分子生物学实验技术
分子生物学实验技术全攻略
分子生物学实验技术目录实验一细菌的培养 2实验二质粒DNA的提取 3实验三紫外吸收法测定核酸浓度与纯度 4实验四水平式琼脂糖凝胶电泳法检测DNA 5实验五质粒DNA酶切及琼脂糖电泳分析鉴定 7实验六植物基因组DNA提取、酶切及电泳分析 8实验七聚合酶链反应（PCR）技术体外扩增DNA 9实验八 RNA提取与纯化 11实验九 RT-PCR扩增目的基因cDNA 13实验十质粒载体和外源DNA的连接反应 15实验十一感受态细胞的制备及转化 16实验十二克隆的筛选和快速鉴定 18实验十三 DNA分析——Southern杂交 19一基本操作实验一、细菌培养实验二、质粒DNA提取实验三、紫外吸收法测定核酸浓度与纯度实验四、水平式琼脂糖凝胶电泳法检测DNA实验五、质粒DNA酶切及琼脂糖电泳分析鉴定实验六、植物基因组DNA提取、定量、酶切及电泳分析实验八、植物RNA提取及纯化二、目的基因获取实验七、聚合酶链式反应（PCR）技术体外扩增DNA实验九、RT-PCR扩增目的基因cDNA三、目的基因的克隆和表达实验十、质粒载体和外源DNA的连接反应实验十一、感受态细胞的制备及转化实验十二、克隆的筛选和快速鉴定实验十三、DNA分析——Southern杂交实验一细菌的培养一、目的学习细菌的培养方法及培养基的配置。
二、原理在基因工程实验和分子生物学实验中，细菌是不可缺少的实验材料。
质粒的保存、增殖和转化；基因文库的建立等都离不开细菌。
特别是常用的大肠杆菌。
大肠杆菌是含有长约3000kb的环状染色体的棒状细胞。
它能在仅含碳水化合物和提供氮、磷和微量元素的无机盐的培养基上快速生长。
当大肠杆菌在培养基中培养时，其开始裂殖前，先进入一个滞后期。
然后进入对数生长期，以20~30min复制一代的速度增殖。
最后，当培养基中的营养成分和氧耗尽或当培养基中废物的含量达到抑制细菌的快速生长的浓度时，菌体密度就达到一个比较恒定的值，这一时期叫做细菌生长的饱和期。
分子生物学的实验技术与方法
分子生物学的实验技术与方法随着科技的不断发展，分子生物学在近年来成为一个极其活跃的领域，也受到越来越多人的关注。
分子生物学是研究生命体系结构、功能、全基因组组成等领域的学科，而分子生物学的实验技术与方法则是研究生命体系结构、功能、全基因组组成等领域的重要支撑。
1. 分子生物学实验技术与方法的概括分子生物学实验技术与方法是研究生命现象和机制的重要手段。
它包括了一系列的技术分析和方法，如基因测序技术、PCR技术、蛋白质组学、转染技术、组织培养技术、荧光技术等等。
其中，基因测序技术是目前最重要的技术之一。
它可以解析DNA序列中的各个碱基、基因等结构元素，为生物学研究提供了极为有利的手段。
PCR技术也是分子生物学实验技术中比较受欢迎的一种技术，它是一种快速检测DNA和RNA的方法，可以在很短的时间内扩增出多个相同的DNA片段或RNA片段，为分析和研究生物的基因、蛋白质等提供了便利。
此外，蛋白质组学是分子生物学研究中另一个重要的手段。
它可以帮助研究人员了解蛋白质的分子结构、功能和相互作用，是研究生物体内各种信号和代谢途径的重要方法。
2. 基因测序技术基因测序技术是分子生物学实验技术中的一项重要技术。
它是指通过一系列的实验步骤，将生物样品中的DNA分离开来，然后通过被称为“测序仪”的机器设备，解析出其DNA序列信息，最终得到一个完整的基因组序列。
基因测序技术的核心是测序仪，目前主要有Illumina、Pacific Biosciences等几种测序仪。
基因测序技术的应用范围非常广泛，如研究一个特定基因的结构和表达情况、找出某些基因存在的异常及其对人体健康的影响等。
当然，基因测序技术的应用不仅局限于科学方面，它还可以应用于医疗诊疗、个性化医学、疾病预防等多个领域。
3. PCR技术PCR技术是一种利用DNA聚合酶扩增DNA的特定技术。
这种技术可以在短时间内扩增出大量的DNA片段，达到检测目的。
PCR技术的核心是DNA聚合酶，通过PCR技术可以扩增任意长度的DNA片段，如检测特定的基因序列等。
分子生物学实验技术
分子生物学实验技术分子生物学实验技术是分子生物学研究领域中使用的一系列实验技术的总称，它们主要用于分析和操作生物体内分子水平的结构和功能。
这些技术的发展与进步，在分子生物学研究中具有重要意义，为科学家们提供了更加高效、准确和精细的实验方法和手段。
本文将着重介绍分子生物学实验技术的一些常用方法和原理。
一、聚合酶链式反应（PCR）PCR是一种通过DNA扩增技术在体外合成目标DNA的方法。
它通过引物与待扩增DNA片段的互补配对，在DNA复制酶（如Taq聚合酶）的催化下，经过一系列的温度循环（包括解链、退火和扩增）反复进行，从而使得目标DNA不断扩增，达到检测和分析的目的。
PCR技术广泛应用于基因检测、疾病诊断、犯罪分析等领域。
二、DNA测序技术DNA测序是指通过测定DNA的碱基序列，以获取基因信息的一种手段。
传统的DNA测序技术包括Sanger测序和Maxam-Gilbert测序。
随着高通量测序技术（NGS）的发展，如Illumina测序、Ion Torrent测序等，使得大规模、快速、低成本的DNA测序成为可能。
DNA测序技术在基因组学和遗传学研究中扮演着关键角色。
三、蛋白质分析技术蛋白质是生物体内功能最为重要的分子之一，研究蛋白质的组成、结构和功能对于理解生物体的生理过程具有重要的意义。
蛋白质分析技术主要包括SDS-PAGE凝胶电泳、Western Blotting、质谱分析等。
SDS-PAGE凝胶电泳可用于蛋白质的分子量测定和纯化，Western Blotting则可以用来检测特定蛋白质的存在及其相对量，质谱分析则可以用来确定蛋白质的氨基酸序列。
四、基因克隆技术基因克隆是指将DNA片段插入到载体DNA（如质粒）中，并利用细胞的自我复制机制，将其复制并表达出来的技术。
这个技术广泛应用于基因工程、药物研发、植物育种等领域。
基因克隆技术的核心是DNA片段的连接和转化。
