。

（5）按30%甘油：种子液为1：1（V/V）的量加入无菌甘油，混合后分装至事先灭菌的菌种保存管（1-2mL/管），-70℃或液氮保存。

冷冻干燥保藏法（1）准备安瓿管用于冷冻干燥菌种保藏的安瓿管宜采用中性玻璃制造，形状可用长颈球形底的，亦称泪滴型安瓿管，大小要求外径6-7.5mm，长105mm，球部直径9-11mm，壁厚0.6-1.2mm。

也可用没有球部的管状安瓿管。

塞好棉塞，1.05kg/cm2，121.3℃灭菌30分钟，备用。

（2）准备菌种，用冷冻干燥法保藏的菌种，其保藏期可达数年至十数年，为了在许多年后不出差错，故所用菌种要特别注意其纯度，即不能有杂菌污染，然后在最适培养基中用最适温度培养，使培养出良好的培养物。

细菌和酵母的菌龄要求超过对数生长期，若用对数生长期的菌种进行保藏，其存活率反而降低。

一般，细菌要求24—48小时的培养物；酵母需培养3天；形成孢子的微生物则宜保存孢子；放线菌与丝状真菌则培养7-10天。

（3）制备菌悬液与分装以细菌斜面为例，用脱脂牛乳2ml左右加入斜面试管中，制成浓菌液，每支安瓿管分装0.2ml。

（4）冷冻冷冻干燥器有成套的装置出售，价值昂贵，此处介绍的是简易方法与装置，可达到同样的目的。

将分装好的安瓿管放低温冰箱中冷冻，无低温冰箱可用冷冻剂如干冰（固体CO2）酒精液或干冰丙酮液，温度可达-70℃。

将安瓿管插入冷冻剂，只需冷冻4-5分钟，即可使悬液结冰。

甘油保藏菌种的原理

甘油保藏菌种的原理
甘油保藏菌种是一种常用的方法，用于在低温下保存细菌菌种。

其原理基于甘油对细菌细胞具有保护作用的特性。

首先，甘油具有很强的渗透压调节能力。

当细菌在培养基中暴露在低温环境下时，温度的下降会导致细胞内水分结冰，形成冰晶，而冰晶的出现会导致细胞膜的破裂，从而对细胞造成损害甚至死亡。

而甘油在低温下具有降低水的结冰温度的作用，可以有效防止细胞内部的冰晶形成，从而保护细胞完整性。

其次，甘油还可以作为一种保护剂。

细菌在低温下容易受到氧化损伤，导致DNA、RNA和蛋白质的降解和损伤。

甘油可以
通过与细胞内部的分子相互作用，形成一种稳定的保护层，减少氧化应激对细胞的影响，防止DNA、RNA和蛋白质的降解
和损伤。

最后，甘油还可以提供能量和碳源。

在低温下，细菌的新陈代谢速度下降，细胞内能量储备减少。

甘油可以作为有机碳源和能量的供应者，为细菌提供所需的能量和营养物质，维持菌种的活力和存活。

因此，甘油保藏菌种的原理是通过甘油的渗透压调节、保护作用以及提供能量和碳源的功能，来保护细菌在低温环境下的完整性和存活能力。

论述菌种的保藏方法

论述菌种的保藏方法菌种的保藏是指将某一种菌株保存在适宜的条件下，以确保其长期存活和保持其遗传特性的一种操作。

菌种的保藏对于科学研究和应用具有重要意义，因为菌株的失活或突变可能导致实验结果的不准确性或应用价值的丧失。

本文将介绍几种常见的菌种保藏方法。

一、冷冻保藏法冷冻保藏法是将菌株保存在低温条件下，以减缓菌株的代谢和生长速率，达到延长其存活时间的目的。

常见的冷冻保藏方法有两种：液氮冷冻和低温冷冻。

1. 液氮冷冻：将培养基中的菌株悬浮液加入一定比例的甘油或乙二醇等保护剂，然后分装至冷冻管中，迅速将冷冻管浸入液氮中进行冷冻保存。

