实验7小鼠骨髓细胞染色体标本的制备和观察
小鼠骨髓细胞染色体标本 制作和观察-医学资料
可见中西医学，一个是以“功能人” 为概念 的独特 的哲学 医学理 论体系 ，一个 是以“ 解剖人 、肉体 人”为 概念的 新兴的 现代医 学科学 理论体 系，二 者都不 是以完 整人为 研究对 象的科 学，从 理论讲 二者都 不是科 学的， 势必影 响各自 发展。 事实也 证明这 一切， 中医长 期停滞 不前、 疗效也 不确实 。西医 尽管发 展到目 前的基 因分子 层次， 但疾病 发病率 居高不 下，对 绝大部 分疾病 发病原 因认识 不清、 发病机 理弄不 明白， 治疗受 到制约 ，在小 小SAR S、禽 流感面 前竟束 手无策 ，在糖 尿病、 癌症、 心脑血 管疾病 、尿毒 症等相 当多疾 病面前 更是不 得不求 助或借 助中医 治疗。 一个是 疗效不 确实， 一个是 有些甚 至相当 多疾病 无法治 疗，这 就是中 西医学 结合的 缘由。 然而， 由于二 者是两 套理论 、两股 道上跑 的车， 风马牛 不相及 ，从理 论上讲 就没有 结合的 可能， 只是形 式上的 融合罢 了。故 出现西 医对治 疗不了 的疾病 只好求 助中医 ，而中 医则往 往采用 西医诊 断中医 治疗， 以及中 西治疗 法一块 用的局 面。
遗传学实验
小鼠骨髓细胞染色体标本 制作与观察
实验目的 实验原理 实验用品 实验步骤 绘图 思考题
实验目的
掌握动物骨髓染色体标本制备基 本程，了解操作步骤的原理
实验原理
小鼠骨髓细胞中的造血干细胞是 生成各种血细胞和原始细胞，具有高 度的分裂能力，本实验采用这一材料， 通过前处理，低渗，固定，制片，染 色等步骤制得染色体标本，可观察到 许多处于分裂中期的染色体，可以进 行染色体组型分析。
实验用品
1．材料：小白鼠 2．器具：注射器（1ml,5ml） 剪刀 镊子
实验七小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
实验七小鼠骨髓细胞染色体标本的制备一、实验目的1. 学会小鼠骨髓细胞的采集和处理方法。
2. 掌握细胞较好的贴壁与生长条件，以保证细胞的好。
3. 学会最常用的Gimsa染色方法，使出现的幻觉具有明朗的色调，以便细胞的编号与统计。
二、实验原理骨髓细胞是一种多能性细胞，可分化为血液成分或骨骼系统的成分。
骨髓细胞被用于检测细胞遗传学异常，在染色体物质遗传及细胞迁移等方面具有潜在用处，并可为结构遗传学提供信息。
作为染色体标本制备的来源，一般选用小鼠骨髓细胞是最为经常采用的试验模型之一，常常作为各类染色体研究、映射和诊断的标本；其区别如来源易得、繁殖成本低、染色体数量较少，易于研究、成熟度高等因素显得优越。
三、实验步骤1. 实验前准备工作（1）保存干燥灭菌的小鼠骨髓细胞培养基，避免接触灰尘。
（2）检查各种器械的完整性，保证手段的杀菌处理。
（3）使用有缩小五倍功能的显微镜，以确保细胞图片清晰度与细胞形态的准确。
（4）打开红外线灯，以增强视觉效果并避免光损伤。
（5）按实验方案准备各种试剂和设备。
（6）实验室内准备50 mL恒温水浴和常规离心机。
2. 骨髓细胞的采集（1）设备：小鼠解剖刀片、50mL离心试管、海绵、抽管等。
（2）用70%酒精清洗瓶子的注射器，使用注射器收集小鼠间隔内的骨髓，放入存储试管中。
（3）轻轻摇动骨髓，使其中的细胞与上清液充分混合均匀。
3. 细胞的处理（1）细胞浓度的调整：从建立骨髓细胞培养物开始，骨髓细胞培养物可以在50mL培养基中存在。
使用试管取出足量细胞，可用比值0.2 mL的浓度悬液被移入12孔文化板中，吸入的细胞细胞数为2×106个左右。
（2）添加培养基到细胞培养物中，以充分覆盖细胞。
（3）将板加入约为35℃，5%二氧化碳环境下的恒温培养箱中，进行配队。
（4）半小时后使用显微镜检查细胞的附着，然后循环补充适量接种。
在24小时之前，每隔2小时更换于第一个。
4. Gimsa染色法（1）准备细胞标本：从培养基中取出涂片架，然后“组织培养板”模式的检测做法，将液体在上面包括涂片架移至吸满液体。
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备与观察ppt课件
9．在干净、湿冷的载玻片上以高距离滴2～3 滴上层细胞悬液，气干或在酒精灯上文火 烘干。注意在滴片时要有一定的高度（大 于40cm），使细胞膜破裂后易于使染色体 散开，并尽量使滴片上的细胞分布均匀， 不要重叠。
10．气干，染色。 在一块洁净的玻板上，将玻片标本有细胞的一面 朝下用牙签架空于玻板上。 11．用滴管将配好的染液充满于玻板与载玻片之间 的空隙中，注意载片上有细胞面的进行染色并在 滴加染液时注意排除气泡。视室温而定，染色15 分钟。 12．染色后，轻轻揭起玻片，倾斜玻片在自来水管 下细水流冲洗数秒，冲掉染液，擦干玻片标本底 面和四周，显微镜观察和分析。注意不要搞错沾 有细胞的一面。选择染色较好、较分散、形态清 晰的细胞分裂相，进行显微观察。
