植物激素的配制方法灭菌方法
植物组织培养基本技术
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2.细胞分裂素（CTK）： （1）作用： ①促进细胞分裂； ②诱导芽的分化，促进侧芽萌发生长； ③抑制顶端优势，延缓离体组织衰老； ④对根的生长一般起抑制作用 （2）常用的细胞分裂素：6-苄基腺嘌呤（6-BA）、激动素（KT）、玉米素（ZT）
等。 （3）使用浓度：一般0.1~10.0mg/L
（4）有些生长调节物质不溶于水，2,4-D 、NAA 、 IAA 、GA3等在配制时可先用少量95%的乙醇溶 解。KT、6-BA等可先溶解于少量1mol/L的盐酸 中。叶酸则可先用少量稀氨水溶解。
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3、配制好的母液贴上标签 标签：注明母液的名称、配制倍数、配制日期、配制人员及配1L培养基时
应移取的量。 注意：母液要低温保存，储存时间不易过长，有沉淀或霉菌，则不可再用。
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（三）有机营养物质： 培养基中若只含有大量元素与微量元素，常称为基本培养基（basic medium)。 为不同的培养目的往往要加入一些有机物以利于快速生长。常加入的有机成 分主要有以下几类：
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1、碳水化合物——碳源： 可作为碳源的有蔗糖，葡萄糖和果糖最常用的碳源是蔗糖，蔗糖使用浓度
在2%—5%，常用3%（30g/L），即配制一升培养基称取30g蔗糖，有时可用 2.5%。
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（三）计算： 1.欲配制1L MS＋6-BA 0.5mg/L+NAA1.0mg/L＋3%蔗糖+0.6%琼脂培养基，已知
MS母液已经配制完成，其浓度分别是：大量元素10倍，微量元素200倍，铁盐 100倍，有机物500倍， 1.0mg/ml 6-BA，0.1mg/ml NAA。 （1）计算各种母液、蔗糖和琼脂的用量 （2）叙述培养基的配制过程
植物激素的配制方法灭菌方法
母液浓度
生长素
IBA（3-吲哚丁酸）用适量无水乙醇或1M NaOH彻底溶解后，再缓慢加入水定容到一定浓度。
除菌方式：与培养基高压共灭菌。
0.2g/L
IAA（3-吲哚乙酸）用适量无水乙醇或1M NaOH彻底溶解后，再缓慢加入水定容到一定浓度。
除菌方式：抽滤除菌。
0.2g/L
α-NAA（a-萘乙酸）可用1M NaOH彻底溶解后，再加水定溶到一定浓度。
0.2g/L
ZT（反式玉米素）先溶于适量1M NaOH中，再加水至一定浓度。
除菌方式：抽滤除菌。（反式用少量1M NaOH溶解后，再加水定容至一定浓度。
除菌方式：抽滤除菌。
0.2g/L
赤霉素
GA3先溶于适量无水乙醇中，再加水定容到一定浓度。
除菌方式：抽滤除菌。
0.2g/L
除菌方式：与培养基高压共灭菌。
0.2g/L
2，4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）用无水乙醇或1M NaOH彻底溶解后，再加水定容至一定浓度。
除菌方式：与培养基高压共灭菌。
0.2g/L
细胞分裂素
KT（激动素6-糖氨基嘌呤）和6-BA（6-苄氨基嘌呤）先溶于少量1M NaOH中，再加水定容。
除菌方式：与培养基高压共灭菌。
配制生长素类，例如IAA、NAA、2.4-D、IBA，应先用少量95%乙醇或无水乙醇充分溶解，或者用1mol/L的NaOH溶解，然后用蒸馏水定容到一定的浓度。
细胞分裂素，例如KT，应先用少量95%乙醇或无水乙醇加3~4滴1mol/L的盐酸溶解，再用蒸馏水定容。
配制生物素，用稀氨水溶解，然后定容。
配制方法
植物激素配制方法总结
原则
植物激素：每种激素必须单独配制成母液，浓度为0.1mg/ml，0.5mg/ml，1.0mg/ml，激素浓度的表示方法多种，ppm（mg/L）、mol/L、mg/ml，用时根据需要取用。
实验二.培养基的配制及灭菌
实验二培养基的配制及灭菌一、实验目的：1. 掌握常用培养基的制备方法；2. 了解培养基的成分、类型及特点；3. 学会玻璃仪器的洗涤和灭菌前的准备工作。
4.了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程和分装方法。
二、实验原理人工配制的培养基是植物组织培养的营养基础，不同材料对培养基的要求不尽相同，适当地设计和选用培养基对组织培养是至关重要的，一个完整的培养基配方应包含有无机盐、有机营养、水、植物生长调节剂、琼脂及其他成分。
培养基的主要成分的详细内容见课本p26~29。
为了省时和减少多次称量的误差，一般先将药品配制成浓缩一定倍数的母液，用时稀释，储存于冰箱低温（2~4摄氏度）中待用。
基本培养基有8中母液，即大量元素母液、微量元素母液、有机物母液、钙盐母液、铁盐母液、肌醇母液、镁元母液、生长调节物质母液，基本培养基的配制方法有两种：一是可以将培养基的每种成分配成单一化合物的母液，便于配制不同种类的基本培养基时使用；二是配成几种不同的混合液，这样在大量配制同一种培养基时更省时、省力。
在配制母液时应注意防止沉淀产生。
绝大多数生长调节物质不溶于水，可以加热并不断搅拌促使溶解，必要时加入稀酸或稀碱等物质促溶。
各类植物生长调节物质的用量极小,它们对外植体愈伤组织的诱导和根、芽等器官分化起着重要和明显的调节作用。
通常使用的浓度单位是mg/L。
配制好的培养基应在24h之内完成灭菌工作，以免造成杂菌大量繁殖。
灭菌方法有：高温高压灭菌、过滤除菌、射线除菌等方法。
培养基常采取高压灭菌的方法，灭菌时间一般是在0.105MPa压力下，温度121摄氏度时，灭菌时间应根据容积的体积确定，所需最少时间见课本P32表2ˉ2。
培养基必需保证绝对无菌，否则因其营养丰富细菌、真菌极易滋生而导致植物死亡。
灭菌后的培养基不宜马上使用，以免造成培养材料的损失。
（一）、组成培养基的五类成分目前，大多数培养基的成分是由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成的。
高中生物选修一植物组织培养知识点总结
中学生物选修一植物组织培育学问点总结生物是高考考试中重要的科目之一，尤其是植物组织培育这个学问点，是高考考试中必考学问点。
