蔗糖合成酶(分解方向;SS-I)活性检测试剂盒说明书 微量法

蔗糖合成酶（分解方向；SS-I）活性检测试剂盒说明书微量法

注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号:BC4315

规格:100T/48S

产品内容：

提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体8mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。临用前加入2.5mL试剂一充分溶解待用，用不完的试剂建议分装后，-20℃保存，避免反复冻融。

试剂三：液体8mL×1瓶，4℃避光保存。

标准品：粉剂×1支，20mg果糖；4℃保存。临用前加入1mL蒸馏水溶解，配成20mg/mL果糖溶液备用。4℃保存一周。

产品简介：

蔗糖合成酶（Sucrose Synthase，SS）是植物糖代谢过程的关键酶，负责催化蔗糖分解与合成的可逆反应，其分解活性可以催化蔗糖水解成UDPG与果糖，参与淀粉、纤维素和半纤维素的合成等代谢途径。

分解方向SS-I催化蔗糖和UDP生成果糖与UDPG，果糖与3,5–二硝基水杨酸反应生成在540nm有特征吸收峰的棕红色物质，通过测定540nm处吸光值变化可计算得SS-I活性。

试验中所需的仪器和试剂：

可见分光光度计/酶标仪、台式低温离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、EP管。

操作步骤：

一、粗酶液提取：

组织：按照质量（g）:提取液体积(mL)为1:5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，8000g，离心10min，取上清置于冰上待测。

二、测定步骤：

1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。

2、将20mg/mL标准液用蒸馏水稀释为8、6、5、4、

3、2、1mg/mL的标准溶液备用。

3、操作表：(在1.5mL离心管中操作)

试剂名称（µL）对照管测定管标准管空白管样本1010--标准溶液--10-

蒸馏水---10

试剂一404040

试剂二-40--

混匀，30℃水浴30min后，95℃水浴10min（盖紧，防止水分散失）。

试剂三50505050

混匀，95℃水浴5min（盖紧，防止水分散失），冷却至室温。

蒸馏水400400400400混匀，取200µL置于微量玻璃比色皿或96孔板中，测定540nm处吸光值A，分别记为A对照管，A 测定管，A标准管，A空白管。计算ΔA=A测定管-A对照管，ΔA标准=A标准管-A空白管。每个测定管需设一个对照管，标准曲线只需检测一次。

三、SS-I活性计算

1、标准曲线的绘制：

以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程

y=kx+b，将ΔA带入方程得到x（mg/mL）

2、SS-I活性的计算：

（1）按蛋白浓度计算

酶活定义：每mg蛋白每分钟分解蔗糖产生1µg果糖为1个酶活力单位。

SS-I酶活（U/mg prot）=x×V提取÷（V提取×Cpr）×103÷T=33.33x÷Cpr。

（2）按样本质量计算

酶活定义：每g样品每分钟分解蔗糖产生1µg果糖为1个酶活力单位。

SS-I酶活（U/g鲜重）=x×V提取×103÷W÷T=33.33x÷W。

V提取：提取液体积，1mL；103：单位换算系数，1mg=103µg；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL，蛋白浓度自行测定；W：样本质量，g；T：反应时间：30min。

注意事项

1.当A或ΔA超过1.5时，建议将样本用提取液稀释后再进行测定，计算公式中乘以稀释倍数。

2.95℃水浴时EP管盖紧，防止水分散失，待冷却至室温后，再进行下一步操作，避免液体飞溅烫伤以及

影响试验数据。