小鼠骨髓细胞染色体 标本的制备与观察
实验目的：
1．初步掌握动物骨髓细胞染色体的制备方法。 2．了解小鼠骨髓细胞染色体的形态特点。Fra bibliotek实验原理：
染色体是细胞分裂时期遗传物质存在的特定 形式，是染色质紧密包装的结果。染色体 是有机体遗传信息的载体，对染色体的研 究在生物进化、发育、遗传和变异中有十 分重要的作用。
谢 谢 大 家
核型分析均是以中期染色体为标准，对制 作出的染色体标本进行照相以获得染色体 的显微图像，并将其剪裁排列即成，或用 专用软件进行分析排列。 凡处于活跃增殖状态的细胞，或者经过各 种处理后，细胞就可进入分裂期此时均可 用于染色体分析。
在正常动物体内，骨髓是处于不断分裂的 组织之一。此时给动物注射一定剂量的秋 水仙素可使许多处于分裂的细胞停滞于中 期（ 秋水仙素可阻断纺锤丝微管的组装）， 然后采用常规空气干燥法制备染色体，即 可得到大量可供分析的染色体标本。本方 法简便、可靠，不需要经体外培养和无菌 操作。
小鼠骨髓细胞染色体标本制备
齐鲁工业大学实验报告
课程名称：细胞生物学实验指导老师：实验日期：
院（系）：专业班级：实验地点：
学生姓名：学号：
实验项目名称: 小鼠骨髓细胞染色体标本制备
一、目的：
初步掌握小鼠骨髓细胞染色体制作方法。
二、原理：
小鼠→秋水仙素处理→骨髓细胞→低渗处理→固定→滴片→染色→观察
三、实验用品：
(1)试剂：200ug/ml秋水仙素溶液，0.075mol/L KCl低渗液、甲醇溶液、冰醋酸溶液、pH6.8磷酸缓冲液、Giemsa原液、生理盐水。
(2)仪器：解剖板、解剖剪、大小镊子、吸管、离心管、注射器、离心机、培养皿、恒温水浴锅、量筒、预冷载玻片、酒精灯、普通天平、香柏油、二甲苯、擦镜纸。
(3)材料：小鼠
四、操作要点：
小鼠→秋水仙素2-3h→脱臼法处死→取四肢骨去肌肉（爪）→生理盐水洗净→剪碎入离心管→KCl 2ml→振荡器30s→加KCl 3ml→37℃水浴15min→甲醇:乙酸固定液1ml→手动混匀→静置1min→3000rpm 6min→弃上清液→加固定液3ml→手动摇匀→静置5min→
3000rpm 6min→弃上清液→加固定液0.5ml→混匀→滴片（冰片距离）→过火（勿过热）→干燥→入Giemsa 8min→水洗→干燥→镜检
五、观察人体细胞染色体标本片
六、结果与讨论：。
实验小鼠骨髓染色体制备和观察
8.小鼠染色体观察： 低倍镜、高倍镜下寻找染色体分散的中
期分裂相.
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
小鼠骨髓染色体 10 ×10
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小鼠骨髓染色体 10 ×40
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➢ 数目观察：小鼠2倍体细胞染色
体，数目2n=40条。其中19对为常染 色体，一对为性染色体，染色体的核 型分为4组。雄性 XY, 雌性XX,Y染 色体最小。
➢形态特征观察：端着丝粒染色体
“U”“V”。
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五、注意事项
1．掌握好秋水仙素的浓度和处理时间； 2．离心前需要配平； 3. 小鼠骨髓要冲洗干净，以收集足够的骨髓细胞； 3．低渗处理是实验成败的关键，注意低渗时间； 4．固定液要现配现用，固定要充分； 5．载玻片要洁净并预冷，滴片要有一定的高度； 6. 细胞悬液不能太稀，要呈乳白色； 7. 烤片时温度不能太高。 8. 冲洗染液时水流要缓慢，以免细胞流失过多。
放出来。
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秋水仙素处理：秋水仙素溶液可抑制纺锤体的形 成，使正在分裂的骨髓细胞停止在细胞分裂中期， 积累大量中期分裂相细胞。
低渗作用: 使细胞充分膨胀，减少染色体间的相互 缠绕和重叠。
预固定：终止低渗作用，使细胞离心时不易破裂 ，固定维持细胞形态结构。
高距离滴片：使细胞膜易于破裂，获得中期染色 体标本，在显微镜下观察染色体的结构和数量。
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三、实验器材和试剂
• 1.器材 蜡盘、手术剪、小镊子、平皿、注射
小鼠骨髓细胞染色体标本制作与观察