液氮的温度极低，可以有效地抑制菌株的代谢活动，保证其长期存活。

2. 低温冷冻：将培养基中的菌株悬浮液加入一定比例的甘油或乙二醇等保护剂，然后分装至冷冻管中，置于-80℃的低温冰箱中保存。

相比于液氮冷冻，低温冷冻的操作更加简便，且可以在普通实验室条件下进行。

二、干燥保藏法干燥保藏法是将菌株保存在无水条件下，通过降低菌株周围环境的水分含量，抑制菌株的代谢活动，并防止细胞内酶的活性。

常见的干燥保藏方法有两种：冷冻干燥和真空干燥。

1. 冷冻干燥：将培养基中的菌株悬浮液加入一定比例的保护剂，然后在真空下进行冷冻干燥。

冷冻干燥的过程中，通过降低温度和压力，使水分直接从固态转变为气态，从而达到保护菌株的目的。

2. 真空干燥：将培养基中的菌株悬浮液均匀涂布在无菌的滤纸或硅胶膜上，然后将其置于真空干燥器中进行真空干燥。

真空干燥的过程中，通过降低压力，将水分从菌株周围环境中蒸发掉，使菌株处于无水状态。

三、液氮冷冻法液氮冷冻法是将菌株保存在液氮中的一种方法。

液氮的温度极低，可以有效地抑制菌株的代谢活动，保证其长期存活。

该方法适用于多种菌株的保藏，包括细菌、真菌和酵母等。

液氮冷冻法的操作步骤如下：1. 将培养基中的菌株悬浮液加入一定比例的甘油或乙二醇等保护剂，以增加菌株的抗冻性。

2. 将菌株悬浮液分装至冷冻管中，每支约0.5-1.0 mL，然后封闭冷冻管。

菌种保存、传代、使用、销毁管理规程,操作规程

菌种保存、传代、使用、销毁管理规程,操作规程传代用菌种采用甘油冷冻管保存法。

将菌种接种在适宜的琼脂培养基上，待菌生长充分后，将菌液混合甘油并分装至冷冻管中，冷冻管标注菌种名称、代数、保存日期等信息，然后放置于-80℃冰箱中保存。

每年进行一次复苏和传代，保存时间不超过5年。

5.3.2.2液体石蜡保存法对于一些难以保存的菌种，采用液体石蜡保存法。

将菌种接种在适宜的琼脂培养基上，待菌生长充分后，将菌液混合液体石蜡并分装至玻璃瓶中，瓶口用铝箔密封，标注菌种名称、代数、保存日期等信息，保存温度为-70℃。

每年进行一次复苏和传代，保存时间不超过5年。

5.4菌种的传代传代用菌种每年进行一次复苏和传代。

复苏后，将菌种接种至适宜的琼脂培养基上，待菌生长充分后，按照规定的传代代数制备传代用菌种，并及时更新菌种库存记录。

5.5菌种的使用使用菌种前，应先确认菌种的品质和纯度，并按照规定的传代代数制备工作用菌种。

使用后，应及时更新菌种库存记录，并进行相应的消毒处理。

5.6菌种的销毁菌种在使用过程中，如出现变异或污染等情况，应及时进行应灭活处理，并填写《菌种销毁记录表》，经主管部门审核同意后，进行销毁处理。

菌种库存中长期未使用的菌种，应定期进行清理和销毁处理。

菌复苏、复壮；Sabouraud葡萄糖琼脂培养基：用于白色念珠菌复苏、复壮；青霉素-链霉素琼脂培养基：用于铜绿假单胞菌复苏、复壮。

5.4.1.1.3复苏步骤：1.取出保存好的菌种管，用接种针在酒精灯上消毒；2.将接种针在75%酒精中消毒，再用酒精棉球擦拭消毒；3.用接种针在相应的培养基上进行接种；4.置于适宜温度下孵育，待菌落出现后进行传代或进行实验。

