单纯疱疹病毒疫苗讲义

生物制品学课堂作业课题：单纯疱疹病毒疫苗组长：陈畑组员：潘芸金宏杰日期： 2015.04.03分数：单纯疱疹病毒疫苗讲义各位同学，下午好，我们小组要讲的课题是单纯疱疹病毒疫苗。

1986年，日本的HSV（单纯疱疹病毒）抗体阴性者日渐增多，1~20岁阴性者达70一80%，40岁以上占10%，20多岁介于二者之间。

与此同时，生殖器疱疹、新生儿疱疹、疱疹性脑炎等单纯疤疹病毒所引起的疾病逐渐增加。

在美国，潜伏性(隐匿性)的生殖器疱疹患者达1000万人，每年原发性生殖器疤疹患者达30~50万人，这已成为严重的社会问题【森良一】。

和CVM（巨细胞病毒）一样，HSV 在人群中感染相当广泛，HSVI人群感染率高达50% - 90%（多为隐性潜伏性感染）。

随着我国经济、社会的发展，我们需要更多地关注这类只以人为宿主细胞的病毒，不管在预防上还是治疗上。

【展示图片】首先，我们来认识一下单纯疱疹病毒：单纯疱疹病毒HSV（Herpes simplex virus）属α疱疹病毒亚科【有α、β、γ三亚科】，是疱疹病毒的典型代表病毒。

HSV病毒颗粒（毒粒）呈球形，直径为120-150nm，完整病毒粒由核心、衣壳、皮层（内膜、被膜）及包膜（囊膜）组成，核心含双股DNA，缠绕成纤丝卷轴（圆柱状）；衣壳呈二十面体对称，由162个壳微粒组成，直径为100nm；衣壳外为一层皮层，最外为包膜上有刺突（或囊膜突起）；包膜表面含有12种糖蛋白【gB、gC、gD、gE、gG、gI、gH、gJ、gK、gL、gM和gN】【书本239】。

球形，120-150nm核心: 线性dsDNA衣壳: 20面体立体对称皮层: 衣壳和包膜之间包膜: 表面有糖蛋白刺突根据抗原性的差别，目前把该病毒分为HSVI和HSVII。

其中HSV I主要引起腰部以上、生殖器以外的皮肤、黏膜、器官和神经系统感染；HSVII主要引起腰部以下的皮肤疱疹和生殖器疱疹。

两个血清型：HSV-1 和HSV-2 (同源性50～70%，测序完成)，型间有共同抗原也有特异性抗原，可用型特异性单克隆抗体做ELISA、DNA限制性酶切图谱分析及DNA杂交实验等方法区分型别。

基因组：150 kb（1.5百万）, 编码70多种蛋白与病毒增殖有关：DNA聚合酶、TK（胸苷激酶）等与细胞相互作用有关：粘附性糖蛋白：gB、gC、gD和gH融合蛋白：gB等。

免疫逃逸：gC(C3bR)，gE/gL复合物(IgGFcR)；与结构有关：衣壳蛋白包膜糖蛋白：gC，gL，gE等与分型有关：血清型：gG（型特异性糖蛋白）gG-1代表HSV-1，gG-2为HSV-2它有宿主范围广（二倍体细胞），复制周期长，致细胞病变强，易扩散，在神经节中常形成潜伏感染等特点。

接着，我们来看一看单纯疱疹病毒侵染、增殖情况：HSV通过表面的糖蛋白（gB、gC、gD、gH）诱导，与宿主细胞融合，将自己的核酸转入，以胞吐或细胞溶解方式释放：宿主细胞，在核内复制和装配，核膜出芽（gH）立即早期蛋白(immediate early protein或α蛋白): 调节蛋白，起动和调节β和γ基因的转录和表达；早期蛋白(early protein 或β蛋白): DNA复制有关的酶和调节因子，如DNA聚合酶，胸苷激酶等；晚期蛋白( late protein 或γ蛋白): 结构蛋白。

HSV可在多种细胞中增殖【二倍体】，产生细胞病变效应，出现细胞肿胀、变圆和产生核内嗜酸性包涵体（表达外源基因的宿主细胞）【书本239】。

HSV作为抗原，它的致病性与免疫性如何呢？HSV通过患者、健康的病毒携带者（病毒常存在于疱疹病灶或携带者唾液中）进行传播，途径有：密切接触、呼吸道、胎盘（HSVI）、性接触、产道（HSVII）及破损皮肤侵入人体，入侵后在局部少量复制，然后进入皮肤神经元，沿轴突上行至感觉神经节并进行病毒DNA合成而潜伏，在适当条件下（受到外界刺激，如物理、情感、压力、发热、紫外线照射、组织损伤或免疫抑制等）被激活再返回值感染局部是即出现肉眼可见的水疱疹。