小鼠骨髓细胞染色体标本制作与观察试验目的把握动物骨髓染色体标本制备基本过程，了解操作步骤的原理试验原理小鼠骨髓细胞中的造血干细胞是生成各种血细胞和原始细胞，具有高度的分裂力量，本试验采纳这一材料，通过前处理，低渗，固定，制片，染色等步骤制得染色体标本，可观看到很多处于分裂中期的染色体，可以进行染色体组型分析。
试验原理制备方法包括以下几个要点:1. 用肯定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成，使细胞分裂停滞在中期, 使中期染色体停留在赤道面处2. 用低渗法使将细胞膨胀, 以至于在滴片时细胞被胀破, 使细胞的染色体铺展到载玻片上3. 空气干燥法可使使细胞的染色体在载片上展平, 经Giemsa染色后便可观看到染色体的显微图象试验用品1．材料：小白鼠2．器具：注射器（1ml,5ml）剪刀镊子玻璃吸管10ml刻度的离心管离心机载玻片盖玻片显微镜滤纸擦镜纸纱布恒温水浴锅3．药品：0.01%秋水仙素0.075MKCl 固定液（甲醇：冰醋酸=3：1）2%柠檬酸钠改良石炭酸品红试验步骤预处理取股骨冲洗骨髓离心低渗离心固定离心滴片染色观看1．预处理：试验前2.5-3小时，按每克体重注射0.02ml，给小白鼠腹腔注射秋水仙素。
2．取股骨：断颈处死小鼠后，剔去肌肉组织，洗净3．冲洗骨髓：剪去两端的股骨头，吸取10ml 2%柠檬酸钠，注射器针头插入股骨一端,反复冲洗两根股骨，洗液收集到10ml的离心管中4 ．离心：1000r/min 离心10 min ,弃上清5 ．低渗：加入8ml 0.075mol/LKCl溶液,滴管吹散,37℃水浴低渗30 min ，中间（约15 min ）再吹散一次，使细胞分散，悬浮于溶液中6．离心：1000r/min离心10 min，弃上清7．固定：沉淀加8ml固定液，并用吸管轻轻吹匀，进行固定，中间（约15 min ）再吹散一次试验步骤8. 离心：1000r/min 离心10 min ,留1 ml 左右上清，轻轻吹打成细胞悬液9. 滴片：用吸管吸取细胞悬液，高度30-40 cm，滴在预冷的载玻片上，在酒精灯火焰上微微加热，室温晾干10. 染色：改良石炭酸品红染色10-20 min11. 观看：低倍高倍。
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备【目的要求】1.掌握小鼠细胞染色体标本制备方法。
2.计数并观察小鼠骨髓细胞分裂中期染色体的数目及特点【基本原理】在骨髓细胞中，有丝分裂旺盛，因此不需要体外培养就可以直接得到中期细胞。
骨髓细胞具有高度的分裂活性，经秋水仙素或秋水酰胺处理后，使分裂细胞阻断在有丝分裂中期，再经低渗处理、固定、滴片、染色等步骤，可制作较好的骨髓细胞的染色体标本。
【实验用品】1．器材：解剖刀、剪刀、镊子、注射器、离心机、离心管、恒温水浴箱、冰冷载玻片、酒精灯、大培养皿、显微镜、纱布,标签纸，记号笔等；2．试剂0.1%秋水仙素溶液、Carnoy’s固定液（甲醇：冰醋酸＝3：1）、0.075 mol / L KCI溶液、Giemsa 染液等。
3．材料：65-90天健康小鼠（生技09级72人，新华09生物技术36人，生科08级75人，生技08级70人，共253人，需购小鼠110只）【方法与步骤】1．前处理取材前3～4 h，向腹腔内注射秋水仙素。
注射浓度随动物种类不同而异，一般每克体重注射2～6μg，注射总量不宜超过2 ml（例如一只体重50 g的蟾蜍，若按4μg / g注射，需注射浓度为0.1％的秋水仙素溶液0.2 ml ）。
秋水仙素的主要作用是使分裂细胞阻断在有丝分裂中期，增加中期分裂相的比例。
2．取骨髓细胞处死动物，用装有生理盐水的注射器反复冲洗出骨髓细胞，并用注射器筒轻轻吹打，使细胞团块分散，静置片刻、待大组织团块沉淀后，用吸管将骨髓细胞悬浮液移至离心管中，以1000 r / min 离心5~10 min，弃去上清液。
3．低渗根据骨髓细胞液的多少，加0.075 mol / L的KCI液5～6 ml，在37℃水浴箱中或室温下低渗20～30 min。
低渗时间过长，易造成细胞破裂；时间过短，则染色体难以分散。
4．预固定低渗完毕，立即加入1 ml 新配制的预冷Carnoy’s固定液，用吸管将细胞轻轻吹打均匀，进行预固定。
小鼠骨髓染色体制备及观察
小鼠骨髓染色体制备及观察许多化学毒物具有遗传毒性基因突变：碱基置换和移码突变。
染色体畸变（structural chromosome aberration)：是指由于染色体或染色单体断裂，造成染色体或染色单体缺失或引起各种重排，从而出现染色体结构异常颜色体数目异常：整倍性和非整倍性改变。
染色体损伤的类型：☐染色体数目的改变①非整倍体：亚二倍体或超二倍体。
②整倍性改变：染色体成倍增加。
☐染色体结构的改变1.断裂和裂隙：2.微小体；较断片小而呈圆形。
3.有着丝点环：带有着丝点部分，两端形成环状结构并伴有一双无着丝点断片。
