HIV病毒学检测及质量保证指南
艾滋病检测质量控制
移液器
定期（每年至少1次）校准，发现异常情况 应随时进行校准。
标定方法包括有色溶液光谱分析法、称量校 准法、同位素计数法以及使用配套校准盒 等。 校准多道移液器时，必须保证每一个 加样头都能够连续、准确地加样。移液器 的精密度应在厂家说明书规定的范围内。
冰箱和孵育箱
每天检查和记录冰箱温度，每个工作日检查记录孵育箱温 度，并做好记录。 使用经过计量部门校准合格的温度计测 量冰箱和孵育箱的实际温度；
8.3 结果报告
分析结果及发出检测报告前，应注意须在 试剂盒及外部质控品结果满足要求的前提 下，对样品进行分析。
试剂盒及外部质控品不合格，样品需要重 新检测；
复核人对检测结果进行仔细复核并对结果 提出结论，签发人对试验结论进行审核、 分析、总结、签字。
8.4 样品登记和保存
收到样品后，建立唯一编码，及时登记有 关信息，包括受检者姓名或代号、试管编 号、性别、年龄、职业、送检单位、人群 类别、检验结果、送检日期、报告日期、 备注（必要时记录通信地址）等。
5、 采血完成后的穿刺针头必须丢弃于尖锐危险品容器里， 妥善处理，防止发生职业暴露。
4.3 样品的保存
用于抗体和抗原检测的血清或血浆样品，短期（1 周）内进行检测的可存放于2～8℃， 一周以上应 存放于-20℃以下。
艾滋病检测筛查实验室检测的筛查阳性样品应及 时送确证实验室，筛查阴性样品，可根据具体需 要决定保存时间，建议至少保存1～2个月。
1 、行政支持
行政领导应将艾滋病检测实验室的建设、 发展和质量管理纳入地方卫生行政规划；
保证实验室负责人和主要技术人员队伍的 稳定；
给予充足的经费支持， 进行经常性监督检查。
2 、人员培训
检测技术人员需经过上岗培训和在岗持续培训。
艾滋病检测质量管理
➢ 位移：如果几个连续质控对照值（3-5次）都落在均值（中心线）的一边则称之为位移，通常表示存在大的变化 （失控）。引起位移的原因有使用新批号的试剂盒、使用新试剂、实验员的更换、孵育温度的改变、仪器（移液器） 故障等。
➢ 趋势：当几个连续质控对照值（5-7个）几乎按一个方向分布时称之为趋势（失控），通常由参数的缓慢改变引起， 如试剂失效和移液器逐渐不准确等。发生漂移和趋势的最常见的原因是试剂（如酶标记物）或对照的失效。
质量保证
➢ 建立实验原始记录表
应按实验要求，设计试验操作原始记录表，标明空白对照、阳性对照、阴性对照、外部对照以及待检样品 的位置，便于指导实验人员加样。要注明试剂盒厂家、测定方法、批号、效期、操作人员和复核人员姓名 及检测日期。
➢ 建立HIV抗体检测程序
参照《全国艾滋病检测技术规范 2015年修订版》第六章
标本加样量、孵育时间、反应温度、洗涤程序和次数等。 ➢ 标本质量：在实验前必须检查所有待检标本的质量，如有脂血、溶血或污染的标本原则上不能使用，
必须重新采集标本。若无法重新采集标本，必须在室主管批准下使用，在检测结果中应该注明该份标 本的情况。 ➢ 标本使用：冰冻的标本待全部融化后必须充分摇匀。
质量控制
艾滋病检测质量管理
质量管理体系
依据：《艾滋病检测质量管理工作指南》 目的：
➢ 提高艾滋病检测工作质量 ➢ 最大限度地防止误检和漏检 ➢ 保证检测结果的正确性和准确性 ➢ 避免实验室交叉感染
质量管理的主要内容
质量保证（Quality Assurance，QA） 质量控制（Quality Control，QC） 质量评价（External Quality Assessment，EQA）
HIV实验质量控制与质量管理程序
HIV实验质量控制与质量管理程序1.目的：为HIV实验室各技术人员统一实验操作程序，保证实验检测质量，特制定本程序。
2.适用范围：适用于HIV实验室技术人员。
3.规范性引用文件：《全国艾滋病检测技术规范》（2004年版）。
4.相关器材设备：酶标仪、洗板机、标准血清。
5.安全防护器材与措施：一次性乳胶手套、隔离衣、口罩、帽子，取用试剂时应把试剂视作感染性材料对待。
首先穿好一次性隔离衣，戴好口罩、帽子，最后戴好乳胶手套后再接触试剂进行试验。
6.操作步骤：在每次实验中必须包含有内部对照质控血清和外部对照质控血清。
内部对照质控血清指试剂盒内提供的阳性和阴性对照血清。
内部对照是质量控制的基础。
每一次检测必须按照试剂盒使用说明书使用内部对照，而且只能在同批号的试剂盒中使用。
外部对照质控血清是为了监控检测的重复性和稳定性以及试剂盒批间或孔间差异而由实验室设置的一套对照血清，包括强阳性、弱阳性和阴性对照血清。
也可以只设置一个弱阳性对照，以该试剂盒临界值（Cut-off）的2~3倍为宜。
6.1 质控血清的制备和保存（以ELISA试验检测HIV抗体为例）6.1.1 外部对照质控血清的制备HIV抗体阳性和阴性血清，56℃ 30min灭活，3000r/min，离心15min。
弱阳性对照可以用HIV抗体阴性血清梯度稀释HIV抗体强阳性血清并标定后得到。
按一年使用量配制（可加入不影响检测结果的防腐剂）用0.2μm滤膜过滤除菌。
