新版药典培养基介绍
《中国药典》9203章节对培养基要求变化解读
《中国药典》9203章节对培养基要求变化解读药品检测实验室日常工作都会围绕药典规定的方法展开，药典改版也是备受大家关注。
本文通过比对解析的方式，对2020版《中国药典》9203章节《药品微生物实验室质量管理指导原则》培养基相关内容和15版药典进行比较，和大家分享。
培养基制备篇2015版1.培养基的制备微生物实验室使用的培养基可按处方配制，也可使用按处方生产的符合规定的脱水培养基。
2020版微生物实验室使用的培养基可按培养基处方配制，也可使用按处方生产的符合规定的脱水培养基配制。
或直接采用商品化的预制培养基。
商品化的脱水培养基或成品预制培养基应设立接收标准并进行符合性验收，包括品名、批号、数量、生产单位、外观性状（瓶盖密封度、内容物有无结块霉变等），附有处方和使用说明外，还应注明、有效期、贮藏条件、适用性检查试验的质控菌和用途生产商提供的质控报告和/或其他相关材料（如配方变更）。
（位置调整-3-）解析：“商品化的预制培养基”在新版药典出现的次数较多，成品培养基的使用也将是微生物实验室的选择趋势。
2015版在制备培养基时,应选择质量符合要求的脱水培养基或按单独配方组分进行配制。
脱水培养基应附有处方和使用说明，（位置调整-3-）配制时应按使用说明上的要求操作以确保培养基的质量符合要求，（位置调整-4-）结块或颜色发生改变的脱水培养基不得使用。
脱水培养基或单独配方组分应在适当的条件下贮藏，如低温、干燥和避光，所有的容器应密封，尤其是盛放脱水培养基的容器。
商品化的成品培养基除了应附有处方和使用说明外,还应注明有效期、贮藏条件、适用性检查试验的质控菌和用途。
（位置调整-3-）为保证培养基质量的稳定可靠，各脱水培养基或各配方组分应准确称量，并要求有一定的精确度。
配制培养基最常用的溶剂是纯化水。
应记录各称量物的重量和水的使用量。
2020版培养基的配制（位置调整-2-）在制备培养基时，应选择质量符合要求的脱水培养基或按单独配方组分进行配制。
药典培养基
按使用说明配 制培养基， 取新鲜配制的液体培养基， 灭菌后， ２０＾２℃时， 中华人民 在 ０ － Ｃ ５ 按《 共和国
药典》２０ 年版）ｐ （０ ５ Ｈ值 测定法测定 ， 应符合 ５１５ ．． 的规定 。
６ １６ 千 燥 失 互 ． ．
按《 人民共和国 中华 药典》 ０５ （ ０ 年版） ２ 干燥失 重测定法， ６℃时压力２６ ｋａ２ ｍ Ｈ ） 下 在 ０ ．７ （０ ｇ以 Ｐ ｍ
ｂ 配方 ； ） ＿ 用途 ； ）
幻
使用方法 ；
： 注意事项 ； ）
ＹＹ／ ０ ７ － ２ ０ Ｔ ５ ５ ０５ ｆ） 创 贮存条件 与失效期 ； 生 产 单 位 名 称 、 系方 式 。 联
８ 标 志与标签
标志与标签至少应 当具 有下列内容 ： ａ 执 行标准号 ； ） ｂ 产 品注册证号 ； ） ｃ 产 品名 称、 ） 规格 、 数量 、 号； 批 ｄ 制造厂名称 、 ） 商标和厂址 ；
５１３ 装ｆ ．．
应不低于标示量 。 ５１４ 暇化层 形成能力 ．． 氧化层形成能力应 符合下列规定 ： ａ 灭 菌后冷至室温 ， ） 培养基上层应 出现 氧化层 （ 粉红色 ） ； ｂ 氧化层 高度不应超过培养基深 度的 １５ ） ／ａ ５１５ Ｈ值 ．． ｐ 灭 菌后 ， ０ ５ ０ －２℃时 ， ２ Ｃ 该培养基 ｐ Ｈ值应为 ７ １ ． ａ ．士。２ ５１６ 干燥 失皿 ． ． 应 不超过 ． ％． ５０ ５２ 灵敏度检 查 空 白对照管应无菌 生长， 加小 于 １０ 菌的培养基管应生 长良好 。 ０ ｃｕ ｆ
Ｙ Ｔ ５ ５ ２ ０ Ｙ／ ０ ７ － ０ ５
硫乙醇酸盐流体培养基
范围
本标 准规定了硫乙醇酸盐流体培养基 的质量要 求、 检验方法 、 使用说明 、 志、 标 标签 以及包装 、 运输 、
培养基质量标准药典
培养基质量标准药典
药典是一个权威的药品质量标准的参考书，其中包含了药物、药材和药品的质量要求、检验方法、规范等内容。
培养基是微生物学实验中非常重要的一种实验用品，其质量标准也需要有相应的药典来规范。
培养基质量标准药典一般包括以下内容：
1. 组成要求：药典中应该明确规定培养基的成分组成，包括氨基酸、碳源、氮源、无机盐等。
这些组成的浓度和比例应该符合一定的要求，以确保培养基提供合适的营养物质来支持微生物的生长。
2. pH值要求：药典中通常会规定培养基的pH值范围，以确保培养基的酸碱度适合微生物的生长。
pH值的测定方法和控制方法也会在药典中有相应规定。
3. 纯度要求：药典中应规定培养基的纯度要求，以确保没有杂质会影响到实验结果。
这些杂质可以是微生物的附着物、细菌、真菌等。
4. 检验方法：药典中应该包含培养基的检验方法，包括培养基的pH值测定、菌落计数、细菌和真菌的筛选和鉴定等。
这些方法应该是准确、可重复的，以确保培养基的质量符合标准要求。
5. 存储要求：药典中应该规定培养基的存储条件，包括温度、湿度等，以确保培养基在存储过程中不会发生质量变化。
总之，培养基质量标准药典是一个很重要的工具，它为微生物学实验提供了可靠的质量保证，确保实验结果的可靠性和重复性。
新版药典培养基介绍
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新版药典制药用水微生物限度培养基
制药用水 纯化水 2010版中国药典 营养琼脂 玫瑰红纳琼脂 营养琼脂 玫瑰红纳琼脂 2015版中国药典 R2A培养基
注射用水
R2A培养基
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培养基的质量控制
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国际通用的培养基质控标准