4.无着丝点环：成环状结构。
5.插入/重复8 非特定性型变化：如粉碎化、着丝点细长化、粘着等整倍性畸变非整倍性畸变如何评价化合物的遗传毒性？鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验（Ames试验）：是最常用的检查基因突变的方法。
检测受试物诱发鼠伤寒沙门氏菌组氨酸营养缺陷型突变株(his-)回复突变成野生型(his+)的能力☐评价染色体损伤的试验方法包括：常用啮齿类动物骨髓嗜多染红细胞(PCE) 微核试验 体外培养细胞或者体内染色体畸变试验2、实验原理☐有丝分裂：真核细胞的染色质凝集成染色体，复制的姐妹染色单体在纺锤丝的牵拉下分向细胞的两极，从而产生两个染色体数目和遗传性相同的子细胞的一种细胞分裂的类型。
☐细胞周期：从一次有丝分裂完成时开始，到下一次有丝分裂结束时为止，成为一个细胞周期。
G1：从有丝分裂结束到DNA 复制之前；S: DNA 合成；G2：DNA 复制结束到有丝分裂开始；M ：有丝分裂期✓增殖群细胞，细胞始终保持分裂能力，持续进入分裂循环；✓不再增殖细胞，比如神经细胞；✓暂不增殖细胞，比如肝脏细胞。
端着丝粒染色体。
小鼠骨髓细胞染色体制备
小鼠骨髓细胞染色体制备染色体制备是生物学研究中常用的实验技术之一，通过染色体制备可以获得染色体的形态和结构信息，从而进一步研究其功能和遗传特性。
本文将介绍小鼠骨髓细胞染色体制备的方法和步骤。
一、材料准备1. 小鼠骨髓细胞2. 10% 碘酒3. 0.075M KCl 溶液4. 甲醛溶液（4%）5. 甲基绿染液6. 预热37°C恒温水浴7. 玻片和载玻片夹二、实验步骤1. 将小鼠安乐死并取出骨髓，将骨髓切碎并转移到15ml离心管中。
2. 加入适量的10%碘酒，使得骨髓完全被浸泡，放置室温下静置15分钟，使细胞均匀染色后固定。
3. 使用离心机以1000rpm离心10分钟，将碘酒倒掉。
4. 加入适量的0.075M KCl 溶液，使骨髓细胞悬浮，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。
5. 再次加入适量的0.075M KCl 溶液，使骨髓细胞悬浮，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。
6. 加入适量的甲醛溶液（4%），使骨髓细胞固定，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。
7. 加入适量的甲醛溶液（4%），使骨髓细胞固定，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。
8. 加入适量的甲醛溶液（4%），使骨髓细胞固定，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。
9. 加入适量的甲基绿染液，使骨髓细胞染色，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。
10. 加入适量的甲基绿染液，使骨髓细胞染色，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。
11. 加入适量的甲基绿染液，使骨髓细胞染色，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。
12. 将悬浮的骨髓细胞滴于预热的玻片上，并用载玻片夹轻轻压平。
13. 将载玻片夹放入预热37°C的恒温水浴中，静置10分钟。
14. 将载玻片夹取出，用甲醛固定液稍微洗净，并用酒精进行脱水。
15. 将载玻片夹放入洗净过的甲醛固定液中浸泡10分钟，然后用酒精进行脱水。
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
细胞培养：在适宜的条件下将细胞从体内分离出来进行体外培养 传代：将培养的细胞按照一定的比例进行分装使细胞能够继续生长
制备前的准备：选 择合适的细胞培养 并维持细胞生长。
细胞固定：使用固 定剂将细胞固定在 一定位置防止细胞 移动。
细胞染色：根据实 验需求选择合适的 染色剂进行染色。
观察与拍照：使用 显微镜观察染色后 的细胞并记录照片 。
小鼠骨髓细胞染色体 制备与观察
汇报人：
目录
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实验准备
染色体制备
观察和分析
实验结论
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实验准备
小鼠骨髓细胞
培养基
胰蛋白酶
秋水仙碱
实验仪器：显微镜、离心机、细胞培养皿、细胞 刮刀等