6.1.2 外部对照质控血清的保存6.1.2.1 按一周实验用量分装、分类、标记、封口、-20℃冻存于非自动除霜冰箱中。
6.1.2.2 外部对照血清不可反复冻融，一旦融化后应该存放2~8℃，供一周内使用。
6.1.3 外部对照质控血清的使用每一次实验必须使用外部对照质控血清，以便监控实验的重复性和稳定性。
同时可以了解各批试剂盒的批间或孔间差异，绘制质量控制图。
6.1.4 外部对照质控物的质量要求质控物的管间或瓶间变异必须小于监测系统预期的变异（cv＜20%），并且质控物的成分应在稳定状态中。
HIV实验室管理及质量控制
3. 冰箱和孵育箱：
定期检查温度并作好记录，必须每天检查和记 录低温及超低温冰箱的温度。
4. 定期检查其他仪器设备。
文件和文件管理
1. 标准操作程序（SOP） 艾滋病检测实验室要建立覆盖主要工作内容的 SOP文件。 SOP由各岗位工作人员起草，实验室主任审定，并 应定期修订。修订应该在实验室主管人员的领导下进 行，每年至少一次。所有工作人员要在所从事工作的 SOP文件上签名表示已经阅读并掌握了有关的内容。
（二）实验室规范化建设
艾滋病实验室的设置及其建筑、设施、设备必须符 合《艾滋病检测工作管理办法》的要求。
（三）人员培训及其评价 实验室工作人员上岗前必须接受技术培训并获得合 格证书。在工作中要定期或不定期接受复训。实验室主管 领导应定期对工作人员进行评价，包括工作的准确性、效 率、执行安全条例和规章制度情况、职业道德、出勤率以 及上岗资格等。 （四）标本采集、运送和处理 （五）检测方法和试剂的选择
二、质量控制（QC）
(一)质控血清的制备和保存
在所有实验中必须包含有内部对照质控血清 和外部对照质控血清。 内部对照质控血清指试剂盒内提供的阳性和 阴性对照血清。内部对照是质量控制的基础。每一 次检测必须使用内部对照，而且只能在同批号的试 剂盒中使用。
外部对照质控血清是为了监控检测的重复性和 稳定性以及试剂盒批间差异而由实验室设置的 一套对照血清，包括强阳性、弱阳性和阴性对 照血清。也可以只设置一个弱阳性对照，以该 试剂盒临界值（Cut-off）的2-3倍为宜。
趋势：当几个连续质控对照值(5-7个)几乎按一个方向分布 时称之为趋势(失控)，通常由参数的缓慢改变引起，如试剂失效和 移液器逐渐不准确等。
发生漂移和趋势的最常见的原因是试剂(如酶标记物)或对照的失效。
医院HIV抗体快速检测质量控制作业指导书
医院HIV抗体快速检测质量控制作业指导书一、目的监控每次检测的重复性和稳定性以及检验试剂盒批间差异、批间操作的重复性，验证检测结果。
二、适用范围适用于HIV-1/2抗体定性快速检测。
三、作业程序（一）检测前质控：1、样品要求唯一编号，实验前仔细核对，检查。
2、检测人员每日检查室内温度，实验环境温湿度应在试剂盒说明书的范围内，试剂和样品应按要求存放，并做好记录。
3、检查是否有足够的试剂库存量，确证试剂是在有效期范围内，禁止使用过期试剂。
4、每批实验如果应用不同批号的试剂，应做好记录。
（二）检测过程质控：1、准备好试验区域，摆放好必要器具。
2、详细记录样品编号、姓名、地址、试剂名称及批号，操作者、复检者签名。
3、核对样品编号、标记、检测、防止错号。
4、实验前仔细阅读试剂盒说明书，严格按照说明书操作。
5、需要在冰箱保存的试剂，先从冰箱内取出，放置室温，平衡后在使用。
剩余的试剂条应立即放入自封袋中密封2～8℃保存，可以存放在室温的试剂，要尽可能避免高温。
6、建议每一次最多做10份样品，确保试剂条和编号与标本编号准确对应，防止错号和交叉污染。
7、结果判定时，质控带必须出现实验条带才能成立。
如实验完成后未出现质控条带，本次实验结果无效，实验需重做。
8、外部质控，由国家或省疾控中心提供，或试剂厂家购买。
要求在更换不同试剂批号时，更换不同厂家时，更更换不同检测人员时做外部质控。
（三）检测后质控：1、实验结果进行判读时，应保证判读地点光线充足。
对于难以判读的条带，最好有2人判读。
2、复核样品编号并填写实验结果。
3、向实验室负责人报告检测结果。
4、检查试剂库存量，根据实际需要，提前向上级实验室申请补充。
5、在收到或检测时，发现试剂出现外包装盒或内容物已损伤，标签出现错误、缺失或字迹模糊（特别是产品厂家名称、批号、生产日期或失效期），应详细记录。
艾滋病检测的质量保证及质量控制发析
艾滋病检测的质量保证及质量控制发析(西藏林芝地区林芝县疾病预防控制中心西藏林芝860000)【摘要】随着世界各国艾滋病流行趋势的日益严峻，预防和控制艾滋病已成为各国医学界面临的一大重要课题。
因艾滋病患者的不断增多，为了及时有效地明确诊断，为后续的临床治疗提供可靠的依据，艾滋病实验室检测的地位日趋重要。
然而艾滋病检测工作则有着特殊性和严格的科学性，所以，对艾滋病检测工作的治疗进行有效控制和管理已成为当务之急。
