动物细胞生物反应器
动物细胞培养生物反应器
•
传统发酵罐
•
酶反应器等
•
固定化酶和细胞反应器
•
动植物细胞培养反应器
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3
生物反应器类型
机械搅拌式反应器 气升式生物反应器 鼓泡塔生物反应器 膜生物反应器
动物生物反应器 植物生物反应器
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4
一 机械搅拌式生物反应器
医药工业中的第一个大规模的微生物发酵过程青霉 素生产是在机械搅拌式反应器中进行的。且迄今为 止,对新的生物过程,首选的生物反应器仍然是机 械搅拌式反应器。机械搅拌式反应器能适用于大多 数生物过程,是形成标准化的通用产品。
• 显然,反应器的增大有利于降低生产成本。
.
31
2 动植物细胞培养反应器得到较大发展
• 由于动植物细胞培养可以得到很多高附加值生物 制品,如干扰素,单克隆抗体等,细胞培养反应 器的开发越来越受到重视。其中关于供氧问题, 快速升温、SIP自动灭菌、CIP自动清洗、机械 密封、排气处理、取样处理等问题等都需很好解 决。
混合不够均匀。
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28
三 其他类型反应器
• 鼓泡塔生物反应器 • 膜生物反应器 • 固定床和流化床反应器 • 动物植物生物反应器 • 其他
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29
四 生物反应器的发展趋势
• 生物反应器的研究、开发和设计是生物技 术的一个重要内容,一种好的生物反应器 出现往往能够大规模降低生产成本,成为 生物制品成功商业化的关键。因此,生物 反应器的开发一直很活跃,尤其是最近的 细胞生物反应器开发更是如此。生物反应 器的发展趋势可归纳为以下几个方面:
.
7
• 反应器的结构
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8
几何尺寸
H/D=1.7~4 d/D=1/2~1/3 W/D=1/8~1/12 B/D=0.8~1.0 (s/d)2=1.5~2.5 (s/d)3=1~2
生物反应器
生物反应器指以活细胞或酶为生物催化剂进行细胞增殖或生化反应提供适宜环境的设备,它是生物反应过程中的关键设备。
生物反应器的结构、操作方式和操作条件的选定对生物化工产品的质量、收率(转化率)和能耗有密切关系。
生物反应器的设计、放大是生化反应工程的中心内容,也是生物化学工程的重要组成部分。
分类从生物反应过程说,发酵过程用的反应器称为发酵罐;酶反应过程用的反应器则称为酶反应器。
另一些专为动植物细胞大量培养用的生物反应器,专称为动植物细胞培养装置。
发酵罐发酵罐若根据其使用对象区分,可有:嫌气发酵罐、好气发酵罐、污水生物处理装置等。
其中嫌气发酵罐最为简单,生产中不必导入空气,仅为立式或卧式的筒形容器,可借发酵中产生的二氧化碳搅拌液体。
若以操作方式区分,有分批操作和连续操作两种。
前者一般用釜式反应器,后者可用连续搅拌式反应器或管式及塔式反应器。
好气发酵罐按其能量输入方式或作用原理区分,可有:①具有机械搅拌器和空气分布器的发酵罐这类发酵罐应用最普遍,称为通用式发酵罐。
所用的搅拌器一般为使罐内物料产生径向流动的六平叶涡轮搅拌器,它的作用为破碎上升的空气泡和混合罐内的物料。
若利用上下都装有蔽板的搅拌叶轮,搅拌时在叶轮中心产生的局部真空,以吸入外界的空气,则称为自吸式机械搅拌发酵罐。
②循环泵发酵罐用离心浆料泵将料液从罐中引出,通过外循环管返入罐内。
在循环管顶端再接上液体喷嘴,使之能吸入外界空气的,称喷射自吸发酵罐。