实验试剂：生理盐水、胰蛋白酶、甲醇、冰醋酸、 Giems染料等
准备实验器材：显微镜、染色剂、 细胞培养皿等
染色体测量：使用显微测微尺等工具测量染色体的长度、宽度、着丝粒位置等特征有助于分析染色体的形态和结 构。
染色体组型分析：根据染色体的数目、形态和结构特征进行染色体组型分析有助于了解小鼠骨髓细胞的遗传特征 和变异情况。
染色体核型分析：通过观察染色体的数目、形态和排列方式分析染色体的核型有助于了解小鼠骨髓细胞的染色体 异常和遗传疾病。
实验前要洗手戴手套避免手上的杂 菌污染细胞。
染色体制备过程中要控制好温度和 时间避免温度过高或时间过长导致 细胞死亡。
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染色体制备过程中要保持细胞活性 避免细胞死亡。
染色体制备过程中要选择适当的染 色剂避免使用过多的染色剂导致细 胞死亡。
观察和分析
观察步骤：将制备好的小鼠骨髓细胞染色体放在显微镜下调整焦距观察染色体的形态和分布
小鼠骨髓细胞染色体标本制备
三、实验材料、器具和药品：
1、材料： 小白鼠 2、器具： 注射器（1ml,5ml）、5号针头、 解剖盘、解剖剪、镊子、玻璃吸管、 10ml刻度的离心管、离心机、载玻片 盖玻片、显微镜、滤纸、擦镜纸、棉 花、量筒、天平、恒温水浴锅等。
3、药品：
0.01%秋水仙素、0.075MKCl、
固定液（甲醇：冰醋酸=3：1）、 Giemsa染液、0.01M磷酸缓冲液 (PH6.8)，0.85%生理盐水。
实验九
小鼠骨髓
细胞染色体标本制备
一、实验目的
1、掌握哺乳动物（小白鼠）骨
髓细胞染色体制片技术。
2、并对动物染色体进行观察。
二、实验原理
1、小鼠四肢骨内骨髓细胞中的造
血干细胞是生成各种血细胞的原始 细胞，具有高度的分裂增殖能力。
2、适当浓度秋水仙素处理分裂 增殖的骨髓细胞，能抑制细胞分裂 时纺锤丝、纺锤体的形成，而染色 体不分裂成为子染色体，使细胞不 向后期过渡，从而收集到更多的中 期分裂相。 同时秋水仙素作用能使染色体缩短、 变粗。
5、低渗：加入4.4ml的 0.075MKCl溶液,在37oC水浴中低渗40 分钟，中间（约20分钟时）用吸轻轻 管吹打，使细胞充分低渗。低渗作用 6、离心：离心之前加1ml固定液 并用吸管轻轻吹匀，进行预固定； 1000rpm离心10分钟后，弃去上清液。
7、固定：沿管壁慢慢加入固定液 5ml，用吸管吹打成细胞悬液后，室 温下静置15分钟，5分钟时轻轻吹打， 使细胞充分固定。 8、离心：1000rpm离心10分钟， 弃上清液。 9、再固定：同固定I。 10、再离心：同8，离心后加 0.1ml固定液，吸管吹打成细胞悬液。
四倍体荞麦体细胞中期染色体（2n=32）
二倍体荞麦体细胞中期染色体（2n=16）
实验七小鼠骨髓细胞染色体标本的观察
四、实验步骤
1.预处理：实验前2.5-3小时，按每克体重注射0.02ml， 给小白鼠腹腔注射秋水仙素。
2.断颈处死动物.
3.剥取股骨和胫骨，剔去肌肉组织，剪去两端的股 骨头
4.冲洗骨髓：吸取2%柠檬酸钠,注射器针头插入骨 一端,反复冲洗骨髓,取6ml至离心管中.1000rpm 离心5min,弃上清.
染色体
介于4～5号
介于18～19号
家兔
44
中央、亚中央近端着丝粒 亚中央着丝粒染色 近端着丝粒染色体，
染色体
体，介于5～6号 介于19～20号
六、注意事项
低渗与离心等步骤的操作要轻。 观察细胞的标准为：
1.细胞完整，轮廓清晰，染色体分布在同一水平面上
2.染色体形态和分布良好。 3.最好无重叠，即使有个别重叠，也要能明确辩认，
制得好的标本应是细胞多、颜色为紫红色。 此时间期细胞由于低渗和固定处理，细胞膜和质 已被去掉，镜下看到的仅为膨胀后呈圆形的细胞 核。分裂期细胞染色体集中在一起，其外也无细 胞膜包裹，染色体之间无重叠，易分辨，臂的长 度适中。但最重要的是分裂相要多。
2012年11月（生技101班）
2012年11月（生技101班）
8.离心：1000rpm离心6分钟，弃上清液。
9.固定II：同固定I。 10.离心：同8离心后,加1mL固定液，吸管吹打成
细胞悬液。 11.滴片：用吸管吸取细胞悬液，滴在预冷的载玻
片上，室温晾干 12.染色：10% Giemsa染液染色30分钟
五、实验结果
在显微镜下观察Giemsa染色之后的染色体 片(染色体呈紫红色)，找出分散适度的中期染色 体图象, 观察小白鼠的染色体形态，统计其染色 体数目。
以免差错。 4.所观察的细胞处于同一有丝分裂阶段，即染色体螺
遗传学实验报告：小鼠骨髓染色体标本制备
小鼠骨髓染色体标本制备实验报告一、实验目的掌握实验动物骨髓染色体标本的一般制备方法；识别有丝分裂中期相的染色体形态；了解小鼠染色体的形态特征及其数目。
二、实验原理用于染色体制备的细胞系需要是分裂增殖旺盛的。