【关键词】艾滋病；质量【中图分类号】r512.9 【文献标识码】a【文章编号】1004-5511（2012）04-0661-01 1 实验室制度管理根据《全艾滋病检测技术规范》的相关要求，艾滋病检测实验室理制度的指定须严格符合相关的管理原则，包括送、收样及保藏制度、生物安全制度、严格执行分区及单间流向制度、个人防护制度、废物处理制度、仪器设备使用及保养制度及检测结果保密制度等［1］。
相关工作人员应当对各项规定进行充分的了解并加以严格遵守执行。
相关责任人应进行定期结合不定期的工作巡检，一旦发现违规操作及相关问题应及时予以纠正并跟进改进工作的落实。
2 基础条件建设检测机构须具备独立的实验用房，保持墙体及地面的平整，须对清洁区和污染区进行区分。
保证操作台面的光滑和防水、易于消毒。
初筛实验室必备设备包括酶标仪、专用普通冰箱、高精度移液器、洗板机、恒温水浴箱、离心机和各类型消毒设备及污物处理设施、安全防护用品和恒温设施。
艾滋病检测确认实验室用房内须设有独立的污染区、半污染区及清洁区，以及初筛实验室及确认实验室所需的各项设备。
3 技术保障及人员培训首选须保证实验室主管人员质量意识处于相对高的水平，以此保证能够领导全体实验室工作人员开展质量管理工作的高效性，同时促进所有工作人员业务水平的提升及技术素养的提高。
此外还应建立并完善稳定的核心专业团队，保证实验室业务团队的技术水平保持熟练状态。
依据卫生部的相关要求，初筛实验室须有3名以上的医技人员，其中必须有1名以上中级职称人员，且具备2年以上检测病毒血清的工作经验、接受过省级及以上hiv抗体确认中心举办的hiv抗体检测学习班培训并取得合格证书。
艾滋病病毒感染者及艾滋病患者CD4 T淋巴细胞检测质量保证指南
第一章总则1.1 意义准确可靠的CD4+T淋巴细胞检测是评价HIV感染者免疫状况，预测判断疾病进程、评价抗病毒药物治疗效果和估测预后的重要指标；世界卫生组织(WHO)和欧美等国家均推荐，艾滋病病毒（HIV）感染者每3-6个月监测一次CD4+T淋巴细胞水平，并以该指标作为开始预防间质性浆细胞肺炎和其它机会性感染，以及作为开始抗逆转录病毒治疗的主要指标。
依照世界卫生组织和美国CDC成年人和未成年人AIDS病例中HIV感染和病例监测分类系统定义，CD4+T淋巴细胞水平也作为判断HIV相关临床病程的标准。
我国“国家免费艾滋病抗病毒药物治疗手册”中也将CD4+T淋巴细胞CD4<200/mm3做为开始抗病毒治疗的标准。
因而保证CD4+T淋巴细胞检测质量是非常重要的。
《艾滋病病毒感染者及艾滋病患者CD4+T淋巴细胞检测质量保证指南》对保证CD4+T淋巴细胞检测质量有重要的指导意义。
1.2目的指导我国从事HIV感染者和AIDS患者CD4+T淋巴细胞检测工作的实验室人员，规范CD4+T 淋巴细胞检测方法和程序，完善实验室质量保证与质量控制，提高检测的准确性。
1.3 适用范围适用于我国采用单平台法检测艾滋病病毒感染者及艾滋病患者CD4+T淋巴细胞的所有实验室。
1.4 缩略语HIV/AIDS: 艾滋病病毒感染者和艾滋病患者；HIV：艾滋病病毒； AIDS：艾滋病； SOP：标准操作程序； FCM：流式细胞术；SPT：单平台技术；ID：患者编号；PMT：光电倍增管； PT：能力验证第二章实验室环境与设施2.1CD4+T 淋巴细胞检测实验室设施理想的CD4+T淋巴细胞检测实验室应该有专用实验室。
如果空间有限，CD4+T淋巴细胞检测可以与HIV检测的筛查和确认实验室共享一个空间。
本指南推荐的是理想的CD4+T淋巴细胞检测实验室的空间安排。
样品接收、处理在一单独房间，样品检测、分析和报告在另一单独房间。
该类实验室应符合国家生物安全二级 (BSL-2)实验室的有关规定。
艾滋病检测及质量控制
在正常人群中的发生率较高, 10-15%
HIV抗体不确定标本的处理
结合流行病学资料，4周后随访检测，如带型没有进展 或呈阴性反应，则报告阴性；如随访期间出现阳性反应，
则报告阳性；如随访期间带型有进展，但不满足阳性标准，
应继续随访到8周。如带型没有进展或呈阴性反应则报告阴 性；满足HIV抗体阳性诊断标准则报告阳性，不满足阳性 判断标准可视情况决定是否继续随访。
REOPERATOR
阴性 □ 签发者
HEAD
检测者
OPERATOR
报告日期
DATE
年
月 日
筛查单位或实验室（公章）
INSTITUTION OR LABORATORY （OFFICIAL SEAL）
备注 NOTE
PRINTED BY CHINESE CENTER FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTION
检测结果的处理
初筛阳性: 保密, 尽快送确认 确认阳性: 保密. 报告. 通知本人, 告 知其有义务不从事将病毒传播给他人的 活动 确认可疑: 保密, 血不能用, 4-8周时采 血随访
军队艾滋病防治工作规定（2010）
第二十条 ……样本送检的筛查实验室所在单 位应当于收到确证报告后24小时内通过全军突 发公共卫生事件和传染病疫情报告信息系统报 告，同时通报感染者所在单位后勤（联勤）机 关卫生部门；感染者所在单位后勤（联勤）机 关卫生部门应当将检测结果告知感染者本人、 配偶或者亲属，… 如何单位和个人不得瞒报、缓报或者谎报艾滋 病疫情信息。
