防腐剂

第一章?前?言?
?
食品是人类赖以生存的基本物质，新鲜的食品则是保障人类健康的基本条件。食品中含有许多丰富的蛋白质、碳水化合物和脂肪类营养物质，在物理、生物化学和有害微生物等的作用下，可以失去原有的色、香、味、形而发生腐烂变质。其中有害微生物的作用是导致食品腐烂变质的主要原因[1]。当今，地方食品要在全国流通，一国的食品要在世界销售，这必然要求食品密封包装、耐贮、耐运，因而使用食品防止腐剂、抗氧剂来防止食品腐烂变质是必要的[2]。食品的保鲜与防腐是食品加工生产的首要问题，而食品防腐剂的选择和安全性的检测与鉴定则是社会关注的热点问题。?
微生物引起食品变质可分为：细菌繁殖造成的食品腐败，霉菌代谢导致的食品霉变和酵母菌分泌的氧化还原酶促使的食品发酵。微生物繁殖需要有适合的客观条件，即适当的水分、温度、氧、渗透压、pH?值和光等[3]。通常可以用物理方法或化学方法来防止有害微生物的破坏，物理方法是通过低温冷藏、隔绝空气、干燥、高渗、高酸度、辐射等来杀菌或抑菌；化学方法就是利用防腐剂来杀菌或抑菌。?
防腐是针对有害微生物的，一是防止微生物造成食品的腐烂，二是防止产毒微生物（如黄曲霉等）的危害。防止微生物对食品的危害主要有以下几种方法：首先，防止微生物污染食物；第二，灭活有害微生物；第三，降低或者抑制受污染食品中微生物的生长，或使之失活。食品防腐剂主要是通过第三种方法，即抑制食品中微生物的生长起到防腐作用，它可以保证食品有较长的货架期[3]。食品添加剂多功能化将有助于生产工艺的优化、产品质量的控制以及新产品的开发[4，5]。?
食品化学防腐剂由于使用方便、效果好且不耗能，是重要的食品添加剂之一，在食品工业中被广泛应用。?
1.1?食品防腐剂的概念和分类?
食品防腐剂是防止因微生物作用引起食品腐败变质，延长食品保存期的一类食品添加剂。其防腐机制主要是降低食品的水分活度和?pH?值，破坏微生物的生长或代谢系统的正常运行，起到抑制微生物生长、延长产品货架期的作用。目前使用的防腐剂品种很多，美国有50多种，日本有?43?种，我国允许使用的超过?18?种，我国香港特区有?27?种。?
食品防腐剂分为化学防腐剂和天然防腐剂两大类。化学防腐剂又分为无机防腐剂和有机防腐剂。我国目前生产和使用的主要是有机酸及其盐类，如丙酸及其盐类、山梨酸及其盐类、苯甲酸类、对羟基苯甲酸酯类、乳酸和乳酸钠、双乙酸钠、单辛酸甘油酯、脱氢醋酸钠、焦亚硫酸钾

