分子生物学实验项目三
分子生物学实验报告
分子生物学实验报告分子生物学实验报告引言分子生物学是一门研究生物大分子结构、功能和相互作用的学科，通过实验手段揭示生命现象的分子机理。
本实验旨在探究DNA复制过程中的关键步骤，以及RNA转录和蛋白质翻译的基本原理。
实验一：DNA复制DNA复制是细胞分裂过程中必不可少的步骤，它保证了遗传信息的传递和维持。
本实验通过模拟DNA复制过程，研究DNA复制酶的作用和复制的准确性。
材料：- DNA模板- DNA聚合酶- 引物- dNTPs- 缓冲液方法：1. 准备反应体系，包括DNA模板、DNA聚合酶、引物、dNTPs和缓冲液。
2. 在适当的温度下，将反应体系放入PCR仪中进行反应。
3. 取样并进行凝胶电泳分析，观察DNA复制产物。
结果：通过凝胶电泳分析，我们观察到DNA复制产物的出现。
这表明DNA聚合酶能够在模板DNA上合成新的DNA链，并且复制的过程较为准确。
讨论：DNA复制的准确性是生命传递遗传信息的基础。
DNA聚合酶具有校正功能，能够识别和修复错误的碱基配对。
这种精确性保证了基因组的稳定性和可靠性。
实验二：RNA转录RNA转录是将DNA信息转录成RNA的过程，它是基因表达的第一步。
本实验旨在研究RNA转录的机制和调控。
材料：- DNA模板- RNA聚合酶- 引物- NTPs- 缓冲液方法：1. 准备反应体系，包括DNA模板、RNA聚合酶、引物、NTPs和缓冲液。
2. 在适当的温度下，将反应体系放入PCR仪中进行反应。
3. 取样并进行凝胶电泳分析，观察转录产物。
结果：凝胶电泳分析显示出RNA转录产物的出现。
这表明RNA聚合酶能够在DNA模板上合成RNA链。
讨论：RNA转录是基因表达的第一步，它决定了细胞内特定基因的表达水平。
RNA聚合酶通过与DNA模板的互作用，选择性地合成特定的RNA链。
这种选择性转录是基因调控的关键。
实验三：蛋白质翻译蛋白质翻译是将RNA信息翻译成蛋白质的过程，它是生物体内蛋白质合成的关键步骤。
分子生物学实验技术3篇
分子生物学实验技术
第一篇：PCR技术
PCR（聚合酶链反应）是一种基于体外体内 DNA 复制的技术。
PCR 技术广泛应用于分子生物学、生物医学研究、医学诊断、生物技术等领域。
在 PCR 中，核酸模板、引物、聚合酶和反应缓冲液是必不可少的组成部分。
PCR 引物是在特定位置的 DNA 片段，用于诱导聚合酶模板 DNA 的扩增。
聚合酶通过催化模板 DNA 在 DNA 引物的引导下合成相应的 DNA 片段，产生大量的重复 DNA 片段。
PCR 是一种快速、高效、灵敏的 DNA 分析技术，可以对非常小的样本进行扩增。
PCR 的操作流程如下：
1．取得合适的 DNA 样品。
2．准备 PCR 反应体系，包括 PCR 反应缓冲液、聚合酶、DNA 模板和引物。
3．用 PCR 机进行程序设定和反应。
4．检查 PCR 反应产物，包括 PCR 产物的带型和验证PCR 产物的特异性和纯度等。
PCR 的应用
1．DNA 序列鉴定以及 DNA 序列变异检测。
2．基因表达分析、基因定量、等位基因分析等基因功能研究操作。
3．分子诊断，可以根据染色体、基因、蛋白质等材料进行分析。
4．农业和畜牧业生物工程的研究。
优点：
PCR 反应时间逐渐缩短，灵敏度高，重现性好，稳定性强。
PCR 技术可以在非常小范围内进行 DNA 分析，并可以处理复杂的实验体系。
缺点：
PCR 技术还有一些局限性，比如需要合理设计引物，需要准确的温度控制，需要恰当的试剂，且对样品的纯度和净化度有严格的要求。
分子生物学实验3篇
分子生物学实验第一篇：PCR技术在分子生物学中的应用PCR（聚合酶链式反应）是分子生物学中一项广泛应用的技术，被用于DNA的扩增和检测。
