昭通青花椒总生物碱含量测定

昭通学院学报第40卷 第5期Vol.40 No.5Journal of Zhaotong University 2018年10月Oct.2018·34·收稿日期：2018-09-26基金项目：云南省教育厅科学研究基金指导性项目(2016ZDX149)。

作者简介：熊汝琴(1986— ) ，女，云南禄劝人，讲师，硕士，主要从事天然药物活性成分研究。

花椒（Zanthoxylum bungeanum Maxim ）为芸香科花椒属植物的果皮，不仅是常用调味品之一，而且具有芳香健胃、温中散寒、除湿止痛、杀虫解毒、止痒解腥等药效。

目前，国内外学者对花椒化学成分及药理活性研究已十分成熟，研究表明花椒中主要含有挥发油、酰胺、生物碱、黄酮、多酚、香豆素、木脂素等多种化学成分[1-2]。

其中生物碱是花椒中普遍存在的一类活性成分，迄今为止，从花椒中已分离得到二十余种生物碱，如青花椒碱、茵芋碱、白藓碱、喹诺酮喹啉生物碱、γ-花椒碱、铁屎米-6-酮、白屈菜红碱等[3-5]。

药理研究表明，花椒总生物碱具有较宽的抗菌谱，对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉和酿酒酵母均有抑制作用，还具有抗炎、镇痛、抗肿瘤、抗疟疾、抑制血小板凝集等作用[5-7]，是反映花椒内在品质的主要指标。

花椒是经济价值、药用价值和生态价值较高的农产品，在我国栽培历史悠久，分布范围广泛，昭通地区的产量约占全省的60～70%。

昭通市花椒品种有“大红袍”和青花椒两种，其中青花椒人工种植规模较大，主要分布在永善县、鲁甸县、彝良县、巧家县、盐津县、大关县等地区。

近年来随着国家提倡振兴特色农业发展，昭通市各级政府高度重视青花椒产业发展，引进新技术发展地方特色农业，青花椒作为地方经济产业支柱，种植规模不断扩大。

目前，昭通市花椒产值达 10多亿元，昭通已经成为国内三大青花椒集散地之一。

目前，对花椒生物碱的研究报道主要集中于四川、重庆、陕西等地区所产花椒[8-9]，但是，由于各地地域不同导致的气候、雨量、日照和土质等很多自然因素存在很大差异，不同产地花椒生物碱含量有很大差异。

而昭通青花椒的种植面积虽不断扩大，但对其生物碱含量的系统研究却鲜有报道，缺乏理论数据的支撑，加上临近四川、重庆等花椒种植基地，使得昭通青花椒的市场竞争力较弱，品牌效应不高。

本次研究将对昭通地区鲁甸县、彝良县、永善县、大关县、盐津县、巧家县六个青花椒主要种植县所产青花椒生物碱进行提取测定，分析昭通地区不同海拔高度及地理环境所产青花椒的生物碱含量，并与其它产地青花椒进行对比，期望为昭通青花椒的质量评价提供基础数据，增加花椒用途，提升价格，带动花椒产区经济发展。

1 仪器与材料 1.1仪器●化学研究昭通青花椒总生物碱含量测定（昭通学院 化学化工学院， 云南 昭通 657000）摘　要：采用酸性70%乙醇溶液提取昭通市六县区所产青花椒总生物碱，以白屈菜红碱为标准品，在425nm 处测得标准曲线为y = 4.615x + 0.0044，r = 0.9994，该方法在0~0.2 mg.mL -1范围内生物碱浓度与吸光度线性关系良好。

采用酸性染料比色法测得昭通各县区青花椒中总生物碱含量在 0.343%~0.430%之间，该方法具有较好的精密度和稳定性，且操作简单，具有良好的可重复性。

该研究可为昭通青花椒的开发利用提供理论数据。

关键词：昭通青花椒； 酸性染料比色法； 总生物碱； 含量测定中图分类号：R284.2 文献标志码：A 文章编号：2095-7408（2018）05-0034-03熊汝琴， 李才涛电热鼓风干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司）；先行者电子分析天平；XFB-200家用粉碎机（吉首市中湘制药机械厂）；PHS-3C型数显酸度计（潍坊金水华禹信息科技有限公司）；HH-S型恒温水浴锅；UNIC7200可见分光光度计（尤尼柯上海仪器有限公司）；移液枪。