等[6]。?
近年随着人们生活和消费水平
的提高，对食品加工的要求向“绿色”、“天然”、“安全”的方向转变，因此，研制开发天然、安全的食品防腐剂已成为食品添加剂领域研究的热点。天然食品防腐剂是一类高效、安全、无毒副作用的防腐剂，不但对人体健康无害，而且还具有一定的营养价值。目前市场上销售及报道的天然防腐剂大致有以下几类：??
①植物类防腐剂，如果胶分解物、茶多酚、芥子提取物、大蒜素、甘草等；?②动物类防腐剂，如壳聚糖、海藻糖、鱼精蛋白、蜂胶、溶菌酶、抗菌肽类等；?③微生物类防腐剂，如乳酸链球菌素、纳他霉素等。但由于天然防腐剂生产、分离、提纯等各项技术成本较高，使其应用受到了极大限制[7，8]。
1.3 食品防腐剂的作用机理 防腐剂抑制与杀死微生物的机理是十分复杂的，目前使用的防腐剂一般认为对微生物具有以下几方面的作用[11，12]：一、破坏微生物细胞膜的结构或者改变细胞膜的渗透性，使微生物体内的酶类和代谢产物逸出细胞外，导致结构受损或削弱或影响与膜有关的呼吸链电子传递系统，导致微生物正常的生理平衡被破坏而失活。二、防腐剂与微生物的酶作用，如与酶的巯基作用，破坏多种含硫蛋白酶的活性，干扰微生物体的正常代谢，从而影响其生存和繁殖。通常防腐剂作用于微生物的呼吸酶系，如乙酰辅酶A缩合酶、脱氢酶、电子转递酶系等。三、作用于遗传物质或遗传微粒结构，进而影响到遗传物质的复制转录，蛋白质的翻译等导致蛋白质部分变性、蛋白质交联而导致其他的生理作用不能进行等。 由于食品科学的发展，相对来说时间较短，因而对防腐剂作用机理的解释还很不充分，还有待于进一步研究。
第二章 实验部分 2.1实验仪器和药品 实验所需主要仪器及试剂分别见表2-1和表2-2所示。 表2-1 主要仪器 仪器名称 型号 生产厂家 可见分光光度计 722N型 上海精密科学仪器有限公司 立式压力蒸汽灭菌器 YXQ-LS-30S11 上海博迅实业有限公司医疗设备厂 气浴恒温振荡器 THZ-92B 上海博迅实业有限公司医疗设备厂 显数鼓风干燥箱 GZX-9240MBE 上海博迅实业有限公司医疗设备厂 洁净工作台 SW-CJ01BU 上海博迅实业有限公司医疗设备厂 电热恒温鼓风干燥箱 DHG-9246A 上海精宏实验设备有限公司 电子天平 JY2502 上海精密科学仪器有限公司 电子万用炉 200V AC 1000W 天津市泰斯特仪器有限公司 冰箱 BCD-231E 伊莱克斯
2.2 抗菌特性研究实验 供试糖酯（富马酸乳糖甲酯）抗菌特性研究实验方案 一 供试糖酯抑菌谱研究 2.2.1 供试菌种及其活化 a)

供试菌种 细菌: 大肠杆菌、 金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌； 酵母：啤酒酵母、
面包酵母 霉菌：黑曲霉、米曲霉 抑菌实验开始前，需将菌种活化。 b) 菌种活化 1) 细菌的活化方法 无菌操作从细菌菌种管中挑取一环菌苔，接种于营养肉汤培养基，并在37℃摇床培养至A560nm值约为0.4，菌体数约为105个/mL～106个/mL。 2）酵母接种麦芽汁培养基并在28℃培养至菌体细胞约为105个/mL～106个/mL。 3）霉菌菌种接种到马铃薯培养基中，在28’C恒温箱中培养72h，可见培养基中有菌苔漂浮，摇动使霉菌的抱子进入到清液中，取培养基清液1mL，用约50ml的马铃薯培养基稀释，用细胞计数器测定其中的霉菌抱子数，最后调整悬浮液中抱子数约为1000个/mL。 2.2.2 培养基的配制及其灭菌 a) 培养基配制 1) 营养肉汤培养基：牛肉膏5g，蛋白胨10g，葡萄糖10g，氯化钠5g，加水煮沸使各成分充分溶解，并定容至1000mL。冷却至常温后，用一定浓度的氢氧化钠调pH为7.6~7.8。营养肉汤培养基用于细菌的培养。 2）马铃薯培养基：取去皮马铃薯200g切成小块加1000mL水煮沸20min，双层纱布过滤取汁，加葡萄糖15g，补足水至1000mL，自然pH值。若需要制成琼脂培养基，加入琼脂18 g，煮沸使琼脂充分溶解。用于霉菌培养。 b) 培养基灭菌 所用培养基均放在高压蒸汽灭菌锅内0.1MPa，121℃保持30min进行灭菌。 2.2.3 最低抑菌浓度（MIC）的测定 a) 实验原理 最低抑菌浓度（Minimum Inhibition Concentration, MIC）是指在体外试验中能抑制培养基内微生物生长的最低浓度。MIC越小，抗菌活性越大，也就是说防腐剂具有较强的抗菌效能。MIC常用来表示防腐剂抑菌效果的指标，帮助确定防腐剂的大约有效抑菌浓度。 b) 实验方法 1) 细菌的MIC测定试管稀释法 用无菌移液管将已活化的菌种1mL接种至1000mL营养肉汤培养基中，然后分装到大小一致的带有棉塞的无菌试管中，每试管10mL。分别加入0.1g/L、0.2g/L、0.3 g/L、0.4g/L、0.5 g/L、0.6 g/L、0.7g/L、0.8 g/L、0.9g/L、1.0g/L 10个浓度梯度（做预实验确定浓度梯度，上述浓度梯度值仅供参考）的供试糖酯，充分摇匀，置30℃（实验条件限制）摇床培养。72h后观察培养液的浑浊度，从无菌生长的培养管中找出最低防腐剂浓度的培养管，此培养管中防腐剂的浓度即为供试糖酯的MIC值。 2) 酵母和霉菌的MIC测定平板涂布法 将不同浓度的防腐剂溶液的n（此次实验n=10）个浓度梯度（n在10~15间较佳，预实验决定n值）的培养基用无菌吸管定量地加入已经灭菌的培养皿中，然后加入一定体积的融化的麦芽汁琼脂培养基(霉菌用马铃薯培养基)，充分混合均