PCR技术已经成为了分子生物学和生物医学研究的基础技术之一。
PCR技术被广泛的应用于遗传学、人类学、医学研究、植物学和动物学研究等各领域。
PCR技术的基本原理是：通过提取DNA，将DNA特异性引物与模板DNA相结合，利用热稳定DNA聚合酶和四种脱氧核苷酸为反应体系提供能量，使其在一定条件下循环扩增目标DNA片段。
通过PCR扩增后的DNA片段可以进行进一步的分析和检测。
PCR技术的扩增具有明显的优势，可同时扩增不同长度的DNA片段，扩增时间短，扩增的精度和重复性高，且所需的样本量小。
PCR技术在分子诊断、基因组学和分子系统学等领域的应用不断扩展和深化。
随着PCR技术的不断发展，PCR在分子生物学研究中的应用越来越广泛，成为分子生物学研究的重要工具。
第二篇：RNA干扰技术在分子生物学中的应用RNA干扰（RNAi）是分子生物学中一种重要的现象，其中小分子RNA片段通过RNAi途径参与靶基因的沉默和调节。
RNAi技术是人类基因功能研究中最具前途的一种技术之一。
RNA干扰技术的基本原理是通过利用RNAi分子的特异性配对功能，引导RNAi分子与靶基因mRNA相结合，导致mRNA的降解和翻译的抑制，实现对基因表达的调控。
RNA干扰技术在分子生物学研究中有广泛的应用，如：功能基因的筛选、基因表达调节、基因功能验证等。
RNA干扰技术具有多种优点，如高效性、特异性强、节约时间、资源和成本等方面的优势，逐步成为生命科学研究中的重要工具。
在研究过程中，RNA干扰技术常用于寻找分子病理学中新的治疗靶点，鉴定靶点基因和靶点蛋白，为新药物的开发和临床治疗提供了重要的理论和实验基础。
第三篇：基因克隆技术在分子生物学中的应用基因克隆技术始于20世纪70年代，是指将DNA分子导入到载体中，使其在细胞中进行表达的过程。
分子生物学实验技术实验内容
2006 年《分子生物学实验技术》实验内容RT-PCR（一）总 RNA的提取实验安排：每两人抽提一管。
为了使操作同步以节省时间，各组样品请一起离心。
操作步骤：TM（苯冰预冷的900μlLS -Biotragents液体样品加入 1.5ml Ep管中，再加入1、将100μ l 酚和异硫氰酸胍的混合物）。
2、将样品剧烈混合后，在室温放置5min。
3、加入200μl 氯仿，颠倒Ep 管混和两次，并剧烈振荡混和10s。
4、在4℃条件下，以10000×g 离心15min。
5、将上层水相转移到一个新的Ep 管中，加入等体积的异丙醇（Isopropanol）并混匀，然后在4℃放置至少10min。
6、在4℃条件下，以10000×g离心15min 后，小心并尽可能地去除全部上清夜。
7、用1ml 75%乙醇洗涤RNA 沉淀和管壁。
8、将RNA 沉淀进行干燥（不能完全干燥）处理后，用10μl 无RNase污染的水（RNase- FreeWater）将RNA 溶解并于-20℃保存。
注意事项：1、所有的玻璃器皿均应在使用前于180℃的高温下干烤6hr 或更长时间。
2、所用的塑料材料，如吸头、离心管等需用0.1% DEPC 水浸泡过夜。
3、配制的溶液应尽可能用0.1% DEPC，在37℃处理12hr 以上。
然后用高压灭菌除去残留的DEPC。
不能高压灭菌的试剂，应当用DEPC 处理过的无菌双蒸水配制，然后经0.22μm 滤膜过滤除菌。
4、操作人员需在超净工作台上操作，并戴一次性口罩、手套，实验过程中手套要勤换。
二）反转录实验安排：每人做一管反应体系（20μ l）：按下列顺序加样μl4 5× Bufferμl6dNTPsμl1RNA 酶抑制剂μl1Oligo （dT）μ随机引μ反转录AMV1μ提取RNA6总体μ201h42反应条件：℃注意事项：反应体系中，应先1、加样时，一般从体积大的开始加，样品最后加。
