玉米组培技术PPT课件
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• 组织培养的植物细胞也成为在细胞水平上 分析研究的理想材料.
21/07/2020
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3
玉米组织培养的目的
• 玉米组织培养的目的是让外植体能够高频 率地诱导出愈伤组织，建立高效 的体细胞 再生体系 ，为玉米遗传转化和细胞工程研 究创造有利条件 。
21/07/2020
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4
玉米组织培养的研究回顾
• Larue在 1949Hale Waihona Puke Baidu用甜玉米的胚乳作外植体， 首次诱出玉米愈伤组织，但未获得再生植株 。
21/07/2020
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6
玉米组织培养的主要方法（简介）
1、玉米花粉和花药组织培养 玉米花粉和花药的培养一般可获取单倍体 植物，有利于促进玉米遗传育种工作的有 效进展。
21/07/2020
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7
2、 玉米茎尖和根尖离体培养
玉米植株的根尖和茎尖分生组织具有良好 的分化性能。玉米茎尖和根尖离体培养有 利于促进完整玉米植株的生长,并且在取材 上不受季节限制。
21/07/2020
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22
谢谢
21/07/2020
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23
16
2、接种
• 取出培养三天后的种子，接种到MS固体 培养基中，根向下伸入培养基中，芽向上， 芽萌发得不太好的继续放进饭盒中再培养。
• 接种到MS固体培养基中的芽放回28℃暗 培养3-4天。
21/07/2020
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3、玉米茎尖转化
• 取出MS固体培养基中的芽放在无菌滤纸 上
• 切根
21/07/2020
• 1975年，Green和Phillips首次用A188的幼 胚作外植体，诱导出二倍 体 愈伤组织 ，并再 生得 到第一株无性系植株。
21/07/2020
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5
玉米组织培养的研究现状
• 现在已经能从多种外植体中诱导出愈伤组 织，并再生出植株。例如：幼胚、花 药、 幼穗等，其中幼胚是最易诱导，也是目前 最常用的外植体。
玉米组织培养
21/07/2020
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1
主要内容：
• 植物组织培养的意义. • 玉米组织培养的目的. • 研究进展. • 目前玉米组织培养的主要
方法.
21/07/2020
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2
植物组织培养的意义
• 植物组织培养可以生产大量的优良无性系.
• 细胞融合可打破种属间的界限，克服远缘 杂交不亲和性障碍.
• 可获得单倍体、三倍体及其它多倍体、非 整倍体.
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1、玉米种子消毒
a)在500ml三角瓶中装入200—300粒玉米种子 b)用75%酒精清洗8min c)0.1%升汞5min d)无菌水洗2遍 e)加入无菌水静置8h f) 0.1%升汞8min g)无菌水洗5遍 h)装入钣盒 i) 28℃暗培养3天
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• 镊子夹胚轴，在茎尖处用刀尖切半边。
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• 在茎尖生长点划一小口。
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• 转化后，接种于MS培养基中，进行暗培养。
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3、移栽及其管理
培养3—5天后，将其移栽至至花盆中， 其 中注意事项与前面的相同。后期的管 理也于前者相近。
• 灭菌
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2、外体消毒及挑幼胚
75%酒精擦玉米外层叶片
至超净工作
台，用75%酒精擦玉米外层叶片，剥一层擦一
层至完 用刀去掉1/3玉米籽粒 挑幼
胚
接种到准备好的诱导培养基上（暗
培养）
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11
3、继代
• 准备继代培养基(N6+水解酪蛋白 0.1g/L+L-脯氨酸0.69g/L+甘露醇 20g/L+蔗糖30g/L+琼脂6.5g/L+2,4D1mg/ml)
• 诱导两次后，转入继代培养基每7天继代一
次，直至出透明、黄色、坚硬的愈伤组织，
可用于转化（一般继代三次）
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4、转化
• 浸染培养（22--25℃，暗培养3天） • 恢复培养（暗培养3天） • 筛选培养 • 分化培养 • 生根培养 • 壮苗
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5、移栽及管理
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3、玉米幼胚的组织培养
玉米幼胚属于二倍体， 且分生能力较强。幼 胚是最易诱导， 也是目前最常用的外植体， 但幼胚取材的时间受到严格的季节限制。
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9
玉米幼胚组织培养的全过程
1、准备工作
• 接种室消毒
• 准备诱导培养基（N6+肌醇+L-脯氨酸 1.38g/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+水解酪蛋 白0.5g/L+2,4-D2mg/mL)
• 移栽前，应对移栽用的基质进行灭菌。
• 移栽前，可将培养物不开口移到自然 光照下锻炼2-3天，然后再开口练苗12天，以适应将来自然湿度的条件。
• 玉米组培苗移栽时首先应把根部的培 养基清洗干净，以免受细菌或真菌污 染而影响幼苗生长。
• 移栽
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玉米茎尖组织培养的全过程