匀。待培养基冷却后，用无菌吸管接种菌液0.2mL至培养基上，用三角耙涂布均匀。在28℃恒温下培养72h，观察菌体的生长情
况，从无菌生长的培养皿中找出最低防腐剂浓度的培养皿，此培养皿的防腐剂浓度即为供试糖酯的MIC值 。 4 抑菌圈直径的测定 滤纸圆片法：用打孔器将定性滤纸制成6mm的小圆片，置于小培养皿中，160℃干热灭菌0.5h备用；将供试糖酯用95%乙醇溶解，配制成一定浓度的溶液；无菌操作下将灭菌后滤纸片浸在供试糖酯配成的溶液里，取出后贴在含菌平板上。每皿均匀分贴同种药液的纸片3片，相应溶剂空白对应的滤纸片2片；贴好滤纸片的培养皿置于恒温培养箱中培养，细菌于30℃恒温培养24~36h，酵母菌和霉菌于28℃恒温培养48~72h。取出后测定抑菌圈直径。 2.2.4 生长抑制实验 实验方法 1) 标记 在无菌培养管上，分别标明接种菌液、供试防腐剂及其浓度和培养时间。 2) 接种 在无菌培养管中，用无菌移液管吸取一定量的0.2g/L供试糖酯，再用营养肉汤培养基将其稀释成为某一浓度。最后接入浓度为104个/mL的细菌或酵母菌菌液1mL。以不加防腐剂的培养基作为空白对照。 3) 培养
将已接种的培养管置恒温摇床振荡培养。 其中，细菌培养温度为30℃，分别培养时间为0h、2h、4h、8h、16h、20h、24h、30h、36h、42h、48h、58h和74h；酵母培养温度为28℃，分别培养时间为0h、2h、4h、8h、12h、16h、20h、24h、30h、36h、42h、48h、52h、58h、64h和74h，将标有相应时间的培养管取出，立即放冰箱中贮存。 4) 测定 最后一同测定其吸光度值，用560nm处吸光值的变化反映浊度的变化，即细菌或酵母生长量的变化。 2.2.5 抗菌性能评价指标 a) 生长适应期 当微生物接种到新的培养基中后，最初并不立即开始繁殖，表现出培养基吸光值没有明显的增加。此阶段主要是调节体内代谢酶系以适应新的环境，变化主要发生在微生物个体内，是微生物生理生化状态的变化，而不是量的变化，不能从宏观上表现出来。所以，在微生物生长曲线上有一段时间吸光度一直维持在最初的水平，这段时间常被称为生长适应期[14]。 生长适应期（t）为细菌和酵母从接种到A560nm值增加 5%所需要的培养时间。 b) 半衰期和抑菌率 由于微生物适应性强，易于产生抗药性，所以一般情况下防腐剂的抑菌效果均为时间的衰减函数： I=Ae-μt。 式中：I ??时刻t（h）的抑菌率(%)； A ??防腐剂在供试浓度下对目标菌种的最高理论抑菌率，反应了防腐剂 的抑菌强度； μ ??衰减系数。 从衰减函数方程可求得防腐剂抗菌作用的最高理论抑菌率 A， 衰减系数

