柱前衍生-高效液相色谱法测定丙戊酸钠血药浓度
柱前衍生化-HPLC法测定患者体内丙戊酸钠的血药浓度
２ １ 色谱条件 ．
色谱柱 ： ｔ ｓｓｍｍ ｔ ｌ（ ． Ｗａｅ ｙ ｅ Ｃ８ ４ ６ｍｍ× ５ ｒ ｙ ｒ ２０
ｍｍ， ｍ） 流动相为 甲醇一 （ ２： ８ ； ５ ； 水 ８ １ ） 检测波长 ：４ ｍ； ２ ８ｎ 流
速 ：． ｌ・ ｉ ～ ； 温 ：０ 。 进 样 量 １ ｌ Ｗａ ｒ Ｅ １０ ｍ ｍ ｎ 柱 ３℃ ０ ｔ。 ｘ ｔ ｓ ｍ— ｅ
丙 戊 酸 钠 分 子 结 构 中 缺 乏 特 征 的 紫 外 吸 收 ， 法 用 无
涡旋振荡器 （ 上海医科大学仪器厂 ） 医用高纯度 氮气 ， Ｙ Ｌ ； Ｅ Ｅ— Ａ ．２０氮吹仪 （ 京 ＲＫ Ｋ Ｋ Ｉ 司 ） Ｈ ＭＧ２ ０ 东 ＩＡ ＩＡ 公 ， Ｈ数 显恒 温水 浴锅 （ 江苏金坛市金城 国胜实 验仪器 厂 ） Ｔ Ｌ１Ｈ 高速离 心 ，Ｇ 一 ６
Ｄｅ ｅ ｍ ｉ ａ ｉ ｎ ｏ ｈ ｏ ｃ ｎ ｒ ｔｏ ｆ ｓ ｄ ｕ ａ ｐｒ ａ ｅ ｉ ａ ｉ ｎ ｓ ｔ ｒ ｎ ｔｏ ｆｔ ｅ ｃ ｎ ｅ ｔ ａ ｉ ｎ ｏ ｏ ｉ ｍ ｖ ｌ ｏ ｔ ｎ ｐ ｔｅ ｔ ’
ｓ ｒ ｍ ｙ ｐ ｅ ｏ ｕ ｎ ｄ ｒ ｖ ｔｚ ｔｏ ． ＰＬＣ ｅ ｈｏ ｅ ｕ ｂ ｒ ｃ ｌ ｍ ｅ ｉ ａ ｉａ ｉ ｎ Ｈ ｍ ｔ ｄ
ｒ ａ ｖ ｔｎａｄｄｖ ｔ ｎ Ｒ Ｄ）ｆｎｅ—ａ ｒ ｏｉｍ ｖｌｒａ ａ ｓ ｔ ｎ５ Ｃｏ ｃｕｓｏ Ｔ ｅ ｍｅｈｏ ｓｒ ｐｄ， ｃ ｕｒｔ ， ｅ ｓ． ｅ ｔ ｅｓ ｄｒ ｅｉ ｉ （ Ｓ ｏ ｔｒ ｙｆ ＇ ｄ ａ ｏｔ ｗ ｓｌ ｓ ｈ ％ ｌｉ ａ ａｏ ｉ ｄ ｏｓ ｕ ｐ ｅ ｅ ａ ｎ ｌ ｉｎ ｈ ｔ ｄ ｉ ａ ｉ ａ ｃ ａｅ ｓ ｎ ｉ
HPLC法测定丙戊酸的血药浓度
HPLC法测定丙戊酸的血药浓度目的：建立快速柱前衍生-高效液相色谱法测定丙戊酸（VPA）血药浓度的方法。
方法：选择ω-溴苯乙酮为衍生试剂，环己烷羧酸为内标，Hypersil ODS-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）为分析柱；流动相为甲醇-水（75∶25，V/V)，检测波长为248 nm，流速为1.0 ml/min。
血样经酸化后以二氯甲烷提取。
结果：内标环己烷羧酸和VPA的保留时间分别为8.0 min和12.8 min，线性范围为25～200 μg/ml，平均回收率为100.61%，日内、日间RSD均小于4.19%。
结论：本法快速、简便、准确，适合临床常规监测需要。
[Abstract] Objective: To establish a rapid pre-column derivatization-high-performance liquid chromatography determination of valproic acid (VPA) plasma method. Methods: ω-bromoacetophenone as a derivative reagent, cyclohexane carboxylic acid as the internal standard, Hypersil ODS-C18 column (250 mm×4.6 mm, 5μm) for the analytical column; mobile phase was methanol-water(75:25, V/V), detection wave length was 248 nm, flow rate was 1.0 ml/min. Blood extracted by dichloromethane after acidification. Results: The internal standard cyclohexane carboxylic acid and VPA respectively, the retention time of 8.0 min and 12.8 min, the linear range of 25-200 μg/ml, the average recovery was 100.61%, days, day RSD were less than 4.19%. Conclusion: The method is rapid, simple, accurate and suitable for routine monitoring of clinical need.[Key words] Pre-column derivatization; High-performance liquid chromatography; Sodium valproate; Blood drug concentration丙戊酸作為癫痫小发作、大发作和肌阵挛的首选药物之一，一直是临床医生常用的抗癫痫药物。
HPLC法测定丙戊酸钠血药浓度柱前衍生化条件的优化
２ Ｔ ｈ ｅ Ｆ ｉ ｒ ｓ ｔ Ａ ｆ ｉ ｌ ｉ ａ ｔ ｅ ｄ Ｈ ｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ ｏ ｆ Ｓ ｈ ｉ ｈ ｅ ｚ ｉ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ，Ｓ ｈ ｉ ｈ ｅ ｚ ｉ ，Ｘ ｉ ｎ ｊ ｉ ａ ｎ ｇ ８ ３ ２ ０ ０ ２ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
ｃ ｏ ｎ ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｄ ｅ ｒ ｉ ｖ ａ ｔ ｉ ｚ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｒ ｅ ａ ｇ ｅｎ ｔ ，ｃ ａ ｔ ａ ｌ ｙ ｓ ｔ ｃ ｏ ｎ ｃ ｅ ｎｔ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ，ｔ ｅ ｍｐｅ ｒ ａ ｔ ｕ ｒ ｅ ａ ｎｄ ｔ ｉ ｍｅ ｗａ ｓ ｕｓ ｅ ｄ ａ ｓ ｓ ｔ ｕｄ ｙ ｆ ａ ｃ ｔ ｏ ｒ ｓ ．Ｒｅ ｓ ｕｌ ｔ ｓ ｓ ｈ ｏ ｗｅ ｄ ｔ ｈａ ｔ
中图分 类号 ： Ｒ ９ ２ ７ ． ２ 文献标 志码 ： Ａ
Ｏｐ ｔ ｉ ｍｉ ｚ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｄ ｅ ｒ ｉ ｖ ａ ｔ ｉ ｚ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｃ ｏ ｎ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｂ ｙ ｏ ｒ ｔ ｈ ｏ ｇ ｏ ｎ ａ ｌ ｅ ｘ ｐ ｅ ｒ ｉ ｍｅ ｎ ｔ
Ａｂｓ ｔ ｒ ａｃ ｔ ： Ｉ ｎ ｏ ｒ ｄ ｅ ｒ ｔ ｏ ｏ ｐｔ ｉ ｍｉ ｚ ｅ ｔ Ｉ ｌ ｅ ｄｅ ｒ ｉ ｖ ａ ｔ ｉ ｚ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｃ ｏ ｎ ｄｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｗｈｅ ｎ ｔ ｈ ｅ Ｈ ＰＬ Ｃ ｍｅ ｔ ｈｏ ｄ ｗａ ｓ ａ ｄ ｏｐ ｔ ｅ ｄ ｔ ｏ ｍ ｏ ｎｉ ｔ ｏ ｉｎ ｒ ｇ ｔ ｈｅ ｓ ｅ ｒ ｎ ｍ
一种用于高效液相色谱仪检测丙戊酸血药浓度的衍生物的制备方法[
专利名称：一种用于高效液相色谱仪检测丙戊酸血药浓度的衍生物的制备方法
专利类型：发明专利
发明人：代伟,李兰兰,虎亚光,杨涛
申请号：CN202010320591.6
申请日：20200422
公开号：CN111337601A
公开日：
20200626
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种用于高效液相色谱仪检测丙戊酸血药浓度的衍生物的制备方法，是将催化剂、丙戊酸衍生化试剂置于密闭玻璃管中，采用一锅煮合成法制备得到的衍生物。