③鼓泡塔式发酵罐以压缩空气为动力进行液料搅拌,同时进行通气的气升发酵罐。
目前,世界所发展的大型发酵罐是英国卜内门化学工业公司的发酵罐,它以甲醇为原料生产单细胞蛋白的压力循环气升发酵罐,其直径为7m,高为60m,总容量为 2300m□,自上至下有5000~8000个喷嘴进料。
目前,还有些发酵产品,如固体曲等,使用专门设计的能调节温、湿度的旋转式固体发酵装置。
生产甲烷(沼气)用的是嫌气发酵罐,也称消化器或沼气发生器,这种发酵罐装有搅拌器,顶部有的有浮顶。
动物细胞生物反应器
(一)、動物細胞培養的類型
动物细胞的体外培养有三种类型,一类是悬 浮培养,指细胞在培养器中自由悬浮生长的过程, 主要用于非贴壁依赖性细胞,此类细胞体外生长 不需贴壁,可采用微生物的方法在培养基中悬浮 培养。另一类是贴壁培养,指必须贴附在固体介 质表面上生长的细胞培养,主要适用于贴壁依赖 性细胞,大多数动物细胞都属于这一类型。再有 一类是固定化培养,这类培养既适用于贴壁依赖 性细胞,又适用于非贴壁依赖性细胞的包埋培养 方式,具有细胞生长密度高、抗剪切力和抗污染 能力强等优点。
1.中空纤维細胞培養法
1972年,理查德‧克瑞克等模拟体内微环境,设计了 中空纤维细胞反应器。细胞能在中空纤维上不断地从流 动的培养液中获得营养物质,细胞代谢产物和培养物又 可随培养液的流动而运走。
2.微載體培養技術
大多数动物细胞,都具有贴壁生长的特性,而传统 的适于贴壁生长的细胞培养系统,由于表面积的限制, 很难达到大规模生产的目的。
性质动物细胞微生物细胞大小10100mm10mm代谢调节方式内部和激素内部营养要求苛刻宽松可利用多种底物生长速率倍增时间一般为1260h倍增时间一般为052h机械强度很差缺乏保护性细胞壁较好环境适应性动物细胞大规模培养它是在传统的培养技术的基础上融合固定化细胞流式细胞技术填充床生物反应器技术以及人工灌流和温和搅拌技术等发展起来的
6.一次性生物反應器(disposable bioreactor)
这种生物反应器由预先消毒的、FDA认可的、对生 物无害的聚乙烯塑料箱组成,箱中部分填充培养基并接 种细胞。
7.載體細胞培養系統
微载体细胞培养系统 是专门用于贴壁生长细胞的 一种培养方法,解决了贴壁 细胞不能进行悬浮培养问题。 微载体培养系统的基 本思路是:制造一些非常小 的球体,贴壁细胞可在这些 球体表面生长,将这些表面 长有细胞的球体悬浮在培养 液中,加上适当的搅拌,实 现了贴壁细胞的悬浮培养。
动物细胞和植物细胞培养反应器
六叶罗式搅拌器实物图
后来,有人使用锚式搅拌器和螺旋式搅拌器进行植物细胞的培养,
也取得了较好的效果。一般认为螺旋式搅拌器效果最优。
锚式搅拌器和螺旋搅拌器植物细胞培养反应器
吸筒式搅拌器和帆式搅拌器也常用于植物细胞的悬浮培养中, 其结构如下图所示。吸筒式搅拌器的结构原理在本章动物细胞培养 反应器中会有详细介绍,帆式搅拌器结构相对简单,由四片较大的 搅拌叶组成。这两种搅拌在使用时转速都不高,一般在30~80转/分。
吸管式搅拌器和帆式搅拌器
搅拌桨是用尼龙丝编织带制成帆形,搅拌轴用磁力驱动旋转, 转速为20~50r/min,氧气通过插入溶液中的硅胶管扩散到培养 液内,以维持培养液内一定的溶解氧水平。
带帆形搅拌器的连续灌注系统培养反应器
/sbs.asp?id=118
第
三
章
植物细胞和动物细胞 培 养 反 应 器
动植物细胞培养与微生物细胞培养有很大的不同。 动物细胞培养与微生物培养区别: • 动物细胞无细胞壁,且大多数哺乳动物细胞附着在固体或半固 体的表面才能生长;对营养要求严格,除氨基酸、维生素、盐类、 葡萄糖或半乳糖外,还需有血清。动物细胞对环境敏感,包括pH、 溶氧、温度、剪切应力都比微生物有更严的要求,一般须严格的监 测和控制。 植物细胞培养与微生物培养区别: • 植物细胞对营养要求较动物细胞简单。但由于植物细胞培养一 般要求在高密度下才能得到一定浓度的培养产物,以及植物细胞生 长较微生物要缓慢,长时间的培养对无菌要求及反应器的设计也提 出特殊的要求。