分子生物学实验报告全解(有图有真相)
分子生物学实验报告慕蓝有志班梦想学院目录实验一细菌的培养 (2)实验二质粒DNA的提取 (4)实验三琼脂糖凝胶电泳法检测DNA (7)实验四质粒DNA酶切及琼脂糖电泳分析鉴定 (9)实验五聚合酶链反应（PCR）技术体外扩增DNA (11)实验六植物基因组DNA提取、酶切及电泳分析 (14)实验七RNA分离与纯化 (17)实验八RT-PCR扩增目的基因cDNA (19)实验九质粒载体和外源DNA的连接反应 (21)实验十感受态细胞的制备及转化 (23)实验十一克隆的筛选和快速鉴定 (25)实验十二地高辛标记的Southern杂交 (27)实验十三阿拉伯糖诱导绿色荧光蛋白的表达 (31)思考题 (32)分子实验心得总结 (33)实验一细菌的培养一、目的学习细菌的培养方法及培养基的配置。
二、原理在基因工程实验和分子生物学实验中，细菌是不可缺少的实验材料。
质粒的保存、增殖和转化；基因文库的建立等都离不开细菌。
特别是常用的大肠杆菌。
大肠杆菌是含有长约3000kb的环状染色体的棒状细胞。
它能在仅含碳水化合物和提供氮、磷和微量元素的无机盐的培养基上快速生长。
当大肠杆菌在培养基中培养时，其开始裂殖前，先进入一个滞后期。
然后进入对数生长期，以20~30min复制一代的速度增殖。
最后，当培养基中的营养成分和氧耗尽或当培养基中废物的含量达到抑制细菌的快速生长的浓度时，菌体密度就达到一个比较恒定的值，这一时期叫做细菌生长的饱和期。
此时菌体密度可达到1×109~2×109/mL。
培养基可以是固体的培养基，也可以是液体培养基。
实验室中最常用的是LB培养基。
三、实验材料、试剂与主要仪器（一）实验材料大肠杆菌（二）试剂1. 胰蛋白胨2. 酵母提取物3. 氯化钠4. 1mol/L NaOH5. 琼脂粉6. 抗生素（氨苄青霉素、卡那霉素等）（三）仪器1. 培养皿2. 带帽试管3. 涂布器4. 灭菌锅5. 无菌操作台（含酒精灯、接种环、灭菌牙签等）6. 恒温摇床四、操作步骤（一）LB培养基的配制配制每升培养基，应在950m1去离子水中加入：细菌培养用胰蛋白胨10g细菌培养用酵母提取物5gNaCl 10g摇动容器直至溶质完全溶解，用1mol/L NaOH调节pH位至7.0。
高中生物实验指南：分子生物学实验操作手册
高中生物实验指南：分子生物学实验操作手册1. 简介分子生物学是研究生物体内分子结构、组成、功能以及相互作用的科学。
在高中生物学课程中，通过进行一系列分子生物学实验，可以加深对基因、DNA、RNA等内容的理解，并培养学生动手实践和科学探究的能力。
本操作手册将介绍一些适合高中副标准课程的基本分子生物学实验，帮助教师和学生更好地开展这方面的实验教学。
2. 实验一：提取DNA2.1 实验目的了解DNA的结构和提取过程，并掌握提取DNA的基本方法。
2.2 材料与仪器•成熟香蕉或其他植物材料•盐水溶液（含氯化钠）•蛋白酶（如葡萄胺酸酶）•洗涤剂（如洗衣粉）•咖啡滤纸或滤纸漏斗•烧杯•酒精1.将香蕉剥皮后放入砧板上，用刀将香蕉捣碎成泥状。
2.在烧杯中加入适量的盐水溶液，并将捣碎的香蕉放入其中搅拌均匀。
3.加入少量蛋白酶和洗涤剂，再次搅拌均匀，让细胞破裂释放DNA。
4.将混合物过滤到另一个烧杯中，通过滤纸除去大颗粒的残渣。
5.将过滤后的溶液倒入试管中，并缓慢地倾斜试管，在溶液与酒精接触的界面处，会出现白色粘稠物质，即提取到的DNA。
2.4 实验结果及分析实验中提取到的DNA呈现为白色细丝状物质。
通过这个实验可以观察到DNA 在水相和酒精相之间的界面上凝聚堆积。
说明了DNA在酒精中不溶性，从而便于提取。
3. 实验二：PCR扩增3.1 实验目的了解聚合酶链式反应（PCR）的原理和基本步骤，并能够进行PCR扩增实验。