5.4.1.2标准菌株的确认通过形态学、生理生化特性、分子生物学等方法进行鉴定，确认菌株的纯度和种属。

5.4.1.3标准菌株的传代将菌株从原始保存方式中转移到新的保存方式中，确保菌株的保存和传承。

传代次数不宜过多，一般不超过10代。

菌种甘油保存方法
1 将要保存菌种接种于LB液体培养至对数生长期（肉眼见培养体系内浑浊即可）
2 将甘油稀释至浓度为50%（等体积蒸馏水加等体积甘油，甘油需要慢慢吸）
3 将甘油、2 ml离心管、枪头等试验用品于121℃灭菌20min
4 无菌条件下将菌液与50%浓度甘油1:1等体积混合于离心管中，甘油终浓度为25%
5 于-20℃冰箱内保存
有效期1年
再次使用钱30°水浴后接种到固体培养基上即可
正常是直接把保藏液接到液体培养基中，让后生长24-48h后，将菌液再次转接到新的液体培养基中。

新的菌液就可以划线培养了。

原始菌种不够的情况下先扩繁十个固体培养基
如果用菌液的话接种到液体培养基上
步骤是固液液用第二个实验第三个保存。

食用菌菌种保藏的方法

食用菌菌种保藏的方法
食用菌是一种广泛使用的食品，如何保存食用菌的菌种是非常重要的。

下面介绍几种常用的菌种保藏方法。

一、冷冻法
冷冻法是将菌种置于低温下，使其处于冷冻状态以达到保藏的目的。

将菌丝均匀地涂于平板上，置于-80℃的低温冷冻柜中冷冻，或将菌丝混入15%甘油溶液中，用液氮冷冻保存。

这种方法保存的菌种质量较好，保藏时间较长。

二、干燥法
将菌丝培养在无菌环境下，培养到菌丝生长至顶部时，用无菌石英砂或无菌滤纸吸干培养皿内的水分，再将石英砂或滤纸中的菌种置于无菌条件下进行干燥，然后密封保存。

这种方法使用简单，保存时间较长，但保存的菌种易受到氧气、温度和湿度等因素的影响。

三、冷藏法
冷藏法是将培养好的菌种置于低温环境下进行保存。

将培养好的菌种涂于平板上，进行初步培养，再将平板用无菌纸包好，置于4℃的冰箱中保存。

这种方法保存的菌种质量较好，但保存时间较短。

四、液氮保存法
将培养好的菌种混入15%甘油溶液中，用液氮冷冻保存。

这种方法保存的菌种质量较好，保存时间长达数年，但需要液氮存储设备。

五、糖分保藏法
将培养好的菌种混入10%蔗糖水溶液中，用常温保存。

这种方法保存的菌种质量较好，保存时间长达数年，但需要注意保藏容器的密封性。

不同的菌种保藏方法适用于不同的情况，我们需要根据实际情况选择合适的方法。

同时，在进行菌种保藏时，需要注意保藏容器的密封性、温度、湿度等因素，以确保保存的菌种质量。

菌种甘油保存方法

菌种甘油保存方法
Company Document number：WUUT-WUUY-WBBGB-BWYTT-1982GT
菌种甘油保存方法1 将要保存菌种接种于LB液体培养至对数生长期（肉眼见培养体系内浑浊即可）
2 将甘油稀释至浓度为50%（等体积蒸馏水加等体积甘油，甘油需要慢慢吸）
3 将甘油、2 ml离心管、枪头等试验用品于121℃灭菌20min
4 无菌条件下将菌液与50%浓度甘油1:1等体积混合于离心管中，甘油终浓度为25%
5 于-20℃冰箱内保存
有效期1年
再次使用钱30°水浴后接种到固体培养基上即可
正常是直接把保藏液接到液体培养基中，让后生长24-48h后，将菌液再次转接到新的液体培养基中。