悬浮培养瓶
小规模悬浮培养
3、固定化培养:是指采用吸附(固体吸附剂)、共价贴附 (与固相载体结合)、共价交连(用试剂处理使细胞间形 成桥而絮结)、包埋(将细胞包埋在多孔材料内)等方法 将细胞固定在支持物上,或将细胞嵌入微囊或高分子聚合 物的网络中进行培养。该方法对贴壁依赖性细胞与非贴壁 依赖性细胞均适用。
生物反应器的分类与发展
分都可经过人为驯化为生物反应器
动物血液生物反应器
动物膀胱生物反应器
动物生物反应器
外源基因编码产物可直 接从血清中分离
出来,血细胞组分可通 过裂解细胞获得,
外源基因在膀胱中表达的转基因动物 生物反应器,叫动物膀胱生物反应器
动物乳腺生物反应器
动物乳腺生物反应器利用哺
泌尿系统
乳动物乳腺特异性表达的启 动子元件构建转基因动物,
生物反应器是发酵工程中最重要的设备之一
原料
原料制备 预处理
能量 灭菌
过程控制
生物 反应器
能量 产品回收
产物
空气
空压机 除菌
热量
废物
二、生物反应器的分类
机械搅拌式反应器 气升式生生物反应器
动物生物反应器 植物生物反应器
生物反应器有很多种,按照不同的分类角度
组织或整株植物,
其中以转基因植物作为生物反应器生产贵重药物和疫
苗已经成为植物基因工程中最有研究前景和商业价值的领
域,
植物生物反应器种类不断增多, 从最初的烟草、拟南
芥到后来的马铃薯、番茄、香蕉、木瓜、豇豆、菠菜、苜
蓿、油菜和芜青等,表达产物包括疫苗、抗体及其片段、
细胞因子、酶及其它药用蛋白和生物活性肽等,
3 生产啤酒 4 生产能源
目前用来生产啤酒的填充 床固定化细胞反应器已完 成中试进入工业生产阶段
光合细菌利用有机物作为电子供 体光敏产氢为工业化生产清洁、 无污染的生物能源提供了具有竞
争力的技术方法
2、动物生物反应器
一般把目的片段在器官或组织中表达的转基因动物叫动 物生物反应器,几乎任何有生命的器官、组织或其中一部
在转基因家畜血液中得到人免疫球蛋白、d 球蛋白、B球蛋白、胰蛋白酶、干扰素和生长激素 等,并且都具有正常的生物活性,美国哺乳动物细 胞表达或生产的生物技术药物有53种,
动物生物反应器建立的主要方法与技术
动物生物反应器建立的主要方法与技术
动物反应器建立是在生命科学领域中一种很重要的工作,这是为了帮助研究者了解和
分析不同类型动物及其生理、生化、行为反应机制。
为了建立动物反应器,科学家们一般
采用以下方法和技术:
1、细胞及分子技术:细胞和分子技术主要用于动物反应器的建立和研究,它们可以
用于展示和模拟动物的行为反应。
通过这种技术,可以研究动物的抗逆性和细胞应激反应,以及探究其发育、基因调控和信号转导机制。
2、生物信息学:生物信息学是研究动物基因组、组蛋白和转录组特征的重要学科,
研究者可以通过对动物基因组、组蛋白和转录组数据的重新构建和分析,来了解动物反应
器的成因、构成、功能等。
3、基因编辑技术:基因编辑技术可以准确和有效地操作指定的基因,使得动物反应
器的建立更容易,从而有助于研究生物调控机制。
目前已发展出包括Crispr-Cas、TALENs、ZFNs等多种基因编辑技术。
4、基于模型动物的实验室技术:模型动物是研究动物反应器的重要实验室技术,通
常采用基因改造技术,利用小鼠、猪、非洲爪哇鼠等模型动物探究动物反应器的规则。
5、大数据和计算机技术:大数据和计算机技术可以为动物反应器的建立提供重要的
支持,它们可以用于整合、可视化和分析大量生物学数据,从而帮助研究者了解和分析动
物反应器的特征。
总而言之,动物反应器建立涉及多种技术和方法,包括细胞和分子技术、生物信息学、基因编辑技术、模型动物实验室技术、大数据和计算机技术等。
不断发展的这些技术为研
究动物反应器提供了强大的工具。