下面是为大家整理的中学生物学问点，希望对大家有所帮助!中学生物选修一学问点课题一菊花的组织培育植物组织培育的基本过程细胞分化：在生物个体发育过程中，细胞在形态、结构和生理功能上出现稳定性差异的过程。
离体的植物组织或细胞，在培育了一段时间以后，会通过细胞分裂，形成愈伤组织，愈伤组织的细胞排列疏松而无规则，是一种高度液泡化的呈无定形态态的薄壁细胞。
由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程，称为植物细胞的脱分化，或者叫做去分化。
脱分化产生的愈伤组织接着进行培育，又可以重新分化成根或芽等器官，这个过程叫做再分化。
再分化形成的试管苗，移栽到地里，可以发育成完整的植物体。
植物细胞工程具有某种生物全套遗传信息的任何一个活细胞，都具有发育成完整个体的实力，即每个生物细胞都具有全能性。
但在生物体的生长发育过程中并不表现出来，这是因为在特定的时间和空间条件下，通过基因的选择性表达，构成不同组织和器官。
植物组织培育技术的应用有：实现优良品种的快速繁殖;培育脱毒作物;制作人工种子;培育作物新品种以及细胞产物的工厂化生产等。
细胞分化是一种长久性的变更，它有什么生理意义?使多细胞生物体中细胞结构和功能趋向特地化，有利于提高各种生理功能的效率。
比较根尖分生组织和愈伤组织的异同影响植物组织培育的条件材料：不同的植物组织，培育的难易程度差别很大。
植物材料的选择干脆关系到试验的成败。
植物的种类、材料的年龄和保存时间的长短等都会影响试验结果。
菊花组织培育一般选择未开花植物的茎上部新萌生的侧枝作材料。
一般来说，简单进行无性繁殖的植物简单进行组织培育。
选取生长旺盛嫩枝进行组培的是嫩枝生理状态好，简单诱导脱分化和再分化。
养分：离体的植物组织和细胞，对养分、环境等条件的要求相对特别，须要配制相宜的培育基。
常用的培育基是MS培育基，其中含有的大量元素是N、P、S、K、Ca、Mg，微量元素是Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、I、Co，有机物有甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等。
实验一培养基的配制与灭菌
实验一培养基的配制与灭菌一、目的掌握培养基母液的配制方法；培养基的配制和灭菌技术；不同质地实验用品的灭菌方法。
二、方法步骤1、母液配制一般大量元素、微量元素和其它成分分别配制成100－200倍母液，使用时按比例稀释即可。
配好的母液需贮存于2～4℃的冰箱中，定期检查有无沉淀和微生物污染，如果出现沉淀或微生物污染，则不能使用。
2、植物激素配制植物激素一般配制成浓度为0.1—1.0mg/ml的溶液，贮存在2～4℃下备用。
由于多数激素难溶于水，所以配制时应按下面步骤进行：IAA：先用少量95%乙醇使之充分溶解，再加蒸馏水定容至需要浓度的体积。
NAA：可溶于热水中，也可采用与IAA同样的方法配制。
2,4-D：先用少量1mol/L的NaOH溶液充分溶解，然后缓慢加入蒸馏水定容至需要浓度体积。
细胞分裂素类：KT和BA等细胞分裂素类物质均溶于稀盐酸，应先用少量1mol/L的HCl溶解后再稀释至需要浓度。
赤霉素：赤霉素的水溶液稳定性较差，一般用95%的乙醇配制成5～10mg/ml的母液低温保存，使用时再稀释。
3、培养基配制按实际配制培养基体积，取各母液的需要量加入一适当体积的烧杯或其它配制培养基的容器中，再加入实际配制培养基体积约2/3—3/4的蒸馏水，然后以每升所用蔗糖的量称取放入培养基并使其溶化。
用0.1mol/L的NaOH或0.1mol/L的HCl调整pH至5.6—5.8，以0.6%—0.8%的比例加入琼脂，并搅拌加热使琼脂完全溶化，用蒸馏水定容至终体积，混合均匀后分装于培养器皿中，然后进行高压灭菌。
4、培养基灭菌分装好的培养基置于高压蒸汽灭菌锅中灭菌，灭菌条件为温度121℃，压力0.105MPa，灭菌时间与培养基容量的关系如下表所示。
培养基体积与灭菌时间的关系三、结果与分析1、培养基的母液配制情况。
2、培养基配制时的注意事项。
四、提交实验报告附：MS培养基配方。
植物激素的配制注意事项
●可高压灭菌：IBA，NAA ，6-BA，2,4-D●不可高压灭菌：IAA，GA3●水杨酸不是很清楚，参考wiki上“科尔贝－施密特反应（Kolbe-Schmitt反应）是干燥的酚钠或酚钾与二氧化碳在加温（125-150°C）加压（100atm）下生成羟基苯甲酸的反应。
它是向芳环上引入羧基的一种常用方法，常用的工业原料水杨酸（邻羟基苯甲酸）就是利用此法，通过苯酚盐与二氧化碳作用制得的。
”而高压灭菌锅的温度和压强分别为121°C和0.15Mpa（压力表的数值，实际为0.25MPa即2.5atm），我个人认为水杨酸高压灭菌会分解。
因为从上可以看出水杨酸的分解就是科尔贝－施密特反应的逆反应，看反应式便明白加压有利于正反应，而减压有利于逆反应，而121°C的灭菌温度基本与合成反应的温度相持，2.5atm的压强却远小于合成反应，明显是有利于逆反应进行。
故我认为水杨酸不宜高压灭菌。
如果不确定的话可以做个实验，配一小瓶水杨酸溶液高压灭菌，灭过后观察其会不会有粉红色，有的话就说明产生苯酚并氧化成对苯醌了。
●配制生长素类，例如IAA、NAA、2.4-D、IBA，应先用少量95%乙醇或无水乙醇充分溶解，或者用1mol/L的NaOH溶解，然后用蒸馏水定容到一定的浓度。
●细胞分裂素，例如KT，应先用少量95%乙醇或无水乙醇加3~4滴1mol/L的盐酸溶解，再用蒸馏水定容。
●配制生物素，用稀氨水溶解，然后定容。
一般来说感觉用醇溶后较容易析出，而且溶解也不容易，还是用少量酸或碱溶，再用蒸馏水定容●植物激素配制方法●植物激素：每种激素必须单独配制成母液，浓度为0.1mg/ml，0.5mg/ml，1.0mg/ml，激素浓度的表示方法多种，ppm（mg/L）、mol/L、mg/ml，用时根据需要取用。
由于多数激素难溶于水，它们的配法如下：●生长素：1 IAA，IBA用适量无水乙醇或1M NaOH彻底溶解后，再缓慢加入水定容到一定浓度。
培养基的组成、配制与灭菌
1、大量元素：
组织培养中，各种矿质营养主要从培养基中获得， N、P、K、Ca、Mg、S等6种大量元素依靠各种无机 盐提供。
不同植物种类和不同试验目的对元素的使用量要求 不同，需经试验确定。
目前已选择出多种培养基配方用于植物组织培养。 其中以MS应用最广泛。
通常激素母液浓度生长素类为0.1~0.5 mg/ml, 细 胞分裂素母液浓度为0.2~1.0 mg/ml.