局部感染较重时，病毒可沿淋巴管扩散，导致淋巴结炎。

若集体免疫功能低下，尤其是细胞免疫功能缺损时，可导致病毒血症并引起多器官损害【百度文库】。

偶尔也可发生严重的全身性疾病，累及内脏【百度文库资源】。

尽管抗病毒治疗是有效的，潜伏感染还是可以伴随患者终生，并经常复发或导致无症状排毒【林静染】。

其感染类型与临床表现有以下四类：【1】原发感染：6个月以内婴儿多从母体通过胎盘获得抗体，初次感染约90%无临床症状，多为隐性感染。

HSV-1原发感染常发生于1-15岁，常见的有龈口炎，系在口颊粘膜和齿龈处发生成群疱疹，破裂后，多盖一层坏死组织。

此外可引起唇疱疹、湿疹样疱疹、疱疹性角膜炎、疱疹性脑炎等。

生殖器疱疹多见于14岁以后由HSV-2引起，比较严重，局部剧痛，伴有发热全身不适及淋巴结炎。

HSV-1：疱疹性龈口炎，唇疱疹，疱疹性湿疹，角膜结膜炎，疱疹性脑炎HSV-2：生殖器疱疹，新生儿疱疹【2】潜伏感染和复发：HSV原发感染产生免疫力后，将大部分病毒清除，部分病毒可沿神经髓鞘到达三叉神经节（HSV-1）和脊神经节（HSV-2）细胞中或周围星形神经胶质细胞内，以潜伏状态持续存在，与机体处于相对平衡，不引起临床症状。

当机体发热、受寒、日晒、月经、情绪紧张，使用垂体或肾上腺皮质激素，遭受某些细菌病毒感染等，潜伏的病毒激活增殖，沿神经纤维索下行至感觉神经末梢，至附近表皮细胞内继续增殖，引起复发性局部疱疹。

其特点是每次复发病变往往发生于同一部位。

最常见在唇鼻间皮肤与粘膜交界处出现成群的小疱疹。

疱疹性角膜炎、疱疹性宫颈炎等亦可反复发作。

【3】先天性感染与新生儿感染：HSV通过胎盘感染，影响胚胎细胞有丝分裂，易发生流产、造成胎儿畸形、智力低下等先天性疾病。

约40-60%的新生儿在通过HSV-2感染的产道时可被感染，出现高热、呼吸困难和中枢神经系统病变，其中60-70%受染新生儿可因此而死亡，幸存者中后遗症可达95%。

【4】致癌关系：一些调查研究表明HSV-1和HSV-2可能分别与唇癌、外阴癌及子宫颈癌有关，特别HSV-1作为宫颈癌的病因，曾受到人们重视，研究表明人乳头瘤病毒与该癌有直接关系，因此宫颈癌成因也许是复杂的。

常见的几种疾病包括：HSV角膜结膜炎、急性疱疹性口龈炎、生殖器疱疹、尿路感染、疱疹性脑膜炎、皮肤疱疹、疱疹性甲沟炎、HSV感染与“感染性腰腿痛综合征”、新生儿疱疹感染与全身播散性疱疹感染。

和其他病毒疫苗（如水痘病毒疫苗，人巨细胞病毒疫苗等等）一样，HSV的疫苗也被关注着，下面我们看一下HSV的疫苗：单纯疱疹病毒疫苗属于治疗性疫苗【旨在打破机体的免疫耐受，提高机体的免疫应答，其机理可能是通过改善和加强疫苗靶抗原的摄入、表达、处理、提呈和激活免疫应答，从根本上唤起机体对靶抗原的免疫应答能力【书本286】。

】其治疗性疫苗研究情况【1、灭活病毒疫苗将细胞培养中的病毒通过甲醛或热等处理灭活，再经过或不经过一系列纯化获得的疫苗。

试验发现有预防生殖器疱疹的保护作用，但未临床，且存在致癌可能性、成本高问题【林静染】。

【2、减毒活疫苗（有骨髓灰质炎和水痘疫苗的成功为先导）由活病毒不断在细胞中培养繁殖、传代，直到得到毒力很弱的病毒株，以达到神经毒性减弱，保持增殖与免疫原性的目的。