μ，半衰期t 0.5值。 抑菌率计算式
: 100(%),,,??????ck tt tcktAAAI 式中： ck tA,?——空白在t时刻的A560nm值和接种时（t=0）A560nm值相比的增量； t tA,?——处理样品在t时
刻的A560nm值和接种时（t=0）A560nm值相比的增量。 其中，防腐剂的抗菌半衰期(t0.5)为防腐剂的抑菌率衰减到初始抑菌率一半时的时间。可由实验数据通过衰减函数求得，也可由抑菌率曲线直接粗略读出。其反映了防腐剂抗菌作用的持久性和稳定性，可作为判断抗菌剂是否具有实际开发应用价值的一项重要参数。2.3不同浓度对富马酸乳糖单甲酯抗菌活性的影响的研究 2.3.1 供试菌种及其活化 a) 供试菌种 牛奶酸败混合菌群，从酸败的纯牛奶中分离得到。 d) 牛奶酸败混合菌的自然发酵培养方法 将新鲜的牛奶倒入烧杯中静置，使其在室温的条件下自然酸败。用滤纸将酸败产生的固体除去，所得澄清滤液即为牛奶酸败混合微生物菌群。使用时培养基中菌液添加量控制在560nm吸光值净增加0.05左右。 2.3.2 培养基的配制及其灭菌 a) 营养肉汤培养基 牛肉膏5g，蛋白胨10g，葡萄糖10g，氯化钠5g，加水煮沸使各成分充分溶解，并定容至1000mL。冷却至常温后，用一定浓度的盐酸或氢氧化钠将其pH值调至7.2~7.4。 营养肉汤培养基用于牛奶酸败混合菌的培养。 b) 培养基灭菌 所用培养基均放在高压蒸汽灭菌锅内0.1MPa，121℃保持20min进行灭菌。 2.3.3 抑菌率计算 时刻t时的抑菌率PI（%）采用下式计算： PI（%）=（1-△A处理，t/△A空白，t）*100 式中△A处理，t和△A空白，t分别为添加供试糖酯和空白培养基在t时刻和0时刻A560nm值相比的增量。 2.3.4 不同浓度对防腐剂抗菌活性的影响实验 实验方法 先用150mL的锥形瓶装好50mLpH值为7.2的肉汤培养基，再分别加入0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%（参考浓度梯度，需要预实验）的供试糖酯，培养时间为111h，应用比浊法测定不同浓度供试糖酯在指定观察时间的A560nm值，并以不加防腐剂的培养基作为空白对照。
第三章 结果与讨论 3.1 富马酸乳糖甲酯的抗菌特性 3.1.1 最低抑菌浓度（MIC）
表3.1富马酸乳糖甲酯对供试菌种的最低抑菌浓度（MIC）
。
在试验条件下，富马酸乳糖甲酯对革兰氏阴性菌大肠杆菌的最低抑菌浓度为0.6％，对革兰氏阳性菌枯草芽孢杆菌的最低抑菌浓度为0.5％，其抗细菌效果不及山梨酸，丁二酸蔗糖甲酯和富马酸二甲酯，说明富马酸乳糖甲酯对不同细胞壁的细菌均有一般抑制作用。富马酸乳糖甲酯对酿酒酵母的最低抑菌浓度为0.25％，富马酸乳糖甲酯对面包酵母的最低抑菌浓度为0.30％，其抗酵母效果不及山梨酸