四、培养基的配制：
1、量取母液：营养元素和激素。 2、称量蔗糖、琼脂，放入600ml左右蒸馏水的锅 内，电路上加热，使琼脂溶化。 3、加入母液，混合均匀，调整pH值。 4、分装入瓶，每瓶40－50ml。 5、封口：用4－6层称量纸封口，之后灭菌备用。
在植物组织培养中，主要通过植物激素 及生长调节物质对离体的组织、器官的形 态发生进行调控。包括诱导细胞分裂、愈 伤组织的生长、根芽的分化以及体细胞胚 胎发生等。
常用的植物激素及生长调节物涉及五大类植物 激素：
1、生长素类：IAA、IBA、NAA、2，4-D 2、细胞分裂类：6-BA、KT（Kin）、ZT、2ip 3、赤霉素类：GA3、GA4、GA7 4、脱落酸：ABA 5、乙烯：ETH
五、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）：
1、加热：
灭菌前检查灭菌锅内水量是否充足， 然后将培养基放于灭菌锅内，改好盖，关 闭放气阀，打开电源，加热升温。
2、排气：
当温度升至0.5kg/cm2时，打开放气阀 彻底排出锅内冷空气。然后关闭放气阀， 促使压力继续上升。
3、温度控制：
当锅内压力升至1.1kg/cm2时，计时15－20 分钟，计时结束后，关闭电源。
二、培养基的类型： 1、高盐浓度培养基：MS、B5、SH等。
植物生长调节剂(植物激素)在组培中的作用
植物生长调节剂（植物激素）在组培中的作用植物生长调节剂（下称：植物激素）是植物新陈代谢中产生的天然化合物，不同的植物激素对植物外植体生长和分化作用不同，如生长素类物质2,4-D或NAA常用来诱导外植体产生愈伤组织，IAA和IBA能促进不定根的发生，细胞分裂素类物质主要作用是诱导不定芽发生等。
同种植物激素使用的浓度不同，起的作用也有变化，如玉米素在低浓度时，能诱导胚状体发生，若浓度较高，则促进芽的发生。
在组织培养中，使什么样的植物激素以及使用浓度要根据培养目的来确定，也要考虑培养的对象。
例如当要诱导愈伤组织生根时，以生长素IBA为好；促进其不定芽的发生，则使用细胞分裂素类物质。
在培养基的各成分中，植物激素是培养基的关键物质，对植物组织培养起着决定性的作用。
1 生长素类在组织培养中，生长素主要被用于诱导愈伤组织形成，诱导根的分化和促进细胞分裂、伸长生长。
在促进生长方面，根对生长素最敏感，在极低的浓度下，（0.1-10mg/L）就可促进生长，其次是茎和芽。
1.1 吲哚乙酸（IAA）IAA（吲哚乙酸）是天然存在的生长素，亦可人工合成，其活力较低，是生长素中活力最弱的激素，对器官形成的副作用小高温高压易被破坏，也易被细胞中的IAA分解酶降解，受光也易分解。
1.2 萘乙酸（NAA）NAA（萘乙酸）在组织培养中的启动能力要比IAA高出3-4倍，且由于可大批量人工合成，耐高温高压，不易被分解破坏，所以应用较普遍。
NAA和IBA广泛用于生根，并与细胞分裂素相互作用促进芽的增殖和生长。
1.3 吲哚丁酸（IBA）IBA（吲哚丁酸）是促进发根能力较强的生长调节物质。
1.4 2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)启动能力比IAA高10倍，特别在促进愈伤组织形成上活力最高，但它强烈抑制芽的形成，影响器官的发育，适宜的用量范围较窄，过量常有毒效应。
组培中常用于诱导愈伤组织的初代培养阶段。
生长素类的作用强弱为IAA < IBA < NAA < 2,4-D。
植物常用培养基附加配制说明
备注：培养基和激素母液配制方法（1）母液配制时，先向容量瓶中注入1/3定容体积的蒸馏水，再一一称取各种盐放入烧杯中溶解，装入容量瓶，不得一次称取所有盐，混合溶解！在配制大量母液时，氯化钙最后加入。
（2）200×Fe盐溶液称取1.39g FeSO4•7H2O溶于水（A液）；称取1.865 g Na2•EDTA溶于热水（B液）；将A液缓慢倒入正在加热的B液中，加水接近250ml，煮沸，混合液颜色变深，冷却到室温，定容到250ml后,置于棕色试剂瓶内4℃保存。
（3）0.5mg/ml 2,4-D母液的配法称取50mg 2,4-D，置于小烧杯内；加少量无水乙醇或95%乙醇使之完全溶解；加水定容至100ml，4℃保存。
如果出现沉淀，需要重新配置。
（4）0.5mg/ml α-NAA母液的配法称取100mgNAA置于小烧杯内；用1N的KOH溶液溶解NAA；用水定容至200m l，4℃保存。
（5）0.5mg/ml 6-BA母液的配法称取100mg 6-BA置于小烧杯中；加少量的浓盐酸，用玻棒研磨成糊状，再加入少量浓盐酸，使之完全溶解；用水稀释并定容至200ml，4℃保存。
（6）100mM乙酰丁香酮（As）的配制称取196.2mg As，用5ml DMSO直接溶解，再加水定容至10ml，过滤灭菌后，分装入无菌小管，-20℃冰冻保存。
使用前加入灭菌培养基。