连接可通过限制性内切酶切割DNA片段，并使用DNA连接酶进行连接；转化则是将重组质粒转入宿主细胞中，使其进行复制和表达。
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DNA 是具有一定结构的物质，一些特殊的环 境会导致DNA的变性，如加热、极端pH值、 有机溶剂、尿素、酰胺试剂等，而适宜的环 境又可以使DNA复性。
SDS是一种阴离子表面活性剂，它既能使细菌细胞 裂解，又能使一些蛋白质变性，所以SDS处理细菌 细胞后，会导致细菌细胞壁的破裂，从而使质粒 DNA以及基因组DNA从细胞中同时释放出来。释放 出来的DNA遇到强碱性（NaOH）环境，就会变性。 然后，用酸性乙酸钾来中和溶液，使溶液处于中 性，质粒DNA将迅速复性，而基因组DNA，由于分 子巨大，难以复性。离心后，质粒DNA将在上清中， 而基因组DNA则与细胞碎片一起沉淀到离心管的底 部。通过这种方法即可将质粒DNA从细菌中提取出 来。
2. 启始复制子（ori, Origin of
replication)； 3. 多克隆位点(MSC, Multiple cloning
site or polylinker)； 4. 标பைடு நூலகம்基因(Marker gene, such as
LacZ gene)。
Ampr抗性基因
Ampr抗性基因编码一种周质酶（β-内酰胺酶）可特异地 切割Amp的β-内酰胺环，从而使其失去杀菌能力
分子生物学实验
目录
实验一、植物染色体DNA的提取及纯度鉴定 实验二、大肠杆菌质粒DNA的提取 实验三、琼脂糖凝胶电泳 实验四、ＤＮＡ的限制性酶切 实验五、大肠杆菌感受态细胞的制备及外源DNA
的转化 实验六、PCR基因扩增技术
实验一、植物染色体DNA的提取 及纯度鉴定
一、实验目的
• 掌握真核植物基因组染色体DNA的一种提 取方法
P(BLA) ApaLI (2367)
APr
pUC19
2686 bp
分子生物学的实验技巧
分子生物学的实验技巧分子生物学作为生物科学的重要分支，主要研究生物分子的结构、功能及其相互作用关系。
合理的实验技巧对于分子生物学的研究至关重要。
下面将介绍几种常用的实验技巧及其操作方法。
一、PCR技术PCR（聚合酶链反应）是分子生物学研究中最常用的技术之一，它能够高效地扩增目标DNA序列。
PCR反应的关键步骤包括：DNA变性（Denaturation）、引物结合（Annealing）和DNA合成（Elongation）。
实验中，我们需要准备好所需的试剂和设备，确保实验台和试管清洁，以避免污染。
同时，掌握好反应温度、时间和引物浓度等重要参数的选择，能够确保PCR反应的成功。
二、凝胶电泳技术凝胶电泳是常用的DNA分子大小分析方法，能够通过电场作用将DNA样品分离出来。
在实验中，我们首先需要准备好凝胶，常用的有琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶。
然后，根据需要选择合适的电泳缓冲液，并将待测样品与DNA标记物一同加入凝胶槽中。
接下来，通过给电极施加电压，使DNA在凝胶中迁移。
最后，通过染色或荧光检测等方法，可可视化目标DNA条带。
当我们操作凝胶电泳时，要注意电流的选择、运行时间和电泳条件的控制，以确保分离结果的准确性。
三、蛋白质SDS-PAGE技术蛋白质的分离与鉴定也是分子生物学研究中的重要内容之一。
其中，SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）是最常用的方法之一。
在进行SDS-PAGE实验时，首先需要准备好聚丙烯酰胺凝胶，根据需要选择合适的凝胶浓度和电泳缓冲液。
接着，将蛋白样品与还原剂和SDS缓冲液混合，然后进行样品沸腾变性。
之后，将样品加载到凝胶孔中，施加电压进行电泳。
最后，可以通过染色或Western blot等方法对蛋白进行检测与分析。
四、基因克隆技术基因克隆技术是分子生物学研究中常用的技术之一，它可用于构建重组DNA分子。
在进行基因克隆实验时，需要首先将目标基因进行PCR扩增，然后进行限制性内切酶切割，得到目标基因的载体和酶切后的DNA片段。
分子生物学实验技术分类
分子生物学实验技术分类分子生物学实验技术是现代生物学研究中不可或缺的一部分，它涉及到对生物体内分子结构、功能和相互作用的研究。
这些实验技术在基础科学研究、医学诊断和药物研发等领域发挥着重要作用。
在分子生物学实验技术中，根据其应用和原理可以进行分类，主要包括以下几类：1. 基因克隆技术，基因克隆技术是分子生物学研究中常用的技术之一，它包括DNA片段的定向克隆、质粒构建、DNA序列分析等。
通过基因克隆技术，研究人员可以将感兴趣的基因或DNA片段放入适当的载体中，进行进一步的研究和应用。
2. 蛋白质分离和纯化技术，蛋白质是生物体内重要的功能分子，其结构和功能的研究对于理解生物学过程至关重要。
蛋白质分离和纯化技术包括凝胶电泳、亲和层析、离子交换层析等方法，可以将混合的蛋白质样品分离并得到纯净的蛋白质。
3. 核酸分离和检测技术，核酸是生物体内的遗传物质，包括DNA和RNA。
核酸分离和检测技术包括DNA/RNA提取、聚合酶链式反应（PCR）、原位杂交等方法，可以用于检测和分析生物体内的核酸序列。
4. 基因组学和转录组学技术，基因组学和转录组学技术是对生物体内所有基因组和转录组的研究，包括全基因组测序、RNA测序、ChIP-seq等方法，可以帮助研究人员全面了解生物体内基因的组成和表达模式。
5. 蛋白质-核酸相互作用技术，蛋白质和核酸之间的相互作用对于细胞内的生物学过程至关重要。
蛋白质-核酸相互作用技术包括免疫共沉淀、荧光共聚焦、电泳迁移变性等方法，可以帮助研究人员研究蛋白质和核酸之间的相互作用。
以上是分子生物学实验技术的一些分类，这些技术的不断发展和创新为生物学研究提供了强大的工具，也推动了生物医学领域的进步。
在未来，随着技术的不断进步，分子生物学实验技术将继续发挥重要作用，为人类健康和生命科学研究带来更多的突破和进展。