ISO/TS 11133食品和动物饲料的微生物学培养基生产和制备指南
• • 第1部分：实验室培养基制备质量保证通则（2000/2009）。 第2部分：培养基性能检验的实用指南 （2003）。
检查与称量 密封性、日期、 说明、配方 溶化(水化) 蒸馏水、加热 惰性容器、＜ 500mL pH±0.2 1 M NaOH or 1 M HCl 商品化的培养基不需调节pH
测定及矫正PH
分装
灭菌 121℃, 15 min. 无菌检验、性能检验
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干粉培养基的保存
遵循先进先出的原则 保存开封的记录 超过保质期的培养基需丢弃 开盖后密封，低于25℃保存 储存时避免吸水，氧化，污染
铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌 梭菌
白色念珠菌
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培养基的质量控制
商品化的培养基需要求厂家提供相应的检测报告（COA）。可以不做污 染测试和促生长实验，但必须做方法适用性试验。
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默克密理博培养基产品
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培养基系列
300多种应用于制药食品微 生物检测培养基，颗粒状保 证安全
颗粒化干粉培养基
90mm,75mm，55mm培养皿
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培养
需氧培养时，每叠建议放置六块平板，平板间要留有空隙以保证空气流 通，使培养物的温度尽快与培养箱温度达到一致。 液体培养基温度达到一致取决于很多因素，如体积、内容物量、容器类 型、培养箱类型等，如有特殊要求应先将液体培养基预热至所需温度再 接种。 厌氧培养时，需要使用厌氧发生器和厌氧指示剂。
培养基稀释法 中国药典2020
培养基稀释法中国药典2020
培养基稀释法是用于制备细菌培养基的一种方法。
在中国药典2020中，该方法具体步骤如下：
1. 准备好所需的培养基成分，包括培养基粉末、水和其他需要的添加剂。
2. 根据需要制备的培养基种类和规格，确定所需的粉末量。
3. 将粉末加入适量的纯净水中，搅拌均匀，使其溶解。
4. 按照规定的配方比例，取出适量的溶液放入容器中。
5. 使用纯净水将容器中的溶液稀释至适当浓度，一般为1倍到10倍稀释。
稀释倍数的选择应根据具体要求确定。
6. 搅拌均匀，使溶液充分混合。
7. 取出所需量的稀释液，装入培养皿或试管中。
8. 对培养基进行灭菌处理，一般使用高压灭菌器或高温灭菌等方法。
9. 灭菌后，根据实验需求进行培养。
请注意，以上步骤仅为一般操作指导，具体的培养基配方和操作方法应根据具体实验要求和中国药典2020的相关规定进行确定。
细胞培养各种培养基简介
DMEM、RIPA1640、F12、L15等细胞培养基的基本知识培养细胞的完全培养基由基础培养基（如MEM）和添加剂（如血清或无血清培养用的某些确定的激素及生长因子）组成，培养基的配方一直在改进，其中包括抗生素和抗有丝分裂剂等等。
一、基础培养基绝大多数培养基是建立在平衡盐溶液(BSS)基础上，添加了氨基酸、维生素和其它与血清中浓度相似的营养物质。
最广泛应用的培养基是Eearle`s MEM 的混合物，其中含有13种必须氨基酸、8种维生素。
而Ham`s F12 也包括非必须氨基酸，维生素的范围亦很广，另外常规含有无机盐和代谢添加剂（例如核苷酸）。
MEM/F12 这两种培养基各取1/2，形成神经生物学最通用的培养基。
Dulbecco`s改良培养基——DMEM，现应用于快速生长的细胞，同MEM 含有相同的营养成分，但浓度高出2~4倍。
选择某种培养基，应仔细了解成分表，应知道大多数情形下培养基都有不足。
例如，有些培养基在氨基酸中包括有谷氨酸，而这种培养基虽广泛用于神经生物学领域，但它对某些对谷氨酸敏感的可能有细胞外毒性损伤的神经元而言，则并非最佳选择，特别是如果神经元生长在缺乏胶质的环境中时。
F12中含有硫酸亚铁，据报道也有神经毒效应。
在所有这些培养基中，谷氨酸比其他氨基酸有更高的浓度，这是因为它具有不稳定性以及在许多细胞培养中它常用作碳源。
对于神经元的培养常常在基础培养基中增加葡萄糖的含量到0.6%或者加入丙酮酸（若培养基中这两种物质缺乏时）。
MEM与F12均要用5%的CO2来平衡，DMEM含更高浓度的NaCO3，要用10%的CO2来平衡，当然也可以在较低CO2浓度下使用。
这些基础培养基的组成成分是建立在对不同细胞系生长的研究之上的，但通常在原代培养中使用也能有比较令人满意的结果。
原则上，HEPES作为缓冲剂可用来代替碳酸氢盐，以解除需要高浓度CO2培养环境的限制。
实际操作中并非如此简单。
显然，溶解的CO2与碳酸氢盐对良好的细胞生长是重要的。
培养基质量标准药典
培养基质量标准药典培养基是微生物学和生物学研究中不可或缺的基础实验工具，其质量标准直接影响着实验结果的可靠性和准确性。
培养基的质量标准药典作为整个行业的准则，对于生物实验及药品生产具有重要意义。
本文将从培养基的定义、分类、制备方法以及当前存在的质量标准药典等方面展开讨论，旨在深入了解对于实验和药品研发的重要性。
培养基是一种含有各种营养物质的物质，能够提供生物体生长、生存、繁殖所需的养分和环境条件。
根据其用途和组成成分的不同，培养基可以分为固体培养基和液体培养基。
固体培养基主要由琼脂、葡萄糖、氨基酸、维生素等组成，通常用于分离纯化细菌或真菌。
液体培养基则以水为基础，添加有机和无机物质，可在培养皿或培养瓶中使用，用于繁殖生长较慢的微生物。
