最新缺血预处理大鼠心肌细胞中的Bcl2蛋白对线粒体通透性转换...ppt课件
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21
癫痫持续状态-分类
根据癫痫发作的病因分类
22
癫痫持续状态 Status Epilepticus (SE)
SE的定义 SE的分类 SE患者的病因评估 惊厥性SE的治疗 非惊厥性SE的处理
23
癫痫持续状态-病因评估
新发生的SE（既往无癫痫发作病史）
➢ 血电解质
➢ V-EEG ➢ 头颅影像学 ➢ 如临床怀疑相关疾病
4.心肌线粒体的制备
取左前壁心肌组织，转移至分离缓冲液A中冲洗、 剪碎、匀浆。用低温高速离心机分离线粒体。
5. MPTP开放程度的检测
线粒体蛋白含量的测定：线粒体悬液用考马斯 亮蓝法进行蛋白含量测定，以1mg/ml的BSA作为标 准品。线粒体悬液的吸光度：根据蛋白定量的结果 用肿胀液将线粒体混悬液稀释为0.25mg/ml。在线 粒体悬液中加200µmol/ml的 CaCl2，测定加入 CaCl2前后A520吸光度的变化，每隔30s进行一次， 连续观察15min。以到达平衡后的吸光度变化ΔS作 为MPTP开放程度的指标。
预期实验结果
Bcl-2蛋白含量：
正常对照组＞ 缺血预处理组＞ 缺血再灌组
MPTP开放程度：
正常对照组＜ 缺血预处理组＜ 缺血再灌组
说明Bcl-2蛋白对MPTP的开放有抑制作用
Thank you !
癫痫持续状态的 诊断与处理
2015最新指南
14
癫痫持续状态 Status Epilepticus (SE)
ILAE 2001定义
➢ 一次癫痫发作持续时间大大超过了该型癫痫发作大多数患者发 作的时间，或反复发作，在发作间期患者的意识状态不能恢复 到基线状态
➢ 时间界定 >5min？（从实际临床操作角度）
“癫痫持续状态”实为“癫痫发作持续状态”，并非仅 限于 癫痫患者
17
癫痫持续状态 Status Epilepticus (SE)
• 血/尿毒物检测 • 遗传代谢相关检查 如伴有发热 ➢ 血常规、CSF
24
癫痫持续状态-病因评估
癫痫患者的SE
➢ 抗癫痫药血浓度 ➢ 血电解质 ➢ V-EEG ➢ 根据情况复查头颅影像学 ➢ 如伴有发热
血常规、CSF
25
癫痫持续状态 Status Epilepticus (SE)
SE的定义 SE的分类 SE患者的病因评估 惊厥性SE的治疗 非惊厥性SE的处理
治疗, 通常>60min ➢ 超难治性SE (Super RSE) 全身麻醉治疗24h仍不终止发作，其
中包括减停麻醉药过程中复发
早期SE
确定性SE
难治性SE
超难治性SE
5min
30min
60-120min
20
癫痫持续状态-分类
根据癫痫发作类型
惊厥性SE Convulsive SE (CSE) ➢ 全面性 Generalized CSE ➢ 局灶性 Focal CSE
材
料
实验动物：SD大鼠 实验药品：戊巴比妥钠，抗鼠Bcl-2抗体及SP免疫组化
试剂盒,分离缓冲液A
实验仪器：呼吸机，分光光度计，低温高速离心机
方
法
1.建立动物缺血模型
大鼠用戊巴比妥钠麻醉后，用止血钳游离大鼠左侧的胸 大肌，暴露左第2，3，4肋，分别在左第2，3，4肋间隙距离 胸骨左缘约0.5cm处进针穿线，每个肋间隙同一进针点穿两 根长约40cm的0号手术线，再将两根线用力拉向两侧，分开 肋间肌和软组织并结扎肋间动脉，留取结扎线的剩余部分， 将两根结扎线剩余部分用力拉向两侧拉开胸腔，并固定之。 充分暴露心脏及其表面的血管，剪开心包膜，结扎冠状动脉 前降支，结扎之前在预结扎的冠状动脉前降支处放置一根约 0.5cm长直径1.5mm的乳胶管，打一个活结结扎，以备进行反 复多次缺血再灌实验。
缺血预处理大鼠心肌细胞中的 Bcl2蛋白对线粒体通透性转
换...