一般临床采用外周血细胞培养，利用植物血凝素刺激淋巴细胞转化为具有分裂能力的淋巴母细胞。
动物骨髓细胞是另一种具有旺盛分裂增殖能力的细胞。
在骨髓细胞中处于分裂相的细胞数目较多。
为了有效积累更多的有丝分裂中期细胞，可在收集骨髓细胞前用秋水仙素对其进行处理，其作用是抑制细胞分裂过程纺锤丝的形成，使细胞有丝分裂停止于中期，可以积累中期分裂相细胞，以便于染色标本的制备。
制备过程中用KCL低渗处理，可使细胞体积膨大，染色体分散。
低渗后，需要用固定液固定染色体。
高位滴片和吹散滴液，可使染色体进一步分散。
用预冷的载玻片滴片后，迅速过火，可使染色体进一步扩散和固定，以便于制片和观察分析。
通过制备小鼠骨髓染色体标本，可以评价毒性物质对动物细胞染色体的影响。
本法可应用于环境致突变剂的检测，具有简单、直接、利于掌握的特点，普通实验室均可应用。
因此本法是检测有害物质对机体遗传物质损伤的常用实验方法之一。
三、实验步骤1、取材：小鼠股骨骨髓细胞取材前4小鼠于小鼠腹腔内注入0.04%的秋水仙素（0.01ml/10g）以积累中期分裂相。
颈椎脱臼法处死小鼠，取其两侧股骨。
将处死后的小鼠腹面朝上，用酒精棉球将皮毛擦拭干净，从外生殖口剪开皮肤，剃净肌肉及内脏，用酒精纱布清除其上粘附的肌肉及结缔组织。
剔除干净后，用剪刀剪去股骨两端少许骨垢及骨皮质，暴露出红骨髓，用5ml预温37℃的0.075M KCL分两次分别从股骨两端冲洗骨髓腔，将冲洗液收集到同一5ml刻度离心管中。
2、低渗：用吸管吸打混匀骨髓细胞，将离心管放置在37℃恒温箱中，低渗处理15-20分钟，使细胞膨胀，染色体分散。
3、预固定：低渗处理完，加入低渗细胞中2-3滴现配的现配的固定液（甲醇：冰醋酸=3:1），立即吹打均匀，平衡后离心，2500rpm，离心5min，去上清，留沉淀。
小鼠骨髓细胞染色体标本制备
小鼠骨髓细胞染色体标本制备1. 引言大家好，今天我们来聊聊一个听起来可能有点儿复杂，但其实挺有趣的话题——小鼠骨髓细胞染色体的标本制备。
别担心，我会把这些专业术语说得简单明了，让你也能轻松get到这个过程。
说起来，小鼠可真是科学研究中的“常客”，就像饭桌上的米饭，随处可见，缺了它可不行。
这不，今天咱们就来探索一下怎么从小鼠身上提取骨髓细胞，搞个染色体标本，看看这些小家伙们的秘密。
2. 骨髓细胞的来源2.1 小鼠的选择首先，你得找一只小鼠。
挑小鼠可不是随便的，得挑那些健康活泼的小家伙，就像挑选水果一样，选那种又圆又亮的最好。
一般来说，实验室里会用小鼠的某个特定品系，比如C57BL/6，它们可是科研界的明星。
别忘了，鼠鼠们可不是随便抓来的，得遵循一套规矩，确保它们的生活环境干净卫生，毕竟咱们要尊重这些小生命。
2.2 获取骨髓细胞接下来，就是动手获取骨髓细胞的环节了。
首先，要麻醉小鼠，这一步可不能省，麻醉得当才能让它们安静下来，不然你想抓取细胞，它们可是不会轻易妥协的。
麻醉之后，小心翼翼地取出小鼠的骨髓，这个过程就像是在做外科手术，要有点儿医生的范儿，稳重些。
骨髓一般是在鼠鼠的股骨和胫骨里，捣鼓的时候要小心别伤到周围的组织。
3. 细胞制备过程3.1 细胞分离一旦取出骨髓，你会发现那里面的小细胞们就像一群调皮的孩子，四处乱窜。
我们要做的就是把它们从骨髓中分离出来。
这个过程通常会用到生理盐水，简单说就是把骨髓和盐水混合，轻轻摇晃，让细胞们游出来。
记住，摇晃的时候要轻柔，别像个暴徒一样，细胞们可是很娇嫩的！3.2 染色体制备接下来就是最神奇的部分——染色体的准备。
我们需要把这些细胞放到培养基里，让它们再长一段时间，这样细胞会分裂得更多，染色体也会更加明显。
等到细胞生长到一定程度，我们就可以通过加一些化学药剂，比如秋水仙素，来阻止它们的分裂，准备好进行染色。
4. 染色体的染色与观察4.1 染色过程染色这个步骤可有意思了！我们要用一种专门的染色液，把这些细胞染上色。
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备The final revision was on November 23, 2020小鼠骨髓细胞染色体标本的制备【目的要求】1.掌握小鼠细胞染色体标本制备方法。
2.计数并观察小鼠骨髓细胞分裂中期染色体的数目及特点【基本原理】在骨髓细胞中，有丝分裂旺盛，因此不需要体外培养就可以直接得到中期细胞。
骨髓细胞具有高度的分裂活性，经秋水仙素或秋水酰胺处理后，使分裂细胞阻断在有丝分裂中期，再经低渗处理、固定、滴片、染色等步骤，可制作较好的骨髓细胞的染色体标本。
【实验用品】1．器材：解剖刀、剪刀、镊子、注射器、离心机、离心管、恒温水浴箱、冰冷载玻片、酒精灯、大培养皿、显微镜、纱布,标签纸，记号笔等；2．试剂%秋水仙素溶液、Carnoy’s固定液（甲醇：冰醋酸＝3：1）、 mol / L KCI溶液、Giemsa 染液等。