培养基的制备方法主要包括液体培养基的配制和固体培养基的熔化、灭菌、接种等步骤。
在制备培养基时，需要根据所需生物体的需求和生长特点，合理选择营养物质的种类和比例，确保培养基的成分和pH值符合要求。
此外，灭菌过程也是至关重要的步骤，可以通过高压蒸汽灭菌或紫外线照射等方法有效消除细菌和真菌的污染。
当前存在的培养基质量标准药典是制定和发布培养基质量标准的权威文件，旨在规范培养基的生产、存储和使用，确保培养基的质量稳定和可靠。
培养基质量标准药典主要包括培养基的成分、性质、pH值、微生物指标等方面的要求和标准，适用于生物实验室、药品生产企业以及医药监督部门的监管和审核。
在实际的实验和药品生产中，培养基的质量标准药典具有重要的指导意义。
通过参照质量标准药典的要求，可以有效评估培养基的质量，并及时调整和改进生产工艺，确保培养基的稳定性和可靠性。
此外，质量标准药典还可以作为评估实验结果可靠性的重要依据，确保实验数据的准确性和可重复性。
然而，目前培养基质量标准药典还存在一些问题和挑战。
首先，由于培养基的种类繁多和生物体的差异性，现有的标准往往无法覆盖所有类型的培养基，导致一些专用培养基缺乏标准化的指导。
2020版药典微生物限度检查所用的固体培养基
2020版药典微生物限度检查所用的固体培养基2020版药典微生物限度检查所用的固体培养基在2020年的药典中，微生物限度检查是药品生产中非常重要的一环，也是保障药品安全和质量的关键步骤。
而固体培养基作为微生物培养的基础工具，更是在微生物限度检查中发挥着至关重要的作用。
通过对固体培养基的选择和使用，能够更准确地检测和鉴定药品中的微生物污染情况，从而保障药品的安全性和有效性，为患者提供更可靠的药物治疗。
在本文中，我们将从固体培养基的选择、准备和使用等方面进行深入探讨，帮助您更好地理解2020版药典微生物限度检查所用的固体培养基。
一、固体培养基的选择1. 选择合适的基质在选择固体培养基时，首先需要考虑培养微生物的基质是否适合。
常见的基质包括琼脂、琼脂糖、琼脂蔗糖等，不同的微生物对基质的需求也不同，因此需要根据具体的微生物种类进行选择。
2. 添加适当的抑菌剂为了防止非目标微生物的生长，固体培养基中通常会添加适量的抑菌剂，如青霉素、链霉素等，以确保培养出的微生物是目标微生物的纯种。
二、固体培养基的准备1. 合理的制备方法固体培养基的准备涉及到多个步骤，包括称量固体培养基原料、溶解、灭菌、倾注、固化等，在每个环节都需要严格按照要求操作，以确保固体培养基的质量和稳定性。
2. 确保培养基的质量固体培养基的质量直接影响到微生物限度检查的准确性，因此在准备过程中需要严格控制各项参数，如PH值、温度、时间等，以确保培养基的质量稳定，从而保证微生物的正常生长。
三、固体培养基的使用1. 严格的操作规范在使用固体培养基进行微生物限度检查时，需要严格按照操作规范进行，包括接种、培养、观察等多个环节，不能出现任何操作失误，以避免结果的误差。
2. 及时的结果解读当固体培养基中出现微生物生长时，需要及时进行结果解读，包括菌落的形态、颜色、大小等特征，以便快速判断是否超出了微生物限度的标准要求。
2020版药典微生物限度检查所用的固体培养基是非常重要的工具，在药品生产和质量控制中发挥着重要作用。
中国药典微生物培训培养基的配制及质量控制PPT课件
3、培养基的促生长和抑制性能试验
⑴无菌检查用培养基 适用性试验 无菌性检查和灵敏度检查
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灵敏度检查
参照 2010年版《中国药典》中培养基灵 敏度检查试验
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微生物限度检查(计数培养基)
培养基的适用性检查
促生长、抑制及指示能力检查
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菌种
大肠埃希菌 [CMCC（B）26003] 金黄色葡萄球菌 [CMCC（B）26003] 枯草芽孢杆菌「CMCC(B)63501」 白色念珠球菌 [CMCC（B）98001] 黑曲霉 [CMCC（F）98003]
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二、培养基的质量控制
目前，许多实验室为了操作方便，多使用脱水 培养基进行配制或购买已制备好的分装于培养皿 或玻璃容器的商业培养基。 经实验室配制或由生产厂生产的培养基的质量高 度依赖于其如何制备，采用不适宜方法制备的培 养基将影响微生物的生长或复苏，从而影响试验 结果的可靠性。
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所有配制好的培养基均应进行验证，验证 方法参照《中国药典2010年版》附录无 菌检查或微生物限度检查项下有关规定进 行。实验室配制的培养基的常规监控项目 是外观、性状、pH、促生长试验、定期 的稳定性检查以及培养基有效期的确定。
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一些用于进一步鉴定微生物的诊断试剂， 如革兰染色、氧化酶试验试剂等。它们与 培养基相似点可能是质量控制试验。在试 剂用于未知样品鉴定前，选择正确的标准 质控菌，按使用说明上的要求进行质控试 验。
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用于环境监控的培养基应特别小心防护。 20
1、测定PH值 2、一般性状
⑴制成平板或分装于试管的培养基应检查 ⑵固体培养基 ⑶液体培养基 ⑷ ⑶其他
曙红亚甲蓝琼脂 或麦康凯琼脂 培养基
促生长能力+指示能力 乙型付伤寒沙门菌