（7） 0.5mg/ml KT和ABT的配法称取50mg kenetin或ABT生根粉，先用少量1N KOH溶解，再用水稀释定容至100ml，4℃保存。
（8）其他附加物的溶解及配制A、称取吗啉乙磺酸（MES）5g溶于水中，定容至10mL。
4℃保存。
B、称取1g L-半胱氨酸(Cys) 溶于2mL 0.2mol/L或10%的NaOH溶液, 用蒸馏水稀释定容至10mL，现用配制。
4℃保存。
C、称取850mg硝酸银，用蒸馏水溶解后定容至100mL。
4℃保存。
D、头孢霉素（cefotaxime）2500mg，用蒸馏水溶解后定容至10mL。
植物组织培养实训指导书
植物组织培养实训指导书《植物组织培养技术》是生物技术及应用专业的工学结合核心课程之一。
本课程采取“项目引领，任务驱动”的教学模式，使学生掌握植物组织培养技术的职业知识和职业技能，能够在实际工作中具备实验方案设计能力、培养基制备能力、无菌操作能力、组培苗驯化移栽能力及组培苗工厂化生产能力。
实训一：实训室的灭菌与玻璃器皿的清洗一、目的要求1.通过实训，使学生了解各种洗涤液的特性；2.掌握酸液的配制方法和组织培养中常用器血的洗涤技术；3.通过实训，培养学生良好的卫生习惯，建立组织培养的无菌意识；4.会配制新杰尔灭溶液。
二、材料用具1.灭菌用具：2%新洁尔灭、高镒酸钾、甲醛、70%酒精、洗涤剂、各种培养血、工作服、口罩、手套、试管刷。
2.洗涤用具：肥皂液、洗衣粉、重铬酸钾粉末、1%HCL、70%酒精、瓶刷等。
三、方法步骤（一）培养室的灭菌1、地面、墙面和工作台的灭菌2、无菌室和培养室的灭菌（二）玻璃器皿的洗涤（酸洗）玻璃器血的洗涤一般要经过浸泡、刷洗、浸酸和清洗四个步骤。
重铬酸钾洗涤（三种）液配制：重铬酸钾508，加工蒸馏水，加热溶化，冷却后再缓缓加入工业浓硫酸90ml。
1、新玻璃器血的洗涤用1%HCL的溶液浸泡一昼夜，再用清水反复洗涤，最后用蒸馏水冲淋一遍，干燥后备用。
2、用过的玻璃器血先将器血中得残留物质除去，用清水冲洗，再用洗衣粉洗涤，最后用清水冲洗3—4遍，把字迹擦洗干净，干燥后使用。
3、污染的培养瓶的处理首先经高压蒸汽灭菌，再按（2）的步骤洗涤。
4、用过的吸管、滴管、容量瓶先放在重铬酸钾溶液浸泡2h以上，取出后经流水冲洗30min左右，干燥后使用。
四、实训报告①.植物组织培养室的灭菌方法步骤。
②.写出洗涤液的配置步骤。
③.记录各种培养瓶的洗涤方法。
实训二：组织培养工厂的设计一、目的要求通过实训，使同学们对现代组培苗生产模式有一个更为深刻的认识，能熟练的根据生产规模设计合理的厂房及工艺流程。
二、材料用具组培苗生产小工厂、绘图纸、绘图笔三、方法步骤（-）组培工厂的参观1.参观组培实验中心2.组培工厂的组成：准备室、灭菌室、缓冲室、无菌室、培养室、驯化室3.各室内仪器设备的种类及摆放（二）设计一 200m2组培工厂，要求给出大概的布局图。
03植物激素的配制方法灭菌方法
细胞分裂素，例如KT，应先用少量95%乙醇或无水乙醇加3~4滴1mol/L的盐酸溶解，再用蒸馏水定容。
配制生物素，用稀氨水溶解，然后定容。
配制方法
脱落酸
ABA（脱落酸）可用少量1M NaOH溶解后，再加水定容至一定浓度。
除菌方式：与培养基高压共灭菌。
0.2g/L
植物组培中，有些植物激素不能加入培养基中随之高压蒸汽灭菌，那么这些激素该如何加入培养皿中？
过滤灭菌后，在无菌条件下将其加入到高压灭菌后的温度下降到约50至60度的未凝固的培养基中，或者适当加热（如50~70°C水浴加热）使之溶解后的培养基中，摇匀，待培养基冷却凝固再接种培养物。
0.2g/L
ZT（反式玉米素）先溶于适量1M NaOH中，再加水至一定浓度。
除菌方式：抽滤除菌。（反式玉米素是天然酶）
0.1g/L
2-ip可用少量1M NaOH溶解后，再加水定容至一定浓度。
除菌方式：抽滤除菌。
0.2g/L
赤霉素
GA3先溶于适量无水乙醇中，再加水定容到一定浓度。
除菌方式：抽滤除菌。
0.2g/L
除菌方式
母液浓度
生长素
IBA（3-吲哚丁酸）用适量无水乙醇或1M NaOH彻底溶解后，再缓慢加入水定容到一定浓度。
除菌方式：与培养基高压共灭菌。
0.2g/L
IAA（3-吲哚乙酸）用适量无水乙醇或1M NaOH彻底溶解后，再缓慢加入水定容到一定浓度。
除菌方式：抽滤除菌。
0.2g/L
α-NAA（a-萘乙酸）可用1M NaOH彻底溶解后，再加水定溶到一定浓度。
植物激素的配制方法灭菌方法
α-NAA（a-萘乙酸）可用1M NaOH彻底溶解后，再加水定溶到一定浓度。
除菌方式：与培养基高压共灭菌。
0.2g/L
2，4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）用无水乙醇或1M NaOH彻底溶解后，再加水定容至一定浓度。
除菌方式：与培养基高压共灭菌。
0.2g/L
细胞分裂素
KT（激动素6-糖氨基嘌呤）和6-BA（6-苄氨基嘌呤）先溶于少量1M NaOH中，再加水定容。
配制生物素，用稀氨水溶解，然后定容。