新的菌液就可以划线培养了。

原始菌种不够的情况下先扩繁十个固体培养基
如果用菌液的话接种到液体培养基上
步骤是固液液用第二个实验第三个保存。

甘油冷冻保藏法以及一些注意事项

甘油冷冻保藏法以及一些注意事项
本方法适合于中、长期菌种保藏，保藏时间一般为2-4年左右。

（1）用火焰灭菌的接种环取斜面菌种在平皿上划线分离单菌落。

（2）平皿倒置于30℃或37℃恒温培养箱，培养24-48小时，至单菌落的大小为3mm左右。

（3）挑取一个单菌落，接种于一个装50mL（LB）的300mL三角瓶中30℃或37℃振荡培养10-15小时，至菌密度OD600为1.0-1.5。

（4）用火焰灭菌的接种环取少量种子液，涂片后，作革兰氏染色，在显微镜下观察菌体的形态，及是否有杂菌。

（5）按30%甘油：种子液为1：1（V/V）的量加入无菌甘油，混合后分装至事先灭菌的菌种保存管（1-2mL/管），-70℃或液氮保存。

实验需要预准备的材料：
平皿培养基50％甘油母液，1.5刻度离心管（保存菌种用，最好买进口的，质量较好）注意事项：
（1）50％甘油母液要多灭几次，因为甘油对细菌有很好的保护作用，所以灭菌除杂时也就相对难一点，多灭几次可解决。

（2）平皿要提前灭好培养基倒进去后要计算好过一周附近再涂平板，因为冷却不久的平板积水汽比较多，不利用涂布弄干。

放几天可减少水分，利于涂布，不过放太久平皿也会干掉的哦！
（3）最后的甘油浓度一般15～30％，太多不容易冻上，而且如有质粒也有可能丢（有质粒时甘油浓度尽量低一些），。