DATE 全血□ 血浆□ 血清□ 唾液□ 尿□ 其它：_____
年
月
日
送检样品
SPECIMEN
HIV-1病毒载量测定及质量保证指南
HIV-1 病毒载量测定及质量保证指南（2013 版）Guideline for HIV-1 Viral Load Testing and QualityAssurance中国疾病预防控制中心2013年1月前言随着HIV-1 病毒载量检测在艾滋病临床辅助诊断、抗病毒治疗监测及相关科研工作中的广泛应用，我国开展该项检测工作的实验室日益增多。
自1997 年艾滋病实验室首次引进HIV-1 病毒载量检测技术以来，截至2012 年底全国已经配备115 台HIV-1 病毒载量检测仪，覆盖疾控、医院、检疫、军队等系统，艾滋病流行重点地区及少数县级实验室均已配备HIV-1 病毒载量检测仪，每年检测量已达13 万人份以上。
由于HIV-1 病毒载量检测质量对艾滋病的早期诊断及治疗有重要影响，因此急需加强该领域的培训和质量控制，规范实验室操作，以保证检测结果的准确性和可靠性。
自2008 年开始实施《HIV-1 病毒载量测定及质量保证指南》（试行，以下简称《指南》）以来，参与HIV-1 病毒载量能力验证工作的实验室从2007 年的29家增加到2012年的107 家，占已开展工作实验室的百分之九十以上。
通过综合分析近几年能力验证发现的问题与检测技术发展的实际情况，考虑各种试剂的检测要求，结合专家意见和一线实验室工作人员的经验与需求，对本指南进行了适当修改、调整和补充，主要修改内容包括：（1）增加“人员要求”章节；（2）修改“常用HIV-1 病毒载量检测方法”；（3）修改“ HIV-1 病毒载量检测能力验证（PT）”；（4）补充常见问题分析和处理等内容。
修订后的《指南》共分八章，包括：总则，人员要求，实验室环境与设施，样品的采集、处理保存运输，常用检测方法简介，室内质量控制，实验室检测能力验证（PT），实验室生物安全，以及四个附表。
本指南在修改过程中，接纳了国内专家、同行的意见和建议，经过多次修改编写成《指南》（2013）版。
HIV病毒学检测及质量保证指南
H I V病毒学检测及质量保证指南Document number：WTWYT-WYWY-BTGTT-YTTYU-2018GT本指南由中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心艾滋病参比实验室组织有关专家撰写，由中国疾病预防控制中心批准执行。
编写主持人：蒋岩编写人员：潘品良蒋岩李敬云钟平尚红李太生审核咨询专家及技术人员：邵一鸣康来仪朱效科王佑春汪宁朱红郭志宏季阳刘海林肖瑶邱茂锋马春涛编写单位：中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心参编单位：中国人民解放军军事医学科学院上海市疾病预防控制中心中国医科大学北京协和医院技术顾问：Mike Ussery, Hao Zhang美国国立卫生研究院过敏及传染病研究所James W. Bremer美国Rush 大学医学中心VQA实验室Trever Peter克林顿基金中国艾滋病防治项目实验室专家Donald J. Brambilla美国华盛顿大学新英格兰研究所Francis F. Mandy加拿大公共卫生局疾病预防控制中心国家免疫学实验室前言随着HIV-1病毒载量检测在艾滋病临床辅助诊断和抗病毒治疗监测以及艾滋病科研工作中的广泛应用，我国开展该项检测工作的实验室日益增多。
自1997年艾滋病实验室首次引进HIV-1病毒载量检测技术，截至2007年底，全国已经配备了近120台HIV-1病毒载量检测仪，覆盖了疾控、医院、检疫、军队等系统。
目前，虽然许多实验室已经将病毒载量检测纳入艾滋病相关辅助诊断和治疗监测工作，但大多数实验室开展工作的时间较短，经验不足，因此，急需加强该领域的培训和质量控制工作，以保证检测结果的准确性和可靠性。
为了加强质控和保证检测质量，并得到国际上的认可，艾滋病参比实验室2004年开始参加美国NIH组织的HIV-1病毒载量检测能力验证工作。
在通过考核和积累经验的基础上，2005年启动了国内HIV-1病毒载量检测能力验证工作。
在积极组织实验室能力验证的同时，艾滋病参比实验室也对实验室技术人员进行培训，积极开展室内质控。
HIV实验室生物安全和质量控制
艾滋病实验室生物安全一、HIV的生物危害•第一类、第二类病原微生物统称为高致病性病原微生物。
人类免疫缺陷病毒（HIV）属第二类病原微生物，是高致病性病原微生物。
HIV相关检测的生物安全级别•HIV抗体检测（包括筛查和确证实验）、抗原检测和相关的免疫学检测应在符合Ⅱ级生物安全实验室（BSL-2）要求的艾滋病检测实验室中进行。
• HIV分离培养、浓缩、中和试验、细胞培养及研究工作及其它需要应用活病毒的研究工作，应在Ⅲ级生物安全实验室（BSL-3）中进行。
• HIV核酸提取和检测均应在符合Ⅱ级生物安全实验室（BSL-2）要求的艾滋病检测实验室中进行。
