13中药制剂分析2第二军医大学解析

指纹图谱的制定原则
系统性：指图谱所反映的化学成分全部信息，其中包括中 药有效部位所含主要成分的种类，或指标成分 的全部。
特征性：指图谱中反映的化学成分信息是具有高度选择性 的，这些信息的综合结果，将有助于特征区分 中药的真伪与优劣。
稳定性：在规定的方法与条件下，不同的操作者和不同的 实验室应能作出相同的指纹图谱。
❖ 国际上基本认可，草药色谱指纹图谱可以提供复杂成 分的定性甚至定量信息，考察生产中的影响，控制产 品的一致性。
色谱指纹图谱的基本属性
整体性 将指纹图谱作为一个整体来分析和比较 它的综合特征以达到鉴别的目的。
模糊性 强调分析、比较指纹图谱的相似性，而 不是完全相同。
是一种综合的、量化的色谱鉴别手段。
中药制剂分析的一般程序
取样
鉴别
检查
含量测定
中药及其制剂分析的杂质检查
检查项目
水分
总灰分和酸 不溶性灰分 重金属
砷盐
农药残留
意义
贮藏过程中保证质量的中药指 标，霉变、粘结、成分分解
控制药材中泥土、砂土的量
对人体有严重危害，药材由于 环境污染等原因易引入重金属 杂质，严重影响中药出口
药材由于受除草剂、杀虫剂、 化学肥料等影响易引入砷盐
药材栽培为了减少虫害，喷洒 农药，土壤中残存的农药，含 磷、含氯，严重影响中药出口
方法
烘干法、甲苯法、 减压干燥法
炽灼残渣法
干法、湿法破坏-硫代 乙酰胺法
古蔡法、二乙基二硫 代氨基甲酸银法等
氧瓶燃烧法(不明农药 测 定 总 氯 / 磷 量 ) 、 GC (已知农药)、比色等
(一)水分测定法
烘干法（不含或少含挥发性成分） 甲苯法 （含挥发性成分） 减压干燥法（含挥发性成分贵重药） GC法
色谱指纹图谱平台流程
中药液相色谱 分析条件
1.计算机辅助指纹图谱评价 2.多成分定量分析方法建立
指导
其他
中药材 预处理
色谱条件 初始化
分离
调整色谱条件
方法学考察
指纹图谱
《中药指纹图谱
N 工作站》软件
示例：知母的指纹图谱研究
知母为百合科植物知母(Anemarrhena àsphodeloides Bge.)的干燥根茎，为常用中药
梯度程序：
Time(min) %A(ACN) %B(buffer)
0
0
100
2
0
100
5
8
92
20
8
92
32
15
85
50
70
30
溶液制备
供试品溶液
药材粉末0.2g
80%甲醇25ml
超声20min
超声20min 80%甲醇25ml
残渣
过滤
过滤
滤液
合并滤液
滤液
挥干，甲醇定容至25ml
不同产地知母药材的HPLC指纹图谱
镉≤0.3ppm
干法破坏 湿法破坏
硫代乙酰胺法
（四）残留农药
有机氯类：六六六、DDT、五氯硝基苯、艾 氏剂
有机磷类：磷酸酯类（敌敌畏、敌百虫）、硫 代磷酸酯类（对硫磷）、磷酰胺及硫代磷酰胺 （甲胺磷）
氨基甲酸酯类：萘基氨基甲酸酯类（西维因）、 杂环甲基氨基甲酸酯类（呋喃丹）、涕灭威等
当药味较多时，应首选君药、臣药、贵重药、 毒性药进行鉴别研究。
凡有原粉入药者，应该作显微鉴别。 原则上处方中的每一药味均应进行鉴别研究，
选择尽量多的药味制订在标准中，但最少也 要超过处方的1/3药味。
二、鉴别试验
鉴定有临床疗效的已知成分
黄连 麻黄 乌头 洋地黄 延胡索
小檗碱（抗菌消炎） 麻黄碱（支气管哮喘） 乌头碱（毒性） 强心苷（强心） 延胡索乙素（镇痛）
中药及其制剂分析2
Analysis of Pharmaceutical Preparations and Traditional Chinese Medicine
中药制剂分析的一般程序
取样
鉴别
检查
含量测定
鉴别药味的选取原则
单味制剂，直接选取单一药味进行鉴别。中 药复方制剂，应按照君、臣、佐、使，依次 选择药味。
“代表性”：中药化学成分群信息须具有统计学意 义的样本数。
国外应用情况
❖ 美国FDA允许草药类食品添加剂申报中可以提供色谱 指纹图谱。
❖ WHO在草药评价指导原则中规定若活性成分不明， 可以提供色谱指纹图谱以证明产品质量的一致性。
❖ 欧共体在草药质量评价的指南中指出，单靠测定某有 效成分的稳定性是不够的。
（二）总灰分和酸不溶性灰分的测定
总灰分的测定（生理灰分+外来杂质）
供试品 已恒△重坩埚 炭化 500~600℃ 恒重 灰化
酸不溶性灰分的测定（外来杂质）
总灰分 dHCl过滤 已恒重△坩埚 灰化 炭化
（三）重金属的测定
铅≤10ppm WHO规定植物药
主要成分为皂苷类，黄酮类，木脂素等 芒果苷和新芒果苷是其清热作用
的有效成分
色谱条件
色谱柱：Hypersil填料，C18-ODS柱（5μm， 4.6×250mm，大连依利特）；流动相：采用梯度洗脱， A相为乙腈，B相为25mmol/L磷酸二氢钾缓冲液（pH 3.0）；流速：1.0ml/min，运行时间60min，检测波长 257nm，柱温为25℃。
供
黄
试
芩
品
空
白
黄
芩
甙
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
栀 子 甙
供试 品
栀子空白
中药指纹图谱
定义：运用现代分析技术表征和评价具有代表性中药 化学成分群信息。
“现代分析技术”：光谱、色谱、波谱、联用技术， 以及化学计量学和计算机技术等。
“中药化学成分群”：药材、饮片、中药提取物和 成药中与药理活性相关的，由次生代谢产物组成的 化合物群。
显微鉴别（含生药粉制剂）
丸剂、片剂、胶囊剂、散剂 快速，简便，覆盖面大
选择原则
应选有专属性的特征进行鉴别 多来源的药材应选择共有的特征进行鉴别
色谱鉴别
TLC法——应用最多 （Rf、颜色、荧光）
GC法 —— 含挥发性成分的药物 HPLC法——常与含量测定同时进行
阴、阳对照法
阳性对照 将要鉴别的药材按制剂 工艺处理，再按鉴别方 法提取的溶液
阴性对照
把制剂中要鉴别的药材 除去，用剩下的各味药 按制剂工艺处理，再按 鉴别方法提取的溶液
示例 万氏牛黄清心丸
[处方] 牛黄10g 朱砂60g 黄连200g 黄芩120g 栀子120g 郁金80g
[方药分析] 牛黄—清热解毒药，主含胆酸类成分 黄连—清热燥湿药，主要为小檗碱 黄芩—清热燥湿药，主要为黄酮类 栀子—清热泻火药，主含栀子甙 朱砂—安神药，主含硫化汞（HgS） 郁金—活血去瘀药，主含挥发油