但研究发现减毒活疫苗不稳定，存在返祖现象【傅锦坚】。

Ps：1、2种疫苗的危险性——HSV有致癌可能性，不宜用于人体【3、复制/基因缺失活疫苗构建复制受限的疫苗（由于I、II型测序工作已完成）集活疫苗和灭活疫苗的优点于一身，较安全，有良好的免疫原性eg.最近一种缺乏gH基因的单纯疱疹病毒株被用做新的HSV疫苗。

这种缺失病毒在宿主细胞中能完成一个完整的复制周期，但其释放出来的子代病毒由于缺乏gH而不具备感染性（缺少粘附、融合、出芽等条件），我们称之为非感染性单周期(DISC)病毒。

（将胸苷激酶（TK）基因去除（I期临床），阻碍早期蛋白的合成。

突变株病力下降，免疫原性下降，同时缺失的II型株能引起急性疾病和再激活，复发性人生殖器HSVII疾病）【4、包膜蛋白（提纯的gB、gD）亚单位疫苗能引起体液免疫和细胞免疫gB、gD蛋白表面较多【陈斯勇】，多用其制亚单位疫苗。

可利用DNA重组技术，在大肠杆菌、酵母、哺乳动物细胞和杆状病毒等多种表达系统中分别或联合表达各种HSV表面糖蛋白，制成亚单位疫苗。

对女性比对男性有较好的预防保护作用。

并有相关文献gB、gC、gD、gE和gI五种糖蛋白混合制成的多价亚单位疫苗对致死剂量攻击和潜伏感染的保护作用可能会比单用gB或gD或两者同时使用效果要好。

【5、gB、gD基因重组痘苗病毒疫苗（gB、gD是HSV诱导机体产生中和抗体的主要抗原）重组载体疫苗兼具减毒疫苗和亚单位疫苗的优点，同时能避免HSV的毒性、潜伏性、活化以及激活原癌基因（致癌性）等问题。

在免疫接种时，这些病毒或细菌的载体能表达具有免疫原性的蛋白，并且相关基因编码产物能诱导广泛的体液免疫和细胞免疫【高健】。

我们可以将一些HSV基因插入到能完整复制的病毒或细菌载体上，如痘苗病毒、腺病毒、水痘一带状疱疹病毒、腺相关病毒和鼠伤寒杆菌等。

这样载体病毒或细菌就能在体内表达相应的HSV蛋白，起到免疫作用。

其中gD诱生中和抗体的能力最强。

【中和抗体是一种用于防止细胞被某种抗原或感染源侵害的抗体,其原理是通过抑制乃至中和它们的某种生化作用；大多数的抗体都是通过与抗原结合，激发白细胞来处理抗原所在的外来物，并最终将其消灭。

而中和抗体和结合抗体的区别在于，前者中和抗原的生化作用，而后者则与之结合变成一种有待处理的标志。

】【6、多肽疫苗多肽构成了抗原表位配体呈递系统(LEAPs)，能诱导Thl型与Th2型免疫反应。

HsV-1和HsV一2的gD都包含一段保守多肽链(gDs) ，可以诱导免疫应答，并产生中和抗体【林静染】。

目前该疫苗仍在J临床前研究中。

【7、核酸疫苗/DNA疫苗疫苗的最新革命性发展是核酸疫苗。

它是用包含病毒基因的DNA质粒（编码HSVgC、gD、gE的质粒）接种体内，在体内表达相应病毒蛋白从而诱导免疫反应。

动物实验显示接种HSV DNA疫苗，可以诱导产生HSV特异的体液免疫和细胞免疫，但不能达到明显清除病毒的效果，免疫反应较弱，保护能力有限。

质粒表达体系能抑制原发感染，减少潜伏感染，但临床未达预期【林静染】。

目前灭活全病毒疫苗已被淘汰，基因突变型减毒活疫苗、重组亚单位疫苗、多肽疫苗、表达HSV抗原的异病毒载体疫苗、复制缺损型疫苗以及DNA疫苗仍应用于HSV疫苗的研究。

新一代疫苗更新的疫苗是研制gD蛋白的化学合成肤链（试图分离出防御感染抗原的遗传因子，将其置于大肠杆菌、酵母或培养细胞，从而得到疫苗），动物试验已证实有效。