1、准备工作 • 接种室消毒 • 准备培养基（MS+蔗糖30g/L+琼脂6.5g/L) • 灭菌
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玉米组织培养的目的
• 玉米组织培养的目的是让外植体能够高频 率地诱导出愈伤组织，建立高效 的体细胞 再生体系 ，为玉米遗传转化和细胞工程研 究创造有利条件 。
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玉米组织培养的研究回顾
• Larue在 1949Hale Waihona Puke Baidu用甜玉米的胚乳作外植体， 首次诱出玉米愈伤组织，但未获得再生植株 。
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玉米组织培养的主要方法（简介）
1、玉米花粉和花药组织培养 玉米花粉和花药的培养一般可获取单倍体 植物，有利于促进玉米遗传育种工作的有 效进展。
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2、 玉米茎尖和根尖离体培养
玉米植株的根尖和茎尖分生组织具有良好 的分化性能。玉米茎尖和根尖离体培养有 利于促进完整玉米植株的生长,并且在取材 上不受季节限制。
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谢谢
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2、接种
• 取出培养三天后的种子，接种到MS固体 培养基中，根向下伸入培养基中，芽向上， 芽萌发得不太好的继续放进饭盒中再培养。
• 接种到MS固体培养基中的芽放回28℃暗 培养3-4天。
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3、玉米茎尖转化
• 取出MS固体培养基中的芽放在无菌滤纸 上
• 切根
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• 1975年，Green和Phillips首次用A188的幼 胚作外植体，诱导出二倍 体 愈伤组织 ，并再 生得 到第一株无性系植株。
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玉米组织培养的研究现状
• 现在已经能从多种外植体中诱导出愈伤组 织，并再生出植株。例如：幼胚、花 药、 幼穗等，其中幼胚是最易诱导，也是目前 最常用的外植体。
玉米组织培养
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主要内容：
• 植物组织培养的意义. • 玉米组织培养的目的. • 研究进展. • 目前玉米组织培养的主要
方法.
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植物组织培养的意义
• 植物组织培养可以生产大量的优良无性系.
• 细胞融合可打破种属间的界限，克服远缘 杂交不亲和性障碍.
• 可获得单倍体、三倍体及其它多倍体、非 整倍体.
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1、玉米种子消毒
a)在500ml三角瓶中装入200—300粒玉米种子 b)用75%酒精清洗8min c)0.1%升汞5min d)无菌水洗2遍 e)加入无菌水静置8h f) 0.1%升汞8min g)无菌水洗5遍 h)装入钣盒 i) 28℃暗培养3天
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• 镊子夹胚轴，在茎尖处用刀尖切半边。
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• 在茎尖生长点划一小口。
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• 转化后，接种于MS培养基中，进行暗培养。
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3、移栽及其管理
培养3—5天后，将其移栽至至花盆中， 其 中注意事项与前面的相同。后期的管 理也于前者相近。
• 灭菌
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2、外体消毒及挑幼胚
75%酒精擦玉米外层叶片
至超净工作
台，用75%酒精擦玉米外层叶片，剥一层擦一
层至完 用刀去掉1/3玉米籽粒 挑幼
胚
接种到准备好的诱导培养基上（暗
培养）
21/07/2020
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3、继代
• 准备继代培养基(N6+水解酪蛋白 0.1g/L+L-脯氨酸0.69g/L+甘露醇 20g/L+蔗糖30g/L+琼脂6.5g/L+2,4D1mg/ml)
• 诱导两次后，转入继代培养基每7天继代一
次，直至出透明、黄色、坚硬的愈伤组织，
可用于转化（一般继代三次）
21/07/2020
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4、转化
• 浸染培养（22--25℃，暗培养3天） • 恢复培养（暗培养3天） • 筛选培养 • 分化培养 • 生根培养 • 壮苗
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5、移栽及管理
21/07/2020
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3、玉米幼胚的组织培养
玉米幼胚属于二倍体， 且分生能力较强。幼 胚是最易诱导， 也是目前最常用的外植体， 但幼胚取材的时间受到严格的季节限制。
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玉米幼胚组织培养的全过程
1、准备工作
• 接种室消毒
• 准备诱导培养基（N6+肌醇+L-脯氨酸 1.38g/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+水解酪蛋 白0.5g/L+2,4-D2mg/mL)
• 移栽前，应对移栽用的基质进行灭菌。
• 移栽前，可将培养物不开口移到自然 光照下锻炼2-3天，然后再开口练苗12天，以适应将来自然湿度的条件。
• 玉米组培苗移栽时首先应把根部的培 养基清洗干净，以免受细菌或真菌污 染而影响幼苗生长。
• 移栽
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玉米茎尖组织培养的全过程
1、准备工作 • 接种室消毒 • 准备培养基（MS+蔗糖30g/L+琼脂6.5g/L) • 灭菌