，反丁二酸蔗糖甲酯和富马酸二甲酯。 试验结果表明，富马酸乳糖甲酯对供试的细菌和酵母均有抗菌效果。但效果不显注，可能是由于合成的富马酸乳糖甲酯不纯导致。 结果分析：由于供试防腐剂中所
含的抗菌活性官能团（也就是α，β-不饱和羰基结构）。α，β-不饱和羰基结构是防腐剂发挥抑菌作用的有效功能结构。由于富马酸含有2个不饱和羰基结构，以富马酸分子为母体，将分子的一端甲酯化来保证合成产物的亲脂性，另一端引入糖基，所以富马酸乳糖甲酯有抗菌母体结构而又不产生毒副作用。 3.1.2 对细菌和酵母的生长抑制作用 3.1.2.1对细菌的生长抑制作用 富马酸乳糖单甲酯对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的生长有较好抑制作用，影响结果见图3.1、图3.2和图3.3从图3.1、图3.2和图3.3上得到富马酸乳糖单甲酯对细菌的抗菌性能评价： 1) 生长适应期 添加0.4%的富马酸乳糖单甲酯后可有效延长细菌的生长适应期。枯草芽孢杆菌由空白对照的4h延长至42h，是空白的9倍。大肠杆菌和金黄色葡萄球菌被杀灭了。 添加0.5%、0.6%、0.7%的富马酸乳糖甲酯后，对大肠杆菌的生长适应期分别为24h、72h、72h；添加0.3%、0.4%、0.5%的富马酸乳糖甲酯后，对枯草芽孢杆菌的生长适应期分别为6h、24h、44h；添加0.4%、0.5%、0.6%的富马酸乳糖甲酯后，对苏云金芽孢杆菌的生长适应期分别为16h；72h；72h。 2) 衰期 由试验数据通过衰减函数求得结果，填于表3.4,为富马酸乳糖甲酯对供试细菌的抗菌衰期。
3.1.2.2对酵母的生长抑制作用 富马酸乳糖甲酯对酿酒酵母和面包酵母的生长有较好抑制作用，影响结果见图3.5和图3.6。
从图3.5和图3.6上得到富马酸乳糖甲酯对酵母的抗菌性能评价： 1) 生长适应期 添加0.25%的富马酸乳糖甲酯后可显著延长酵母的生长适应期。酿酒酵母由空白对照的8h延长至58h，是空白的7.25倍；面包酵母由空白对照的8h延长至64h，是空白的8倍。 添加0.2%、0.25%、0.30%的富马酸乳糖甲酯后，对酿酒酵母的生长适应期分别为24h、50h、74h；添加0.25%、0.30%、0.35%的富马酸乳糖甲酯后，对面包酵母的生长适应期分别为20h、60h、74h。 2) 衰期 由试验数据通过衰减函数求得结果，填于表3.7,为富马酸乳糖甲酯对供试酵母的抗菌衰期。
3.1.2.3表明 试验表明, 富马酸乳糖甲酯的抗菌作用主要表现在以下几个方面. ①延长微生物的生长适应期 生长适应期是微生物的生长初期，是防腐剂发挥抑制作用的关键时期[3]。在测定时生长适应期是指从接种到A560值增加0.05%所需要的培养时间。 试验表明，富马酸乳糖甲酯可有效延长细菌

和酵母到生长适应期。对细菌菌液添加0.5%和对酵母菌液添加0.3%的富马酸乳糖甲酯，其生长适应期是空白对照的8倍～11倍。随着富马酸乳糖甲酯添加量的逐渐增加，对细菌和酵母的生长适应期也随之延长。 ②降低微生物生长量 试验表明，富马
酸乳糖甲酯可降低细菌和酵母的生长量，有效抑制细菌和酵母的生长。在培养52h后，添加0.5%富马酸乳糖甲酯的大肠杆菌菌液的生长量为空白对照的25.3%，枯草芽孢杆菌菌液的生长量为空白对照的37.5%，苏云金芽孢杆菌菌液的生长量为空白对照的38.4%。在培养74h后，添加0.08%富马酸乳糖甲酯的酿酒酵母菌液的生长量为空白对照的3.9%，面包酵母菌液的生长量为空白对照的3.4%。 ③延长抗菌衰期 试验表明，富马酸乳糖甲酯对细菌的抗菌衰期较长，对酵母的抗菌衰期稍短。对细菌菌液添加0.5%对酵母菌液添加0.3%的富马酸乳糖甲酯，其抗菌衰期是空白对照的8倍～11倍，说明富马酸乳糖甲酯的抗代谢能力好。这可能是因为富马酸乳糖甲酯的分子量大，其分子运动速度小，与微生物分解酶系作用的机率小。 3.1.3 与其他防腐剂的抗菌活性比较 表3.8 几种防腐剂对大肠杆菌和酿酒酵母的抗菌活性数据
富马酸乳糖甲酯的生长适应期和衰期分别为24h和36h，而反丁烯二酸葡萄糖甲酯为17h和25.7h，而富马酸二甲酯为18h和16.5h，山梨酸的为14h和7.0h，富马酸乳糖甲酯的适应期反丁烯二酸葡萄糖甲酯、富马酸二甲酯和山梨酸长，衰期也比这些防腐剂长，说明富马酸乳糖甲酯的抗代谢能力高于反丁烯二酸葡萄糖甲酯、山梨酸和富马酸二甲酯。这可能是因为富马酸乳糖甲酯的分子最大，在相同动能下，其分子运动速度最小，与微生物分解酶系作用的几率也显著小于反丁烯二酸葡萄糖甲酯、山梨酸和富马酸二甲酯。
3.2 不同浓度对富马酸乳糖甲酯抗菌活性的影响 3.2.1 不同防腐剂浓度对抗菌性能的影响 不同浓度的富马酸乳糖甲酯对牛奶酸败混合菌的生长有较好抑制作用，影响结果见图3.9。 1) 生长适应期 添加0.10%的富马酸乳糖甲酯后可显著延长牛奶酸败混合菌的生长适应期，由空白对照的4h延长至16h，是空白的4倍。 添加0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%的富马酸乳糖甲酯后，对牛奶酸败混合菌的生长适应期均为16h 、16h 、16h 、16h 、16h。
培养111h后，添加0.10% 富马酸乳糖甲酯的牛奶酸败混合菌菌液的生长量为空白对照的26.1% 2) 衰期 由试验数据通过衰减函数求得结果，填于表3. 11,为富马酸乳糖甲酯对牛奶酸败混合菌的抗菌衰期。 表3.11防腐剂浓度对牛奶酸败混合菌的抗菌衰期的影响