3.2 材料与仪器•PCR试剂盒（含模板DNA、引物、聚合酶等）•热循环仪•PCR试管或反应管1.准备PCR反应体系，按照试剂盒说明书的要求加入模板DNA、引物和聚合酶等。
2.将装有反应溶液的PCR管放入热循环仪中。
3.设置PCR的温度程序，包括变性、退火和延伸阶段。
4.启动热循环仪开始PCR扩增反应。
5.完成PCR后，可以通过凝胶电泳等方法检测扩增产物。
3.4 实验结果及分析通过PCR扩增，可以在较短的时间内大量复制并放大目标基因片段。
生物化学和分子生物学课程教学大纲
《生物化学》和《分子生物学》课程实验教学大纲
课程名称：生物化学与分子生物学实验技术
英文名称：Experiment Technology of Biochemistry and Molecular Biology
课程编号：实验课性质：必修
课程负责人：崔行开放实验项目数：3
一、学时、学分
课程总学时：70 课程总学分：
二、适用专业及年级
本大纲适用于医疗、公共卫生、口腔、护理、预防医学七年制学生。
三、实验教学目的与基本要求
掌握人体生命的物质基础，生物大分子的结构和功能。
掌握各种生物物质能
量的正常代谢过程，代谢调节，代谢障碍和临床疾病的关系。
通过实验掌握基本
的生物化学实验技术及验证部分课堂理论知识。
在实验教学中，要求学生掌握电泳技术、层析技术、分光光度法、离心技术、
蛋白质及分子生物学等技术。
掌握蛋白质、核酸、酶类的提取、测定，学习血液
成分生化测定，以及部分生物化学理论知识的验证。
掌握紫外—可见分光光度计、
高速离心机、PCR仪、层析系统、电泳仪系统、电热恒温水浴箱、凝胶扫描仪、
电动匀浆器等仪器的使用，了解其性能、适用范围及注意事项。
四、主要仪器设备
紫外—可见分光光度计、高速离心机、PCR仪、层析系统、电热恒温水浴箱、
凝胶扫描仪、电泳仪、电动匀浆器等。
分子生物学实验内容
实验守则
1. 实验室内禁止吃食物，勿高声谈话。 2. 实验前认真预习，熟悉实验的内容，了解所用的仪器用具； 3. 实验中严格按操作规程进行，认真操作、仔细观察，及时记 录实验现象及结果；
4. 实验结束后仔细分析和总结实验结果，认真做好每一天的实
验报告。 5. 使用贵重精密仪器时，应严格遵守操作规程，对任何自己不
实验内容
分子生物学实验概述 植物基因组DNA提取 琼脂糖凝胶电泳及紫外检测技术 PCR扩增及凝胶电泳检测 DNA的酶切及凝胶电泳检测 质粒DNA的提取 质粒DNA的酶切及凝胶电泳检测
c) 使用电泳仪等电器时注意用电安全。
d) 微波炉内不可使用金属容器以及空载。
e) 使用紫外线时，注意防护：不可裸眼注视，不可在 紫外线下暴晒…… f) 电泳实验时带一次性手套。 g) 使用可能造成环境污染或对人体等生物体有害的物 品，在实验结束后要集中处理，不可随处丢弃。
用试剂及用具盒用完后，应立即盖好放回原处。 8. 实验结束后要把微量移液器清点后归还，征得同意后方可 离开实验室。实验时损坏的任何物品（尤其是微量移液器） 都要按规定赔偿。
9. 实行值日生制度，每天安排3-4人值日（由学委安排）。
其职责是负责实验器具的整理、操作台、水槽、地板等实 验室卫生工作，并注意实验室的水、电、门窗等方面情况。
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分子生物学实验项目三
实验三植物基因组DNA的提取
实验目的
通过本实验学习从植物组织中提取DNA的方法。
实验原理
利用液氮对植物组织进行研磨，从而破碎细胞。
细胞提取液中含有SDS溶解膜蛋白而破坏细胞膜，使蛋白质变性而沉淀下来。
EDTA抑制DNA酶的活性。
再用酚、氯仿抽提的方法去除蛋白，得到的DNA溶液经乙醇沉淀。
仪器、材料与试剂
（一）仪器