培训资料培养基介绍及质量控制
培训资料培养基介绍及质量控制培训资料：培养基介绍及质量控制一、培养基的定义与作用培养基，简单来说，就是为微生物、细胞或组织生长提供营养和环境条件的混合物。
它就像是微生物的“美食广场”，为它们提供了生存、生长和繁殖所必需的各种营养物质。
培养基在生物学、医学、食品工业等领域都有着至关重要的作用。
在微生物研究中，合适的培养基能帮助科学家们成功地培养和分离特定的微生物菌株，从而深入了解它们的特性和功能。
在医学领域，培养基用于检测病原体，帮助诊断疾病。
而在食品工业中，培养基可用于检测食品中的微生物污染情况，确保食品安全。
二、培养基的分类（一）按照成分分类1、天然培养基这类培养基使用天然物质作为营养成分，如肉汤、蛋白胨、酵母提取物等。
优点是营养丰富，成分复杂，能满足微生物的多种需求；缺点是成分不够明确，质量不稳定。
2、合成培养基由已知化学成分的物质精确配制而成。
成分明确，重复性好，但营养相对单一，有时不能完全满足微生物的生长需求。
3、半合成培养基结合了天然培养基和合成培养基的特点，既有天然成分提供丰富的营养，又有合成成分保证成分的明确性和稳定性。
（二）按照用途分类1、基础培养基提供微生物生长所需的基本营养成分，如氮源、碳源、无机盐等。
2、加富培养基在基础培养基中添加特定的营养物质，以促进特定微生物的生长。
3、选择培养基含有抑制其他微生物生长的物质，而只允许特定微生物生长，常用于分离和筛选特定的微生物。
4、鉴别培养基根据微生物在培养基中的代谢反应产生的特定现象，来鉴别不同种类的微生物。
（三）按照物理状态分类1、液体培养基营养物质溶解在水中，微生物在其中能充分接触营养，生长迅速，但不利于分离和鉴定。
2、固体培养基在液体培养基中加入凝固剂，如琼脂，使其成为固体状态。
常用于微生物的分离、纯化和鉴定。
3、半固体培养基凝固剂含量较低，呈半固体状态，可用于观察微生物的运动性和穿刺培养。
三、培养基的成分培养基通常包含以下几类成分：（一）碳源微生物生长所需的碳元素来源，如葡萄糖、蔗糖、淀粉等。
培养基参数
250g
250g
28073
溴甲酚紫葡 萄糖蛋白胨 水培养基 用于压力蒸 汽灭菌效果 的测定。 （GB标准）
250g
28073
24051
BCP Dextrose Peptone Medium 胰蛋白胨大 豆肉汤(TSB)
250g
用于压力蒸 汽灭菌效果 的测定。 （GB标准） 用于金黄色 葡萄球菌的 检验(SN标 准)，也可用 于一般细菌 的培养，药 品、生物制 品的无菌试 验及消毒剂 消毒效果的 测试。（中 国药典、GB 、USP、EP、 美国FDA标 准） 用于金黄色 葡萄球菌的 培养，还可 用于霉菌、 酵母、细菌 的培养，包 括营养要求 较高的微生 物的培养。 (GB、美国 FDA、ISO标 准) 广泛用于霉 菌、酵母、 细菌的培 养，包括营 养要求较高 的微生物的 培养，特别 用于饮用矿 泉水和城市 供水中粪性 链球菌滤膜 法的确证实 验。（GB、 美国FDA标 准） 加或不加脱 纤维羊血或 免血，用于 营养要求较 高的细菌培 养及溶血试 验，或用于 梭菌检验。 （中国药典 、GB、EP、 USP标准）
500g
用于药品检 测的稀释液 。（GB、USP 、ISO标准）
100g
24061
Brain Heart Infusion Agar 哥伦比亚琼 脂
100g
Columbia Agar Base
250g
HCM040
酪胨-卵磷脂 -吐温20液体 培养基 (SCDLP 20 肉汤) Fluid Casein Digest- Soy Lecithin Polysorbate 20 Medium
27100
250g
27010
27020
Soya Casein Digest Lecithin Polysorbate Broth 卵磷脂－吐 温80营养琼 脂
无菌检查用培养基灭菌后的保存有效期的验证方法
无菌检查用培养基灭菌后的保存时限验证方法1.项目描述质量控制部无菌检查用培养基为硫乙醇酸盐流体培养基及胰酪大豆胨液体培养基，此两种培养基均为商品化的脱水培养基。
根据《中国药典》2020版规定，无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基等应符合培养基的无菌性检查及灵敏度检查的要求，制备好的培养基若不即时使用，应置于无菌密闭容器中，在2～25℃、避光的环境下保存，并在经验证的保存期内使用。
因此，拟对胰酪大豆胨液体培养基及硫乙醇酸盐流体培养基在灭菌后的保存期进行验证，验证方法为：培养基灭菌后冷处保存（冰柜保存2～10℃），确认在保存期内两种培养基的pH值、无菌性及灵敏度是否符合要求；每种培养基应进行三个配制批次验证；分别确认培养基在灭菌后保存0天、1天、2天、3天、4天、5天的pH值、无菌性检查及灵敏度检查是否符合要求；根据验证结果，确认硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基在灭菌后的保存时限。
2.目的对无菌检查用培养基灭菌后的保存时限进行验证，确认无菌检查用培养基灭菌后在保存有效期内的pH值、无菌性检查及灵敏度检查是否符合要求。
3.范围本验证文件的范围仅适用于质量控制部无菌检查用培养基制备好后的保存时限的验证，验证项目包括：先决条件确认、实验设备及器材确认、培养基确认、灭菌效果确认、包装储藏确认、培养基pH值确认、培养基无菌性检查确认及培养基灵敏度检查确认。
4.职责4.1 质量控制部职责：负责验证方案、报告的起草；负责按照批准的方案进行验证操作；负责对验证数据进行收集、整理、分析；负责记录在确认过程中所有发生的偏差及变更；负责针对偏差及变更，并提出解决方案，以采取纠正行动；负责验证过程中的相关检验工作；负责验证结果的总结、分析评价工作；负责人负责审核文件。