分子生物学实验技术3篇
分子生物学实验技术
第一篇：PCR技术
PCR（聚合酶链反应）是一种基于体外体内 DNA 复制的技术。
PCR 技术广泛应用于分子生物学、生物医学研究、医学诊断、生物技术等领域。
在 PCR 中，核酸模板、引物、聚合酶和反应缓冲液是必不可少的组成部分。
PCR 引物是在特定位置的 DNA 片段，用于诱导聚合酶模板 DNA 的扩增。
聚合酶通过催化模板 DNA 在 DNA 引物的引导下合成相应的 DNA 片段，产生大量的重复 DNA 片段。
PCR 是一种快速、高效、灵敏的 DNA 分析技术，可以对非常小的样本进行扩增。
PCR 的操作流程如下：
1．取得合适的 DNA 样品。
2．准备 PCR 反应体系，包括 PCR 反应缓冲液、聚合酶、DNA 模板和引物。
3．用 PCR 机进行程序设定和反应。
4．检查 PCR 反应产物，包括 PCR 产物的带型和验证PCR 产物的特异性和纯度等。
PCR 的应用
1．DNA 序列鉴定以及 DNA 序列变异检测。
2．基因表达分析、基因定量、等位基因分析等基因功能研究操作。
3．分子诊断，可以根据染色体、基因、蛋白质等材料进行分析。
4．农业和畜牧业生物工程的研究。
优点：
PCR 反应时间逐渐缩短，灵敏度高，重现性好，稳定性强。
PCR 技术可以在非常小范围内进行 DNA 分析，并可以处理复杂的实验体系。
缺点：
PCR 技术还有一些局限性，比如需要合理设计引物，需要准确的温度控制，需要恰当的试剂，且对样品的纯度和净化度有严格的要求。
分子生物学常用实验技术
一CTAB 法微量提取植物总DNA1. CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）的作用：CTAB是一种阳离子去污剂，具有从低离子强度的溶液中沉淀核酸和酸性多聚糖的特性，在这种条件下，蛋白质和中性多聚糖仍留在溶液里，在高离子强度的溶液里，CTAB 与蛋白质和大多数酸性多聚糖以外的多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸。
因此，CTAB可以用于从大量产生粘多糖的有机体如植物以及某些革兰氏阴性菌（包括E.coli的某些株）中制备纯化DNA 。
2. β-巯基乙醇的作用：巯基乙醇是抗氧化剂,有效地防止酚氧化成醌,避免褐变,使酚轻易去除基因组DNA。
巯基乙醇有消泡的作用。
3. EDAT（乙二胺四乙酸）的作用：是一种重要的络合剂，抑制某些金属蛋白酶的活性，防止DNA被DNase 酶解。
4. 为什么用无水乙醇沉淀DNA？用无水乙醇沉淀DNA，这是实验中最常用的沉淀DNA的方法。
乙醇的优点是可以任意比和水相混溶，乙醇与核酸不会起任何化学反应，对DNA 很安全，因此是理想的沉淀剂。
DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在，当加入乙醇时，乙醇会夺去DNA 周围的水分子，使DNA失水而易于聚合。
一般实验中，是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混合，其乙醇的最终含量占67％左右。
因而也可改用95％乙醇来替代无水乙醇（因为无水乙醇的价格远远比95％乙醇昂贵）。
但是加95％的乙醇使总体积增大，而DNA在溶液中有一定程度的溶解，因而DNA损失也增大，尤其用多次乙醇沉淀时，就会影响收得率。
折中的做法是初次沉淀DNA时可用95％乙醇代替无水乙酵，最后的沉淀步骤要使用无水乙醇。
也可以用0.6倍体积的异丙醇选择性沉淀DNA。
一般在室温下放置15－30分钟即可。
2.在用乙醇沉淀DNA时，为什么一定要加NaAc或NaCl至最终浓度达0.1～0.25mol/L？在pH为8左右的溶液中，DNA分子是带负电荷的，加一定浓度的NaAc 或NaCl，使Na+中和DNA分子上的负电荷，减少DNA分子之间的同性电荷相斥力，易于互相聚合而形成DNA钠盐沉淀，当加入的盐溶液浓度太低时，只有部分DNA形成DNA钠盐而聚合，这样就造成DNA沉淀不完全，当加入的盐溶液浓度太高时，其效果也不好。
分子生物学实验技术
分子生物学实验技术分子生物学实验技术专注于研究生物分子的结构、功能和相互作用。
通过分析和操作不同的生物分子，分子生物学实验技术可以为生物学研究提供有力的工具和方法。
本文将介绍分子生物学实验技术的一些常见方法和应用。
第一部分：DNA和RNA的分析与操作方法（1000字）在分子生物学研究中，DNA和RNA是最常见的研究对象之一。
了解DNA和RNA的序列、结构和相互作用对于我们理解生物基因组、遗传变异和蛋白质合成等过程至关重要。
以下是一些常见的DNA和RNA的分析与操作方法：1. PCR（聚合酶链式反应）：PCR是一种通过DNA的放大，使其达到可以检测的程度的技术。
它可以扩增DNA片段并产生大量的复制品。
PCR的优点是速度快、灵敏度高、操作简便。
这使得它在基因检测、基因组测序和遗传变异研究等领域得到广泛应用。
2. 基因克隆：基因克隆是指将感兴趣的DNA片段插入到载体DNA 中，形成重组DNA分子的过程。
通过克隆，可以研究和操纵特定的DNA 序列，以确定其功能、表达和调控。
常用的克隆方法包括限制性内切酶消化和连接技术，例如使用DNA连接酶将DNA片段连接到载体上。
3. DNA测序：DNA测序是指确定DNA序列的过程。
它是研究基因组、疾病突变和基因功能的重要工具。
常见的DNA测序方法包括链终止法和碱基测序法。
链终止法使用有标记的二进制探针和DNA聚合酶，通过测量信号强度来确定DNA序列。
碱基测序法则通过测量不同碱基释放的荧光信号来确定DNA序列。
4. RNA干扰（RNAi）：RNA干扰是一种通过干扰RNA分子的转录和翻译过程来沉默特定基因表达的技术。
通过使用双链RNA或小分子RNA（siRNA）来介导干扰，可以选择性地抑制或沉默特定的基因，从而研究其功能和相互作用。
第二部分：蛋白质的分析与操作方法（1000字）蛋白质是生物体内最重要的功能分子之一。