生物反应器概念
生物反应器概念
生物反应器(Bioreactor)是一个用于培养生物细胞、组织或其他生物实体以生产生物产品的系统。
它是一个封闭的、可控制环境参数的设备,能够提供适宜生物生长和代谢的物理和化学环境。
这些环境参数包括但不限于温度、pH值、溶解氧、营养物质供应、代谢废物移除等。
生物反应器有很多种类型,包括传统的酵母或细菌培养的发酵罐、哺乳动物或植物细胞培养的悬浮培养器、固定化细胞或酶的固定床反应器,以及用于培养组织的生物反应器。
每种类型的生物反应器都有其特殊的设计和操作要求,以满足特定生物实体的生长和生产需要。
生物反应器在许多领域都有应用,如制药、食品和饮料、生物技术、农业、环境工程等。
例如,制药工业中,生物反应器常被用于生产抗体、疫苗、细胞疗法产品等;在环境工程中,生物反应器则常被用于处理废水或其他废物。
动物细胞大规模培养和专用生物反应器
贴壁培养细 胞转瓶机
细胞转瓶培养器
转瓶培养系统:
为最初采用系统;一般用 于小量培养到大规模培养的过 渡阶段;或作为生物反应器接 种细胞准备的一条途径 细胞 接种在旋转的圆筒形培养器— —转瓶中;培养过程中转瓶不 断旋转;使细胞交替接触培养 液和空气;从而提供较好的传 质和传热条件
转瓶机
转瓶培养的优 缺点
优点:
结构简单;投资少;技术成 熟;重复性好;放大只需简 单的增加转瓶数量等
缺点:
劳动强度大;占地空间大;单位体 积提供细胞生长的表面积小;细 胞生长密度低;培养时监测和控 制环境条件受到限制
二 悬浮培养suspension culture
指细胞在反应器中自由悬浮生长的过 程 主要用于非贴壁依赖型细胞培养;如杂 交瘤细胞等;是在微生物发酵的基础上发 展起来的
通过植物组织培养的药物:奎宁 长春碱 洋地黄 紫 草素 人参皂甙等
1
大 规2 模 动 物3 细 胞 培 养4 工 艺 流5 程 图
6
8 7
9
10 细胞培养反应器
诱生剂
细胞
提取 纯化
产品肿瘤抗原
提取 纯化 产品干扰素
细胞
浓缩纯化
产品单克隆抗体
大规模培养动物细胞的方法:
• 贴壁培养 • 悬浮培养 • 固定化培养
一 贴壁培养attachment culture
细胞贴附在一定的固相表面进行的培养
1 生长特性:贴壁依赖型细胞在 培养时要贴附于培养瓶器皿壁上;细 胞一经贴壁就迅速铺展;然后开始有 丝分裂;并很快进入对数生长期 一般 数天后就铺满培养表面;并形成致密 的细胞单层
贴壁培养细 胞转瓶机
2 贴壁培养的优点:
2 连续式培养的特点: ●细胞维持持续指数增长;
生物反应器是指什么
生物反应器,是指利用酶或生物体(如微生物、动植物细胞等)所具有的特殊功能,在体外进行生物化学反应的装置系统。
生物反应器与化学反应器不同。
化学反应器从原料进入到产物生成,常常需要加压和加热,是一个高能耗过程。
而生物反应器则不同,在酶和微生物的参与下,在常温和常压下就可以进行化学合成。
因此,生物反应器问世之后,就受到化工部门的重视。
化学工程专家认为,应该尽可能多地让化学合成过程由生物去完成。
设计理想的生物反应器,就成了现代生物技术产业的一个重要任务。
设计生物反应器时要考虑两点:一是选择特异性高的酶或适宜的活细胞作为催化剂,尽可能减少副产物,提高产品产量;二是尽可能提高产物的浓度,降低成本。
生物反应器首先在发酵工业中得到应用。
发酵工业中使用的生物反应器,实际上是发酵罐。
另一种是以固定化酶或固定化细胞为催化剂的酶反应器。
世界上最大的发酵罐高达100米,直径7米,容积为4000立方米。
动物细胞培养生物反应器及专用微载体PPT课件
2、限制细胞生长的因素:
• 动物细胞培养系统能达到的细胞密度较低的 主要原因是培养条件和最优化控制的困难, 包括:
▪ 细胞代谢产物的毒害:乳酸、氨等;
▪ 营养物的耗竭 ▪ 可利用的表面积的限制;