1低温离心机
2 恒温水浴锅
3 台式离心机
4 琼脂糖凝胶电泳系统
5 微量加样器
（二）材料与试剂
1 三羟甲基氨基甲烷（Tris）
2 乙二胺四乙酸（EDTA）
3 氯化钠（Nacl）
4 β-巯基乙醇
5 氯化钾（KCl）
6 异丙醇
7 乙醇
8 琼脂糖
9 十二烷基硫酸钠（SDS）
10 50mL离心管
11陶瓷研钵
12 吸头、小指管
13 细胞提取液
100mmol/L Tris.HCl(PH 8.0)
5 mmol/L EDTA(PH 8.0)
500 mmol/L Nacl
1.25% SDS
1 mmol/L β-巯基乙醇
14 5 mol/L KCl
15 TE缓冲液
10 mmol/L Tris.HCl(PH 8.0)
1 mmol/L EDTA(PH 8.0)
16 哥伦比亚野生型拟南芥（Arabidopsis Columbia）三周幼叶。
17 TIANGEN基因组DNA提取试剂盒（Plant Genomic DNA Kit）（离心柱型）。
实验步骤
一、自配试剂提取步骤
1 取4g新鲜叶片，在液氮中充分研磨成粉末状（越细越好）。
2 将研磨好的粉末转移至50mL的离心管中，加入16mL细胞提取液，充分混匀，65℃水浴保温20min。
3 从水浴中取出离心管，加入5mL5mol/L的KCl溶液，混匀，冰浴20min。
4 4000r/min离心20min。
5 降上清液转移到另一50mL的离心管中。
6 加等体积的酚/氯仿混匀，12000 r/min离心5min，取上清。
7 加等体积氯仿，混匀，12000r/min离心5min，取上清。
8 加入0.6-1倍体积的异丙醇（沉淀DNA），混匀。
9 离心获得沉淀，加70%乙醇洗涤3次，风干沉淀。
10加入500μLTE缓冲液，溶解DNA。
11取3 mL上清液，琼脂糖凝胶电泳检测DNA的浓度和质量。
二植物基因组DNA提取试剂盒提取步骤
1、拟南芥基因组DNA的提取
以野生型拟南芥(Arabidopsis Columbia)2周幼叶为材料（称取叶片约100毫克），用TIANGEN基因组DNA提取试剂盒（Plant Genomic DNA Kit）（离心柱型）按以下步骤提取基因组DNA：
1) 取干净幼叶100mg，加入液氮充分研磨。
2) 将研磨好的粉末迅速转移到预先装有700μL65℃预热缓冲液GP1的离心管中（实验前在预热的GP1加入巯基乙醇，使其终浓度为0.1%），迅速颠倒混匀后，将离心管放在65℃水浴中20分钟，水浴过程中颠倒离心管以混合样品数
次。
3) 加入700μL氯仿，充分混匀，12000rpm(13,400хg)离心5分钟。
4) 小心的将上一步所得上层水相转入一个新的离心管中，加入700μL的缓冲液GP2，充分混匀。
5) 将混匀的液体转入吸附柱CB3中，12000rpm(13,400хg)离心30秒，弃掉废液。
（吸附柱容积为700μL左右，可分次加入离心）。
6) 向吸附柱CB3中加入500μL去蛋白液GD（用前已加入无水乙醇），12000rpm(13,400хg)离心30秒，弃掉废液。
7) 向吸附柱CB3中加入700μL的漂洗液PW（用前已加入无水乙醇），12000rpm(13,400хg)离心30秒，弃掉废液。
8) 向吸附柱CB3中加入500μL的漂洗液PW，12000rpm(13,400хg)离心30秒，弃掉废液。
9) 将吸附柱CB3放回废液收集管中，12000rpm(13,400хg)离心2分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。
将吸附柱CB3置于室温或50℃温箱放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