4.2 质量保证部职责：负责监督整个验证活动，确保验证按计划进度进行；负责过验证项目的验证；负责对验证数据进行收集、整理、分析；负责变差、变更的调查和处理，偏差调查报告及变更情况上报审批；负责人负责审核文件。
2020版三部培养基部分解析
“附录3704检验用培养基配制法”
收录情况 新增10种、修订12种、删除3种
一、培养基修订的总体情况
培养基 种类
2015年版
2010年版
无菌检验 培养基
支原体检 验培养基
2种：新增1种，删除2种 硫乙醇酸盐流体培养基 胰酪大豆胨液体培养基（新增）
5种： 改良Frey氏液体培养基、改良Frey氏固 体培养基、支原体液体培养基、支原 体固体培养基、无血清支原体培养基
使灭菌后的培养基 pH 值为 6.9~7.3，分装，116℃灭菌 30 分钟。制备好的培养基应保持在 2℃~25℃灭菌、密封容器 中。若培养基氧化层（粉红色）的高度超过培养基深度的
1/3，需用水浴或自由流动的蒸汽加热驱氧，至粉红色消失 后，迅速冷却，只限加热 1 次，并防止污染。
✓ 检验培养基：注重检验方法与所用培养基的衔接， 新增了检验方法中提到的但没有收录的培养基， 删除与兽药典收录的检验项目无关的培养基。
二、主要变化——1
无菌检验 培养基
分为2部分进行分 别阐述，即2.1.1培 养基及配方和2.1.2 培养基的质量控制
两部分，内容分布 更加合理。
调整培养基种类， 新增了胰酪大豆胨 液体培养基(TSB)， 作为检验真菌和需 氧菌的培养基，删 除了GA、GP，与 国外药典和中国药 典无菌检验培养基 种类接轨。
1.增加对质控菌种 的溯源，修订了白 色念珠菌和黑曲霉 的名称。 2.进一步优化TG的 配方，与国内外药 典统一，补充了质 控标准的参数，如 明确了无菌检查的 检验标准。二、Leabharlann 要变化——2支原体检验 培养基
分为2部分进行分 别阐述，即1.1培 养基及配方和1.2 培养基的质量控制
两部分，内容分布 更加合理。
药物培养基及其成分种
药物培养基及其成分种药物培养基是一种用于细菌、真菌、细胞等生物体的培养基，也是一种用于研究药物合成和筛选的重要实验手段。
药物培养基的成分种类较多，常见的有基础培养基、附加物、抗生素和其他特殊添加剂。
下面就逐一介绍药物培养基及其成分种。
一、基础培养基基础培养基是植细物体中充当碳、氮、硫、磷、钾、钠和矿物质等元素源的物质，是药物培养基的主要成分。
常见的基础培养基有Tryptic Soy Broth (TSB)、Luria-Bertani Broth (LB)、Nutrient Broth等。
1.TSB(Tryptic Soy Broth)TSB是一种全面的营养培养基，含有散布在培养基中的大量氨基酸和几乎所有代谢所需的营养成分，并且含有明胶，可增加培养物生长所需的粘度。
2.LB(Luria-Bertani Broth)LB是由Luria和Bertani于1943年开发的一个营养培养基，是用于大肠杆菌等细菌生长的一种全面性培养基，因此在教学实验中经常使用，特别是在学生了解细菌培养、分离、纯化和菌体重复等基本知识时使用。
3. Nutrient BrothNutrient Broth供给主要的有机素和一些无机离子元素，含**细胞生长和菌落形成的环境，并且是一种经济实惠的营养培养基。
主要成份种类成份种类TSB Luria-Bertani Broth Nutrient Broth大豆酪蛋白酶胨残渣17g/L No Yes Yes NaCl 5g/L Yes Yes Yes 青霉素G and Streptomycin 0.1g/L Yes Yes No 蛋白胨3g/L Yes Yes Yes 明胶No Yes No 琼脂15g/L No No Yes二、附加物附加物是指用于促进细胞生长和细胞分裂的物质，例如细胞因子、水解酪蛋白、葡萄糖和铁等。
媒介的不同添加材料也不同，因此媒介调配时需要根据各种细胞的特点这些成分的内容调配不同的附加物。
中国药典版微生物检测所用菌种和培养基
抗生素检定VI
多粘菌素效价测定
11
抗生素检定VII
头孢噻肟钠效价测定
12
抗生素检定VIII
万古霉素效价测定
13
抗生素检定IX
白色念珠菌悬液抗生素效价测定
14
多黏菌素B用培养基
多粘菌素B效价测定
15
制霉素检定培养基
制霉素效价测定
16
麦迪/麦白霉素检定培养基
麦迪（白）霉素效价测定
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阿奇霉素检定培养基
制备药品制品的稀释液或冲洗液
2.2微生物限度检查
编号
名称
用途
1
胰酪大豆胨液体培养基(TSB)
药品或生物制品中总需氧菌计数
2
胰酪大豆胨琼脂培养基(TSA)
药品或生物制品中总需氧菌计数
3
沙氏葡萄糖液体培养基(SDB)
药品或生物制品中真菌的培养
4
沙氏葡萄糖琼脂培养基(SDA)
药品抑菌剂效力检测中真菌检测
5
一、菌株【1】
编号
名称
用途
1
金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003
2
铜绿假单胞菌CMCC(B) 10104
3
生孢梭菌CMCC(B) 64941
4
生孢梭菌CMCC(B) 64941
5
白色念珠菌CMCC(F) 98001
6
大肠埃希菌CMCC(B)44102
7
乙型副伤寒沙门菌CMCC(B)50094
8
黑曲霉CMCC(F) 98003
9
单核细胞增生李斯特氏菌
10
鼠伤寒沙门氏菌
11
阪崎肠杆菌
12
蜡样芽胞杆菌
二、微生物干粉培养基
最新版中国药典培训问答（第1部分：培养基配置）（1）
最新版中国药典培训问答（第1部分：培养基配置）（1）2010版中国药典培训问答（第1部分：培养基配置）⼴东省药检所对《中国药典》2010版微⽣物专题培训班的有关问题解答答案。