细胞凋亡
▪ 接种的细胞最小密度;
① 解决问题的方法是通过过程调控来实现:灌 注系统、换液、流加等,其中灌注是最好的 方法。同时采用合理的培养系统以增加表面 积并提供最佳的物理化学环境。
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•
存在二种流加方式:
▪
无反馈控制流加:
▪
反馈控制流加:
① 最常见的流加物质:葡萄糖、谷氨酰胺等能源和碳源
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三、半连续式操作(反复分批式、换液培养): • 概念:在分批培养操作的基础上,不全部取出反应系,剩余部分重新补充新的
营养成分,再按分批式操作方式进行培养,反应器内培养液的总体积保持不变。 • 优点:可反复收获培养液,对培养基因工程动物细胞分泌有用产物或病毒培养
和细胞分布均匀,能长期运转
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动物细胞反应器的控制
• 溶氧控制:针对动物培养的合适搅拌,加入 少量溶氧量大的不相溶溶济,改变通入气体的氮氧比; • pH控制:采用通入CO2/NaOH缓冲液系统来控制,可避免局部的极端pH出现; • 温度和搅拌转速的控制比较简单
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动物细胞培养的意义
• 动物细胞培养对生产生物工程产品,特别是功能蛋白质方面具有明显的优势: 1)同源性: • 直接进行翻译后加工,蛋白质可直接折叠成正确的构象 • 翻译后修饰糖基化,与天然产品一致。 2)有利于产品的分离纯化:分泌胞外、纯化方便
动物细胞培养生物反应器的操作模式
动物细胞培养生物反应器的操作模式米力第四军医大学细胞工程中心,国家863西安细胞工程基地陕西西安,710032动物细胞培养工艺的选择首先考虑的重要一点是该产品所涉及的生物反应器系统。
选择反应器系统也就是选择产品的操作模式,操作模式选择将决定该产品工艺的产物浓度、杂质量和形式、底物转换度、添加形式、产量和成本,工艺可靠性等。
与许多传统的化学工艺不同,动物细胞反应器设备占整个工艺资金总投入的主要部分(>50%),也就是说动物细胞培养工艺的选择主要部分是生物反应器系统的选择。
选择反应器系统及培养工艺时,必须对工艺的整体性进行全面考虑,主要包括以下几个方面:细胞株及生长形式、产物表达量和稳定性,培养基质及代谢物,产物分离和纯化难度等。
动物细胞大规模培养的生物反应器操作模式,一般分为分批式操作(batch)、流加式操作(Fed-batch)、半连续式操作(semi-continuous)、连续式操作(continuous)和灌流式操作(perfusion)五种操作模式。
1. 批式操作(batch culture)批式操作是动物细胞规模培养发展进程中较早期采用的方式,也是其它操作方式的基础。
该方式采用机械搅拌式生物反应器,将细胞扩大培养后,一次性转入生物反应器内进行培养,在培养过程中其体积不变,不添加其它成分,待细胞增长和产物形成积累到适当的时间,一次性收获细胞、产物、培养基的操作方式。
该方式的特点:(1) 操作简单。
培养周期短,染菌和细胞突变的风险小。
反应器系统属于封闭式,培养过程中与外部环境没有物料交换,除了控制温度、pH值和通气外,不进行其他任何控制,因此操作简单,容易掌握;(2)直观的反应细胞生长代谢的过程。
由于培养期间细胞的生长代谢是在一个相对固定的营养环境,不添加任何营养成分,因此可直观的反应细胞生长代谢的过程,是动物细胞工艺基础条件或"小试"研究常用的手段;(3)可直接放大。
第四章 动植物细胞生物反应器
螺旋卷绕
特点: 流体力学易 于控制, 易于放 大, 但制造成本 较高.