结 论 1

、富马酸乳糖甲酯可延长微生物的生长适应期、降低微生物生长量、延长抗菌衰期，有杀灭细菌的功能。对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、啤酒酵母、面包酵母、黑曲霉、米曲霉的最低抑菌浓度（MIC%）分别为0.60、0.40、0.50、0.25、0.30、0.40、0.50；适当浓度的富马酸乳糖甲酯
可使上述菌种的生长适应期由4h延长到65h以上，杆菌和酵母的抗菌衰期分别为36h和72h。 2、不同防腐剂浓度实验结果表明富马酸乳糖甲酯对牛奶酸败混合菌有较好的抑制作用。添加0.10%的富马酸乳糖甲酯可使牛奶酸败混合菌的生长适应期由4h延长到16h。

收获和体会 毕业论文的完成前前后后花费了很多时间，在这些时间里我思考了很多，认识到理论知识与实际操作的区别。本次实验是大学生涯花费时间最长，难度高，要求的专业知识比较多的一次实验，我在其中花了很多心血，但更多的是学到了全面的专业知识和实验操作技能，为踏出社会作准备。 实验之前，我查找整理有关本实验的相关文献资料，在老师和同学的帮助下，逐步制定出来了实验方案，根据实验的要求，又确定了相关的药品试剂和实验仪器。最后归纳出最佳实验方案。毕业论文的实验部分，主要是测定富马酸乳糖甲酯进行抗菌特性，并进行了浓度及各条件对其抗菌活性影响的研究。 实验开始，我全心全意投入到实验中。实验过程中出现了很多困难，有时间上和一些冲突，也有实验室的设备老化，药品质量下降，仪器出现损坏等问题的出现，最主要的还是专业技能比较差，最后通过老师的帮助下问题得到了一定程度的解决。在初次接触实验仪器时，不懂如何操作，后来看了操作说明书和请教老师同学，逐渐的掌握了操作技巧，很多错误的操作方式也得到了改正。实验中学习，在学习进步，一点点地完成了我的毕业实验。我培养了发现问题、分析问题和解决问题的能力，锻炼了我的意志，学会了如何合理安排时间、如何与他人沟通合作。 毕业实验完成后，我整理了相关的实验数据，并撰写了毕业论文。 毕业论文前后，我学会了很多，只有自己不断的思考和实践，才会有进步，才会有出息，也只有靠自己，才会让我感到充实。不断学习，吸取经验教训，敢于动手，勇于探索，是我这次实验的收获。 一句话，最后还是努力完成了论文，其中有很多曲折，实验结果也不是理想，但重要的是学会了很如何从头到尾完整地完成一个方案，这将帮助我更好地踏入社会。