背
景
缺血预处理（IPC）是迄今保护缺血/ 再灌注（I/R）心肌的最强效方式之一。缺 血/再灌注损伤致心肌细胞死亡有凋亡和坏 死两种形式。IPC心肌保护作用主要表现在 缩小心肌梗死面积。线粒体是细胞关键的 细胞器之一，它在供能、调节渗透压、钙 稳态，PH值以及细胞信号传导中起了重要 作用。
SE的定义 SE的分类 SE患者的病因评估 惊厥性SE的治疗 非惊厥性SE的处理
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癫痫持续状态 Status Epilepticus (SE)
SE的定义 SE的分类 SE患者的病因评估 惊厥性SE的治疗 非惊厥性SE的处理
16
癫痫持续状态-定义
传统定义
➢ 1次癫痫发作持续30min以上，或反复多次发作持续>30min，且 发作间期意识不恢复至发作前的基线状态
SE的定义 SE的分类 SE患者的病因评估 惊厥性SE的治疗 非惊厥性SE的处理
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癫痫持续状态-分类
根据癫痫发作持续时间及治疗反应分类 根据癫痫发作类型分类 根据癫痫发作病因分类
19
百度文库
癫痫持续状态-分类
根据癫痫发作持续时间及治疗反应
➢ 早期SE ( Impending SE, Early SE) >5min ➢ 确定性SE (Established SE) >30min ➢ 难治性SE (Refractory SE,RSE) 对二线治疗无效，需全身麻醉
26
癫痫持续状态-惊厥性SE的治疗
治疗原则
➢ 尽早治疗，遵循SE处理流程，尽快终止发作 ➢ 查找SE病因，如有可能进行对因治疗 ➢ 支持治疗，维持呼吸、循环及水电解质平衡
2.将实验动物分为三组：
正常对照组：穿线但不做结扎处理，持续灌流。 缺血再灌组：结扎30min，再灌注20min。 缺血预处理组：连续3次停灌3min+复灌 5min，然后
缺血30min，再灌注20min。
3.Bcl-2蛋白含量的测定
取心尖以上缺血梗死区横切2mm厚心肌，用免 疫组化sp法测定心肌Bcl-2的含量
非惊厥性SE Non-convulsive SE (NCSE) 需满足
➢ 明确的和持久的(>30min)行为、意识状态或感知觉改变 ➢ 通过临床或神经心理检查证实上述改变 ➢ EEG持续或接近持续的阵发性放电 ➢ 不伴持续性的惊厥症状如肌肉强直、阵挛等
分类
➢ 可以活动的患者 Ambulatory NCS (如:癫痫患者不典型失神持续状态) ➢ 危重患者 (如CSE治疗后、脑炎等)
癫痫持续状态-分类
根据癫痫发作的病因分类
22
癫痫持续状态 Status Epilepticus (SE)
SE的定义 SE的分类 SE患者的病因评估 惊厥性SE的治疗 非惊厥性SE的处理
23
癫痫持续状态-病因评估
新发生的SE（既往无癫痫发作病史）
➢ 血电解质
➢ V-EEG ➢ 头颅影像学 ➢ 如临床怀疑相关疾病
4.心肌线粒体的制备
取左前壁心肌组织，转移至分离缓冲液A中冲洗、 剪碎、匀浆。用低温高速离心机分离线粒体。
5. MPTP开放程度的检测
线粒体蛋白含量的测定：线粒体悬液用考马斯 亮蓝法进行蛋白含量测定，以1mg/ml的BSA作为标 准品。线粒体悬液的吸光度：根据蛋白定量的结果 用肿胀液将线粒体混悬液稀释为0.25mg/ml。在线 粒体悬液中加200µmol/ml的 CaCl2，测定加入 CaCl2前后A520吸光度的变化，每隔30s进行一次， 连续观察15min。以到达平衡后的吸光度变化ΔS作 为MPTP开放程度的指标。
预期实验结果
Bcl-2蛋白含量：
正常对照组＞ 缺血预处理组＞ 缺血再灌组
MPTP开放程度：
正常对照组＜ 缺血预处理组＜ 缺血再灌组
说明Bcl-2蛋白对MPTP的开放有抑制作用
Thank you !