3．材料：65-90天健康小鼠（生技09级72人，新华09生物技术36人，生科08级75人，生技08级70人，共253人，需购小鼠110只）【方法与步骤】1．前处理取材前3～4 h，向腹腔内注射秋水仙素。
注射浓度随动物种类不同而异，一般每克体重注射2～6μg，注射总量不宜超过2 ml（例如一只体重50 g 的蟾蜍，若按4μg / g注射，需注射浓度为％的秋水仙素溶液 ml ）。
秋水仙素的主要作用是使分裂细胞阻断在有丝分裂中期，增加中期分裂相的比例。
2．取骨髓细胞处死动物，用装有生理盐水的注射器反复冲洗出骨髓细胞，并用注射器筒轻轻吹打，使细胞团块分散，静置片刻、待大组织团块沉淀后，用吸管将骨髓细胞悬浮液移至离心管中，以1000 r / min 离心5~10 min，弃去上清液。
3．低渗根据骨髓细胞液的多少，加 mol / L的 KCI液5～6 ml，在37℃水浴箱中或室温下低渗20～30 min。
低渗时间过长，易造成细胞破裂；时间过短，则染色体难以分散。
4．预固定低渗完毕，立即加入1 ml 新配制的预冷Carnoy’s固定液，用吸管将细胞轻轻吹打均匀，进行预固定。
实验7小鼠骨髓细胞染色体标本的制备和观察
实验7小鼠骨髓细胞染色体标本的制备和观察一、实验目的了解利用动物骨髓进行细胞染色体制片的一般方法，掌握细胞收集、低渗、滴片等技术手段。
观察和了解小鼠染色体的数目及形态特征。
利用显微照相技术对所得切片进行照相。
二、实验原理染色体上的基因决定了一个物种生长发育的全部信息。
因此通过染色体分析，可以了解某一物种最基本的遗传指标。
进行染色体标本的制备一般取自细胞分裂旺盛的组织，如骨髓、淋巴细胞以及通过人工培养的悬浮液。
如将秋水仙素注射到动物的腹腔内，经肠系膜吸收并可转运到骨髓，结果使正在分裂的细胞不能形成纺锤体，使得染色体停在中期状态，经过处理和制片后就可以清楚地观察到染色体。
这种制片方法是属于侵害性的，因此这种方法适用于动物来源丰富、动物个体较小的材料。
对于大型动物可以采取骨髓穿刺术获得红骨髓，在临床上用于一些血液疾病的研究分析。
对于一些珍稀的鸟类可采用羽髓来制片，方法基本一样。
人类的染色体分析可采用外周血培养的方法来获得大量的细胞材料。
三、实验用具及材料实验材料：体重20克左右的小鼠一只实验试剂：0.075mKCl低渗液、固定液（甲醇：醋酸＝3:1）、0.4%秋水仙素、改良苯酚品红溶液、二甲苯实验材料：恒温水浴槽、纱布、烧杯、离心管2支、刀片、镊子、解剖盘、解剖剪、镊子、注射器、离心机、镜头纸光学显微镜、带数码相机的光学显微镜四、实验步骤1腹腔注射秋水仙素溶液：在做实验前2~3小时，对实验用小鼠按0.1ml/20g小鼠的量对其进行0.4％的秋水仙素注射。
2取材：实验时，用断颈法迅速将小鼠处死，通过解剖取出股骨，用注射器吸取在37℃下保温的低渗液2毫升，将针头插入骨髓腔中冲洗骨髓，使冲洗液从股骨的另一端流出。
收集冲洗液到5ml刻度的离心管中。
3低渗：用吸管将冲洗液吹打几次，然后把离心管放在37℃恒温水浴槽内低渗20分钟。
4固定：之后取出并加1ml的固定液，吹打之后放入37℃恒温水浴槽内固定10分钟。
5离心：然后将1000rpm离心10分钟，弃去上清。
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实验7小鼠骨髓细胞染色体标本的制备和观察
一、实验目的
了解利用动物骨髓进行细胞染色体制片的一般方法，掌握细胞收集、低渗、滴片等技术手段。
观察和了解小鼠染色体的数目及形态特征。
利用显微照相技术对所得切片进行照相。
二、实验原理
染色体上的基因决定了一个物种生长发育的全部信息。
因此通过染色体分析，可以了解某一物种最基本的遗传指标。
进行染色体标本的制备一般取自细胞分裂旺盛的组织，如骨髓、淋巴细胞以及通过人工培养的悬浮液。
如将秋水仙素注射到动物的腹腔内，经肠系膜吸收并可转运到骨髓，结果使正在分裂的细胞不能形成纺锤体，使得染色体停在中期状态，经过处理和制片后就可以清楚地观察到染色体。
这种制片方法是属于侵害性的，因此这种方法适用于动物来源丰富、动物个体较小的材料。
对于大型动物可以采取骨髓穿刺术获得红骨髓，在临床上用于一些血液疾病的研究分析。
对于一些珍稀的鸟类可采用羽髓来制片，方法基本一样。
人类的染色体分析可采用外周血培养的方法来获得大量的细胞材料。
三、实验用具及材料
实验材料：体重20克左右的小鼠一只
实验试剂：0.075mKCl低渗液、固定液（甲醇：醋酸＝3:1）、0.4%秋水仙素、改良苯酚品红溶液、二甲苯
实验材料：恒温水浴槽、纱布、烧杯、离心管2支、刀片、镊子、解剖盘、解剖剪、镊子、注射器、离心机、镜头纸
光学显微镜、带数码相机的光学显微镜
四、实验步骤