三、植物组织培养反应器
1.发状根大规模培养
2.小植物的大规模快速繁殖
但传统方法设备占有体积大,劳动强度大、 费用昂贵。
通过大规模悬浮培养技术进行植物的快速 繁殖有可能提供一个更有效的工业化途径,它 也是继试管繁殖后又一十分有用的培养技术。
2、流化床反应器
混合效果较好,但 流体的切变力和固定 化颗粒的碰撞常使支 持物颗粒破损,另外, 流体动力学复杂使其 放大困难。
3、膜生物反应器
膜固定化是采用具有一定孔径和选择 透性的膜固定植物细胞。营养物质可以 通过膜渗透到细胞中,细胞产生的次级 代谢产物通过膜释放到培养液中。
膜反应器主要有中空纤 维反应器和螺旋卷绕 反应器。
5. 灌注培养
三、动物细胞培养反应器
三、动物细胞大规模培养反应器 1. 通气搅拌式细胞培养反应器 2.气升式动物细胞培养反应器 3.中空纤维细胞培养反应器
4、微囊培养系统
5.大载体系统
6.微载体培养系统
利用固体小颗粒作为载体,细胞在载 体的表面附着,通过连续搅拌悬浮于培 养液中,并形成单层生长、繁殖。由于 扩 大了细胞的附着面,能充分利用生长 空间和营养液,因此大大提高了细胞的 生长效率和产量。
2、悬浮培养(非贴壁依赖 型)
所谓悬浮培养,是指 细胞在培养器中自由悬 浮生长的过程。主要用 于非贴壁依赖性细胞培 养,如杂交瘤细胞等。
3.固定化培养 适于两类细胞
常用包埋法固定(常用海藻酸钙包埋)
二、细胞培养的操作方式 无论是贴壁细胞还是悬浮细胞,就操作方式而言,深层培
养可分为5种方式。
细胞工程-7.转基因动物与生物反应器
从分子水平和乳腺分泌物两个方面进行鉴定。
整理:灵魂的心碎 更多内容请联系 linghundexinsui@
■ 目的基因的选择
选择目的基因的基本要求是,正常情况下浓度低、翻译后修饰复杂、其它表达体系难以表达或表达量低、应用前景广阔的蛋白基因。
■ 体外重组
选择好目的基因和启动子调控元件后进行体外重组,构建融合基因。
■ 基因转导
将构建好的重组基因用基因转导方法转移到受精卵。
■ 胚胎移植
利用胚胎移植技术将制备的转基因受精卵植入待孕母体子宫内,生产转基因动物,得到转基因乳腺表达个体。通过采集转基因动物的乳汁,来获得目的基因表达产物。
━转基因技术:通过人工方式将外源基因整合到生物体基因组内,并使该转基因生物能够稳定地将此基因遗传给后代的技术。
━转基因动物:在基因组内稳定地整合外源基因,并且可以稳定地遗传给后代的基因工程动物。
━转基因动物细胞反应器制备流程
■ 外源目的基因的制备
■ 外源目的基因有效导入生殖细胞或胚胎干细胞
■ 选择获得携有目的基因的细胞
■ 选择合适的体外培养系统和宿主动物
■ 转基因细胞胚
■ 胎发育及鉴定
■ 筛选所得的转基因动物品系。
━生物反应器的类型
■ 动物血液生物反应器
■ 动物乳腺生物反应器
■ 动物膀胱生物反应器
动物乳腺生物反应器的制备
■ 表达载体的构建
目前用于表达载体的启动子调控元件选用动物乳蛋白基因启动子元件,主要有四类乳腺定位表达调控元件。
动物细胞用生物反应器
特性
反应器类型
气升式
通气搅拌式
中空纤维管式
无泡搅拌式
流化床式
培养方式
悬浮
悬浮