本发明提供的一种用于高效液相色谱仪检测丙戊酸血药浓度的衍生物的制备方法，利用超声化学原理，加速分子运动，促进衍生化反应，提高反应效率，缩短反应时间；采用“一锅煮”的方法，简化衍生化反应后处理步骤，无需蒸干或氮气吹干再加流动相溶解进样，可减少因挥发或氮气吹干导致的衍生化产物的损失；而采用衍生化结束后冰浴冷却吸取下层溶液直接进样，后处理方法简便，同时减少误差，为高效液相色谱法测定丙戊酸血药浓度提供一种高效、快捷、方便的衍生化方法。
申请人：代伟
地址：730050 甘肃省兰州市七里河区七里河北街89号(甘肃省妇幼保健院)
国籍：CN
代理机构：兰州锦知源专利代理事务所(普通合伙)
代理人：勾昌羽
更多信息请下载全文后查看。
高效液相色谱法测定丙戊酸血药浓度
高效液相色谱法测定丙戊酸血药浓度陈坚方维军吴芳张灯玲丁宗政!上海市松江区中心医院药剂科上海"#$%##&’摘要(目的)建立测定血浆中丙戊酸血药浓度的高效液相色谱法*方法)血浆用正己烷提取+经,-溴苯乙酮衍生后浓集进样+采用.//01234$5柱!$6#7789:%77+6;7&+以甲醇<水!5#<"#&为流动相+环己烷羧酸为内标物+在波长"95=7处测定*结果)丙戊酸的线性范围为$$:>$?$5$:##;@A7/+平均回收率大于B C D+日内和日间E F G H6D*结论)本法快速I简便I 准确+适用于丙戊酸血药浓度测定*’关键词(高效液相色谱法J丙戊酸J血药浓度’中图分类号(E B C$K:%J E B$C’文献标识码(.’文章编号($##C-99#%!"###-#"B%-#>L M N M O P Q R S N Q T RT U V S W X O T Q Y S Y Q Z Q R[M O\P]^_Q‘_X M O U T O P S R Y M W Q a\Q Z Y_O T P S N T‘b O S X_^431=c d e=+f e=@g1d h i=+gif e=@+j k l m!n j o l p k q j r k s tu v l p q l w x+y v l r z v l{y s r z|{l r z}j r k j p~s!o{-k l m+y v l r z v l{"#$%##&’"#$%&"’%("())*+,101-7d=1.e//-+d2e2d,d=01-i7123d@3/1-3+-7e=21/d4i d,23-+7e0+@-e/32 !5674&8)9%:;L$)422/+31<e=12e-1+<2/d2e2d,=e001/1201,e0e=d=01-=e/00e=,e-,8.>?,10120+-!"95=7&e=,4$52+/i7==e0i01,8F1-i70e7//1!#:$7/&=e01<0-e201,=d03"7/e210d2=-31<e=18?e/-/-+d2e2d,d=+-@e=d2/e21-=e0,1-d.1,12e,,d=@d=0+,-1-+7+e210+/31=+=18*31+-@e=d2/e21-=e01.e/+--e01,0+,-2=100i=,1-@"00-1e78&9$A B%$)*31/d=1e-d02+3.e//-+d2e2d,=e0$$:>$C$5$:#;@A7/8*31 -1/e0d.100e=,e-,,1.d e0d+=!E F G&+3d=01--,e2e=,d=0-e-,e23+-.e//-+d2e2d,=e0/10003e=6D8*311<-0-e20d+=-12+.1-2=e07+-103e=B C D8*31,10120d+=/d7d00d=01-i7=1-1#:6;@A7/3+-.e//-+d2e2d,8’;D’B A$(;D)*317103+,d0e22i-e01e=,01=0d0d.1+0i d0e1/13+-031-e/1i0d2,-i@7+=d0+-d=@!*G E&e=, /3e-7e2+F d=10d200i,2+3.e//-+d2e2d,8’G9HI;&L$(3d@3/1-3+-7e=21/d4i d,23-+7e0+@-e/32J.e//-+d2e2d,J01-i72+=21=0-e0d+=丙戊酸!.e//-+d2e2d,&在临床上常用于抗癫治疗+由于药物的剂量和血药浓度间的个体差异很大*因此+在长期用药或增减药物剂量时对体内血药浓度进行监测显得十分必要*由于丙戊酸在紫外区无特征性吸收+故有关丙戊酸的血药浓度测定方法多为气相色谱法或酶免疫法*虽有高效液相色谱法的报道+但都各有不同J$+"K*本法采用,-溴苯乙酮将丙戊酸衍生化+生成苯甲酰甲基丙戊酸+在紫外条件下+用5674法测定血清中丙戊酸的浓度*此法快速I简便I准确+适用于丙戊酸临床血药浓度监测* L材料与方法L:L仪器M N@*E N@>""型高效液相色谱仪J M N@*E N@>>"型可变紫外检测器J M N@*E N@ G96#数据处理系统J5#-"离心沉淀器!上海手术器械厂&J5-B"微型混合器!西巴斯生物技术开发公司&J电热恒温水浴锅!上海医疗器械厂&*L:O药品和试剂丙戊酸标准品!湖南湘中制药有限公司+纯度B B:6D以上&J环己烷羧酸!f/i F e2317d1.P&J,-溴苯乙酮I正己烷I乙腈I硫酸I三乙胺I氨水均为分析纯+甲醇为色谱纯*L:Q色谱条件.//01234$5柱!$6#7789:%77+ 6;7&+流动相为甲醇<水!5#<"#&+检测波长"95 =7+流速$:#7/A7d=+灵敏度#:#6.>f F+进样量"#;/*内标为环己烷羧酸*在本实验条件+两种物质R%B"R中国临床药学杂志45S@T F T c N>E@.7N f47S@S4.765.E E.4U"###年第B卷第6期医生在线的色谱峰分离良好!血浆内源性物质峰无干扰"内标保留时间为#$%&’()!苯甲酰甲基丙戊酸保留时间为*$*+’(),图%-"[#-e __f _g G )g,O J H ’E-h G i )_g G )g,O J H ’E -j f g G k f U lU m n f,o-j p q,o-%%$&%%%$F +rD $&D +N $N &rF $*D F $*D +D $#D N N $F +rD $*%+*$#K rD $*N D $N D %N %$D D%*+$%#r&$&++N $+N r%$N *%$N *表Q 丙戊酸的日内和日间精密度‘7a Q s ?847t >7c7?>0?8@4t >7c<4@=0A 05?59:7;<450=7=0>,d[#-e __f _g G )g ,O J H ’E -u )n U m B _m l h G i )_g G )g,O J H ’E -j p q,o-u )n f U B _m l h G i )_g G )g,O J H ’E -j p q,o-%%$&%%D $N N rD $M %&$*M %D $K #rD $&*&$M *+D $#D +%$N D rF $F &F $M &+%$D +rF $M D F $K M %N %$D D%*N $N D rF $N #%$#+%*N $&+r#$F +F $+KQ $Q 专一性考虑到临床检测及药物动力学研究的干扰情况!选择了几种可能合用的药物进样!结果扑米酮L 地西泮L 苯巴比妥L 苯妥英钠和卡马西平在该色谱条件下均不出峰!可见以上药物对本法测定无干扰"Q $v 临床应用w 病例%x 男!#*l !癫病史F D m "目前用药情况T 丙戊酸钠H 丙戊酸缓释片D $#J !y _!卡马西平片D $%J !n (_"于清晨服药前抽血!在本色谱条件下!测得丙戊酸的谷药浓度为F %$F +O J H ’E!未见有卡马西平的干扰!同时在另一色谱条件下!测得卡马西平的谷药浓度为K $K M O J H ’E "分析两药合用!卡马西平可增加肝脏代谢!导致丙戊酸的谷药浓度低于治疗范围!但由于卡马西平的谷药浓度在治疗范围内!故患者的症状仍得以控制"w 病例F x 女!*l !%m 前诊断为癫"目前用药情况T 丙戊酸钠片D $&J !z (_"于清晨服药前抽血!在本色谱条件下!测得丙戊酸的谷药浓度为M +$*+O JH {*+F {中国临床药学杂志|}u W ~p ~!"