了解蛋白质的结构、功能和相互作用对于研究生物学和疾病机制至关重要。
分子生物实验技术
分子生物实验技术
分子生物实验技术是一种应用于生物学领域的实验技术，利用现代分子生物学的基本
原理及技术手段，对生物体内的分子机制进行研究，其中包括基因表达调控、蛋白质结构
与功能等方面。
分子生物实验技术主要包括：DNA/RNA提取、PCR扩增、基因克隆、蛋白质质谱、基因编辑、分子标记等。
其中，DNA/RNA提取是分子生物学实验的基础手段，其过程是通过将细胞裂开，然后
利用一系列的化学方法来分离出DNA/RNA。
PCR扩增是一种在体外人工合成DNA的方法，它可以将DNA扩增至数千万倍，为后续基因克隆和鉴定提供了条件。
基因克隆是将所需的基
因拷贝到向量中，使其可以被转移至其他生物体中并发挥作用的过程。
蛋白质质谱是一种
用来解析蛋白质结构、鉴定蛋白质功能及定量测定蛋白质含量的技术手段。
基因编辑是一
种新近兴起的技术手段，利用这种技术可以直接对基因进行修饰、插入或删除，应用广泛。
分子标记则是将特定基因或序列标记出来，便于后续的研究工作。
分子生物实验技术在现代生物科技中具有重要作用，它们可以广泛应用于基因检测、
基因治疗、生物大数据、新药研发等领域，能够为人类健康和生命科学研究提供有力的支撑。
随着分子生物学不断发展，分子生物实验技术也将不断创新，为生物科学领域的发展
带来更多的科学进步。
分子生物学常用实验技术概述
分子生物学常用实验技术概述分子生物学是研究生物大分子（如DNA、RNA和蛋白质等）组成、结构和功能的科学领域。
在分子生物学的研究中，常用各种实验技术来解析生物大分子的结构和功能，为科学研究和应用提供依据。
下面将概述一些常用的分子生物学实验技术。
1.PCR（聚合酶链式反应）：PCR是一种能在体外快速扩增DNA序列的技术，可以从一个DNA模板扩增出百万倍的DNA片段。
PCR包括三个步骤：变性、退火和延伸。
通过PCR，可以在短时间内扩增大量特定的DNA 片段，并常应用于基因分析、疾病诊断以及基因工程等领域。
2.转基因技术：转基因技术是将外源基因导入到目标生物体细胞中，使其表达外源蛋白或产生新的表型。
转基因技术通常包括四个步骤：基因分离、基因克隆、基因传递和基因表达。
转基因技术在农业、医学和生物科学研究中具有广泛的应用。
3.蛋白质电泳：蛋白质电泳是根据蛋白质的电荷和大小差异将其分离的一种方法。
常用的蛋白质电泳方法包括SDS-和二维电泳。
蛋白质电泳可用于纯化蛋白质、分析蛋白质组成以及检测蛋白质的修饰。
4.蛋白质质谱：蛋白质质谱是一种分析蛋白质的结构和功能的方法。
常用的蛋白质质谱技术包括MALDI-TOF质谱和液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）。
蛋白质质谱可用于鉴定未知蛋白质、确定蛋白质的氨基酸序列以及检测蛋白质的修饰等。
5.分子克隆：分子克隆是将外源DNA或RNA序列插入到载体DNA中，并通过细胞转染等方法将其导入到目标细胞中进行表达的过程。
分子克隆常用的方法包括限制性内切酶切割、连接反应、质粒构建和转染等步骤。
分子克隆技术可用于分析、表达和研究目标基因。
6. Northern blotting：Northern blotting是一种检测RNA的方法，常用于检测特定的mRNA分子。
在Northern blotting中，通过RNA的电泳分离、转移、固定以及杂交等步骤，可以检测目标RNA的存在和表达水平。
分子生物学的实验技术
分子生物学的实验技术【分子生物学的实验技术】分子生物学作为现代生物科学领域的重要组成部分，以其独特的实验技术为研究人员提供了许多强有力的工具。
本文将对分子生物学中常见的实验技术进行介绍，包括DNA提取、PCR扩增、凝胶电泳、克隆和测序等。
一、DNA提取DNA提取是分子生物学研究的第一步，也是最基本的实验技术之一。
DNA提取的目的是从生物样本中分离出DNA，并纯化得到高质量的DNA溶液，以便后续实验使用。
常用的DNA提取方法有酚/氯仿法、离心柱法和磁珠法等。
酚/氯仿法是一种传统的DNA提取方法，它利用酚和氯仿的不同密度分离DNA。
首先，将生物样本与裂解缓冲液混合并加入酚/氯仿混合液，通过离心分离出DNA在上层的细胞碎片，然后进行酚/氯仿再萃取和乙醇沉淀，最后得到纯化的DNA。
离心柱法是一种高效的DNA提取方法，它利用离心柱上的纤维素膜或硅胶膜对DNA进行捕获和纯化。
在这种方法中，生物样本与裂解缓冲液混合后，加入离心柱进行离心，DNA能够通过纤维素膜或硅胶膜的作用被固定，而其他杂质则被洗脱掉，最后用纯化缓冲液洗脱得到高质量的DNA。
磁珠法是一种快速、高通量的DNA提取方法，它利用表面修饰的磁珠对DNA进行特异性捕获。
在这种方法中，生物样本与裂解缓冲液混合后，加入磁珠混悬液，并利用磁力使磁珠与DNA结合，然后用磁力将磁珠与DNA一起沉淀到管壁上，洗脱杂质后得到纯化的DNA。
二、PCR扩增PCR（聚合酶链式反应）是一种用于体外扩增DNA的技术，通过反复的循环性温度变化，可以扩增特定的DNA片段。
PCR由于其高度敏感和高效性，被广泛应用于基因分型、基因定量、基因突变分析等领域。
PCR反应的基本组成包括DNA模板、引物、聚合酶、四种脱氧核苷酸和缓冲液。
首先，将DNA模板与引物、脱氧核苷酸和缓冲液混合，并添加聚合酶，然后进行多次温度循环，包括变性、退火和延伸等步骤，从而使DNA模板经过反复扩增，最后得到目标DNA片段的数量大幅增加。
分子生物学实验基本技术
汇报人：
目录
分子生物学实验技 术概述
基因克隆和表达技 术
PCR技术和相关技 术
分子杂交和印迹技 术
基因编辑技术
蛋白质技术和蛋白 质组学
分子生物学实验技 术概述
添加标题
定义：分子生物学实验技术是指在分子水平上研究 生物现象和过程的技术，包括基因克隆、基因表达、 基因突变、基因重组等。
蛋白质组学在分子生物学实验中的应用：研究蛋 白质的功能、调控机制和疾病发生机制等