配制方法
除菌方式
母液浓度ห้องสมุดไป่ตู้
生长素
IBA（3-吲哚丁酸）用适量无水乙醇或1M NaOH彻底溶解后，再缓慢加入水定容到一定浓度。
除菌方式：与培养基高压共灭菌。
0.2g/L
IAA（3-吲哚乙酸）用适量无水乙醇或1M NaOH彻底溶解后，再缓慢加入水定容到一定浓度。
除菌方式：抽滤除菌。
可高压灭菌: IBA，NAA，6-BA，2,4-D;、KT
不可高压灭菌:ZT、2-IP、IAA，GA3
配制生长素类，例如IAA、NAA、2.4-D、IBA，应先用少量95%乙醇或无水乙醇充分溶解，或者用1mol/L的NaOH溶解，然后用蒸馏水定容到一定的浓度。
细胞分裂素，例如KT，应先用少量95%乙醇或无水乙醇加3~4滴1mol/L的盐酸溶解，再用蒸馏水定容。
除菌方式：抽滤除菌。
0.2g/L
脱落酸
ABA（脱落酸）可用少量1M NaOH溶解后，再加水定容至一定浓度。
除菌方式：与培养基高压共灭菌。
0.2g/L
植物组培中，有些植物激素不能加入培养基中随之高压蒸汽灭菌，那么这些激素该如何加入培养皿中？
过滤灭菌后，在无菌条件下将其加入到高压灭菌后的温度下降到约50至60度的未凝固的培养基中，或者适当加热（如50~70°C水浴加热）使之溶解后的培养基中，摇匀，待培养基冷却凝固再接种培养物。【下载本文档，可以自由复制内容或自由编辑修改内容，更多精彩文章，期待你的好评和关注，我将一如既往为您服务】
植物常用培养基附加配制说明
备注：培养基和激素母液配制方法（1）母液配制时，先向容量瓶中注入1/3定容体积的蒸馏水，再一一称取各种盐放入烧杯中溶解，装入容量瓶，不得一次称取所有盐，混合溶解！在配制大量母液时，氯化钙最后加入。
（2）200×Fe盐溶液称取1.39g FeSO4•7H2O溶于水（A液）；称取1.865 g Na2•EDTA溶于热水（B液）；将A液缓慢倒入正在加热的B液中，加水接近250ml，煮沸，混合液颜色变深，冷却到室温，定容到250ml后,置于棕色试剂瓶内4℃保存。
（3）0.5mg/ml 2,4-D母液的配法称取50mg 2,4-D，置于小烧杯内；加少量无水乙醇或95%乙醇使之完全溶解；加水定容至100ml，4℃保存。
如果出现沉淀，需要重新配置。
（4）0.5mg/ml α-NAA母液的配法称取100mgNAA置于小烧杯内；用1N的KOH溶液溶解NAA；用水定容至200m l，4℃保存。
（5）0.5mg/ml 6-BA母液的配法称取100mg 6-BA置于小烧杯中；加少量的浓盐酸，用玻棒研磨成糊状，再加入少量浓盐酸，使之完全溶解；用水稀释并定容至200ml，4℃保存。
（6）100mM乙酰丁香酮（As）的配制称取196.2mg As，用5ml DMSO直接溶解，再加水定容至10ml，过滤灭菌后，分装入无菌小管，-20℃冰冻保存。
使用前加入灭菌培养基。
（7） 0.5mg/ml KT和ABT的配法称取50mg kenetin或ABT生根粉，先用少量1N KOH溶解，再用水稀释定容至100ml，4℃保存。
（8）其他附加物的溶解及配制A、称取吗啉乙磺酸（MES）5g溶于水中，定容至10mL。
4℃保存。
B、称取1g L-半胱氨酸(Cys) 溶于2mL 0.2mol/L或10%的NaOH溶液, 用蒸馏水稀释定容至10mL，现用配制。
4℃保存。
C、称取850mg硝酸银，用蒸馏水溶解后定容至100mL。
4℃保存。
D、头孢霉素（cefotaxime）2500mg，用蒸馏水溶解后定容至10mL。
植物组织培养实验报告
植物组织培养实验报告摘要：以大豆子叶为外植体，在MS培养基上附加不同浓度、不同种类的植物激素，以研究不同激素组合和不同浓度对大豆子叶愈伤诱导率的影响，并练习无菌操作。
实验结果显示第2组即MS+6-BA（2.0mg/L)+NAA(1.0mg/L)和第3 组即MS+KT（0.5mg/L)+2,4-D(1.0mg/L) 培养基中愈伤组织诱导率较高，为较佳的愈伤组织诱导组合。
关键词：大豆；植物组织培养；无菌操作；愈伤组织1.材料与方法1.1实验材料：大豆子叶1.2实验试剂与仪器（1）试剂：75%酒精、MS干粉、蔗糖、琼脂、植物生长调节剂（NAA、2，4-D、KT、6-BA）、无菌水、升汞、NaOH溶液（2）仪器：超菌净工作台、圆纸片、培养皿、封口膜、称量纸、千分之一天平、不锈钢杯子、移液枪、试管、高压灭菌锅、注射器、酒精灯、镊子、手术刀、搁置架、烧杯、电炉。
1.3实验方法1.3.1培养基的配制与灭菌1.3.1.1 配制培养基的准备阶段（1）准备80个培养试管及封口膜，2个小培养皿、1个大培养皿，用洗衣粉、自来水洗净，再用蒸馏水把每个培养试管、润洗一下。
带晾干后将试管编号1-80；（2）在称量纸上用百分之一天平分别称取1.5g 琼脂4份，7.5g 蔗糖4份，在烧杯里用千分之一天平上称取1.185g MS干粉4份（烧杯不要清洗）；（3）剪小圆纸片40张，均分在两个小培养皿中大小能从中自由取出为宜；剪大圆纸片10张，均分在两个大培养皿中。