#j W e I "h|I u W u |e I $}e j %e |&F D D D 年第+卷第#期医生在线!"#接近治疗范围#经与临床医师沟通#测定结果与临床症状基本相符$%讨论有文献&’(报道血清样品用正戊烷提取#但实际操作中发现#当加入正戊烷进行振荡提取时#极易发生乳化凝固现象#经过反复测试#改用正己烷提取后#克服了上述的缺点#提高了分离效果$在衍生化试剂使用方面#有文献&)#*(报道#用对溴代苯酰甲基澳和+,溴,对,硝基苯乙酮#而本法采用的-,溴苯乙酮则具有价廉.易得的特点#并且为衍生化反应提供了多种选择$国内有报道&’(的检测波长为+/*和+0/1!#但经紫外扫描后我们发现苯甲酰甲基丙戊酸的紫外最大吸收波长应为+*21!$国内外所报道&’#/(的采用荧光检测的高效液相色谱法#虽然检测灵敏度高#但需有荧光检测器#检测条件要求较高#一般医院难以开展$而本法所采用的条件简便.价廉#并且灵敏度.精密度.准确性及专一性均符合测试要求#适用于丙戊酸的临床治疗药物浓度监测$3参考文献4&)(郝润喜#闫彩萍#刘玉玺5高效液相色谱,柱前衍生法测定丙戊酸镁血药浓度5药物分析杂志#)667#)78’9:)7+&+(郁健#王广基#杜春波#等5高效液相色谱法测定人血清中丙戊酸钠的含量5中国药科大学学报#)662#+68)9:*/&’(黄希顺#唐敦立5丙戊酸类药物的药理与临床5郑州:河南医科大学出版社#)667#)/*;)/0&*(胡纪原#谢晓梅#洪铭范5等5<=>=?法结合紫外吸收衍生法测定血清丙戊酸浓度5安徽医学#)667#)2809:00&/(<@A B#C@!D A@E#F1G D H C#I J K L5M H N H A!O1@N O G1G P Q@"R A G O S@S O T O1U D!@1V H A D!W X U O Y U,R H A P G A!@1S H"O Z D O T S U A G!@N G Y A@R U X [O N UP"D G A H V S H1S H T H N H S N O G15\O G"=U@A!\D""#)666#++869:67/8+]]],]/,)2收稿9;26+;中国临床药学杂志?<F<=B=>?@><d A?B?A F<F?d A=<d>Ed?C+]]]年第6卷第/期。
HPLC法测定丙戊酸钠血药浓度柱前衍生化条件的优化
HPLC法测定丙戊酸钠血药浓度柱前衍生化条件的优化胡雪飞;张永军;魏丽红;陈文【摘要】为了研究HPLC法测定丙戊酸钠血药浓度衍生时的最佳衍生条件,探讨不同衍生条件对血药浓度的影响,本实验采用L9(34)正交实验设计,以衍生试剂浓度、催化剂浓度、衍生温度和衍生时间为考察因素,确定最佳衍生条件.结果显示,A2B2C3D1为最佳衍生条件,即衍生试剂为2.0 mg/mL,催化剂浓度为20%,衍生温度为60℃,衍生时间5 min为最佳衍生条件.不同的衍生条件对测定结果有显著影响(P<0.05),且衍生反应的主次因素为衍生试剂浓度>衍生温度>催化剂浓度>衍生时间.由此可知,优化后的衍生条件方法回收率高,节约时间和成本,简便可行.%In order to optimize the derivatization conditions when the HPLC method was adopted to monitoring the serum concentration of sodium valproate, and investigate the influence of different derivatization conditions on serum concentration of sodium valproate, L9 (34) orthogonal experimental design was used to determine the optimal derivatization conditions, the concentration of derivatization reagent, catalyst concentration, temperature and time was used as study factors. Results showed that A2B2C3D1 combination was the optimal derivation conditions, so the best derivation condition was that the concentration of derivatization reagent was 2.0 mg/mL, the catalyst concentration was 20%, the reaction temperature was 60℃, and time was 5 min. Different derivatization conditions had a significant effect on the determination results (P< 0.05). The primary and secondary factors for the derivatization reaction were derived reagent concentration > derived temperature >catalyst concentration >derivatization time. These findings in our research showed that the optimized derivation condition method had high recovery rate, saves time and cost, and simple and feasible.【期刊名称】《石河子大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2017(035)002【总页数】6页(P176-181)【关键词】衍生条件;丙戊酸钠;血药浓度;正交实验;优化【作者】胡雪飞;张永军;魏丽红;陈文【作者单位】石河子大学药学院,新疆石河子 832002;石河子大学医学院第一附属医院,新疆石河子 832002;石河子大学医学院第一附属医院,新疆石河子 832002;石河子大学药学院,新疆石河子 832002【正文语种】中文【中图分类】R927.2丙戊酸（valproic acid，VPA）钠是临床上常用的一线抗癫痫药，是癫痫综合征、大发作、失神性发作、肌阵挛性发作的首选。
柱前衍生化-HPLC法测定患者体内丙戊酸钠的血药浓度
柱前衍生化-HPLC法测定患者体内丙戊酸钠的血药浓度杨春兰;方会慧;夏泉;许杜娟;周农【摘要】Aim To determine sodium valproate in patients ' serum by high performance liquid chromatography( HPLC) . Methods Serum sample was extracted with n-Hexane. Cyclohexanecarboxylic acid and 2-Bromoacetophenone were selected as an internal standard and derivative reagent respectively. The analytical column was Symmetry C18 (4. 6 mm × 250 mm ,5 μm) with the temperature at 30℃ . The detection wavelength was 248 nm and the flow rate was 1. 0 ml · min -1. Column temperature 30 ℃ . The mobile phase consisted of methanol-water (82 ∶ 18). Results The linear range of sodium valproate was 12. 