贴壁、结团
悬浮
贴壁、结团
细胞的剪切保护
较差
较高
稍底
较好
较高
较低
对细胞的检测和控制
直接
过程控制
容易
扩散限制
无
放大
容易
生产率
较底
下游处理
较难
二、动物细胞培养用生物反应器
(一)生物反应器的特点动物细胞生物反应器是动物细胞产品生产过程中把原料转化为产物的环节,是生化工艺过程的心脏。由于动物细胞与微生物细胞有很大的差异,对体外培养环境有严格的要求,如动物细胞没有细胞壁,非常脆弱,生长缓慢,对培养环境十分敏感。传统的微生物发酵用的反应器不能适用于动物细胞的大规模培养,因而对动物细胞培养用的反应器的设计和过程控制系统提出了特殊的要求。一般地说,一台生物反应器的设计必须满足如下要求。① 生物因素:必须有很好的生物相容性,能很好地模拟细胞在体内的生长环节。② 化学因素:必须提供足够的停留时间,完成所需要的转化度,符合过程反应动力学的要求。③ 传质因素:对非均相反应,反应过程往往可能被反应底物的扩散速率制约,而不是被反应动力学所控制,因此,必须满足物质传递的要求。④ 传热因素:有能力除去和加入反应过程的热量,无过热点。⑤ 安全因素:能有效地隔离有毒害的反应物和产物,有优良的防污染性能。⑥ 操作因素:便于操作和维修。
动物生物反应器
(2)目的基因的选择 选择目的基因的基本要求是,正常情况下浓度低、翻 译后修饰复杂、其它表达体系难以表达或表达量低、应用 前景广阔的蛋白基因。
(3)体外重组及检测
选择好目的基因和启动子调控元件后进行体外重组,构 建融合基因。并将构建的表达载体转染至动物乳腺细胞中表 达,提取细胞分泌蛋白,检测目的基因表达情况。
乳腺动物反应器建立的关键在于: 乳腺组织特异性表达载体构建的合理性和有效 性,这包括外源基因在活体动物组织中分泌表达,
表达是否具有组织特异性,表达水平及其蛋白是
否具有全部的生物学活性。
为解决这些问题,国外采用的的方法:
• 采用BLG、WAP、酪蛋白启动子及部分内含子等乳腺定位
表达调控元件进行乳腺特异性表达的调控。
转基因动物乳腺生物反应器是目前国际上唯一证明可以达到商
业化生产水平的生物反应器。
• 动物就像一个活的发酵罐,其温度、气体、水分
和PH值均由动物自身调控,所以常被喻为药物工 厂、生物反应器、基因农场或分子农场。 • 动物生物反应器优点: ① 表达产物能充分被修饰且具有稳定的生物活性。 ② 产品成本低。可无限繁殖,且饲养成本低,可 大规模生产。 ③ 产品质量高,易提纯。由动物生物反应器生产 的药品为纯的生物制品,避免了化学试剂及生物 毒素的污染,安全可靠。 ④ 生物反应器目的基因对动物内部组织器官的干 扰和影响不大,一旦获得有高效表达的祖代个体, 其遗传性即可保证维持生产的低成本。
蛋白质或多肽等药物己取得了一定进展。外源基因编码产物 可直接从血清中分离出来,血细胞组分可通过裂解细胞获得。
动物膀胱生物反应器
外源基因在膀胱中表达的转基因动物生物反应器 , 叫动物膀胱生物反应器。膀胱尿乳头顶端表面可表达一
组尿血小板溶素的膜蛋白,这种蛋白在膀胱中表达具有专一性, 而且它的基因是高度保守的,将外源基因插入5′端调控序列中, 就可以指导外源基因在尿中表达。