菌种保藏方法甘油

菌种保藏方法甘油
甘油是一种常用的菌种保藏方法，具体步骤如下：
1. 准备甘油溶液：用无菌蒸馏水将甘油稀释至10-20%的浓度。

可以使用无菌瓶或试管来制备溶液。

2. 菌种准备：将需要保藏的菌种以活菌母液或活菌培养物的形式准备好。

3. 混合菌种和甘油溶液：将相应的菌种接种到甘油溶液中。

通常可用无菌吸管将菌种转移到甘油溶液中。

4. 混匀：轻轻摇动或翻转瓶子，确保菌种均匀分散在甘油溶液中。

5. 分装：将混匀的菌种溶液分装到无菌小容器中，如无菌管或试管中。

每个容器通常只需要接种几滴。

6. 标记和封存：在容器上标记菌种名称、时间和保藏条件，并用无菌盖子或锡箔密封容器。

7. 保藏：将标记好的菌种容器存放在适当的温度和湿度条件下，如4冰箱或-80冰箱。

注意事项：
- 进行所有步骤时，确保操作环境和操作器具都是无菌的，以防止其他细菌或真菌的污染。

- 甘油保藏法适用于大多数菌种，但并非适用于所有菌种。

某些菌种对甘油不耐受或易于受损，可能需要使用其他保藏方法。

- 在保藏期间，定期检查菌种的存活情况，并根据需要制备培养物以进行后续的实验或培养。

菌种甘油管保藏操作方法

菌种甘油管保藏操作方法
菌种甘油管是用于保存微生物菌种的一种常用方法。

以下是菌种甘油管保藏操作方法的步骤：
1. 准备好所需材料，包括菌种甘油管、保存微生物菌种的培养基、无菌赛瓶、无菌一次性注射器、无菌棉签等。

2. 在无菌条件下，准备培养基。

一般使用甘油-酵母提取液培养基，将其加热至溶解。

3. 取一小块接种棒蘸取菌液，接种到培养基上。

轻轻转动培养基使其均匀分布。

4. 将培养基和菌液充分混合后，用一次性注射器吸取混合液。

5. 打开一个菌种甘油管，将混合液缓慢注入管内。

注入过程中要确保无气泡形成。

6. 将注满混合液的菌种甘油管放入赛瓶中，倒入约1 cm深的无菌水。

7. 用无菌棉签擦拭赛瓶外壁湿润的部分，使其与周围环境隔离。

8. 将赛瓶盖盖严，放入冰箱中保存。

9. 定期检查保存的菌种甘油管，如果有菌落生长，可以取出菌种进行进一步培养。

注意事项：
- 操作时要保持无菌条件，避免污染。

- 注入混合液时要缓慢，避免气泡形成。

- 冰箱中的温度应保持在-20左右，避免冷冻过度。

- 定期检查保存的菌种甘油管，如发现有菌落生长异常，应及时更换。

菌种甘油保存

菌种甘油保存
1、配制30%甘油，121摄氏度高压灭菌20min，常温保存既可，一般都是现配现用
2、将要保存菌种接种于LB（或带相应抗性）液体培养至对数生长期（肉眼见培养体系内浑浊即可）
3、无菌条件下将菌液与30%浓度甘油1:1等体积混合于离心管中，甘油终浓度为15%
4、再次使用前置冰浴融化后接种到固体培养基上即可
5、一般零下20度一年左右，零下80度二年以上，时间太长就使用前活化下
甘油保菌原理
1、冷冻保存时菌液会被冻起来，内部产生的“冰晶”会使细胞破裂等，加入如甘油后可以防止对细胞的伤害。

2、简单来说就是抗冻，原理是甘油能够提高水体的粘稠度，使其冰点提高，防止细胞内部产生冰晶造成细胞的损害，一般使用甘油的终浓度在10%-20%，该范围外的浓度会对细胞产生毒性，质粒会很容易丢失
3、高浓度甘油保存菌种据说会影响菌种的表达活性如果该菌只用一次怎么化都没关系的甘油浓度太高，质粒就很容易丢失。

菌种甘油保存方法

菌种甘油保存方法文件编码（008-TTIG-UTITD-GKBTT-PUUTI-WYTUI-8256）
菌种甘油保存方法1 将要保存菌种接种于LB液体培养至对数生长期（肉眼见培养体系内浑浊即可）
2 将甘油稀释至浓度为50%（等体积蒸馏水加等体积甘油，甘油需要慢慢吸）
3 将甘油、2 ml离心管、枪头等试验用品于121℃灭菌20min
4 无菌条件下将菌液与50%浓度甘油1:1等体积混合于离心管中，甘油终浓度为25%
5 于-20℃冰箱内保存
有效期1年
再次使用钱30°水浴后接种到固体培养基上即可
正常是直接把保藏液接到液体培养基中，让后生长24-48h后，将菌液再次转接到新的液体培养基中。

新的菌液就可以划线培养了。

原始菌种不够的情况下先扩繁十个固体培养基
如果用菌液的话接种到液体培养基上
步骤是固液液用第二个实验第三个保存。

严格厌氧菌菌种保藏方法

严格厌氧菌菌种保藏方法以下为本实验严格厌氧细菌的保藏方法，如果是兼性厌氧菌可参照好氧菌保藏方法保藏。

一、厌氧细菌的甘油保藏方法：1、厌氧甘油的制备：厌氧瓶或厌氧管中放置一定量的甘油，甘油的量根据需要加入，不要多加，因为厌氧甘油制备好以后不能反复灭菌，反复灭菌甘油会变性而呈黄色，且有一股芳香味道。

加入终浓度为0.04 %的L-cysteine和 1 %的5 %的N2S母液。

往厌氧瓶中通N2，通气时间和配制培养基时时间相同。

盖上塞子和盖子。

121 ℃，20 min 灭菌后备用。

2、取新鲜菌液（对数期），在通N2的情况下，用针筒和针头往有菌液的厌氧管中加入终浓度为15-20 %的厌氧甘油，再通一会N2，目的是赶走在转移甘油过程中带进去的O2。