5 ～150 mg · L-1 ,The mean recovery was 98. 74％ . The relative standard deviation( RSD) of inter-day for sodium valproate was less than 5％ . Conclusion The method is rapid , accurate.sensitive and suitable for clinical routine monitoring for sodium valproate.%目的建立反相高效液相色谱法测定人血清中丙戊酸钠血药浓度.方法血清用环己烷提取,以环已烷羧酸为内标,2-溴苯乙酮为衍生化试剂,用高效液相色谱法测定丙戊酸钠血药浓度.采用Symmetr y C18 (4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱;流动相为甲醇-水(82:18);检测波长为248 nm;流速为1.0 ml·min-1;柱温:30℃.结果血清中丙戊酸钠线性范围为12.5～150 mg·L-1,平均回收率98.74%,日内RSD<5%.结论该法快速、灵敏、准确,适用于临床常规监测需要.【期刊名称】《安徽医药》【年(卷),期】2011(015)011【总页数】3页(P1352-1354)【关键词】丙戊酸钠;柱前衍生化;高效液相色谱法;血药浓度【作者】杨春兰;方会慧;夏泉;许杜娟;周农【作者单位】安徽医科大学第一附属医院药剂科,国家中医药管理局中药化学三级实验室;安徽医科大学第一附属医院药剂科,国家中医药管理局中药化学三级实验室;安徽医科大学第一附属医院药剂科,国家中医药管理局中药化学三级实验室;安徽医科大学第一附属医院药剂科,国家中医药管理局中药化学三级实验室;安徽医科大学第一附属医院神经内科,安徽,合肥,230022【正文语种】中文丙戊酸钠(sodium valproate，VPA)又名二丙基乙酸钠，是治疗癫痫病全身性强直、阵挛性发作的首选药物，对失神发作和肌阵挛性发作效果较好，也可用于治疗部分性发作［1］。
高效液相色谱法测定人血清中丙戊酸钠含量
最低 检 出质 量 浓 度 为 １６ ｇ ｍ ， 均 回收 率为 ９ ．７ ， ．４￣ ／ Ｌ 平 ８ ３ ％ 其他 常 用抗 癫 痫 药物 不 干扰 测 定 ， 分析 范 围 内具有 良好 的 线性 关 系。 在 结论 该 方
丙戊 酸钠又名二丙 基乙酸钠 ， 至今仍 是临床上使用 较多 的抗
癫痫 药 物 。 由于 丙 戊 酸 钠 的 治疗 剂量 范 围 窄 ， 效 及 毒 性 与 血 药 浓 疗 度 关 系密 切 ， 患 者 间个 体 差 异 很 大 ， 且 因此 对 其 体 内血 药 浓 度 进 行 监 测 十分 必 要 。 丙戊 酸钠 分 子结 构 中缺 乏 有 效 的 紫外 吸 收 ， 用 因 采 紫外 检 测 的高 效 液 相 色 谱 （ Ｐ Ｃ 法 测 定 其 血 药 浓 度 时 灵 敏 度 较 ＨＬ） 低 且 干 扰 因素 多 ， 以 大 多 采 用 荧 光 检 测 的 Ｈ Ｌ 所 Ｐ Ｃ法 ， 检 测 条 件 但 要 求 比较 高 。 者 利 用 丙 戊 酸 钠 与 溴 苯 乙酮 在 一 定 条 件 下 衍 生 化 笔 后 具 紫 外 吸 收 的特 点 ， 立 了 比较 简 单 的紫 外 检 测 的 Ｈ Ｌ 建 Ｐ Ｃ法 ， 并 常 规监 测 了 ２ 例 癫 痫 患 者 ， 报 道 如 下 。 ０多 现
２ ０ 第 ｌ 第 ６期 ０９年 ８卷
药物 研究
高效液相色 谱法测定人血清 中丙戊酸钠 含量
展 翔 徐 ，
柱前衍生化-HPLC检测丙戊酸钠血清浓度方法验证
柱前衍生化-HPLC检测丙戊酸钠血清浓度方法验证曲秀梅;雷力力;方芳;李冬;张志国【摘要】@@ 丙戊酸钠为一线广谱抗癫痫药物,因分子结构中没有能够产生紫外光谱吸收的结构,用一般的HPLC法难于直接测定,文献报道多用毛细管气相色谱法、酶联免疫法、荧光偏振免疫法等.目前应用较多的是"柱前衍生化高效液相色谱法检测丙戊酸钠的血清含量",为了开展丙戊酸钠临床血药浓度监测,对文献[1,2]报道的柱前衍生化-高效液相色谱检测方法进行了综合,经过改进的方法检测结果稳定、准确,可以投入临床使用.【期刊名称】《黑龙江医药科学》【年(卷),期】2010(033)005【总页数】2页(P75-76)【关键词】丙戊酸钠;血药浓度;HPLC【作者】曲秀梅;雷力力;方芳;李冬;张志国【作者单位】佳木斯大学附属第一医院,黑龙江,佳木斯,154003【正文语种】中文【中图分类】R927丙戊酸钠为一线广谱抗癫痫药物,因分子结构中没有能够产生紫外光谱吸收的结构,用一般的 HPLC法难于直接测定,文献报道多用毛细管气相色谱法、酶联免疫法、荧光偏振免疫法等。
目前应用较多的是“柱前衍生化高效液相色谱法检测丙戊酸钠的血清含量”,为了开展丙戊酸钠临床血药浓度监测,对文献[1,2]报道的柱前衍生化-高效液相色谱检测方法进行了综合,经过改进的方法检测结果稳定、准确,可以投入临床使用。
1 仪器及试剂P230Ⅱ高效液相色谱仪(大连伊利特分析仪器仪器有限公司);XW-80涡旋混合器(上海精科实业有限公司);岛津AUW220D十万分之一天平。
色谱纯甲醇：天津凯通化学试剂有限公司生产;丙戊酸钠对照品 (湖南省湘中制药有限公司提供,含量：99.8%,批号 090405)环己烷羧酸 (美国 Sigma公司 ,批号：08265PD,);ω-溴苯乙酮(国药集团化学试剂有限公司,批号：20090212);其它试剂均为分析纯。
2 方法及结果2.1 色谱条件色谱柱：Hypersil ODS2C18(4.6mm× 250mm,5μm);柱温：30℃;检测波长：248nm;流动相：甲醇：水 (75：25);流速：1.0mL˙min-1;进样量：15 μL。
高效液相色谱法测定丙戊酸钠的血药浓度
高效液相色谱法测定丙戊酸钠的血药浓度胡琳【期刊名称】《中国药业》【年(卷),期】2013(22)12【摘要】Objectlve To establish the HPLC method for the serum concentration determination of valproic acid(VPA)and to guide the individualized medication regimen by analying the typical cases.Methods Serum was extracted with hexane.With α-bromoacetophenone as the derivative reagent and cyclohexane carboxylic acid as the internal standard,the Zorbbx SB-C18 column(250 mm×4.6 mm,5 μm) was adopted as the analytical column;the mobile phase was methanol-water(79:21,V/ V),the detection wave length was set at 248 nm,the flow rate was 1.0mL/min.The above mentioned method was used to determine the dozens of cases using sodium valproate.From them,3 typical cases were selected for discussing the influencing factors of the serum sodium valproate concentration and designing the individualized drug administration regimen.Results The retention time of internal standard cyclohexane carboxy acid and VPA was 6.3 min and 9.3 min respectively,the linear range was 12.5-200 