致 谢 值论文完成之际，感谢所有关心和帮助我的老师和同学： 首先要特别感谢曾

霞老师的指导与督促，同时感谢她的对于一此难题的解说。她勇于探索的工作作风深深地感染和激励着我，使我从一个书呆子的我变成一个敢于实践，勤于思考，勇于探索的我。从课题的选择到项目的最终完成，曾老师都始终给予我细心的指导和和支持。 我还要感谢在一起实验的同学，你们的给予我很多仪器与给一些
技术帮助，使我克服一个一个的困难和疑惑，直至到论文的完成。特别感谢王军锐同学，他和我共同做了不少工作，我们一起探讨了很多问题，过程中互相帮助，共同进步，学会了合作，学会了如何为一个目标努力奋斗。 在这里我还要感谢为我们提供仪器的老师与及各位理论课与实验课的老师，他们为我的毕业论文做出的巨大的帮助，也正是由于大家的帮助，我才能顺利实成实验。同时也要谢谢马玉刚班主任，他也给了我一些实验方向性的指导。在此，也对他们所有人表示衷心感谢。 最后，衷心感谢在百忙之中抽出时间审阅本论文的专家教授。

参考文献 [1]牟冠文,李光浩.食品防腐剂的概况及其检验方法[J].食品与发酵工业,2006,32(10):103～107 [2] 宋启煌.精细化工工艺学[M].北京：化学工业出版社.2004:142～144. [3] 黄艳娥, 刘海波. 食品防腐剂对人体健康的影响及发展趋势[J]. 化工中间体, 2005, (7) : 1~6. [4] 凌关庭.食品添加剂手册[M]. 北京:化学工业出版社,1997:1～15. [5] 周如金,农兰平,彭燕，等.反丁烯二酸蔗糖甲酯的功能特性研究[J].食品科学,2005,26(5):144～148. [6] 赵电波, 陈必春, 张小利, 等. 新型食品防腐剂[J]. 食品与药品, 2007 , 9 (3) : 69~71. [7] 杜荣茂. 天然食品防腐剂[J]. 中国食品添加剂, 2003, (2) : 68～74. [8] 张红艳, 林凯, 阎春娟. 国内外天然食品防腐剂的研究进展[J]. 粮食加工, 2004, 3 : 57～60. [9] 王燕，车振明.食品防腐剂的研究进展[J].食品研究与开发，2005，26(5)：168～170. [10] 闫澍.富马酸酯类防腐剂的合成与抑菌性能研究[D].大连理上大学硕士学位论文，2006. [11] 刘钟栋.食品添加剂[M].南京：东南大学出版社,2006:6～7. [12] 段杉,彭喜春,彭志英.新型食品防腐剂[J].中国食品添加剂,2002,(2):62～65. [13]尤新.食品安全和食品防腐剂抗氧保鲜剂[J].食品科技,2005,(9):1～4 [14]王旭峰,朱燕平.揭开食品防腐剂的神秘面纱[J].食品添加剂之家,2005,(10):6～9 [15]蔡建.防腐剂与食品安全性[J].科技信息,2001:633 [16]陈正行,蒋予箭.食品添加剂新产品与新技术[M].南京：江苏科学技术出版社,2002年:22～65 [17] 龚福春. 非对称富马酸二酯类对饲料保鲜效果试验[J]. 兽药与饲料添加剂, 1998, 3 : 6～9. [18] 李妍, 高建华, 宁正祥.

反丁烯二酸单糠醇酯钠的合成及抗菌活性[J]. 华南理工大学学报(自然科学版), 2005, 33(12) : 33～36. [19] 郭新竹. 新型防腐剂反丁烯二酸葡萄糖甲酯的合成及抗菌性能研究[D]. 华南理工大工学博士学位论文, 2002. [20] 战宇, 郭新竹, 宁正祥. 反丁烯二酸葡萄糖甲酯的合成及抑菌活性研究[J]. 广东药学院学报, 2006, 19(2) : 141～143. [21] 周如金, 聂凌鸿, 宁正祥. 反丁烯二酸蔗糖甲
酯的合成[J]. 日用化学工业, 2004, 34(3) : 160～163. [22] 战宇.丁烯二酸桂醇甲酯的合成及在荔枝防腐保鲜中的应用研究[D]. 华南理工大学博士学位论文,2003. [23] ZHAN Yu,NING Zheng-xiang,Synthesis Tchnologyand Antimicrobial Activityof Cinnamyl Methyl Fumarate,Jou mal of Yunnan AgricultumL Univeisity,2006,4(21):240～242.