• HIV病毒株应保存在符合Ⅲ级生物安全实验室（BSL-3）要求的艾滋病实验室；HIV阳性样品，包括全血、血清、血桨和其他组织（液）、核酸提取物应保存在符合BSL-2要求的艾滋病实验室。
二、生物安全保证措施1.建立安全制度实验室的安全工作制度或安全标准操作程序（S-SOP）。
意外事故处理预案，主要是生物安全意外事故。
内容包括应急处理、登记和报告、调查和处理。
信息安全及保密制度：与HIV/AIDS检测相关的所有资料均应严格保密，包括送检单、检测记录、样品登记、报告单及工作人员年度检测结果等，不得对无关人员透露检测结果。
•培训和管理实验室应进行全员安全培训并强化―普遍性防护原则‖安全意识，所有的血液、未固定的组织和组织液样品，均应视为有潜在的传染性，都应以安全的方式进行操作。
所有管理和检测人员都应接受省级以上艾滋病检测实验室主持的安全培训，包括上岗前培训和复训，并接受管理人员的监督。
必须对新上岗人员进行安全教育和培训，使他们清楚实验室工作的潜在危险，通过考核等方式确认他们具备安全操作的能力后方可单独工作。
必须对新调入人员、外来合作、进修和学习的人员进行生物安全培训，经实验室主任批准后，方可进入实验室。
生物安全培训和监督应有客观详实的记录。
实验室主任应详细了解所有工作人员的教育和培训背景、特长、性格特点等。
艾滋病检测质量管理工作指南
艾滋病检测质量管理工作指南前言为了认真贯彻1997年9月中华人民共和国卫生部颁布的《全国艾滋病检测工作规范》（下称“规范”），不断提高艾滋病检测工作质量，最大限度地防止误检和漏检，保证我国HIV抗体初筛和确认实验室检测结果的正确性和准确性，避免实验室交叉感染，更好地发挥HIV检测在艾滋病防治工作中的作用，需要建立一个全面的质量管理体系。
为了帮助各级艾滋病实验室做好室内质控工作，并帮助省级艾滋病确认中心开展本地区内HIV抗体检测的质量评价工作，特制定《艾滋病检测质量管理工作指南》（下称“工作指南”），主要内容包括HIV实验室检测的质量保证（Quality Assurance，QA），质量控制（Quality Control，QC）和质量评价（External Quality Assessment，EQA）。
质量保证、质量控制和质量评价是HIV测定的重要部分。
在全面质量管理体系中，实验室内质量控制是一个重要的环节，是保证高质量操作必不可少的措施。
HIV检测的室间质量评价又是使全面质量保证体系标准化、法制化的一个途径。
因此建立运行良好的质量管理体系是保证全国高质量艾滋病检测实验室工作的重要因素。
本工作指南是在质量管理方面履行《规范》的具体实施办法，适用于我国境内按《规范》程序批准的所有各级艾滋病检测实验室。
各级卫生行政部门负责辖区内艾滋病检测实验室实施本工作指南的监督工作。
一质量保证（QA）（一）定义质量保证是指从接收检验标本起，到实验室发出报告止，为确保实验室最终报告结果的正确性所进行的全过程，包括采取各种行政和技术上的措施和方法。
质量保证是确保实验结果质量的基本条件，其实施程度直接影响试验结果和最后报告的每个参数。
质量保证取决于良好的质量控制程序，并经良好的质量评价程序加艾滋铺检测质量管理工作指南以鉴定。
因此，要求所有的实验室工作人员有责任时刻注意解决影响实验结果的每个环节上可能出现的问题。
（二）实验室质量保证1.行政支持HIV初筛和确认实验室的质量保证是整个艾滋病检测工作的组成部分。
HIV抗体检测与质量控制
体外生存
人类免疫缺陷病毒在人体外生存能力极 差，不耐高温，抵抗力较低，离开人体 不易生存，常温下只可生存数小时至数 天。
HIV对热敏感。在56℃条件下30分钟即 失去活性，但在室温保存7天，仍保持活 性。
灭活方法
国际卫生组织推荐对艾滋病病毒灭活加 热100℃持续20分钟，效果较理想。
病毒形态
加50ul样品于样品垫中
手指血方法
15分钟内读取结果
加一滴缓冲液
静脉血方法
质控条 病人条
快速检测（RT）及其它检测试验
优点: 快速 单份标本检测 不需额外试剂或设备 操作简便 缺点:
肉眼判断较主观 价格较贵 结果不易保存（建议拍照保存）
HIV筛查试剂的选择
检测目的 实验设施条件 价格 其他：检测数量、标本用量、复检问题、习惯等
抗体确证试验检测流程 免疫印迹试验（WB/RIBA）
不确定
阴性
阳性 出现HIV-2指示带
核酸试验 或2-4周后
随访
报告HIV-1 报告HIV-1 抗体阴性 抗体阳性
根据情况 进一步 检测HIV-2
图5 免疫印迹试剂（WB/RIBA）试验流程
抗体确证试验检测报告
HIV抗体WB及 RIBA/LIA试验结果报告： （1）符合HIV-1抗体阳性判断标准，报告“HIV-1抗体阳 性”，并按规定做好检测后咨询和疫情报告。符合HIV-2抗 体阳性判断标准，报告“HIV-2抗体阳性”，并按规定做好 检测后咨询和疫情报告。 （2）符合HIV抗体阴性判断标准，报告“HIV抗体阴性”。 如疑似“窗口期”感染，建议2-4周后随访或进一步做HIV 核酸检测，尽早明确诊断。 （3）符合HIV抗体不确定判断标准，报告“HIV抗体不确 定”，在备注中应注明“2-4周后复检”或尽快做核酸检测。