1腹腔注射秋水仙素溶液：在做实验前2~3小时，对实验用小鼠按0.1ml/20g小鼠的量对其进行0.4％的秋水仙素注射。
2取材：实验时，用断颈法迅速将小鼠处死，通过解剖取出股骨，用注射器吸取在37℃下保温的低渗液2毫升，将针头插入骨髓腔中冲洗骨髓，使冲洗液从股骨的另一端流出。
收集冲洗液到5ml刻度的离心管中。
3低渗：用吸管将冲洗液吹打几次，然后把离心管放在37℃恒温水浴槽内低渗20分钟。
4固定：之后取出并加1ml的固定液，吹打之后放入37℃恒温水浴槽内固定10分钟。
5离心：然后将1000rpm离心10分钟，弃去上清。
6再固定：加入固定液继续固定10分钟（先吹打，再放入恒温水浴槽）。
7离心：再1000rpm的速度离心10分钟。
弃去上清，
8制备细胞悬液：离心结束弃上清，最后留大约与沉淀等量的上清液，
9滴冰片：从冰箱里取出预冷的载玻片4块并排，手持吸管在载玻片上方向下滴片。
10干燥：让其自然晾干。
11染色：用改良苯酚品红溶液染色10分钟左右。
12去浮色：清水冲洗，风干。
13镜检：先用低倍镜找到一好的分裂相区域，然后转用高倍镜观察。
14观察和照相：用油镜观察，并选取良好的视野照相。
五、结果与讨论
1．观察结果
在考试的10分钟内拍摄了五张照片。
我使用的是0号机，由于前面已经有人用过，所以没有太考虑图像设置的问题，结果拿到结果才发现，0号机的图片普遍偏小，放大就模糊了。
在拍照的时候，其实是调节清楚了的。
所以，选择同组另一个同学的图片进行分析，如下：
图一：经秋水仙素处理的小鼠（Mus musculus）骨髓细胞染色体照片
M≥100×10倍（油镜，数码相机光学变焦）
1）染色体计数
可以看到染色体形态很清楚，细胞膜已经破裂所以边缘不是圆形，第一张染色体有交叉和重叠，只能判断数目为391，第二张有些模糊，但染色体分得更开，仔细辨认
可以看出是40条染色体。
查资料得小鼠染色体数目为40，与结果相符。
2）照片质量。
这是我从同组同学照片里挑出的一张，就制片而言，第一张杂质更多，特别是在要观察的细胞上有一点污渍，不是特别理想；第二张效果要好一些，染色体分得比较开便于计数，旁边的细胞虽然紧挨但是不影响计数和观察，视野里没有太多杂质，尤其是要观察的区域很干净。
2. 实验讨论
1）影响实验结果的重要步骤：
（1）秋水仙素的注射
虽然这一步不是我们完成的，但是它对于本次实验至关重要，如果没有秋水仙素使正
在分裂的细胞不能形成纺锤体，使得染色体停在中期状态，因为细胞分裂中期在整个分裂期中占的比例不大，我们就很难得到那么多分裂中期的细胞，也就难以观察。
（2）取骨
取骨可参照人的大腿骨位置，而不是主观地判断其大小，取骨后一定要把肌肉除净，否则最后的制片效果会受到影响。
（3）低渗
分析我们装片分散不够好的原因，我认为主要问题就出在低渗上。
低渗液可以使细胞充分吸水膨胀而不破裂，从而一直保持在胀得很大而又没有破裂的状态。
进而使得细胞内的中期染色体就能够足够分散开来，从而使得经固定等步骤后仍然处于膨胀状态。
之后经过滴片时的摔打和骤降温过程，使细胞很快破碎，染色体进一步分散开。
如果细胞低渗处理不够，在细胞从高处掉下也无法摔碎，染色体将难以观察。
（4）滴片
经过实践，我们认为吴老师说得很对，越高越好，在我们可达到高度范围内，基本不用担心染色体摔碎的问题。
比较了我们的片子和个子高的同学的片子，我们更加确信了这一结论。
（我们都是站着往地上滴片的。
）
六、实验小结
这次实验要注意的地方：
1.处死小鼠的时候要果断。
这次实验采用断颈法杀死小鼠，按住头部后要用力拉。
出于人
道主义和对实验对象的尊重，我们都应该让小鼠在最少的折磨中死去。
2.取骨后要清理干净。
3.注射低渗液的时候要注意看，如果液体从针头入口出来，说明另一头没有剪开，应该再
剪一次。
4.低渗液处理时间可以长一点。
5.第二次加固定液是1ml而不是书上写的5ml，实验结果，加1ml和加5ml区别不大，但
从节约的角度，选取1ml。
6.滴片要高。
7.找到好的视野后要记住它的位置，方便显微摄像。
七、思考题
1. 显微照相见图一。
2. 统计小鼠2N染色体数目，仔细观察其形态特征。
小鼠体内2n染色体数目为40条，形态上多为中部着丝粒染色体。
3. 低渗液起什么作用，在使用过程中应注意什么问题？
答：低渗液的作用是使细胞充分吸水膨胀而不破裂，从而一直保持在胀得很大而又没有破裂的状态。
进而使得细胞内的中期染色体就能够足够分散开来，从而使得经固定等步骤后仍然处于膨胀状态。
之后经过滴片时的摔打和骤降温过程，使细胞及其核很快破碎，染色体进一步分散开。
在滴片的时候就能够获得一团仅属于一个细胞的分散的中期染色体的片子，易于在显微镜下观察和对染色体进行计数。
使用时应该十分注意适当的低渗时间和温度，以及低渗液的浓度。
八、参考文献
张贵友等编著，《普通遗传学实验指导》，清华大学出版社，2003。