盖上塞子和盖子，混匀，冻于-80℃。

3、活化：用针头和针头吸取一定甘油保藏的菌液，加到培养基当中，加的量一般要多于1 %，因为厌氧菌的生物量比较小，一般2到5 %左右。

目测加完甘油菌液的培养基是否浑浊，并作记录。

如果加入的菌液太多，造成一开始培养基就比较浑浊，会干扰我们对菌是否生长的判断，而且甘油太多也会抑制菌的生长。

二、厌氧细菌的冷冻干燥保藏方法：1、厌氧牛奶的制备：先配置10 % Difco Skim Milk（BD）的母液。

和厌氧甘油配制方法一样，转移到厌氧瓶中，加入加入终浓度为0.04 %的L-cysteine和 1 %的5 %的N2S母液。

通N2，盖上塞子和盖子。

113℃，15 min 灭菌后放置过夜，于4℃放置备用。

放置过夜后牛奶不结块，溶液均匀，不沉淀才可以用，否则牛奶变性，需要重新配制。

同样，厌氧牛奶只能灭菌一次，反复灭菌牛奶会变性。

2、准备冷冻干燥用的安瓿管，管口要用棉花封住，棉花缠在牙签上，这样拔出比较方便，灭菌并烘干后备用。

3、新鲜菌液离心，尽量除去上清，根据菌量加入10 % 的厌氧牛奶，一般大拇指盖大小的菌体能做15-20支安瓿管左右。

将菌体打散后，迅速分装到安瓿管中，每支安瓿管0.2 ml，并用棉花封住管口，防止杂菌污染。

菌种甘油保藏方法

菌种甘油保藏方法
菌种甘油保藏方法是将菌种进行冻存，用甘油作为保护剂。

具体步骤如下：
1.选取优良的菌株，进行预处理，将其生长到最佳状态。

2.将菌株分装到无菌冰盒中，添加等量的甘油，并彻底混合。

3.快速冷冻菌种冰盒，放入-80冰箱冻存。

4.定期检查冻存菌株的完整性和活性。

5.需要用菌种时，从冰箱取出冰盒，在无菌条件下迅速解冻，将菌株接种在合适培养基上。

注意事项：
1.菌种的密度要合适，冻存密度过高会影响菌株的生存率，过低会使冻存时间延长。

2.菌种的保存期限一般为半年至一年，应定期检查菌株的完整性和活性，如有损坏或无法生长，应及时更换菌株。

甘油保存菌种方法的改良

甘油保存菌种方法的改良钟志宏,李启星,唐小异,邱　月摘要:　目的　将甘油原液保存菌种方法进行改良,寻找一种简便易行的保存实验室各种菌种的方法。

　方法　将一般细菌的菌种纯化后接种于普通肉汤管,4～6h增菌后,加入适量甘油-生理盐水保存液,-20℃冰箱保存;链球菌属和奈瑟氏菌属的菌株纯化后接种于血清肉汤管,在5%～10%CO2中经8～10h增菌后,加入适量保存液,-80℃低温冰箱保存;真菌菌种纯化后直接取菌洗入肉汤,不做培养,加入保存液后,-20℃冰箱保存。

　结果　在连续3年实验期内,各菌种保存效果良好,且其形态结构、染色特性、生化反应等与标准株相符。

　结论　使用甘油-生理盐水保存法来保存菌种,各菌种保存时间长,方法简便,特别是使链球菌、奈瑟氏菌和弧菌等需特殊保存方法保存的菌株在一般实验室得以保存。

关键词:　菌种保存;细菌保存;冷冻保存;甘油中图分类号:R37 文献标识码:B 菌种的保存不仅关系到微生物学的教学、科研、质控等,而且与临床上一些疑难菌株的鉴别也有着至关重要的联系,同时也是微生物学实验室的一项重要工作。

因此,选择一种简便易行、对设备要求不高的菌种保存方法成了每个微生物学工作者的共同愿望。

1　材料与方法1.1　材料1.1.1　实验菌种　大肠杆菌(Escherichia coli,44101)、产气肠杆菌(E.aerogenes,45102)、变形杆菌(P.mirabilis,49027)、伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi,50402)、甲型副伤寒沙门氏菌(S. paratyphi A,50001)、乙型副伤寒沙门氏菌(S.paratyphi B, 50602)、福氏志贺菌(S.flexneri,51573)、宋内志贺菌(S.sonnei, 51334)、粪产碱杆菌(A.faecalis,40001)、铜绿假单胞菌(P. aeruginosa,10105)、炭疽芽胞杆菌(B.anthracis,63001)、蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus,63301)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,26001)、表皮葡萄球菌(S.epidermidis,26103)、腐生葡萄球菌(S.saprophyticus,27101)甲型溶血性链球菌(α-hemolytic streptococcus,32213)、乙型溶血性链球菌(β-hemolytic strepto2 coccus,32172)、粪肠球菌(E.faecalis)、肺炎链球菌(Strep.pneu2 moniae,31002)、脑膜炎奈瑟菌(N.meningitides,29019)、淋病奈瑟菌(N.gonorrhoeae)、水弧菌(Vibrio water,17023)、白色念珠菌(C.albicans)、新生隐球菌(Cryptococcus neoformans)。