μg/mL,the ratio of the sodium valproate peak height and the internal standard peak height showed good linear relation with the concentration(r=0.999 9).The average recovery rate was 99.98％,RSD of intra-day and inter-day was less than 5.66％.At the same time,during theprocess of the practical measurement of serum drug concentrations,it was founded that the same dosage of sodium valproate could produce a larger gap of the blood drug concentration in different individuals.Conclusion This method is rapid,simple,accurate and suitable for serum sodium valproate concentration monitoring.In order to adjust the individualized dosing regimen,the serum sodium valproate concentration monitoring is necessary.%目的建立测定血清中丙戊酸(VPA)血药浓度的高效液相色谱法.方法血清用正己烷提取,α-溴苯乙酮为衍生试剂,环己烷羧酸为内标,采用Zorbbx SBC18柱(250 mm×4.6 mm,5μm)为分析柱；流动相为甲醇-水(79∶21,V/V),检测波长为248 nm,流速为1.0 mL/min,设计个体化给药方案.结果内标环己烷羧酸和丙戊酸的保留时间分别为6.3 min和9.3 min,质量浓度线性范围为12.5 ～ 200μg/mL(r =0.999 9),平均回收率为99.98％,日内、日间RSD均小于5.66％.结论该法快速、简单、准确性好,适用于临床进行丙戊酸的血药浓度监测.【总页数】3页(P16-18)【作者】胡琳【作者单位】浙江省人民医院,浙江杭州 310014【正文语种】中文【中图分类】R969.1;R969.3;R971+.6【相关文献】1.HPLC法测定患者丙戊酸钠血药浓度 [J], 段自皞;王法财;沈炳香;聂松柳2.均相酶扩大免疫分析法与高效液相色谱法测定癫痫患儿丙戊酸钠血药浓度比较研究 [J], 杨艳;张婉婷;姚晓东;苟小艳3.柱前衍生-高效液相色谱法测定丙戊酸钠血药浓度 [J], 周春华;张志清;李飞高;亢泽坤;李敬瑄;张雪宁4.HPLC法测定丙戊酸钠血药浓度柱前衍生化条件的优化 [J], 胡雪飞;张永军;魏丽红;陈文5.高效液相色谱法同时测定癫痫患儿血清中丙戊酸钠和2-丙基-4-戊烯酸血药浓度[J], 李赛;苏凌璎因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
高效液相色谱法测定丙戊酸血浓度
高效液相色谱法测定丙戊酸血浓度
陈淇芳;胡朝欣
【期刊名称】《儿科药学》
【年(卷),期】1999(005)003
【摘要】本文建立了采用ＢｒＭＭＣ将丙戊酸转化为可紫外检测的酯，再经ＲＰ－ＨＰＬＣ测定的丙戊酸血浓度测定方法。
在１５－２００ｕｇ／ｍｌ范围内，峰高比与浓度呈良好的线性关系。
ｒ＝０．９９９１；平均回收率为１０１．２％，方法准确、灵敏、选择性强、重现性好，操作简便快速，应用于３４例患者的治疗药物监测。
取得良好的临床效果。
本法适于临床研究与应用。
【总页数】3页(P23-25)
【作者】陈淇芳;胡朝欣
【作者单位】青岛市儿科临床研究所临床药理室;青岛市儿科临床研究所临床药理室
【正文语种】中文
【中图分类】R971.6
【相关文献】
1.高效液相色谱法测定环孢素A的全血浓度 [J], 钱薇;肖大伟;刘羽
2.高效液相色谱-柱前衍生化法测定丙戊酸血浓度 [J], 沈芸;叶美娣
3.反相高效液相色谱法测定多索茶碱血浓度 [J], 林玳;郑怀宇
4.单克隆荧光偏振免疫法和高效液相色谱法测定环孢素A全血浓度的相关性 [J], 戴志凌;帅莉;苏琴
5.高效液相色谱（HPLC）法测定环孢素A全血浓度及其控制标准 [J], 李秀萍;尚丽红
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
高效液相色谱法测定人体外周血丙戊酸钠浓度
高效液相色谱法测定人体外周血丙戊酸钠浓度摘要】目的：建立人体外周血中丙戊酸钠浓度检测方法。
方法：色谱柱Pronaos EP-C18柱，流动相：乙腈-水（70:30），流速：1.0mL?min-1，进样量为20μL，柱温35℃，检测波长λ=248nm。
结果：本法在丙戊酸钠浓度（X）为11.5～115μg?mL-1(r=0.9999)内线性关系良好。
三种不同浓度（11.5、46.0、115.0?g?mL-1）相对回收率分别为98.26%、99.35%、99.47%，精密度的RSD小于5%。
结论此法样本需求量少，血浆处理方法简单，具有专一性，适用于临床丙戊酸钠血药浓度监测。
【关键词】丙戊酸钠；血药浓度检测；高效液相色谱【中图分类号】R446.112 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2018）13-0376-02丙戊酸钠为广谱抗癫痫药，其抗痫谱广、疗效高，是较理想的抗癫痫药物。
近年来，临床用于治疗偏头痛、原发性三叉神经痛、迟发性运动障碍等也有较好疗效[1-2]，但其在临床上的治疗指数低，安全有效血药浓度范围较窄，而且服药周期长，容易发生不良反应[3]。
患者长期服用丙戊酸钠治疗的过程中，密切注意影响丙戊酸钠血药浓度波动的因素，必须综合考虑各方面的因素，实行个体化给药，以血药浓度为依据，而确保患者的用药安全。
本法通过优化血浆中丙戊酸钠提取方法，减少干扰因素，通过HPLC法测定肿瘤患者血浆中丙戊酸钠的含量，其专属性强、结果可靠，为临床使用丙戊酸钠做好药学监护提供了依据。
1.仪器与试药LC100高效液相色谱仪（上海伍丰科学仪器有限公司）；BSM电子天平（上海卓精电子科技有限公司），HX-03超声波清洗器（武汉恒信世纪科技有限公司）。
丙戊酸钠对照品由中国食品药品生物制品检定研究所提供（批号：100963-201302）；乙腈为色谱纯；水为娃哈哈纯净水；正己烷、甲醇、三乙胺均为分析纯；空白血浆由血库供应。
柱前衍生HPLC法测定丙戊酸钠的血药浓度及其临床应用
例数
9 12 2
百分率 / %
39. 1 8. 7 52. 2
3 讨论 3. 1 色谱条件的选择 本法采用 2 溴苯乙酮为衍生化试剂 , 在三乙胺的催化下 , 反应完全彻底 ; 经试验发现 VPA 在波长 262 nm 处吸收最强 ; 流动相选择甲醇 ∶ 水 ( 65 ∶ 35) , 基线稳 定 ,流动相不需使用缓冲液等盐类物质 ,有利于保护色谱柱 ; 萃取选用二氯甲烷 、 二氯甲烷 /乙醚 、 正戊烷 、 正己烷 [ 4, 5 ] ,经反 复试改 ,用正戊烷提取药物峰形理想 ,分离效果好 ,柱效高 ,正 戊烷虽然沸点很低 ,但在常温下 ,其挥发性对吸取操作无影响 , 水浴温度高于其沸点 ,因此水浴过程中 ,正戊烷逐渐挥发至干 或近干 ,部分样品有微量液体残留 ,所以最后仍需氮气吹干 。 3. 2 临床监测 进行临床应用的过程中 ,抗癫痫药大都有不 良反应 ,在剂量不当或药物相互作用而至血药浓度过高时尤 易发生 。因此 ,在整个治疗期内宜高度警惕 ,结合血药浓度监 测结果来随时调整剂量 [ 6, 7 ] 。柱前衍生 HPLC 法测定 VPA 血 药浓度 ,方法简便快捷 ,精密度好 ,回收率高 , 试验成本低 , 适 用于丙戊酸钠的临床血药浓度监测. 53 99. 41 UV 法 93. 89 96. 12 98. 06
甲氧苄啶含量 [ J ]. 中国药业 , 2008, 17 ( 21) : 29 - 30.