然后分别用报纸包好。
（4）把接种工具手术刀、镊子、剪刀等用报纸包好。
1.3.1.2 配制培养基（1）在装有MS干粉的烧杯中按下表加入植物生长调节剂实验所用的所有激素浓度均为0.5mg/mL编号培养基配置激素的加样量(ml)6-BA NAA KT 2,4-D1 MS+6-BA（1.0mg/L)+NAA(0.5mg/L)0.5 0.252 MS+6-BA（2.0mg/L)+NAA(1.0mg/L)1.0 0.53 MS+KT（0.5mg/L)+2,4-D(1.0mg/L) 0.25 0.54 MS+KT（1.0mg/L)+2,4-D(2.0mg/L) 0.5 1.0（2）用量筒量取250ml（稍多）蒸馏水，取一个不锈钢杯子加入150ml蒸馏水和称量好的琼脂，在电炉子加热沸腾2min，再加入混合好的MS培养基1号和蔗糖，混合沸腾2min，用剩余的蒸馏水定容至250ml；（3）当温度降到60℃左右时，将溶液pH 调至5.8，一般加4滴NaOH溶液即可；（4）取编号1-20的培养试管，用大量注射器以每瓶12.5ml 左右培养基分装在培养试管中，用封口膜封口，4支一捆捆扎好。
实验二 灭菌、无菌操作技术
四、主要实验步骤 1、材料处理及外植体消毒； 室外的叶片→自来水下用软毛刷冲洗干净。如叶片上粘 附许多植物分泌物或其他物质，可以使用洗涤剂（洗衣粉 或洗涤灵）轻轻刷洗，干净为止。 体表灭菌在超净工作台上操作。 紫外照射15～20min→关紫外→工作送风15～20min。 实验台上准备好无菌水，灭菌的三角瓶，灭菌的镊子、刀 片、剪子等，回收氯化汞的容器。 沥干（或者用灭菌的滤纸吸干）植物材料上的水→70％ 乙醇溶液中灭菌15-30sec→无菌水冲洗3次→放入无菌三 角瓶→加入0.1%氯化汞溶液，计时3-6min→无菌水洗涤 6～10次。注意用过的氯化汞溶液以及前3次洗涤植物材料 使用的有污染的水回收到一个的三角瓶中，待处理。
六、注意事项 1、实验安全及实验室使用规则； 2、实验设备使用方法及损坏赔偿条例； 3、本次实验注意事项。 （1）材料消毒要掌握好时间、浓度，避免消毒不够或 过头； （2）酒精用70%-75%效果最好，外植体用酒精消毒时 间一般不超过半分钟； （3）植物激素用过滤灭菌法，不能高温消毒； （4）各种消毒剂处理后，要用无菌水冲洗干净； （5）高温高压灭菌时，注意锅底水位，压力上升至5磅 时要放气，灭菌结束，必须等锅内压力回到零时才能 打开锅盖，灭菌时须有人看守，注意异常情况；
6、整理及清洗； 将污染的培养瓶挑出，灭菌，清洗。 五、作业 1.实验报告（包括实验目的、设备、步骤、结果与 现象分析）； 2.课后思考 （1）什么叫外植体体表灭菌，常用消毒剂有哪些， 各有什么特点，要掌握什么原则？ （2）植物激素一般用什么方法消毒？为什么？ （3）无菌操作要注意哪些问题。 （4）如何区分细菌性污染和真菌性污染？
植物组培 实验二
植物组培实验报告实验二、培养基的配制及灭菌一、实验目的1、熟悉植物组织培养的一般工作流程。
2、了解培养基的成分、类型及特点。
3、能正确进行培养基的配制及灭菌操作。
二、实验原理植物组织培养是一项技术性强、无菌条件要求高的工作，对场地有一定的要求，需配备必要的仪器设备和器皿、器械，还必须熟练掌握每个环节的操作技术。
植物组织培养的一般程序包括拟定培养方案、初代培养、继代扩繁、生根壮苗培养及驯化移栽，其基本操作技术包括培养基的配制及灭菌、外植体的选择与消毒、无菌接种与培养、试管苗生根与驯化移栽等。
三、实验内容1、培养基的成分以MS培养为例，其成分可以分为水、无机盐、有机物、天然复合物、培养体的支持材料等五大类。
１．水作用：原生质体的组成成分，代谢过程的介质和溶媒。
它是生命活动过程中。
配制：培养基母液时要用蒸馏水：配培养基时可用自来水。
但在少量研究上尽量用蒸馏水。
２．无机元素大量元素，指浓度大于0.5mmol/l的元素，有Ｎ、Ｐ、Ｋ、Ｃa、Ｍg、Ｓ等。
其作用是：(1)N功能：是蛋白质、酶、叶绿素、维生素、核酸、磷脂、生物碱等的组成成分，是生命结构和功能物质不可缺少的。
供应形式：含有ＮＯ3－N又含ＮＨ4－N。
ＮＨ4－N对植物生长较为有利。
在制备培养基时以这两种形式供应。
供应的物质有ＫＮＯ3、、ＮＨ4ＮＯ3等。
有时，也添加氨基酸。
(2)P功能：是磷脂的主要成分，而磷脂又是细胞膜、细胞核的重要组成部分。
磷也是核酸、ＡＴＰ、辅酶等的组成成分。
组织培养中，磷不仅增加养分、提供能量，而且也促进对Ｎ的吸收，增加蛋白质在植物体中的积累。
供应形式：常用的物质有ＫＨ2ＰＯ4或ＮaＨ2ＰＯ4等。
(3)K功能：Ｋ对碳水化合物合成、转移、以及氮素代谢等有密切关系，它具有活化酶的作用。
Ｋ增加时，蛋白质合成增加，维管束、纤维组织发达，对胚的分化有促进作用。
但浓度不易过大，一般为１～３mg/l 为好。
供应形式：制备培养基时，常以ＫＣl、ＫＮＯ3 等盐类提供。