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汇报人：
PCR技术和相关技 术
原理：通过DNA复制技术，将DNA片段扩增 步骤：包括模板DNA的制备、引物的设计、反应体系的配置、PCR反应的进行等 应用：广泛应用于基因克隆、基因表达分析、基因突变检测等领域 相关技术：包括实时荧光定量PCR、多重PCR、巢式PCR等
原理：逆转录-聚合 酶链反应技术，将 RNA逆转录为cDNA， 再进行PCR扩增
添加标题
Northern印迹技术：用于检测RNA序列，通过电泳将RNA片段分离，然后用放射性标记的探 针进行杂交，最后通过放射自显影检测杂交信号。
添加标题
应用：Southern印迹和Northern印迹技术广泛应用于基因克隆、基因表达分析、基因突变检 测等领域。
添加标题
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
优缺点：Southern印迹技术灵敏度高，但操作复杂，耗时长；Northern印迹技术操作简单， 但灵敏度较低。
基因编辑技术
应用：广泛应用于基因功能 研究、疾病治疗等领域
原理：利用Cas9蛋白对DNA进 行切割，形成双链断裂，从而 实现基因编辑
优势：操作简便、高效、精 确，可应用于多种生物体
局限性：存在脱靶效应，可 能导致非目标基因的突变
分子生物学实验技术
分子生物学实验技术目录实验一细菌的培养 (2)实验二质粒DNA的提取 (3)实验三紫外吸收法测定核酸浓度与纯度 (5)实验四水平式琼脂糖凝胶电泳法检测DNA (6)实验五质粒DNA酶切及琼脂糖电泳分析鉴定 (8)实验六植物基因组DNA提取、酶切及电泳分析 (9)实验七聚合酶链反应（PCR）技术体外扩增DNA (10)实验八RNA提取与纯化 (12)实验九RT-PCR扩增目的基因cDNA (15)实验十质粒载体和外源DNA的连接反应 (17)实验十一感受态细胞的制备及转化 (18)实验十二克隆的筛选和快速鉴定 (20)实验十三DNA分析——Southern杂交 (22)一基本操作实验一、细菌培养实验二、质粒DNA提取实验三、紫外吸收法测定核酸浓度与纯度实验四、水平式琼脂糖凝胶电泳法检测DNA实验五、质粒DNA酶切及琼脂糖电泳分析鉴定实验六、植物基因组DNA提取、定量、酶切及电泳分析实验八、植物RNA提取及纯化二、目的基因获取实验七、聚合酶链式反应（PCR）技术体外扩增DNA实验九、RT-PCR扩增目的基因cDNA三、目的基因的克隆和表达实验十、质粒载体和外源DNA的连接反应实验十一、感受态细胞的制备及转化实验十二、克隆的筛选和快速鉴定实验十三、DNA分析——Southern杂交实验一细菌的培养一、目的学习细菌的培养方法及培养基的配置。
二、原理在基因工程实验和分子生物学实验中，细菌是不可缺少的实验材料。
质粒的保存、增殖和转化；基因文库的建立等都离不开细菌。
特别是常用的大肠杆菌。
大肠杆菌是含有长约3000kb的环状染色体的棒状细胞。
它能在仅含碳水化合物和提供氮、磷和微量元素的无机盐的培养基上快速生长。
当大肠杆菌在培养基中培养时，其开始裂殖前，先进入一个滞后期。
然后进入对数生长期，以20~30min复制一代的速度增殖。
最后，当培养基中的营养成分和氧耗尽或当培养基中废物的含量达到抑制细菌的快速生长的浓度时，菌体密度就达到一个比较恒定的值，这一时期叫做细菌生长的饱和期。
分子生物学实验方法
分子生物学实验方法
分子生物学实验方法是研究生物分子结构、功能和相互作用的技术手段。
以下是常用的分子生物学实验方法：
1. PCR（聚合酶链式反应）：PCR是一种通过体外DNA扩增技术来复制DNA 片段的方法，可以快速、高效地扩增特定DNA序列。
2. 基因克隆：通过将目标DNA片段插入到载体DNA中，形成重组DNA分子，再将重组DNA导入到宿主细胞中，从而得到大量目标DNA的方法。
3. 电泳：电泳是一种利用电场将DNA、RNA或蛋白质分子按照大小和电荷进行分离的方法。
常用的电泳包括琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。
4. 蛋白质表达与纯化：通过在宿主细胞中表达目标蛋白质的基因，然后利用蛋白质的特异性结构、功能或抗体亲和纯化技术，从宿主细胞中纯化目标蛋白质。
5. 免疫沉淀：利用抗体与特定蛋白质结合来纯化对应的蛋白质复合物的方法。
6. 荧光显微镜：利用荧光探针标记目标生物分子，通过荧光显微镜观察和分析分子在细胞或组织中的位置和数量。
7. Northern blot和Western blot：用于检测和分析RNA和蛋白质的方法。
Northern blot可以检测特定的RNA序列，Western blot可以检测特定蛋白质。
8. 基因敲除和基因转染：通过基因敲除技术可以去除或禁止特定基因的表达，而基因转染技术可以将外源基因导入细胞中，从而改变细胞的表型。
9. 蛋白质相互作用分析：利用蛋白质相互作用分析技术，如酵母双杂交、质谱分析等，研究蛋白质之间的相互作用关系。
这些方法是分子生物学研究中常用的实验技术，可以用于从分子水平解析生物学问题，探索生物的结构和功能。
分子生物学常用实验技术
分子生物学常用实验技术
1. PCR技术（聚合酶链反应）：能够扩增DNA的特定序列，用于检测、克隆和序列分析DNA。
2. 能量荧光素酶（Luciferase）报告基因：用于监测基因表达和调节，通过荧光素衍生物的反应来检测酶活性。
3. 免疫印迹（Western blot）技术：用于检测目标蛋白质的表达，并鉴定特定的抗原-抗体反应。
4. 基因芯片（Microarray）技术：可以同时测量大量基因的表达，用于研究基因表达的调节。
5. 基因组编辑技术（CRISPR-Cas9）：通过靶向修饰基因组来研究基因功能和治疗疾病。
6. 蛋白质亲和层析技术（Protein Affinity Chromatography）：用于分离和纯化蛋白质，常用于研究蛋白质-蛋白质或蛋白质-配体相互作用。