1. 含琼脂培养基冷却⾄25℃后已凝固，如何测定其pH？答：有专门的固体培养基pH计，如RadiometerA/S, DK22400 Copen2 hagen NV, Denmark 或者Microelectrodes Inc1, NH 03053,U1S1A1 。
".2. PH计测培养基的PH好像有⽐较⼤的差别，应如何选择PH计？（效价7.8的培养基我⽤普通理化室的PH计测定只有7.0左右，不知道是否因为在⾼温下测定（含琼脂）。
答：培养基应冷却到20℃～25℃才可测量，另外PH计应按时校准。
3. ⽣物指⽰剂对灭菌设备的性能，灭菌程序的验证是只验证⼀次呢，⽽后进⾏定期验证，如果⽣物指⽰剂换批号，是否要重新验证？答：应定期或不定期验证⼀次，确保灭菌设备正常。
⽣物指⽰剂更换批号，不需重新验证。
4. 紫外线灭菌后，需要多久进去操作？答：打开通风净化设备，半⼩时后可⼊内操作。
5. 孟加拉培养基是否可以取代玫瑰红钠琼脂进⾏培养霉菌和酵母菌？答：根据中国药典，采⽤玫瑰红钠琼脂。
6. 配制PH值7.0氯化钠-蛋⽩胨缓冲液时有时因为⾼压灭菌器灭菌过程温度过⾼⽽导致培养基混浊了，这种情况缓冲液还能⽤吗？答：建议按正常温度灭菌，混浊培养基建议不要使⽤。
7. 培养基在冷藏中形成结晶怎么处理？①销毁②加热再⽤③待冷却完⽤。
答：建议不要使⽤8. 融化的培养基为什么不能再冷⽔中冷却？答：防⽌受热不均引起结块9. 取菌后测PH：（25℃）培养基配制好测PH，取其中⼀瓶测PH，那这⼀瓶测完就不能⽤了，污染了。
答：也可在⽆菌条件下取出适量测pH.10. 配制分装过程中能否使⽤不锈钢锅？答：我实验室使⽤不锈钢锅，⽬前未发现异常。
11. 对新购进⽆菌0.9%氯化钠（500ml）能否再次灭菌？答：能。
新培养基知识讲解
▪ 鉴别培养基：是利用各种细菌分解糖类和蛋 白质的能力及其代谢产物的不同，在培养基 中加入特定的作用底物，观察细菌在其中生 长分解底物的作用，从而达到鉴别细菌的目 的。例如，无糖的基础培养基（蛋白胨水） 中，加入乳糖和指示剂，接种细菌后培养， 常用的糖发酵管，硫 化氢培养基等都是用于鉴别细菌的
▪ 选择培养基是在培养基中加入某种化学物质， 使其抑制某一类的细菌生长，而有利于另一 类细菌生长，从而将后者筛选出来，这种培 养基叫选择培养基。例如培养肠道致病菌的 SS培养基，含有胆酸盐能抑制革兰氏阳性菌， 枸椂酸钠和煌绿能抑制大肠埃希氏菌，这样 就能使致病菌—沙门氏菌和志贺菌容易生长 出来。培养基中加进某种抗生素，亦可起到 选择作用。
培养基
▪ 培养基是由适合细菌需要的各种营养物质配 制而成的营养基质，可供细菌在其中生长繁 殖。培养基本身必须无菌，一般病原菌所用 培养基的PH值7.2——7.6。
▪ 培养基按用途，可分为基础培养基，营养培 养基，鉴别培养基，选择培养基和厌氧培养 基五大类。
▪ 基础培养基是含有细菌所需要的最基本的营 养成分，可供大多数细菌生长。最常用的基 础培养基是肉浸液，即用新鲜牛肉的浸出液， 加入适量的蛋白胨，NaCl，磷酸盐，调节PH 值为7.2—7.6即可。此外，肉膏液和蛋白胨 水也是常用的基础培养基。
▪ 厌氧培养基：专性厌氧菌须在
微生物限度测定所用培养基
微生物限度测定所用培养基微生物检测所涉及的原料药品：蛋白胨、牛肉浸出粉、氯化钠、琼脂、葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、玫瑰红钠、酵母浸出粉、蒸馏水。
或者成品营养琼脂、玫瑰红钠琼脂、酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂。
所涉及的物品：量筒、烧杯、培养皿、三角瓶、牛皮纸、橡胶塞、试管夹、隔热手套、滤纸、酒精灯、火柴、高温高压灭菌指示胶带、试管刷等。
1、营养琼脂培养基1.1、用途：供药品和生物制品中细菌的计数和培养用。
（《中华人民共和国药典》2010年版1.2、干粉配方（每升）：【成分】蛋白胨10g、牛肉浸出粉3.0g、氯化钠5.0g、琼脂14.0g、蒸馏水1000mL（《中华人民共和国药典》2010年版）【制备】将上述成分(除琼脂外)溶于水中校正pH后加入如琼脂,煮沸溶解,根据用途不同进行分装，经121℃灭菌15min，最终pＨ7.0～7.4。
置冰箱保存,两周内保持用完。
1.3、成品配方：称取本品Mg（不同厂家生产取的量不一样具体看使用说明），加入蒸馏水或去离子水1000mL，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15min。
2、玫瑰红钠琼脂培养基2.1、用途：供药品和生物制品中霉菌和酵母菌的计数、分离和培养用。
（《中华人民共和国药典》2010年版）2.2、原理：胨提供碳源和氮源；葡萄糖提供能源；磷酸二氢钾为缓冲剂；硫酸镁提供必须的微量元素；玫瑰红钠作为选择性抑菌剂可抑制细菌的生长，并可减缓某些霉菌因生长过快而导致菌落漫延生长；琼脂是培养基的凝固剂。
2.3、干粉配方（每升）：【成分】胨5.0g 葡萄糖10.0g、磷酸二氢钾1.0g、硫酸镁0.5g、玫瑰红钠0.0133g、琼脂14.0g、蒸馏水1000mＬ（《中华人民共和国药典》2010年版）【制备】将上述成分除葡萄糖、玫瑰红钠外，微温溶解，滤过，加入葡萄糖、玫瑰红钠根据用途不同进行分装,经115℃灭菌15min，最终pH 6.0±0.2（药典没有标示）。
培养基的概念、种类及用途
培养基的概念、分类及用途各位同学，大家好，今天我们来学习《微生物检验技术》中有关培养基的基本知识，微生物的培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配置出供其生长繁殖的营养基质，也就是说，培养基实际上是微生物所需要的各种营养物质，那么构成培养基的成分就非常重要。