母液的制备及培养基的配制、灭菌
实验一母液的制备及培养基的配制、灭菌一、目的要求通过掌握培养基对母液制备及常用培养基的配制和灭菌方法，为植物组织培养准备合适的营养条件。
二、实验内容学习母液和培养基的配制，灭菌的方法。
三、实验原理植物材料培养要获得成功，并正常生长，培养基的组成成分是一个决定性因素，不同植物要求不同的培养基，因此，在进行大量工作之前，对不同培养基应进行分析、比较、试验，选择一个符合试验材料需要的适宜培养基。
大多数植物组织培养所用的培养基由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成。
四、实验仪器与材料高压灭菌锅、冰箱、普通及精密天平、电炉、铝锅、玻璃器皿（烧杯、量微、容量瓶、移液管、试剂瓶、三角瓶、漏斗），化学试剂(CaCl2·2H2O，KNO3，MgSO4·7H2O，NH4NO3，KH2PO4，Na2—EDTA，FeSO4·7H2O，MgSO4·4H2O，Zn SO4·7H2O，H3BO3，KI，NaMoO4·2H2O，CuSO4·5H2O，CoCl2·6H2O，甘氨酸，盐酸硫胺素，盐酸吡哆醇，烟酸，肌醇，蔗糖，琼脂，若干种生长调节物质及天然复合物，HCL,NaOH,酒精)，以及称量纸、药匙、玻璃棒、精密度纸，瓶盖用纸，线绳或橡皮筋、铅笔、标签纸。
五、方法和步骤1、母液的配制母液的配制是按所使用药品的类别，而分别配成大量元素、微量元素、维生素和铁盐等。
配制母液时特别要注意无机盐成分在一起，可能产生的化学反应，如Ca2+和SO2-4,Ca2+,Mg2+和PO3-4一起溶解后，会产生硫酸钙或磷酸钙的不溶物沉淀，因此不能配在一起作母液贮存，应分别配制和保存。
配制母液时要用双重蒸馏水等纯度较高的水，药品应采用化学纯或分析纯级，药品的称量及定容都要准确，各种药品先以少量蒸馏水使其充分溶解，然后按培养基上的排列顺序混合。
现以Murashige和Skoog(1962)培养基为例叙述如下：根据各种药品的特点，母液可配成4种。
植物激素的配制注意事项
●可高压灭菌：IBA，NAA ，6-BA，2,4-D●不可高压灭菌：IAA，GA3●水杨酸不是很清楚，参考wiki上“科尔贝－施密特反应（Kolbe-Schmitt反应）是干燥的酚钠或酚钾与二氧化碳在加温（125-150°C）加压（100atm）下生成羟基苯甲酸的反应。
它是向芳环上引入羧基的一种常用方法，常用的工业原料水杨酸（邻羟基苯甲酸）就是利用此法，通过苯酚盐与二氧化碳作用制得的。
”而高压灭菌锅的温度和压强分别为121°C和0.15Mpa（压力表的数值，实际为0.25MPa即2.5atm），我个人认为水杨酸高压灭菌会分解。
因为从上可以看出水杨酸的分解就是科尔贝－施密特反应的逆反应，看反应式便明白加压有利于正反应，而减压有利于逆反应，而121°C的灭菌温度基本与合成反应的温度相持，2.5atm的压强却远小于合成反应，明显是有利于逆反应进行。
故我认为水杨酸不宜高压灭菌。
如果不确定的话可以做个实验，配一小瓶水杨酸溶液高压灭菌，灭过后观察其会不会有粉红色，有的话就说明产生苯酚并氧化成对苯醌了。
●配制生长素类，例如IAA、NAA、2.4-D、IBA，应先用少量95%乙醇或无水乙醇充分溶解，或者用1mol/L的NaOH溶解，然后用蒸馏水定容到一定的浓度。
●细胞分裂素，例如KT，应先用少量95%乙醇或无水乙醇加3~4滴1mol/L的盐酸溶解，再用蒸馏水定容。
●配制生物素，用稀氨水溶解，然后定容。
一般来说感觉用醇溶后较容易析出，而且溶解也不容易，还是用少量酸或碱溶，再用蒸馏水定容●植物激素配制方法●植物激素：每种激素必须单独配制成母液，浓度为0.1mg/ml，0.5mg/ml，1.0mg/ml，激素浓度的表示方法多种，ppm（mg/L）、mol/L、mg/ml，用时根据需要取用。
由于多数激素难溶于水，它们的配法如下：●生长素：1 IAA，IBA用适量无水乙醇或1M NaOH彻底溶解后，再缓慢加入水定容到一定浓度。
ms基本培养基母液的配制方法
ms基本培养基母液的配制方法一、准备所需材料1. 酸性植物激素溶液：包括吲哚乙酸（IAA）、纯度较高的激素（如6-苄基腺嘌呤，BA）等。
2. 碱性植物激素溶液：如生长素（GA3）等。
3. 无机盐溶液：包括硝酸铵、硝酸钾、磷酸二氢钾、硫酸镁、硫酸钾、硼酸、锌硫酸、硼酸等。
4. 维生素溶液：如次黄嘌呤核苷酸（NAA）等。
5. 蔗糖溶液：用于提供能量和碳源。
6. 琼脂：用于凝固培养基。
二、配制步骤1. 称取适量的无机盐溶液成分，按照MS基本培养基的配方比例将各种盐溶解在蒸馏水中，常用的浓度为1/2或1/4的MS培养基。
2. 将酸性植物激素溶液和碱性植物激素溶液分别加入到溶液中，注意控制激素的浓度。
3. 加入维生素溶液，按照配方比例加入到溶液中。
4. 加入适量的蔗糖溶液，用来提供能量和碳源。
5. 最后将琼脂加入到溶液中，搅拌均匀。
6. 调节溶液的pH值，通常为5.8左右。