[6] 严宏凤 . UV 法测定复方磺胺甲噁唑片中磺胺甲噁唑和甲氧苄
啶的含量 [ J ]. 中兽医医药杂志 , 2008, 27 ( 3) : 46.
有 2 例 ,占 8. 7% ,患者均为自行超量服用出现了头晕 、 乏力 、 震颤 、 共济失调等不良反应 ,停药一周后中毒症状消失 ; 在有 效范围内的有 12 例 ,占 52. 2% 。结果见表 3。
高效液相色谱仪测定丙戊酸的方法探讨
０．１５ｍｇ·ｍＬ一，放 置 于 ４℃ 冰箱 中 备 用 。 ２．２．３ 衍 生化试剂的配制 ：精密称量 Ｗ一溴苯乙酬 ０．２５００ｇ放 置于 ２５ｍＬ容培瓶 中，用 少 量 乙腈 溶 解 ，然 后 加 乙腈 定 容 到 ２５ｍＬ，摇 匀 ，配 置 成 浓 度 为 １０ｍｇ·ｍＬ 的 Ｗ一溴 苯 乙酮 乙腈 溶 液 ，放 置于 ４℃冰箱 中备用 。 ２．３ 样品处理及 ＨＰＬＣ分 析 将 血样 离心 （４５００ｒ·ｒａｉｎ ） 分离出血清 ，精 密 吸 取血 清 ＩＯ０￣Ｌ，加 内标 溶 液 ５０１ｘＬ，再 加 ５０ｔ．ＬＬ ０．２ｍｏｌ·Ｌ 氨 水 、１００￣Ｌ １．０ｍｏｌ·１ 硫 酸 、２ｍＬ乙 醚 ， 涡旋革 取 １０ｒａｉｎ，５０００ｒ·ｒａｉｎ～．离心 ５ｎｌｉｒｌ。取 Ｌ层 乙醚 层 ｌｍＬ于具塞玻璃 管 中，加 １０ｔｘＬ三 乙胺 ，ｌＯｐ．Ｌ澳 苯 乙酮 ，涡旋 ２０ｓ，盖 上 塞 反 应 １０ｒ ａｉｎ，去 塞 ５５℃ 水 浴 反 嘘挥 乙 醚 ｌＯｍｉｎ。 加 １００１ｘＬ甲醇 ，涡旋 ｌｍｉｎ进 样。在上 述色 谱条件下 测定 ，记 录 内 标 及 ＶＰＡ衍 生 物 的峰 面 积 。 ３ 结 果 ３．１ ＨＰＬＣ法 色 谱 行 为 在 上 述 所 定 实 验 条 件 卜，样 及 空 白血清的色谱图 （见 图 １）。由 １町 ，ｍ样 ｒ｝Ｉ内标峰 和样 品 峰 能 与 其 他 成 分 的 色 谱峰 很 好 的分 离 ．他 们 的 保 留 ｝ｌ寸问 分 别 为 １０．２７０ｎｆ ｉｎ、１７．８４３ｎｆ ｉｎ。
及 ＶＰＡ 衍 生 物 的 保 留 时 间 分 别 为 １０ ２７０ｒ ａｉｎ、ｌ７．８４３ｒ ａｉｎ，标 准 曲 线 回 归 方 程 为 Ｙ＝７４．３６５Ｘ 一９．６０２８，Ｒ ＝０．９９７５，丙 戊 酸 钠 浓 度 在 １１．７２— １４０．６４ｐｇ·ｍＬ 范 围内内标峰 和样品峰 的峰 面积 比与丙戊酸 钠浓度 呈现 良好线性 关 系、结 论 此 方法快速准确 、经济有效 ，适合 用于 丙戊酸 钠 的 血 药浓 度 监 测
柱前衍生-HPLC法测定人血清中丙戊酸钠的方法改进
动相为乙腈一 ７ ：５ ｖ．） 检测波长 ２ ４ｒ 流速 １０ ｍＺ ｉ； 温 ４ 水（ ５２ ，／ ； ５ ｍ； ｉ ． ｌｍｎ 柱 ｏ℃。结果
Ｖ Ａ的血清浓 Ｐ
度在 ２ ． ２０ ０ｍ ／ ５ ０— ５ ． ｇＬ范围内线性关系 良好 （ ｒ＝０ ９ ９ ）平均 回收率为（０ ． ３± ． ３ ％ ， ．９ １ ， １０ ４ ０７ ） 日内、 日间 Ｒ Ｄ均 ＜５ ；２ Ｓ ％ １３例服用 Ｖ Ａ 的癫痫患者应用本法监测 ， ５ ． Ｐ 有 ３７％的患者血 药浓度在有效浓
荣
选择对 溴
建立快速柱前衍生－ Ｐ Ｃ法测 定人血清 中丙戊 酸钠 （ Ｐ 。方法 ＨＬ Ｖ Ａ）
苯 甲酰 甲基 溴 为衍 生化 试 剂 ， 酸为 内标 ， ｙｅｓ Ｄ 。 ４ ６ｍ × ２０ ｍ ５ ｍ） 分 析 柱 ； 壬 Ｈ ｐ ｒｌ ＳＣ （ ． ｍ ｉＢ ０ ｍ， 为 流
・
４１ ・ ８
东南国防医药２１ ００年
１ 卷箜 塑 些 ２
！
！ 竺 ！ ！
！！ ：！ 墨 ！ ！！ ： 望： ： ：
・
论
柱 前衍 生． Ｐ Ｃ法测定 人血 清 中 ＨＬ 丙 戊酸钠 的方 法 改进
费 燕 ， 秀丽 ， 林 胡永狮 ， 张
［ 摘要 ］ 目的
ａ ｄ ｂ ｔ ｅ ａ ｅ ｅａ ｌ ｅ ｓ ｔａ ． ｈ ｔｏ ａ ｓ ｄ ｆｒｍｏ ｉ ｒｎ ｅ ｌ ｓ ｄ ｕ ｖ ｐ ｏ ｔ ｏ ｃ ｎ ｎ ｅｗｅ ｎ ｄ ｙ ｗ ｒ ｌ ｌｓ ｈ ｎ５％ Ｔ ｅ ｍｅｈ ｄ ｗ ｓ ｕ ｅ ｎｔｉ ｇ ｓ ／ ｍ ｏ ｉ ｍ ａ ｒ ａｅ ｃ ｎ ｅ — ｏ ｏ ％ ｌ
ｈ ｎ ａ ｃｌ ｒｔ ｎ ｅ ｖ ｓ ｂ ｉｅ ｈ ｏ ｃ ｎ ａ ｏ ａ ｇ ｆ ． ２ ０ ０ ｍ ／ ｒ ０ ９ ９ ） Ｔ ｅｌ ｅ ｒ ａｉ ａ ｏ ｒｅ ａ ｏ ｔ ｎ ｄｉ ｔｅｃ ｎ ｅ ｔ ｔ ｎｒｎ ｅｏ ５ ０～ ５ ． ｇ Ｌ （ ＝ ． ９ １ ． ｉ ｂ ｉ ｕ ｗ ａ ｎ ｒｉ ２
柱前衍生超高效液相色谱法测定人血浆中丙戊酸钠的含量
柱前衍生超高效液相色谱法测定人血浆中丙戊酸钠的含量吴雪艳;庄奕筠;罗晓梅【期刊名称】《海峡药学》【年(卷),期】2015(027)010【摘要】目的建立超高效液相色谱法测定人血浆中丙戊酸钠浓度的方法 . 方法将血样酸化,采用正戊烷提取,以环己烷羧酸为内标,a-溴苯乙酮为衍生化试剂,采用超高效液相色谱法测定丙戊酸钠血药浓度. 采用 Shim-pack XR-ODS Ⅲ柱(1.6μm,75L ×2.0),流动相为甲醇-水(70:30),检测波长为248nm,流速0.4mL· min -1,柱温:40℃. 结果血浆中丙戊酸钠线性范围为12.5 ~150.0μg· mL -1,平均回收率 >98.27%,日内、日间RSD<0.97%. 结论本法快速、简便、准确,适用于临床常规监测需要.【总页数】3页(P269-271)【作者】吴雪艳;庄奕筠;罗晓梅【作者单位】福建医科大学附属第二医院药学部泉州 362000;福建医科大学附属第二医院药学部泉州 362000;福建医科大学附属第二医院药学部泉州 362000【正文语种】中文【中图分类】R927.2;R969.4【相关文献】1.柱前衍生超高效液相色谱法测定核桃仁中的氨基酸含量 [J], 杨俊;王文辉;李翼;王齐;孙晓东;朱艳琴2.程序进样-柱前衍生-超高效液相色谱法测定鱼露酱油中的牛磺酸含量 [J], 孟冰冰;杨桂玲;徐惠;于林;马驰骋;陈莎莎;孙娜;杨劭辰3.柱前衍生高效液相色谱法测定人血浆中17种氨基酸的含量 [J], 陈蓉;周莉;董吉;张华;缪丽燕4.柱前衍生-超高效液相色谱法测定油莎豆饼粕中17种氨基酸的含量 [J], 陆雨顺; 赵丽娟; 宫瑞泽; 陈建波; 李志满; 孙印石5.柱前衍生-超高效液相色谱法测定3种奶粉中18种氨基酸 [J], 曲栗;古淑青;张嘉麒;赵超敏;邓晓军因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