一般微生物的培养基呢，都含有水，碳源，氮源，无机盐等营养物质，虽然不同的微生物所需要的营养物质有一定差异，但是他们都需要刚刚提到的这四种物质，所以这是配制培养基最基本的四类物质，大家需要记住它。
那么在此基础上，培养基还需要满足微生物对PH值，特殊的营养物质以及氧气等等的要求，那么我们通过两个例子来帮助大家理解，比方说牛肉膏蛋白胨培养基里面的牛肉膏，其中呢有含有牛肉成分，那么它可以为微生物的生长提供碳源和氮源，另外还有磷酸盐，维生素等等，那么蛋白胨，听这个名字大家应该知道，里面的蛋白质成分可以为微生物培养提供碳源和氮源，另外呢，还可以提供维生素，那么氯化钠主要是提供无机盐，最后还有水。
培养基的制备还需要满足微生物对PH值，特殊营养物质以及氧气的需求。
我们举几个例子帮助大家理解，如果要培养乳酸杆菌，那么我们需要在培养剂里添加维生素，培养霉菌的时候，要把PH值调至酸性，如果是细菌的话，PH值调至中性或微碱性，如果是厌氧微生物呢，就放在无氧条件下培养。
这是培养基的概念及成分。
接下来我们来简单介绍一下培养基的分类。
首先我们来说两种最基本的分类方法，按成分划分和按状态划分。
按成分划分的话，主要是分三种，天然培养基、合成培养基和半合成培养基。
那什么叫合成培养基？培养基不都是人工合成的吗？合成培养基指的是：培养基中的成分全部已知。
注意这个已知它的要求非常严格。
比如说我配一个马铃薯琼脂培养基，合成培养基需要你知道马铃薯中有哪些化学成分。
比如有多少糖？有多少氨基酸？有多少生长因子等等，所以说这个叫做天然培养基，因为你的用的主要的材料是天然的成分：马铃薯。
实际在实验室中，真正严格的纯的合成培养基是不多见的，这个原因很多，第一个，合成培养基的制备非常麻烦，它需要东西很多，每一种物质都需已知并自行添加。
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2015版中国药典微生物相关内容
6个检查法：
• • • • • • 通则 1101 无菌检查法 通则 1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法 通则 1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查 通则 1107 非无菌药品微生物限度标准 通则 1121 抑菌效力检查法----适用范围 通则 1421 灭菌法 （未修订）
22
培养基的质量控制
培养基污染控制 • 从每批制备好的培养基中选取部分样品进行污染测试。
培养基促生长实验 • • 使用质控菌株检测培养基的生长能力，抑制能力和特异性。 测试菌株
− 菌落计数 − 具有典型反应的阳性的菌株； − 微弱生长的阳性菌株（对培养基中选择剂敏感性强的菌株） − 非特异性菌株。（如：产生不同发酵反应和荧光反应的菌株） − 阴性菌株。
预制培养基
100ml,200ml瓶装 测菌片
生物指示剂
辅助工具
鉴定试剂盒 厌氧发生器
27
默克德国培养基工厂
默克培养基工厂位于德国Darmstadt ，1892建厂，>7500员工。
28
可靠的质量保证
Raw material
Inspected and QA released
Manufacturing
麦康凯肉汤 麦康凯琼脂 RV沙门菌增菌肉汤 木糖赖氨酸脱氧胆酸琼脂 三糖铁琼脂培养基 溴化十六烷基三甲铵琼脂
沙门菌
铜绿假单胞菌
金黄色葡萄球菌
甘露醇氯化钠琼脂
梭菌
梭菌增菌培养基 哥伦比亚琼脂 沙氏葡萄糖肉汤 沙氏葡萄糖琼脂 念珠菌显色培养基
白色念珠菌
5
新版药典无菌检查培养基
2010版中国药典 硫乙醇酸盐流体培养基 改良马丁培养基 选择性培养基 营养肉汤培养基 营养琼脂培养基 改良马丁琼脂培养基 2015版中国药典 硫乙醇酸盐流体培养基 胰酪大豆胨肉汤 选择性培养基 0.5%葡萄糖肉汤培养基 胰酪大豆胨琼脂培养基 沙氏葡萄糖液体培养基 沙氏葡萄糖琼脂培养基
13
称量与溶解
称量培养基时，应戴上口罩，防止在称量过程中扬起的粉末对操 作人员的健康造成影响。 严格按照说明书称量，避免在湿度过高的环境下操作，防止培养 基受潮； 加水溶解后，应适当加热并搅拌，加快培养基的溶解。
14
培养基配制用水
采用蒸馏水或相同质量的水，以排除测试条件下抑制或影响微生物生长 的物质； 如果蒸馏水是用氯消毒的水制备的，蒸馏前应先对氯进行中和 离子过滤器生产的去离子水，微生物含量过高，这种水在过滤除菌后仍 可能含有细菌的生长抑制物质. pH 5.5-7.5，否则可能造成培养基颜色异常、产生沉淀或凝胶强度下降。 储存于惰性容器（如：玻璃、聚乙烯材质容器）中，容器应清洗干净， 防止抑制剂残留。
21
培养
需氧培养时，每叠建议放置六块平板，平板间要留有空隙以保证空气流 通，使培养物的温度尽快与培养箱温度达到一致。 液体培养基温度达到一致取决于很多因素，如体积、内容物量、容器类 型、培养箱类型等，如有特殊要求应先将液体培养基预热至所需温度再 接种。 厌氧培养时，需要使用厌氧发生器和厌氧指示剂。
Component traceability
QC tests
Sterilization
QA tests
Mfg parameters and in-process tests record
Test results record
Sterilization parameters record
Test results record
20
灭菌后培养基的保存
经过高压灭菌的培养基应尽量减少重加热时间，避免过度加热。 培养基融化后放入47±2℃的恒温水浴锅中保温，直至使用，放置时间 一般不应超过4h。 未用完的培养基不能重新凝固留待下次使用。敏感的培养基尤其应该注 意，融化后时间应尽量缩短； 培养基应该在避光、干燥的环境中保存，必要时建议在4° - 12°C (适宜温度 12°C)避光保存，在没有说明的前提下，建议平板保存不超 过1周; 平板 出现脱水, 裂缝, 脱色 或微生物污染现象时，应丢弃;