10) 将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200μL经65-70℃水浴预热的洗脱缓冲液TE，室温放置2-5分钟，12000rpm(13,400хg)离心30秒，将DNA溶液收集到离心管中。
11) 离心得到的溶液再加入吸附柱CB3中，室温放置2分钟，12000rpm(13,400хg)离心2分钟。
（注意：洗脱缓冲液的体积不应小于50μL，体积过小影响回收效率。
且DNA 产物应保存在-20℃，以防DNA降解）。
2、实验结果
提取得到的DNA应为一条带。
3、实验结果分析
1）DNA浓度及纯度检测
用紫外分光光度计在230nm、260 nm、280 nm和310 nm上检测DNA 样品的光吸收，通过吸收值计算DNA样品的浓度，并判断DNA样品的纯度。
其中260 nm的读数用来估计样品中DNA的浓度，OD260/ OD280与OD260/ OD230的值用于估计DNA的纯度，310 nm为背景吸收值。
1OD260=50μg/mL双链DNA或40μg/mL单链DNA。
样品浓度（μg/mL）=[ OD260- OD310]×稀释倍数×50
对于DNA纯制品，其OD260/ OD280≈1.8，OD260/ OD230应大于2。
OD260/ OD280>1.8说明有RNA污染；OD260/ OD280<1.8说明有蛋白污染。
2）用琼脂糖凝胶电泳检测核DNA的完整性时，完整性好的基因组DNA应是一条较为清晰单一的电泳条带，若降解则成弥散状。
若RNA未除净，会在电泳前缘出现斑点。
3）如果DNA沉淀呈白色透明状而且溶解后成粘稠状，说明DNA含有较多的多糖类物质，可在取材前将植物放在暗处24小时，以达到去除淀粉的目的。
4）DNA沉淀成棕色，难以酶切
植物材料中含有大量酚类化合物，与DNA共价结合，使DNA呈棕色，并抑制DNA酶的酶解反应。
为防止此情况出现，可在加入2×CTAB的同时加入2-5%的β-巯基乙醇，或者加入亚精胺（100μLDNA加入5μL0.1mol/L的亚
精胺）。
5）DNA中含有多糖或盐类
将DNA用100%的乙醇或异丙醇沉淀出来，离心，沉淀用70%的乙醇清洗两次获更多次，吹干后重溶于TE中（注意乙醇一定要吹干，否则电泳点样时，样品上漂）。
6）DNA已降解电泳条带呈弥散状
样品降解可能有两种情况：一是机械振动过于剧烈，二是操作过程中DNase 污染。
在提取DNA的各个操作过程中要避免剧烈振荡，提取液及用品要高温高压灭菌。
另外，使用Tip头吸取过程中应避免产生气泡，Tip头应剪去Tip头尖，避免反复冻融DNA。
4、拟南芥简介
拟南芥（Arabidopsis thaliana）十字花科。
二年生草本，高7～40厘米。
基生叶有柄呈莲座状，叶片倒卵形或匙形；茎生叶无柄，披针形或线形。
总状花序顶生，花瓣4片，白色，匙形。
长角果线形，长1～1.5厘米。
花期3～
5月。
我国内蒙、新疆、陕西、甘肃、西藏、山东、江苏、安徽、湖北、四川、云南等省区均有发现。
拟南芥的优点是植株小（1个茶杯可种植好几棵）、每代时间短（从发芽到开花不超过6周）、结子多（每棵植物可产很多粒种子）、生活力强（用普通培养基就可作人工培养）。
拟南芥的基因组是目前已知植物基因组中最小的。
每个单倍染色体组（n=5）的总长只有7000万个碱基对，即只有小麦染色体组长的1/80，这就使克隆它的有关基因相对说来比较容易。
拟南芥是自花受粉植物，基因高度纯合，用理化因素处理突变率很高，容易获得各种代谢功能的缺陷型。
例如用含杀草剂的培养基来筛选，一般获得抗杀草剂的突变率是1/100000。
由于有上述这些优点，所以拟南芥是进行遗传学研究的好材料，被科学家誉为“植物中的果蝇”。