柱前衍生高效液相色谱法测定人血清中丙戊酸钠浓度
柱前衍生高效液相色谱法测定人血清中丙戊酸钠浓度
汪宝军;胡庭杰
【期刊名称】《药学研究》
【年(卷),期】2010(029)011
【摘要】目的建立人血清丙戊酸钠浓度的测定方法.方法将血清酸化,用乙醚提取,α-溴苯乙酮衍生,环己烷羧酸为内标,采用高效液相色谱法测定丙戊酸钠的浓度.色谱柱:Shimadzu VP-ODS(150mm×4.6mm,5μm),流动相:甲醇-水(75:25),检测波长为248nm.结果血清内丙戊酸钠浓度在11.24～180.96μg·mL-1范围内,丙戊酸衍生物和内标衍生物的峰面积比与浓度呈现良好线性关系,平均回收率为101.00%,日内和日间RSD均<3.77%.结论该方法快速、简便、准确,适合于临床丙戊酸钠的血浓度监测.
【总页数】3页(P664-666)
【作者】汪宝军;胡庭杰
【作者单位】河南省三门峡市中心医院,河南,三门峡,472000;河南省三门峡市中心医院,河南,三门峡,472000
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
【相关文献】
1.柱前衍生化HPLC法测定人血清中丙戊酸钠的浓度 [J], 李炳东
2.柱前衍生超高效液相色谱法测定人血浆中丙戊酸钠的含量 [J], 吴雪艳;庄奕筠;罗
晓梅
3.柱前衍生化高效液相色谱法测定人血清中丙戊酸钠的浓度 [J], 徐建敏
4.柱前衍生-HPLC法测定人血清中丙戊酸钠的方法改进 [J], 费燕;林秀丽;胡永狮;张荣
5.柱前衍生化高效液相色谱法测定人血浆中花生四烯酸乙醇胺浓度 [J], 李晶;董志;唐柏彬;乐乐乐
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
柱前衍生-高效液相色谱法测定丙戊酸钠血药浓度周春华;张志清;李飞高;亢泽坤;李敬瑄;张雪宁【摘要】目的建立柱前衍生-高效液相色谱法测定血清样品中丙戊酸钠的含量.方法以Diamonsil C18(4.6×250mm 5μm)为色谱柱,流动相为甲醇-水(87:13,V/V),检测波长为245nm;流速为1.0mL/min;柱温25℃.样品酸化提取后经α-溴代苯乙酮衍生化后分析,环己烷羧酸为内标.结果标准曲线线性相关系数R为0.999 3,线性范围15.0～180.0μg/mL,平均回收率为103.2%,日内、日间相对标准差均小于10%,最低检出浓度为0.3μg/mL.结论该方法简便、准确,适合于临床血药浓度监测.【期刊名称】《河北医科大学学报》【年(卷),期】2013(034)011【总页数】4页(P1422-1425)【关键词】丙戊酸;色谱法;高压液相;血药浓度【作者】周春华;张志清;李飞高;亢泽坤;李敬瑄;张雪宁【作者单位】河北医科大学第二医院药学部,河北,石家庄,050000;河北医科大学第二医院药学部,河北,石家庄,050000;河北医科大学第二医院药学部,河北,石家庄,050000;河北医科大学第二医院药学部,河北,石家庄,050000;河北医科大学第二医院药学部,河北,石家庄,050000;河北医科大学第二医院药学部,河北,石家庄,050000【正文语种】中文【中图分类】R969.11丙戊酸钠（sodium valproate，VPA）是临床上常用的抗癫痫药物［1］，当其血药浓度＞100μg/mL时，其不良反应增加而疗效无明显增加，是血药浓度监测的常检药物，有效血药浓度为50～100μg/mL，血药浓度与疗效及毒性反应密切相关，是需进行常规监测的药物之一［2-4］。
由于VPA在紫外区无特征吸收，不易直接检测，临床上常用气相色谱测定，但存在萃取过程药物挥发的问题。
近年来，采用柱前衍生-高效液相色谱（high performance liquid chromatography，HPLC）法衍生化测定VPA血药浓度的报道［5-6］也较多，但多采用的衍生化试剂、条件及方法各不相同。
本研究采用α-溴代苯乙酮为衍生化试剂，环己烷羧酸为内标，衍生化过程较简易快速，紫外条件下测定显示，样品及内标峰性良好，无内源性物质干扰，该方法适用于VPA血药浓度常规监测。
Waters高效液相色谱仪，包括Empower Pro工作站，Waters-515泵；Waters-486紫外检测器；7725i进样阀（RHEDYNE）；电子天平（Sartorius，CPA2250）；离心机（LD5-10，北京医用离心机厂）；涡旋混合器（XW-80A，上海精科实业有限公司）；数控恒温水浴（氮吹仪专用，KL512J，北京康林科技有限责任公司）。
抽滤泵（AP-01P，天津市协同仪器有限公司）；超声波清洗器（KQ-300B，昆山市超声仪器有限公司）。
丙戊酸钠标准品（批号100963-201101，中国食品药品检定研究院）；α-溴代苯乙酮标准品（批号LA50LO9，瑞士J＆K Scientific公司）；环己烷羧酸标准品（批号LU70L15，瑞士J＆K Scientific公司）；甲醇（批号120301，色谱纯，天津康科德科技有限公司）；乙腈（批号101203，色谱纯，天津市康科德科技有限公司）；正己烷（批号20091118，分析纯，宜兴市试剂二厂）；氨水（批号20031018，分析纯，张家口市化学试剂厂）；三乙胺（批号20111220，分析纯，天津市永大化学试剂有限公司）；硫酸（批号19981116，分析纯，北京北化精细化学品有限责任公司）；蒸馏水（自制，二次蒸馏）。
2.1 色谱条件［5］：色谱柱DiamonsilTMC18柱（250mm×4.6mm，5μm，XB-C18）；流动相甲醇-水（87∶13，V/V）；流速1.0Ml/min；检测波长245nm；柱温25℃；进样量20μL；内标物环己烷羧酸。
2.2 溶液的制备：储备液配制，精密称取丙戊酸钠200mg，加入25mL容量瓶中，蒸馏水定容，作为丙戊酸钠储备液。
标准溶液配制，取丙戊酸钠储备液适量，用蒸馏水稀释成浓度分别为150、300、450、750、1 000、1500、1 800mg/L的标准溶液。