7. RNA干扰技术（RNAi）：利用RNA分子靶向抑制目标基因表达的技术，常用于研究基因调节的机制。
分子生物学实验技术
分子生物学实验技术分子生物学是研究生命体系分子结构、功能和相互作用的一门学科，它成为了现代生物学中极为重要的分支。
分子生物学技术主要包括DNA/RNA提取、PCR 技术、电泳技术、DNA Microarray技术、测序技术、基因编辑技术等。
本文将重点介绍分子生物学常用的实验技术。
一、DNA/RNA提取DNA/RNA提取是分子生物学实验中最基础的步骤，其目的是从样本中分离出DNA/RNA，为后续的实验提供物质基础。
常用的DNA/RNA提取方法包括酚-氯仿法、硅胶膜法、离心柱法等。
其中，酚-氯仿法是最常用的一种方法。
该方法操作简单，成本低，适用于大多数的样本。
二、PCR技术PCR技术是分子生物学实验中最具代表性的技术之一，它能够在体外合成大量特定序列的DNA分子。
PCR技术的关键是引物设计，引物的选择和设计直接影响PCR反应的特异性和灵敏度。
同时，PCR反应中的缩合酶也是至关重要的因素，它能够在合适的温度下将引物特异性地结合，并引导DNA合成。
近年来，PCR技术已经广泛应用于极为多样化的领域，包括基因检测、疾病诊断、脱氧核糖核酸序列确定等。
三、电泳技术电泳技术是分子生物学实验中使用较多的技术之一，它能够分离不同长度的DNA或RNA分子，从而确定它们的大小和数量。
电泳技术的操作步骤相对简单，但是不同的电泳仪和所用电极对其结果的影响巨大。
同时，电泳结果也需要进行染色、成像、定量和分析，以确定它们在实验中的作用。
四、DNA Microarray技术DNA Microarray技术是一种高通量、并行性大的遗传学方法，它能够测定大量DNA样本之间的差异。
这种技术直接基于互补杂交的原理，利用DNA序列之间的配对反应来评估不同的DNA样本之间的差异。
DNA Microarray技术已被广泛应用于癌症和复杂人类疾病的诊断、药物研究和基因表达分析等领域。
五、DNA测序技术DNA测序技术是分子生物学实验中最具有代表性和标志性的技术之一，采用这种技术能够准确和高通量的测定DNA序列。
分子生物学实验技术
分子生物学实验技术分子生物学是现代生物学的重要分支之一，其在疾病预防、治疗和生物科技等方面有广泛应用。
本文将介绍分子生物学实验中常用的技术，并讨论其原理和应用。
一、基本实验技术1. DNA/RNA提取技术DNA/RNA提取是分子生物学实验中的基础技术之一。
DNA/RNA提取的目的是从细胞或组织中提取高质量的DNA或RNA，为其后续检测和研究做好准备。
现在市场上有多种DNA/RNA提取试剂盒，供实验室使用。
通常，提取DNA首先将组织/细胞裂解，然后进行蛋白质沉淀、DNA沉淀、洗涤和重溶等步骤。
而提取RNA则需要防止RNA酶的污染并保护RNA的完整性。
RNA提取常见的方法是直接裂解和三步酚-氯仿法等。
2. PCR技术PCR（聚合酶链式反应）技术是一种常用的分子生物学技术，用于扩增DNA片段。
PCR反应是在一个热循环下进行的，包括退火、结合和扩增阶段。
其中，退火温度用于将引物与靶DNA结合，获得高特异性；扩增阶段用于扩增目标DNA片段，通常在72℃左右进行。
PCR技术广泛应用于疾病的诊断、基因多态性分析、DNA指纹鉴定和基因工程等方面。
对于基因工程，PCR技术在基因克隆、定量PCR、mutagenesis、突变扫描和芯片检测等方面也有重要应用。
3. 转染技术转染技术是指将外源基因或其他化合物转入目标细胞中的技术。
常用的转染方法包括：病毒介导的转染、电穿孔、化学转染及基于脂质体的转染等。
转染技术在基因治疗、模型建立、基因表达分析、药物筛选和基因敲除等方面都有广泛应用。
二、高级实验技术1. 基因测序技术基因测序是分子生物学中应用最广泛的技术之一，用于确定DNA序列。
常用的基因测序技术包括Sanger测序和新一代测序（NGS）技术。
Sanger测序是一种传统的测序技术，通过DNA聚合酶、DNA模板、引物和ddNTPs（二脱氧核苷三磷酸）来扩增和定序DNA。
此外，NGS技术的基本原理是平行测序，利用高通量测序技术对DNA样本进行重复测序，得到高质量的DNA序列。
分子生物学中最重要的5个实验技术
分子生物学中最重要的5个实验技术分子生物学是一个研究生命体系分子组成、结构、功能及其相互作用的学科，广泛应用于植物、动物及微生物等各种生物体的研究当中。
在分子生物学研究中，人们运用了众多的实验技术，为了更好的认识和掌握这些实验技术，本文将介绍分子生物学中5个最重要的实验技术。
一、PCR技术PCR技术（聚合酶链反应技术），是一种常用的DNA复制技术。
PCR技术是通过对DNA分子的放大，使科学家们能够快速、准确地研究、分离、克隆、检测和定量目标DNA分子。
PCR技术是分子生物学研究中最重要的技术之一。
PCR技术可以在数小时内产生比原来样本10^6或更多倍的DNA片段。
PCR的原理是利用特定的引物，将图谱上某个特定的DNA区段扩大和复制，产生大量的相等DNA片段。
准确而高效的PCR技术，被广泛应用于人类基因组学、遗传病学、系统发育分析、DNA指纹鉴定等领域。
二、DNA测序技术DNA测序技术是分子生物学研究中另一个重要的实验技术。
它是现代分子生物学和基因组学研究中应用的一种最常用的技术。
DNA测序技术被广泛应用于分析、比较、鉴定各种不同物种的基因组序列，也被广泛应用于疾病的诊断和治疗等医学领域。
DNA测序技术的运作原理是根据测序反应的结果，来确定分析样品中每个碱基的序列。
DNA测序技术有两种主要方法：Sanger 技术和下一代测序技术。
这些实验技术的不断进步，为人们在分析基因组和研究遗传疾病方面提供了更多的可能性。
三、蛋白质电泳蛋白质电泳是一种用于生物体内蛋白质的分离、纯化和鉴定的实验技术。
随着分子生物学研究的深入，蛋白质在细胞功能和代谢调控等方面的作用越来越受到关注。
蛋白质电泳技术则成为了研究蛋白质在生物体内分布、功能活性和变化的重要工具。
经典蛋白质电泳技术被广泛应用于蛋白质分离和鉴定。