[实用参考]HIV-1病毒载量检测及质量保证指南
![[实用参考]HIV-1病毒载量检测及质量保证指南](https://img.taocdn.com/s3/m/0bcebe44f46527d3240ce051.png)
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第一章 总 则
1.1 意义 HIV-1 病毒载量是艾滋病防治工作中一项重要的实验室检测指标。检测 HIV-1 病毒载量
可以监控和预测病程，指导艾滋病患者的抗病毒治疗，包括确定治疗时机、选择治疗方案、 评价治疗效果；结合疾病临床症状和其它实验指标，可作为早期感染诊断的辅助手段；还可 用于婴儿早期感染的辅助诊断以及采供血机构样品的窗口期检测。为了准确地检测 HIV-1 病 毒载量，必须对开展 HIV-1 病毒载量检测的实验室进行规范化管理和质量控制，才能保证检 测结果的准确性和可靠性。 1.2 目的
指导 HIV-1 病毒载量检测工作，规范实验室质量控制与管理。 1.3 适用范围
适用于我国开展 HIV-1 病毒载量检测工作的所有实验室。
优质室设置
各种 HIV-1 病毒载量检测方法需要相应的辅助设备才能完成检测。以下为 HIV-1 病毒载 量检测实验室不同分区内必备的辅助设备及耗材。 2.1 样品处理区：
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HIV-1 病毒载量检测及质量保证指南（20PP 版） 目录
第一章 总则 第二章 实验室设置 第三章 样品的采集、处理、保存、运输 第四章 常用 HIV-1 病毒载量检测方法简介 第五章 室内质量控制 第六章 外部质量控制 第七章 实验室生物安全
附表 1 常见问题分析和处理 附表 2 HIV-1 病毒载量检测样品送检及接收单 附表 3 HIV-1 病毒载量检测能力验证样品接收专用单 附表 4 HIV-1 病毒载量检测报告单 附表 5 HIV-1 病毒载量能力验证结果专用报告单（NASBA) 附表 6 HIV-1 病毒载量能力验证结果专用报告单（RT-PCR)
优质参考文档 本指南由中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心艾滋病参比实验室组织有 关专家撰写，由中国疾病预防控制中心批准执行。 编写主持人：蒋岩 编写人员： 潘品良 蒋岩 李敬云 钟平 尚红 李太生 审核咨询专家及技术人员：邵一鸣 康来仪 朱效科 王佑春 汪宁 朱红 郭志宏 季阳
HIV检测点的质量管理与控制
4、室内质控血清的制备
收集阳性血清 （无溶血、黄疸、脂肪）
56℃、30min灭活 3000r/min离心15min
正常人血清或10%小牛血清 PBS溶液稀释
测量值
分装，-20 ℃冻存
谢 谢！
谢谢！
质量控制
一、实验室质量控制的定义
为达到质量要求所采取的作业技术和活动。 定义
二、快速法抗体检测的质量控制 1、室内质量控制的质控品
试剂内部对照
判断试验有效性，但不能作为室内质控品。
室内质控品
监控检测的重复性。可只设弱阳性质控，以试剂盒临界值的2~3倍 为宜。
2、试剂内对照
在质控窗口内出现质控带，该质控带是试剂自带的内部过程质控，说明实验室操 作全部完成并且实验所用材料处于工作状态。清洁的检测区背景是内部阴性过程质 控。如实验完成后为呈现红色质控带，说明试剂盒内质控无效，该试验结果无效， 样品须重检。
国家法定部门定期校准（每年至少1次） 须做好日常维护及使用记录
六、文件和文件管理 1.标准操作程序（SOP）
至少建立以 下SOP
样品的接收、登记、处理和保存 检测方法和步骤 试剂使用和保存 仪器的使用、维护和校准 质量控制要求及程序 结果解释与报告 保密程序 实验室数据、相关文件记录与保存 不确定样品追踪和处理 实验室安全防护、清理及消毒
注：血清置4℃冰箱5天内完成检测
四、检测方法和试剂选择
试剂
必须是HIV-1/2混合型,并且经国家食品药品监督管理局注 册批准、批检合格、在有效期内，经临床质量评估敏感性 和特异性高。
更换试剂批号时应进行平行实验。
检测方法
使用快速检测的方法，常用：金标、硒标。
五、设备维护与校准
加样器 温度计 高压锅
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HIV病毒学检测及质量保证指南编写人员：潘品良蒋岩李敬云钟平尚红李太生审核咨询专家及技术人员：邵一鸣康来仪朱效科王佑春汪宁朱红郭志宏季阳刘海林肖瑶邱茂锋马春涛编写单位：中国疾病预防操纵中心性病艾滋病预防操纵中心参编单位：中国人民解放军军事医学科学院上海市疾病预防操纵中心中国医科大学北京协和医院技术顾咨询：Mike Ussery, Hao Zhang美国国立卫生研究院过敏及传染病研究所James W. Bremer美国Rush 大学医学中心VQA实验室Trever Peter克林顿基金中国艾滋病防治项目实验室专家Donald J. Brambilla美国华盛顿大学新英格兰研究所Francis F. Mandy加拿大公共卫生局疾病预防操纵中心国家免疫学实验室前言随着HIV-1病毒载量检测在艾滋病临床辅助诊断和抗病毒治疗监测以及艾滋病科研工作中的广泛应用，我国开展该项检测工作的实验室日益增多。