7. 用蒸馏水补充溶液至总体积，并充分搅拌均匀。
8. 将配制好的培养基溶液进行高温高压灭菌处理，一般条件下为121摄氏度，压力为0.1MPa，持续20分钟。
三、注意事项1. 在配制过程中，要保持实验室卫生，使用无菌操作。
2. 使用高质量的试剂和蒸馏水，避免杂质的干扰。
3. 激素的浓度要根据实验需要进行调整。
4. 配制过程中要注意酸碱度的调节，尽量控制在5.8左右。
5. 琼脂的加入要充分搅拌均匀，避免结块。
6. 灭菌处理要按照规定的条件进行，确保培养基的无菌性。
通过以上步骤，我们可以成功地配制出MS基本培养基的母液。
这种培养基在植物组织培养、植物细胞和胚胎发生研究中起着重要的作用。
根据实验的需要，可以在母液的基础上进一步调整培养基的成分和浓度，以满足不同植物材料的培养要求。
希望以上内容对您有所帮助。
不同灭菌条件下植物激素对植物组培快繁的影响
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菌条 件下 对 同仁黄果 组培 的影 响 。 １ ２ ２ 苹 果梨 转接试 验 ．． 以 ＭＳ 做 基 本 培 养 基 ，加 Ｂ ．５ ／ ＋ Ａ０ ｍｇ Ｌ 表 ２结果 表 明 ， 对苹果 梨组 培 苗 的影 响 ， 以过 滤
头灭 菌苗 木生 ຫໍສະໝຸດ 最快 ， 苗木 分化 率也 最 高 ， 次 为 紫 其
山 东林 业科 技 ， ０ ９ （ ） ７ ～ ８ ２０ ，４ ：８ Ｏ
［］ 李 火 根 ， １ 陈龙 ， 梁呈 元 ， 敏 仁 ． 掌 楸 属 树 种 种 源 试 验 黄 鹅 研 究 ［］ 林 业科 技 开发 ，０ ５ １ （ ） １ ～ ｌ Ｊ． ２０ ，９ ５ ：３ ７ ［］ 朱 晓 琴 ， 建 霞 ， 青 菊 ， 鹅 掌 楸 遗 传 多 样 性 的 等 位 ２ 马 姚 等．
植 物组织 培养 已经从 试验 室研 究 阶段 一跃 而成
为 一种 大规模 成批 量 的 工 厂化 生 产方 法 ， 目前 植 物
压 （ ． ｋ ／ｍ。 灭 菌 １ ～ ２ １ １ｇ ｃ ） ５ Ｏ分 钟 。因植 物 激 素 存 在 与热不 稳定 性 ， 我们 采 用 将植 物 激 素 用 一 次性 注 射 器戴过 滤灭 菌头 和 紫 外灯 照 射 ３ Ｏ分 钟 的 方法 加 入 到 已进行 了高 雅 灭菌 的 ＭＳ培 养 基 中， 常 规加 与
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细胞分裂素，例如KT，应先用少量95%乙醇或无水乙醇加3~4滴1mol/L的盐酸溶解，再用蒸馏水定容。
配制生物素，用稀氨水溶解，然后定容。
配制方法
除菌方式
母液浓度
生长素
IBA（3-吲哚丁酸）用适量无水乙醇或1M NaOH彻底溶解后，再缓慢加入水定容到一定浓度。
除菌方式：与培养基高压共灭菌。
0.2g/L
IAA（3-吲哚乙酸）用适量无水乙醇或1M NaOH彻底溶解后，再缓慢加入水定容到一定浓度。
除菌方式：抽滤除菌。
0.2g/L
α-NAA（a-萘乙酸）可用1M NaOH彻底溶解后，再加水定溶到一定浓度。
植物激素配制方法总结
原则
植物激素：每种激素必须单独配制成母液，浓度为0.1mg/ml，0.5mg/ml，1.0mg/ml，激素浓度的表示方法多种，ppm（mg/L）、mol/L、mg/ml，用时根据需要取用。
可高压灭菌: IBA，NAA，6-BA，2,4-D;、KT
不可高压灭菌:ZT、2-IP、IAA，GA3
除菌方式：与培养基高压共灭菌。
0.2g/L
2，4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）用无水乙醇或1M NaOH彻底溶解后，再加水定容至一定浓度。
除菌方式：与培养基高压共灭菌。
0.2g/L
细胞分裂素
KT（激动素6-糖氨基嘌呤）和6-BA（6-苄氨基嘌呤）先溶于少量1M NaOH中，再加水定容。
除菌方式：与培养基高压共灭菌。
0.2g/L
ZT（反式玉米素）先溶于适量1M NaOH中，再加水至一定浓度。
除菌方式：抽滤除菌。（反式玉米素是天然酶）
0.1g/L
2-ip可用少量1M NaOH溶解后，再加水定容至一定浓度。
除菌方式：抽滤除菌。
0.2g/L
赤霉素
GA3先溶于适量无水乙醇中，再加水定容到一定浓度。
除菌方式：抽滤除菌。
0.2g/L
脱落酸
ABA（脱落酸）可用少量1M NaOH溶解后，再加水定容至一定浓度。
除菌方式：与培养基高压共灭菌。
0.2g/L
植物组培中，有些植物激素不能加入培养基中随之高压蒸汽灭菌条件下将其加入到高压灭菌后的温度下降到约50至60度的未凝固的培养基中，或者适当加热（如50~70°C水浴加热）使之溶解后的培养基中，摇匀，待培养基冷却凝固再接种培养物。【下载本文档，可以自由复制内容或自由编辑修改内容，更多精彩文章，期待你的好评和关注，我将一如既往为您服务】