内标溶液配制，精密称取环己烷羧酸12.8mg，加入100mL容量瓶中，0.5mol/L 氨水定容，摇匀，得浓度为123.90mg/L的内标溶液。
衍生剂溶液的配制，精密称取α-溴代苯乙酮250mg，加入25mL容量瓶中，乙腈定容，摇匀，得浓度为10.00g/L的衍生剂溶液。
2.3 血清样品处理：取血清常温下融化，精密吸取180μL，加入内标溶液200μL和1mol/L硫酸200μL，混匀，加提取液正己烷3mL涡旋混合2min，离心（4 000r/min）5min，转移上层有机相2.5mL至玻璃离心管中，加入20μL三乙胺和20μL衍生剂溶液，水浴氮气吹干（水浴温度50℃），加入100μL甲醇溶解后进样。
2.4 专属性考察：按“2.3”项方法操作制备血清样品进样测定。
在选定色谱条件下VPA与内标完全分离，VPA和内标的保留时间分别为8.5min和6.5 min且分离良好，血浆内源性物质对测定无干扰，结果见图1。
2.5 标准曲线制备：取空白血清常温下融化，精密吸取180μL，加入系列浓度的丙戊酸钠溶液20μL，内标溶液200μL，1mol/L硫酸200μL，混匀，使血清中丙戊酸钠的浓度依次为15、30、45、75、100、150、180mg/L，加入提取液正己烷3mL，涡旋混合2min，离心（4 000r/min）5min，转移上层有机相2.5mL至玻璃离心管中，加入20μL三乙胺和20μL衍生剂溶液，水浴50℃放置10min，氮气流吹干，加入100μL甲醇复溶后进样。
测得的丙戊酸钠峰面积与内标峰面积之比（Y）对血清药物浓度（C）进行线性回归，得到标准曲线方程为Y=0.00938C+0.024 72，（线性范围为15～180mg/L，r=0.999 3）。
2.6 精密度试验：日内精密度，取空白血清180μL，分别加入低（300mg/L）、中（750mg/L）、高（1 500mg/L）3种浓度的丙戊酸钠标准溶液20μL，使血清药物浓度分别为30、75、150mg/L。
按血清样品处理方法处理并测定，记录色谱峰面积。
一日内重复配制并测定5次，并计算日内相对标准差（relative standard deviation，RSD）值。
日间精密度，取空白血清180μL，加入低（300mg/L）、中（750mg/L）、高（1 500mg/L）3种浓度的丙戊酸钠标准溶液20μL，使血清药物浓度分别为30、75、150mg/L。
按血清样品处理方法处理并测定。
连续测定5d，并计算日间RSD值。
低、中、高3个浓度血清样品的日内及日间精密度结果见表1。
RSD在15.00％以内，结果表明，丙戊酸钠溶液在5d内稳定，本法精密度较好。
2.7 稳定性试验：低温保存稳定性，按“2.6”项制备低、中、高浓度血清样品，于-40℃低温保存5d，按血清样品处理方法处理并测定，计算RSD。
丙戊酸钠血清样品低温保存稳定性结果见表2。
结果表明低温保存对测定结果无影响。
反复冻融稳定性，按“2.6”项制备低、中、高浓度血清样品，反复冻融3次后按血清样品处理方法处理并测定，计算RSD。
丙戊酸钠血清样品反复冻融稳定性结果见表2。
结果表明，反复冻融对测定结果无影响。
处理样品放置稳定性，按“2.6”项制备低、中、高浓度血清样品，按血浆样品处理方法处理后。
分别于0，1，2，3，4h进行测定，计算RSD。
处理样品低温保存稳定性结果见表2，相对标准偏差为0.42％，结果表明处理样品后放置一定时间对测定结果无影响。
2.8 回收率试验：按“2.6”项制备低、中、高浓度血清样品。
依据标准曲线计算其浓度，并与实际浓度比较得方法回收率。
低、中、高3种浓度模拟血清样品的回收率97.36％～107.10％之间，RSD均在在3.4％以下，结果见表3。
本研究采用高效液相色谱法紫外检测器测定血药浓度，选用与VPA的结构相似物环己烷羧酸为内标［3］，该方法进样量小，样品处理简单，杂质干扰少，方法灵敏度高，可作为VPA血药浓度测定方法。
本研究根据相似相容原理，分离提取过程采用正己烷为提取液，且正己烷为重蒸过的，可使提取率达到最高而且稳定。
丙戊酸分子结构中不含有紫外特征吸收基团，不能用高效液相色谱法直接测定，因此，将其连接上有紫外吸收的基团是本研究的关键：在三乙胺的催化下，α-溴苯乙酮与丙戊酸及内标环己烷羧酸发生衍生化反应，三乙胺作为催化剂能中和反应中生成的溴化氢，阻止反应向逆反应方向进行，使VPA酯化完全；同时也可作为改性试剂，起到改善色谱峰峰形的作用［6］。
流动相为甲醇和水，不需使用缓冲液等盐类物质，有利于保护色谱柱。
VPA是常用的广谱抗癫痫药，VPA进入人体后，转变成丙戊酸而发挥作用，故服用VPA后血药浓度监测以丙戊酸浓度为准。
目前，丙戊酸常用的血清药物浓度监测方法有HPLC法和FPIA法。
相对于FPIA法的仪器昂贵、试剂盒保质期短等缺点，HPLC法的准确、仪器试剂便宜易得等优点，更适合一般医院的临床血药浓度检测工作。
3.1 心理干预有利于提高患者依从性并减轻焦虑、抑郁情绪及痛苦：观察组实施了心理干预，使患者手术前后的焦虑、抑郁情绪明显减轻或消失；而对照组术前、术后变化不明显，虽有所改善，但差异无统计学意义。
2组在健康教育达标率以及患者的依从性和术后痛苦程度上差异有统计学意义。
说明运用心理干预可有效地减轻鼻腔手术患者的焦虑、抑郁情绪，减轻术后痛苦，并可提高其依从性。
3.2 心理干预有利于培养护理人员服务理念：本研究强化了责任护士应具备丰富的专业知识、心理护理方面的知识以及道德修养。
应具有爱心、诚心、热心及责任心，站在患者的角度理解患者的感受，树立为患者着想的服务理念。
3.3 非语言性干预在心理干预中的作用不可忽视：语言与肢体语言的配合，特别是手的触摸能带来积极效果，促进人与人之间的沟通交往。
通过触摸人体分泌一种有助于放松的激素，从而消除紧张；触摸还会增加机体后叶催产素的分泌，此激素使人产生爱、信任和亲密的感觉，是一种无声的语言，是一种很有效的沟通方式，触摸可以表达关心、体贴、理解、安慰和支持［6］。
3.4 心理干预是健康教育中重要的一环：在护患沟通方面也提出更高的要求，通过对患者进行有效的心理干预，可减轻患者的焦虑、紧张情绪，调动其主观能动性，使之能够积极配合治疗。
同时通过有效沟通，使护患关系得到改善。