自1997年艾滋病实验室首次引进HIV-1病毒载量检测技术，截至200 7年底，全国差不多配备了近120台HIV-1病毒载量检测仪，覆盖了疾控、医院、检疫、军队等系统。
目前，尽管许多实验室差不多将病毒载量检测纳入艾滋病有关辅助诊断和治疗监测工作，但大多数实验室开展工作的时刻较短，体会不足，因此，急需加大该领域的培训和质量操纵工作，以保证检测结果的准确性和可靠性。
为了加大质控和保证检测质量，并得到国际上的认可，艾滋病参比实验室2004年开始参加美国NIH组织的HIV-1病毒载量检测能力验证工作。
在通过考核和积存体会的基础上，2005年启动了国内HIV-1病毒载量检测能力验证工作。
在主动组织实验室能力验证的同时，艾滋病参比实验室也对实验室技术人员进行培训，主动开展室内质控。
这些工作对提升HIV-1病毒载量的检测技术，保证质量起到了重要作用。
为了进一步规范艾滋病实验室HIV-1病毒载量检测，建立标准化质量操纵程序，准确开展各项检测及质量操纵工作，特制定本指南。
本指南是按照各种HIV-1病毒载量检测方法的技术要求，结合现行的国内外有关技术规范而制定。
本指南针对HIV-1病毒载量检测的实验室设置、样品治理、检测技术、质量操纵、生物安全等方面提出指导。
本指南自2006年初正式开始编写，性病艾滋病预防操纵中心多次组织了有国内外专家参加的指南编写专项技术咨询会，与会专家对指南提出了专门多建设性意见和建议，美国NIH病毒载量检测质量保证实验室专家多次对指南进行认确实批阅和具体指导。
指南编写过程中，也认真听取了实验室一线检测人员的具体需求和建议，并补充了大量的实验数据，包括HI V-1病毒载量检测值的稳固性、冻融阻碍实验与不同检测方法之间比较的实验数据等。
在此基础上，通过多次修订、补充和审定，于2007年11月完成《HIV-1病毒载量检测及质量保证指南》的最后定稿。
由于国内外还没有可作为参考的HIV-1病毒载量检测及质量操纵的有关指南，因此本指南要紧提出一些原则上的参考建议，其中定有不妥之处，期望宽敞同仁提出意见，以便持续完善。
致谢在本指南的编写过程中，世界卫生组织、克林顿基金中国艾滋病防治项目和美国NIH等国际组织与机构给予了大力支持，全国HIV-1病毒载量检测实验室一线操作人员提出了许多建设性的意见和具体需求，艾滋病参比实验室工作人员毛玮、陶晓霞进行了大量的补充实验和文字编辑工作，才保证本指南的编写顺利完成，在此一并向他们表示真诚的感谢。
中国疾病预防操纵中心性病艾滋病预防操纵中心主任吴尊友研究员在本指南编写过程中提出了重要的修改意见，在此专门致谢。
HIV-1病毒载量检测及质量保证指南（2007版）名目总则实验室设置样品的采集、处理、储存、运输常用HIV-1病毒载量检测方法简介室内质量操纵外部质量操纵实验室生物安全附表1 常见咨询题分析和处理附表2 HIV-1病毒载量检测样品送检及接收单附表3 HIV-1病毒载量检测能力验证样品接收专用单附表4 HIV-1病毒载量检测报告单附表5 HIV-1病毒载量能力验证结果专用报告单（NASBA)附表6 HIV-1病毒载量能力验证结果专用报告单（RT-PCR)参考文献缩略语第一章总则1.1意义HIV-1病毒载量是艾滋病防治工作中一项重要的实验室检测指标。
检测HIV-1病毒载量能够监控和推测病程，指导艾滋病患者的抗病毒治疗，包括确定治疗时机、选择治疗方案、评判治疗成效；结合疾病临床症状和其它实验指标，可作为早期感染诊断的辅助手段；还可用于婴儿早期感染的辅助诊断以及采供血机构样品的窗口期检测。
为了准确地检测HIV-1病毒载量，必须对开展HIV-1病毒载量检测的实验室进行规范化治理和质量操纵，才能保证检测结果的准确性和可靠性。
1.2目的指导HIV-1病毒载量检测工作，规范实验室质量操纵与治理。
1.3适用范畴适用于我国开展HIV-1病毒载量检测工作的所有实验室。
第二章实验室设置各种HIV-1病毒载量检测方法需要相应的辅助设备才能完成检测。
以下为HIV-1病毒载量检测实验室不同分区内必备的辅助设备及耗材。