癫痫持续状态的 诊断与处理
2015最新指南
14
癫痫持续状态 Status Epilepticus (SE)
ILAE 2001定义
➢ 一次癫痫发作持续时间大大超过了该型癫痫发作大多数患者发 作的时间，或反复发作，在发作间期患者的意识状态不能恢复 到基线状态
➢ 时间界定 >5min？（从实际临床操作角度）
“癫痫持续状态”实为“癫痫发作持续状态”，并非仅 限于 癫痫患者
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癫痫持续状态 Status Epilepticus (SE)
• 血/尿毒物检测 • 遗传代谢相关检查 如伴有发热 ➢ 血常规、CSF
24
癫痫持续状态-病因评估
癫痫患者的SE
➢ 抗癫痫药血浓度 ➢ 血电解质 ➢ V-EEG ➢ 根据情况复查头颅影像学 ➢ 如伴有发热
血常规、CSF
25
癫痫持续状态 Status Epilepticus (SE)
SE的定义 SE的分类 SE患者的病因评估 惊厥性SE的治疗 非惊厥性SE的处理
治疗, 通常>60min ➢ 超难治性SE (Super RSE) 全身麻醉治疗24h仍不终止发作，其
中包括减停麻醉药过程中复发
早期SE
确定性SE
难治性SE
超难治性SE
5min
30min
60-120min
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癫痫持续状态-分类
根据癫痫发作类型
惊厥性SE Convulsive SE (CSE) ➢ 全面性 Generalized CSE ➢ 局灶性 Focal CSE
材
料
实验动物：SD大鼠 实验药品：戊巴比妥钠，抗鼠Bcl-2抗体及SP免疫组化
试剂盒,分离缓冲液A
实验仪器：呼吸机，分光光度计，低温高速离心机
方
法
1.建立动物缺血模型
大鼠用戊巴比妥钠麻醉后，用止血钳游离大鼠左侧的胸 大肌，暴露左第2，3，4肋，分别在左第2，3，4肋间隙距离 胸骨左缘约0.5cm处进针穿线，每个肋间隙同一进针点穿两 根长约40cm的0号手术线，再将两根线用力拉向两侧，分开 肋间肌和软组织并结扎肋间动脉，留取结扎线的剩余部分， 将两根结扎线剩余部分用力拉向两侧拉开胸腔，并固定之。 充分暴露心脏及其表面的血管，剪开心包膜，结扎冠状动脉 前降支，结扎之前在预结扎的冠状动脉前降支处放置一根约 0.5cm长直径1.5mm的乳胶管，打一个活结结扎，以备进行反 复多次缺血再灌实验。
缺血预处理大鼠心肌细胞中的 Bcl2蛋白对线粒体通透性转
换...
背
景
缺血预处理（IPC）是迄今保护缺血/ 再灌注（I/R）心肌的最强效方式之一。缺 血/再灌注损伤致心肌细胞死亡有凋亡和坏 死两种形式。IPC心肌保护作用主要表现在 缩小心肌梗死面积。线粒体是细胞关键的 细胞器之一，它在供能、调节渗透压、钙 稳态，PH值以及细胞信号传导中起了重要 作用。
SE的定义 SE的分类 SE患者的病因评估 惊厥性SE的治疗 非惊厥性SE的处理
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癫痫持续状态 Status Epilepticus (SE)
SE的定义 SE的分类 SE患者的病因评估 惊厥性SE的治疗 非惊厥性SE的处理
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癫痫持续状态-定义
传统定义
➢ 1次癫痫发作持续30min以上，或反复多次发作持续>30min，且 发作间期意识不恢复至发作前的基线状态
SE的定义 SE的分类 SE患者的病因评估 惊厥性SE的治疗 非惊厥性SE的处理
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癫痫持续状态-分类
根据癫痫发作持续时间及治疗反应分类 根据癫痫发作类型分类 根据癫痫发作病因分类
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百度文库
癫痫持续状态-分类
根据癫痫发作持续时间及治疗反应
➢ 早期SE ( Impending SE, Early SE) >5min ➢ 确定性SE (Established SE) >30min ➢ 难治性SE (Refractory SE,RSE) 对二线治疗无效，需全身麻醉
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癫痫持续状态-惊厥性SE的治疗
治疗原则
➢ 尽早治疗，遵循SE处理流程，尽快终止发作 ➢ 查找SE病因，如有可能进行对因治疗 ➢ 支持治疗，维持呼吸、循环及水电解质平衡
2.将实验动物分为三组：
正常对照组：穿线但不做结扎处理，持续灌流。 缺血再灌组：结扎30min，再灌注20min。 缺血预处理组：连续3次停灌3min+复灌 5min，然后
缺血30min，再灌注20min。
3.Bcl-2蛋白含量的测定
取心尖以上缺血梗死区横切2mm厚心肌，用免 疫组化sp法测定心肌Bcl-2的含量
非惊厥性SE Non-convulsive SE (NCSE) 需满足
➢ 明确的和持久的(>30min)行为、意识状态或感知觉改变 ➢ 通过临床或神经心理检查证实上述改变 ➢ EEG持续或接近持续的阵发性放电 ➢ 不伴持续性的惊厥症状如肌肉强直、阵挛等
分类
➢ 可以活动的患者 Ambulatory NCS (如:癫痫患者不典型失神持续状态) ➢ 危重患者 (如CSE治疗后、脑炎等)