其原理是利用蛋白质的分子量、电荷、溶胀性质等物理化学性质进行分离。
在蛋白质浓度检测和鉴定方面，蛋白质电泳技术具有重要的应用价值。
分子生物学实验技术
分子生物学实验技术分子生物学实验技术分子生物学是生物学的一项重要分支，它研究细胞分子机制、基因调控、遗传信息的传递、处理和表达等。
分子生物学实验技术是对分子生物学研究进行实验室操作和检测的方法与技术。
本文将从基础实验技术、基因克隆技术、基因表达技术、基因分析技术四个方面深入介绍分子生物学实验技术的相关内容。
一、基础实验技术在分子生物学研究中，藏龙卧虎的实验技术为实验的准确性和精细度提供了保障。
以下是分子生物学实验室常用技术的简介：1、聚合酶链式反应PCR技术是分子生物学重要的实验技术，通过PCR技术，能够将极少量的DNA 扩增为大量的DNA。
PCR在分子生物学中有广泛应用，包括基因片段的克隆、置换突变、基因型检测、DNA 测序等诸多方面。
PCR反应需要引物和DNA模板，引物和模板配合的合理性是PCR反应的关键。
PCR反应具体操作时需要根据引物的长度、Tm值、模板浓度、扩增片段长度等因素，进行优化以达到最佳扩增效果。
2、蛋白质电泳蛋白质电泳是一种分离蛋白质的技术，可按照分子质量和电荷分离其中的成分。
蛋白质电泳具体操作时比较复杂，核心是电泳样品的制备和电泳条件的设置。
电泳样品的制备主要包括电泳缓冲液的配制、蛋白质提取、样品准备、蛋白质定量和蛋白质加样。
电泳条件的设置主要包括电泳槽的填充、初始电压、电泳时间、gel浓度等。
3、核酸电泳核酸电泳是一种分离核酸的技术，通过电泳将带负电的DNA/RNA片段从电泳起点移向电极终点，达到分离纯化的目的。
关键是电泳实验条件的设置，包括电泳缓冲液的配制、电泳时间、电压、电泳gel浓度和transfer buffer浓度等。
4、原位杂交法原位杂交法是研究DNA 和RNA 相互作用的一种方法。
该方法能够定量测定DNA或RNA与特定基因的结合能力，从而实现特定基因的检测与鉴定。
原位杂交方法的操作步骤主要包括制备标记探针、制备样品、加标记探针、定性分析、定量分析等。
此方法具有灵敏度高，特异性强等优点。
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replication)； 3. 多克隆位点(MSC, Multiple cloning
site or polylinker)； 4. 标记基因(Marker gene, such as
LacZ gene)。
Ampr抗性基因
Ampr抗性基因编码一种周质酶（β-内酰胺酶）可特异地 切割Amp的β-内酰胺环，从而使其失去杀菌能力
三、实验材料与试剂物品
• 1.材料 • 香椿（Toona sinensis）黄花苗
2、试剂
• 提取缓冲液（预冷） • SSC • RNase液
3、仪器设备
• 高速冷冻离心机（8-316） • 制冰机（8-312） • 紫外可见分光计（8-316） • 冰箱（-86度在8-312，-20度，4度在8-312）
实验二、大肠杆菌质粒DNA的提取
1. 目的与要求
通过质粒的一些特性、质粒DNA 的提取、测定，学习用碱变性法 提取质粒DNA的方法，了解用分 光光度计测定DNA含量的方法。2. 相关知识源自原理质粒(Plasmid) ：
独立于染色体外的，能自主复制且稳定遗传的遗传 因子。是一种环状的双链DNA分子。
紫外光吸收法：
因为组成核酸的碱基(G,A,T,C）在260nm处 具有强吸收峰，所以通过测定260nm的吸收 峰即可对DNA进行定量。但有时也会因为所 处溶液的pH值不同而导致吸光系数的不同。 因此，一般在中性pH值左右的环境中进行 测定。这种方法常用于测定比较纯的样品。
3. 材料与试剂 材料:含有质粒大肠杆菌JM83+。
TE缓冲液或水（+ 20g/ml RNase ）:
10mmol/L，Tris-HCl, 1mmol/L，EDTA ， pH8.0, 100%乙醇，70％乙醇
▪ 平衡酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）
作用：氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机 相的分离。平衡酚pH7.8（酸性下DNA分配于 有机相，酚的密度大），可使DNA在上清中。 异戊醇有助于消除抽提过程中出现的泡沫）
P(BLA) ApaLI (2367)
APr
pUC19
2686 bp
ApaLI (178) ALPHA EcoRI (397) AvaI (413) XmaI (413) SmaI (415) BamHI (418) PstI (440) HindIII (448) P(LAC) ORI
ApaLI (1121)
• 水浴锅 • 电子天平 • 玻璃仪器等
四、实验操作流程
• 采摘芽苗，洗净→剪小段，擦干表面水分 →放-86度冰箱冻30分钟以上→冰浴研磨匀 浆（分次加提取液）→以下见讲义
• 纯度 • 含量
五、结果与处理
• 思考题：影响本实验结果的因素有 哪些，要得到高纯度的DNA需要在 实验中注意哪些问题？
分子生物学实验
目录
实验一、植物染色体DNA的提取及纯度鉴定 实验二、大肠杆菌质粒DNA的提取 实验三、琼脂糖凝胶电泳 实验四、ＤＮＡ的限制性酶切 实验五、大肠杆菌感受态细胞的制备及外源DNA
的转化 实验六、PCR基因扩增技术
实验一、植物染色体DNA的提取 及纯度鉴定
一、实验目的
• 掌握真核植物基因组染色体DNA的一种提 取方法
12000rpm，离心15min，取上清记录体积到一新管
（可省略）上清加等体积的氯仿：异戊醇（振荡混匀）
12000rpm，离心15min，取上清记录体积到一新管
上清加2倍体积的无水乙醇（充分混匀），冰浴 30min
12000rpm，离心15min
沉淀用75%乙醇1mL洗涤两次（振荡混匀、离心）
注：用时取下层液，酚腐蚀性强，可引起灼伤。
▪ 无水乙醇：除去DNA水化层，使DNA沉淀
