临床化学常用分析方法

临床化学常用分析方法 This manuscript was revised by JIEK MA on December 15th, 2012.

临床化学常用分析技术

临床化学常用分析方法

一、光谱分析（分光光度技术）

利用各种化学物质所具有的发射、吸收或散射光谱谱系的特征，来确定其性质、结构或含量的技术，称为光谱分析技术。具有灵敏、快速、简便等特点，是生物化学分析中最常用的分析技术。

发射光谱分析：荧光分析法和火焰光度法

吸收光谱分析：可见及紫外光分光光度法、原子吸收分光光度法

散射光谱分析：比浊法

二、电泳分析

在直流电场中，带电粒子向带符号相反的电极移动的现象称为电泳。

三、离心技术

离心技术分为制备离心技术和分析离心技术。制备离心技术主要用于物质的分离、纯化，而分析离心技术主要用来分析样品的组成。

四、层析技术

层析法是利用不同物质理化性质的差异而建立起来的技术。所有的层析系统都由固定相和流动相组成。

五、电化学分析技术

利用物质的电化学性质，测定化学电池的电位、电流或电量的变化进行分析的方法称为电化学分析法。包括电位法、电导法、电容量分析法。离子选择电极法：离子选择电极（ISE）能对某特定离子产生响应，在一定范围内，其电位与溶液中特定离子活度的对数呈线性关系，因此可用离子选择电极来定量分析某些离子的活度或浓度。例题用于分离不同分子大小蛋白质的方法

是 A.琼脂糖凝胶电泳 B.凝胶层析 C.密度梯度离心法 D.免疫比浊法 E.电化学分析法

【正确答案】B

血清酶催化活性浓度和代谢物浓度检测技术

一、酶反应动力学原理

酶反应动力学主要研究酶催化反应的过程与速率，以及各种影响酶催化速率的因素，定量时的观察对象是总单位时间内底物的减少或产物增加的量。

当底物[S]＞＞Km时，公式可近似为V＝Vmax；从理论上说只有测定的是酶Vmax，反应速度才和酶量成正比。

二、酶活性的定义及单位

在实验规定的条件下（温度、最适pH、最适底物浓度时），在1分钟内催化1μmol底物发生反应所需的酶量作为1个酶活力国际单位（U）。

习惯用U／L来表示体液中酶活性浓度。

三、测定酶活性浓度的两大类方法

（一）固定时间法（取样法）

（二）连续监测法：酶耦联法（指示酶、辅助酶）

（三）影响酶活性测定的因素

1.底物浓度的影响：底物的种类和浓度。多种底物中，Km最小的底物往往是此酶的生理底物。

2.反应体系的最适pH、缓冲液的种类和浓度。

3.温度的控制：37℃。

四、代谢物浓度酶法测定

（一）代谢物酶促终点法测定

1.一步法：最简单的底物法测定。

2.酶促耦联法：工具酶（指示酶、辅助酶）

在临床生化测定中，最常用的耦联指示系统有两个：一个是脱氢酶系统，另一个为氧化酶系统。

脱氢酶系统：测定NAD＋或NADP＋在340nm处的吸光度增高或下降来计算被测物的浓度。但会受到内源性脱氢酶及其底物如乳酸脱氢酶和乳酸／丙酮酸的干扰。

（二）动力学法测定：实际操作中，测定两个固定时间的吸光度差值，只要此期间待测物消耗＜5%，就可以采用标准浓度对照法计算样本浓度，所以动力学法有时又称为固定时间法。与终点法相比，动态法测定中待测物无须完全转化，故工具酶的用量较少。产物的堆积和样品色原对动态法影响较小，而对终点测定法影响较大。如碰到乳糜或溶血，在做终点法测定时，有时需设样本空白。