检查与称量 密封性、日期、 说明、配方 溶化(水化) 蒸馏水、加热 惰性容器、＜ 500mL pH±0.2 1 M NaOH or 1 M HCl 商品化的培养基不需调节pH
测定及矫正PH
分装
灭菌 121℃, 15 min. 无菌检验、性能检验
12
干粉培养基的保存
遵循先进先出的原则 保存开封的记录 超过保质期的培养基需丢弃 开盖后密封，低于25℃保存 储存时避免吸水，氧化，污染
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌 梭菌
白色念珠菌
24
培养基的质量控制
商品化的培养基需要求厂家提供相应的检测报告（COA）。可以不做污 染测试和促生长实验，但必须做方法适用性试验。
25
默克密理博培养基产品
26
培养基系列
300多种应用于制药食品微 生物检测培养基，颗粒状保 证安全
颗粒化干粉培养基
90mm,75mm，55mm培养皿
• • SN/T1538.1-2005：实验室培养基制备质量保证通则。 SN/T 1538.2-2007：培养基性能测试实用指南。
GB 4789.28-2013 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求
WS/T 232-2002 商业性微生物培养基质量检验规程
10
培养基配制及注意事项
11
培养基配制的基本程序
新版药典微生物检测的特点
• 采用更优良的培养基进行相应检验。 • 方法适用性试验模拟样品污染微生物后进行方法试验性验证。 • 计数方法的多样性。 • 结果判定以变化范围进行规定，符合微生物计数规律。 • 更新试验环境的要求。 • 方法适用性试验增加供试品对照组 • 微生物限度标准
新版药典微生物检验方法的更新，基于2010年版《中国药典》。更新后与ICH协调 案方法即现行的USP、EP、JP接轨，同时兼顾了中国的国情。
23
培养基适用性检查测试指标
控制菌检查 耐胆盐革兰阴性菌 紫红胆盐葡萄糖琼脂 麦康凯肉汤 大肠埃希菌 麦康凯琼脂 RV沙门菌增菌肉汤 沙门菌 培养基 肠道菌增菌肉汤 特性 促生长能力 抑制能力 促生长能力+指示特性 促生长能力 抑制能力 促生长能力+指示特性 试验菌株 大肠埃希菌/铜绿假单胞菌 金黄色葡萄菌 大肠埃希菌/铜绿假单胞菌 大肠埃希菌 金黄色葡萄菌 大肠埃希菌 乙型副伤寒沙门菌 金黄色葡萄球菌 乙型副伤寒沙门菌 乙型副伤寒沙门菌 铜绿假单胞菌 大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 生孢梭菌 生孢梭菌 白色念珠菌 白色念珠菌 白色念珠菌 大肠埃希菌
6
新版药典制药用水微生物限度培养基
制药用水 纯化水 2010版中国药典 营养琼脂 玫瑰红纳琼脂 营养琼脂 玫瑰红纳琼脂 2015版中国药典 R2A培养基
注射用水
R2A培养基
7
培养基的质量控制
8
国际通用的培养基质控标准
ISO/TS 11133食品和动物饲料的微生物学培养基生产和制备指南
• • 第1部分：实验室培养基制备质量保证通则（2000/2009）。 第2部分：培养基性能检验的实用指南 （2003）。
2015版中国药典
肠道菌增菌肉汤培养基 紫红胆盐葡萄糖琼脂
大肠埃杆菌
胆盐乳糖培养基 MUG培养基 曙红亚甲蓝琼脂或麦康凯琼脂 营养肉汤 四硫磺酸钠绿培养基 胆盐硫乳琼脂或沙门、志贺氏属琼脂 曙红亚甲蓝琼脂或麦康凯琼脂 胆盐乳糖培养基 溴化十六烷基三甲铵琼脂 绿脓菌素测定培养基 亚碲酸盐肉汤培养基 卵黄氯化钠琼脂培养基或甘露醇盐琼脂 梭菌增菌培养基 哥伦比亚琼脂 沙氏葡萄糖肉汤 沙氏葡萄糖琼脂 念珠菌显色培养基 吐温80玉米琼脂培养基
32
培养基相关文件
无疯牛病或口蹄疫的证明（ BSE/TSE – Certificate ）
33
培养基相关文件
COA 应用说明
34
默克密理博
35
15
培养基的分装
储存于惰性容器（如：玻璃、聚乙烯材质容器）中； 将培养的培养基分装至容器中，培养基的体积不超过所用容器的3/5； 培养基灭菌时，总体积应小于1000ml；
16
培养基pH值的测定
灭菌前后测定培养基的pH值； pH ±0.2； 1 mol/L的 NaOH 或 Hcl来调整pH值； 商品化的培养基一般不需要调整pH值，但需测定pH是否在规定范围内；
促生长能力 抑制能力 木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂 促生长能力+指示特性 三糖铁琼脂培养基 指示能力 溴化十六烷基三甲铵琼脂 甘露醇氯化钠琼脂 梭菌增菌培养基 哥伦比亚琼脂 沙氏葡萄糖肉汤 沙氏葡萄糖琼脂 念珠菌显色培养基 促生长能力 抑制能力 促生长能力+指示特性 抑制能力 促生长能力 促生长能力 促生长能力 促生长能力+指示特性 促生长能力+指示能力 抑制能力
3
新版药典微生物限度——微生物计数法培养基
2010版中国药典 营养琼脂 营养肉汤 玫瑰红钠琼脂培养基 2015版中国药典 胰酪大豆胨肉汤 胰酪大豆胨琼脂培养基 沙氏葡萄糖琼脂 沙氏葡萄糖肉汤 马铃薯葡萄糖琼脂 玫瑰红钠琼脂培养基
4
新版药典微生物限度——控制菌检查法培养基
控制菌
耐胆盐格兰阴性菌
2010版中国药典
6个指导原则：
• • • • • •
2
通则9201 药品微生物检验替代方法验证指导原则（未修订） 通则9202 非无菌药品微生物限度指导原则（修订） 通则9203 药品微生物实验室质量管理指导原则（修订） 通则9204 微生物鉴定指导原则（新增） 通则9205 药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则（新增） 通则9206 无菌检查用隔离系统验证指导原则（新增）