▪ TE缓冲液：溶解DNA
四、实验步骤
接含质粒的单菌落于3ml LB Amp+液体培养基中
370C，190rpm振荡培养过夜
取1.5菌液入1.5ml的dorf管中
6000rpm、离心2min，弃上清，收集菌体
4. 加入150 l乙酸钾溶液(溶液II)，加盖后颠倒67次混匀，冰上放置5min;
5. 用冷冻高速离心机，10000r/min离心7min，上 清移入另一干净离心管，并加1ml 100％乙醇混 匀，12000r/min离心5min，弃去上清液;
6. 沉淀用0.5ml 70％乙醇清洗一次， 12000r/min 离心5min，弃去上清液，小管倒置于吸水纸上 ，除尽乙醇，室温自然干燥;
ApaLI (1121)
细菌质粒:
细菌质粒是用的最多的质粒类 群，其大小从1Kb-200Kb，它们复 制时利用宿主细胞复制自身基因组 DNA的同一组酶系。
质粒类型：
• 严谨型：这些质粒的复制是在寄主细胞严格控 制之下的，与寄主细胞的复制偶联同步。所以， 往往在一个细胞中只有一份或几份拷贝；
• 松驰型：这些质粒的复制是在寄主细胞的松弛 控制之下的，每个细胞中含有10-200份拷贝， 如果用一定的药物处理抑制寄主蛋白质的合成 才会使质粒拷贝数增至几千份。如较早的质粒 pBR322即属于松弛型质粒，要经过氯霉素处理 才能达到更高拷贝数。
• 学习使用紫外分光光度法鉴定DNA的纯度， 估计相对含量。
二、实验原理
• 用低温机械研磨和高浓度、SDS等破坏细 胞壁及膜，使蛋白变性使DNA与蛋白分离， 用一定浓度的溶液将DNA提取出来，用高 浓度乙醇沉淀DNA，氯仿/异戊醇等去除杂 质，RN ase降解核酸，得到纯度较高的 DNA样品。根据核酸与蛋白质分别在 OD260和OD280有吸收峰分别测定之，比 较OD260/OD280比值在1.8附近程度估计 纯度，依据经验公式计算DNA含量。
K＋
可中和DNA
溶液1－GET缓冲液： 50mmol/L葡萄糖， 10mmol/L EDTA， 25mMTris-HCl pH8.0。
溶液2－0.2mol/L NaOH, 1%SDS 溶液3－乙酸钾溶液(3M, pH=4.8)：
60mL的5mol/L KAc, 11.5ml冰醋酸，
28.5mL H2O
三、实验仪器、材料与试剂
（一）仪器：恒温培养箱、恒温摇床、台式离心机、高压灭菌锅
（二）材料：含有质粒的大肠杆菌JM83+、LB液体培养基
（三）试剂：
▪ 溶液I
作用：分散细胞，鳌合金属离子使金属酶失活
▪ 溶液II
作用：细胞壁肽聚糖碱性下水解，核酸和蛋白质变性。
▪ 溶液III
作用：酸性下质粒DNA复性，变性蛋白－SDS＋线性DNA沉淀，
12000rpm，离心10min
沉淀超净台中风干
沉淀用20uL RTE溶解，-200C保存
注意：
• 用移液器操作时，每一步都要格 外小心，特别是在加入溶液II 和 III后，一定不要剧烈振荡，以免 切碎DNA(包括质粒DNA和基因组 DNA)！！！
质粒小量提取的方法（手工提取）：
1. 培养细菌：将带有质粒的大肠杆菌接种到 1.5-3ml含有相应抗生素的液体培养基，37℃ 培养12～16小时;
2. 蒸 馏 水 作 为 空 白 , 在 波 长 260nm 、 280nm处调节紫外分光光度计读数 至零。
3. 加入DNA稀释液，测定260nm 及280nm 的吸收值。260nm 读数用于计算样品中 核 酸 的 浓 度 ， OD260 值 为 1 相 当 于 约 50g /ml双链DNA，33g /ml单链。可根据在 260nm 以 及 在 280nm 的 读 数 的 比 值 （ OD260/OD280 ） 估 计 核 酸 的 纯 度 。 一 般 DNA的纯品，其比值为1.8，低于此值说 明有蛋白质或其它杂质的污染。
载体(Vector)： 用于携带重组DNA，并且能够使外源DNA一起复制 与表达的质粒(运载工具)。
具备的条件： • 易于鉴定； • 在受体细胞中可以独立复制； • 易于筛选； • 易于导入受体细胞。
Insert
EcoRI 1.9kb
XhoI
载体的结构：
1. 抗性基因（Antibiotic resistance gene,such as Ampicillin resistance gene, Kanamycine resistance gene)
7. 加入30-50l含有20g/ml RNase的灭菌蒸馏水 或TE 缓冲液溶解提取物，室温放置15-30min ，使DNA充分溶解(有时需要酚:氯仿抽提);
8. 将分离出的质粒DNA置于-20℃保存备用。
B. 用分光光度计法定量DNA
1. 取2l提取的质粒DNA，加入98l蒸 馏水对待测DNA样品做1:50(或更高 倍数的稀释);
DNA 是具有一定结构的物质，一些特殊的环 境会导致DNA的变性，如加热、极端pH值、 有机溶剂、尿素、酰胺试剂等，而适宜的环 境又可以使DNA复性。
SDS是一种阴离子表面活性剂，它既能使细菌细胞 裂解，又能使一些蛋白质变性，所以SDS处理细菌 细胞后，会导致细菌细胞壁的破裂，从而使质粒 DNA以及基因组DNA从细胞中同时释放出来。释放 出来的DNA遇到强碱性（NaOH）环境，就会变性。 然后，用酸性乙酸钾来中和溶液，使溶液处于中 性，质粒DNA将迅速复性，而基因组DNA，由于分 子巨大，难以复性。离心后，质粒DNA将在上清中， 而基因组DNA则与细胞碎片一起沉淀到离心管的底 部。通过这种方法即可将质粒DNA从细菌中提取出 来。
4. 记录OD值，通过计算确定DNA浓 度或纯度，公式如下:
dsDNA=50×(OD260) × 稀释倍数 以上浓度单位为g /ml
实验三、琼脂糖凝胶电泳
P(BLA) ApaLI (2367)
APr
pUC19
2686 bp
ApaLI (178) ALPHA EcoRI (397) AvaI (413) XmaI (413) SmaI (415) BamHI (418) PstI (440) HindIII (448) P(LAC) ORI