2.1样品处理区：2.1.1生物安全柜：二级2.1.2离心机（32000g，可离心1.5mL 管子）2.1.5加样器1套（20μL、200μL、1000μL），为专用设备2.1.6有滤芯的一次性吸头（无DNA和RNA酶）2.1.7计时器2.1.8旋涡振荡器：震动频率可调2.1.9 一次性工作服、帽、口罩、无粉手套、鞋套2.2试剂预备区：2.2.1超净工作台（或密闭工作台）2.2.2加样器1套（20μL、200μL、1000μL），为专用设备2.2.3离心机（18000g，可离心1.5mL 管子）2.2.5 计时器2.2.6旋涡振荡器，震动频率可调2.2.7有滤芯的一次性吸头（无DNA、RNA酶）2.2.8 1.5mL 管子（无DNA和RNA酶）和1.5mL 试管架2.2.9一次性工作服、帽、口罩、无粉手套、鞋套2.3扩增产物分析区：2.3.1 HIV-1病毒载量检测仪2.3.2加样器1套（20μL、200μL、1000μL）2.3.4水浴箱( 41℃)2.3.5旋涡振荡器：震动频率可调2.3.6有滤芯的一次性吸头（无DNA、RNA酶）2.3.7一次性工作服、帽、口罩、无粉手套、鞋套2.4 HIV-1病毒载量检测实验室设备分布示意图2.4.1总体原则：各区独立、操纵风向、因地制宜、方便工作。
具体来讲：2.4.1.1各区必须是相互独立的，有条件各区内可分不设置缓冲间，以保证不同区之间始终完全分隔开。
2.4.1.2各区的仪器设备以及各种物品必须是专用的。
2.4.1.3 试剂预备区和样品处理区可保持低度正压（或常压）状态，使空气流向始终由室内向外，以幸免扩增污染物进入此区域。
2.4.1.4 扩增产物分析区可保持低度负压状态，使空气流向始终由室外向内，以防止扩增产物造成其他区域的交叉污染。
可安装排风扇或其他排风装置。
2.4.1.5扩增产物分析区能够设在远离其他各区的地点。
2.4.1.6工作时必须遵循单一工作流向进行，即工作流向只能从试剂预备区开始，到样品处理区，然后再到扩增产物分析区。
第三章样品的采集、处理、储存和运输样品采集、处理、储存和运输，按照所使用检测方法的要求严格执行。
用于HIV-1病毒载量检测的样品举荐采纳抗凝血浆。
3.1 样品的采集采样器材：一次性抗凝真空采血管、持针器、蝶形针等。
抗凝剂：通常采纳EDTA（乙二胺四乙酸）或ACD（枸橼酸钠），并符合不同检测方法对样品的要求。
样品标识：在采血管上贴对应的样品编号，并填写HIV-1病毒载量检测样品送检及接收单（附表2）。
样品采集量：通常采集全血3～5ml, 采集的样品量应尽可能与定量采血管的刻度一致，采集量过多或不足，会造成血液凝固或被稀释。
样品的混匀：采集血液后，赶忙轻轻上下颠倒抗凝管约10次，使血液与抗凝剂充分混匀。
猎取其它信息：包括采集对象的差不多信息和流行病学资料，抗病毒药物使用情形，以往的实验室检测结果，在HIV-1病毒载量检测样品送检及接收单（附表2）上备注栏注明。
3.2 样品的处理3.2.1 一样要求在采血后6小时内进行离心，室温下800-1200xg离心1 0分钟。
3.2.2 分离后，吸出血浆，分装到无菌的聚丙烯螺口冻存管中，并注明分装时刻。
在冻存管上贴样品编号。
3.2.3 血浆样品不能灭活。
3.2.4 做好样品处理记录。
3.3 样品的储存3.3.1储存条件：按照血浆检测时刻而定，4天内可在4℃临时储存，3个月以内应冻存于-20℃以下，3个月以上应置于-70℃以下。
不举荐使用自动除霜冰箱。
3.3.2血浆样品冻融不应超过3次。
3.3.3监控并记录储存温度以及样品状态的变化。
3.3.4防止样品变质、泄漏及污染。
3.4 样品的运输按照《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输治理规定》的要求运输，并严格操纵运输的冷冻状态，防止样品冻融。
3.5 样品的发送和接收3.5.1发送样品时必须填写样品HIV-1病毒载量检测样品送检及接收单（附表2）。
3.5.2接收样品时，核对样品数量，检查样品状况，按HIV-1病毒载量检测样品送检及接收单（附表2）核对。
3.5.3 样品管破旧造成样品溢出、显现明显溶血、凝血的样品，不宜作HIV-1病毒载量检测；如果样品差不多融解，4℃储存并尽快检测，记录冻融一次。
第四章常用HIV-1病毒载量检测方法简介目前常用的HIV RNA测定方法为核酸序列依靠性扩增(NASBA) 技术，代表产品为NucliSens ECL 及其升级产品荧光实时PCR技术NucliSens Ea syQ仪；逆转录PCR系统（RT-PCR）技术，代表产品为AMPLICOR HIV-1 MONITOR assay；分枝DNA信号放大系统（bDNA）技术，代表产品为bDNA 340分析仪；实时荧光定量PCR扩增技术（real-time PCR），M2000与国产试剂盒均属此类技术。
4．1 核酸序列依靠性扩增(NASBA)技术最早产品为NucliSens ECL定量RNA测定方法，最近被NucliSens E asyQ新一代荧光实时定量PCR所取代。
NASBA技术是一种等温扩增系统，其扩增基础在于系统内的混合酶系统，此系统内含有逆转录酶AMV-RT和T7-DNA多聚酶在体外模拟逆转录病毒体内复制过程。
此方法可分成四个步骤：核酸开释、提取、扩增和测定。
扩增后的产物使用NASBA QR电化学发光（ECL）系统进行检测和定量，此系统包括亲和素标记的磁珠、生物素标记的核苷酸片段（此片段可与新合成的RNA产物的一端互补结合）及可特异与四种产物结合的探针（探针上标记有铷元素），这四种探针可分不与不同的RNA产物结合。