80甘油保存菌种步骤

80甘油保存菌种步骤
1. 准备甘油溶液：向无菌蒸馏水中加入一定量的高纯度甘油（通常浓度为20％或30％），并用适当的方法将其溶解均匀。

2. 收集细菌菌落：从培养基上收集细菌菌落，可以使用无菌耳棒、针筒、平板刮片等工具。

3. 将菌落转移到甘油溶液中：将菌落转移到含有甘油的试管或培养皿中，用无菌的工具将菌落均匀悬浮在甘油溶液中。

4. 混匀：用无菌铁环、耳棒或震荡器等方法将菌落和甘油溶液混合均匀。

5. 储存：将混合好的甘油菌种溶液分装到无菌的冰冻管中或其他合适的容器中，每管中约含有1-2毫升的溶液。

6. 冷冻：将制备好的菌种溶液迅速放入低温冷冻器中，以-
70°C或更低的温度冷冻保存。

7. 标签：在冰冻管或容器上标明菌株信息，如菌种名称、日期、菌株编号等。

8. 存放：将冷冻好的菌种溶液移至液氮罐或其他特定的冷冻设备中，存放在低温条件下保存。

注意事项：
- 所有步骤都需在无菌条件下进行，以防止细菌的污染。

- 储存的菌种溶液应尽快冷冻保存，以防止菌落中细菌的多余
增殖。

- 菌种的冷冻保存时间一般不宜超过6个月。

- 取用菌种时，应尽量避免反复冻融，以防止菌种活力的下降。

甘油保存菌种的方法,保存菌种的温度

甘油保存菌种的方法，保存菌种的温度1、方法：准备好镊子、EP管、枪头等工具，并进行杀菌处理；手和镊子用酒精擦拭消毒，用镊子取出约10支的EP管放到试剂盒里；找到移液枪，取出50%的甘油（等体积蒸馏水加等体积甘油，甘油需要慢慢吸）放到EP管里面，再取出菌种放到EP管里面；最后把所有的菌种都装入到一个大袋子里盖好盖子标注好保存起来，放入-20°C 的冰箱里保存。

2、温度要求：长期保存，建议在-70°C下冻存；短期保存，可在-20°C保存。

一、甘油保存菌种的方法1、原料/工具甘油、镊子、EP管、移液枪。

2、方法/步骤（1）准备工具并杀菌：准备好镊子、EP管、枪头等工具，把这些工具放到高压灭菌的锅里进行杀菌。

（2）把EP管放入试剂盒：用酒精将手和镊子擦拭消毒，用镊子取出约10支的EP管放到试剂盒里。

（3）把甘油和菌种放入EP管：找到移液枪，取出50%的甘油（甘油稀释至50%浓度的方法：等体积蒸馏水加等体积甘油，甘油需要慢慢吸）放到EP管里面，再取出菌种放到EP管里面。

（4）保存并放入冰箱：把所有的菌种都装入到一个大袋子里盖好盖子标注好保存起来，放在-20°C的冰箱里保藏。

二、甘油保存菌种的温度1、甘油保存菌种，若是长期保存，建议在-70°C下冻存，保藏时间一般为2-4年左右；在-20°C保存时间较短，通常只有1年左右。

目前实验室大都采用-80°C（-70°C）冰箱保藏。

2、甘油冷冻保藏菌种是目前实验室应用最为广泛的一种的菌种保藏方法，原理是以甘油为保护剂，低温冷冻条件下，使微生物的新陈代谢趋于停止，从而达到长期有效的保藏。

一般来说，保藏温度越低，保藏效果越好。

这种方法适用于一般细菌的保存，同时也适用于链球菌、弧菌、真菌等需特殊方法保存的菌种。