1.2材料与试剂：青花椒样品分别采于昭通市鲁甸县梭山镇，巧家县大寨乡，彝良县角奎镇，永善县黄华镇、盐津县庙坝镇、大关县高桥镇。

白屈菜红碱标准品（江苏永健医药科技有限公司）；碘化铋钾；磷酸二氢钠；磷酸氢二钠；无水乙醇；氯仿（均为分析纯）。

2 实验方法2.1 试液配制2.1.1 pH值=7.6的溴甲酚绿磷酸缓冲液的配制准确称取Na2HPO4 17.90g，溶解定容至250mL容量瓶中，其浓度为0.2mol/L，准确称取NaH2PO4 1.56g，溶解定容至50mL容量瓶中，其浓度为0.2mol/L。

分别取NaH2PO4溶液87mL，NaH2PO4溶液13mL，称取0.05g溴甲酚绿定容至100mL；即配制成pH值=7.6的溴甲酚绿磷酸缓冲液。

2.1.2 碘化铋钾溶液的配制准确称取碘化铋钾2.00g，加入20mL冰醋酸充分溶解后加入50mL水稀释即可。

2.1.3 标准溶液的配制准确称取5.00mg白屈菜红碱标准品，加无水乙醇定容至25mL，制得0.2mg/mL白屈菜红碱标准溶液。

2.2 标准曲线的建立准确吸取取1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL白屈菜红碱标准溶液于5支规格为25mL 的试管中，先加入一定量蒸馏水补至5mL，再加入2mL溴甲酚绿磷酸缓冲液，最后加氯仿10mL。

振荡2分钟后，分别倒入干燥洁净的分液漏斗中充分摇匀后静置1小时。

待溶液分层后，取氯仿层(下层)在425nm波长下测定吸光度值，建立标准曲线[10]。

2.3 样品处理将昭通六县区所产青花椒果皮干至恒重，分别用粉碎机粉碎后过60目筛，精确称取5.0g 粉末倒入具塞锥形瓶中，平行称三份，加70%乙醇溶液75mL，用稀盐酸溶液调节pH=3，室温浸提5小时后过滤。

用浓氨水将滤液调节至中性，分别取5mL滤液于5支试管中，再分别加入2mL溴甲酚绿磷酸缓冲液和10mL氯仿，振荡2分钟后，倒入分液漏斗中充分摇匀静置1小时。

取分液漏斗上层液1mL，加入1mL碘化铋钾溶液，若有橘红色沉淀生成则继续加氯仿至生物碱萃取完全，取氯仿层在425nm波长处测吸光度[11-12]。

3 结果与分析3. 1 标准曲线方程以白屈菜红碱质量浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得线性回归方程为y = 4.615x + 0.0044，线性相关系数r = 0.9994，说明白屈菜红碱质量浓度在0~0.2 mg/mL与吸光度呈良好的线性关系，该方程可用于青花椒总生物碱含量测定。

图1 生物碱测定标准曲线3.2 稳定性实验取制备好的供试溶液，按前述2.2测定方法，在样品液与显色剂反应完全后，分别在0.5h、1.0h、1.5h、2.0h、2.5h、3.0h连续测定吸光度，所测吸光度值的相对标准偏差RSD为1.56%，说明显色后的溶液在3.0h内稳定。

3.3 精密度实验取制备好的供试溶液，按前述2.2测定方法，重复测定5次，记录吸光度值，相对标准偏差RSD为0.32%，表明仪器精密度高。

3.4 重现性实验熊汝琴，李才涛昭通青花椒总生物碱含量测定第5期y=4.615x+0.0044r2=0.9989·35·第40卷2018年（总第180期）昭通学院学报分别称取鲁甸县所产青花椒样品粉末5份，每份5.0g，按2.3项方法处理后获得供试溶液，再按2.2项方法测定吸光度值，相对标准偏差RSD为1.35%，表明重复性高。

3.5 昭通青花椒总生物碱含量分别称取昭通六县区所产青花椒干燥果皮粉末5.0g，按前述方法提取其中总生物碱制备待测溶液，采用酸性染料比色法测定吸光度值，并根据标准曲线计算总生物碱含量，结果见表1。

表1 昭通六县区青花椒生物碱含量实验编号产地总生物碱含量1巧家县0.428%2大关县0.379%3盐津县0.343%4永善县0.430%5鲁甸县0.356%6彝良县0.422%从表中可见，昭通地区六县所产青花椒中总生物碱含量在0.343%~0.430%之间，没有显著差异。

4 小结与讨论本文以白屈菜红碱为标准品绘制标准曲线。

根据生物碱可与酸反应生成盐，使其在乙醇中的溶解度增大，用70%乙醇溶液并加稀盐酸调节pH为酸性，充分浸提过滤后，用浓氨水将滤液调节至中性，氯仿萃取生物碱后加溴甲酚绿磷酸缓冲液显色，于425nm波长处测吸光度。

实验结果表明，昭通市六县区所产青花椒中总生物碱含量在0.343%~0.430%之间，没有显著差异，本文为昭通青花椒的进一步开发利用提供理论依据。

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