生物反应器
•
•
生物 反应器 生物 反应器
• 生物反应器潜在的社会价值是 无可估量的。在未来几年内, 将有多种动物乳腺生物反映器 重组蛋白上市,从而形成市场 前景广阔和利润巨大的新生物 制药行业。
张 鑫
王 吟
霍 博 超
目
录
• • • • • 概念 动物反应器 微生物反应器 植物反应器 家蚕反应器
概
•
念
生物反应器是利用生物体所具有的生物功能,在体外或 体内通过生化反应或生物自身的代谢获得目标产物的装 置系统、细胞、组织器官等等。 生物反应器听起来有些陌生,基本原理却相当简单。 生物工程上的生物反应器是在体外模拟生物体的功能, 设计出来用于生产或检测各种化学品的反应装置。或者 说,生物反应器是利用酶或生物体(如微生物)所具有 的生物功能,在体外进行生化反应的装置系统,是一种 生物功能模拟机,如发酵罐、固定化酶或固定化细胞反 应器等。
家蚕 反应器
桑蚕生物反应器主要有两种形式
1.转基因桑蚕(transgenic silkworm) 2.杆状病毒表达载体系统(Baculovirus Expression Vector System,BEVS)。
技术
力量
• 国内现有技术力量包括中科院上海生化与细胞研 究所、浙江理工大学、浙江大学、中山大学、中 科院武汉病毒所、中国农科院、南京大学、西北 农业大学等单位已基本建立工作基础。 • 中科院上海生化所在昆虫(家蚕)杆状病毒系统 和高效表达载体等上游工作具有较强优势。浙江 理工大学在家蚕生物反应器生产基因工程口服药 物及产业化和家蚕蛋白功能组学研究积累许多工 作基础,“家蚕生物反应器生产生物制品的方法” 获得了2004年国家技术发明二等奖。
• •
植物
动物细胞生物反应器的种类和特点
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生物化工工艺学--第7章--生物反应器
十一 冷却装置 • 5M3以下发酵罐一般采用夹套冷却。大型发酵罐采用列管 冷却(四至八组)。带夹套的发酵罐罐体壁厚要按外压计 算。 • 夹套内设置螺旋片导板,来增加换热效果,同时对罐身起 加强作用。冷却列管极易腐蚀或磨损穿孔,最好用不锈钢 制造。
十二 发酵罐装料容积 • 发酵罐装料容积:在一般情况下,装料高度取罐圆柱 部分高度,但须根据具体情况而定。采用有效的机械 消泡装置,可以提高罐的装料量。
第二节 鼓泡反应器
鼓泡反应器是以气体为分散相、液体为连续相、涉及气液界面的反应器。 高径比较大的反应器常称为塔式反应器。 特 点:结构简单,易于操作,操作成本低,混合和传质传热性能好,因此广 泛应用于生物工程行业中,例如乙醇发酵、单细胞蛋白发酵、废水处理、 废气处理(例如用微生物处理气相中的苯)等。鼓泡反应器无传动部件,
• 通常通风管的空气流速取20米/秒。为了防止吹管吹入的空 气直接喷击罐底,加速罐底腐蚀,在空气分布器下部罐底上 加焊一块不锈钢补强。可延长罐底寿命。 • 通风量在0.02~0.5ml/sec时,气泡的直径与空气喷口直径的 1/3次方成正比。也就是说,喷口直径越小,气泡直径也越 小。因而氧的传质系数也越大。但是生产实际的通风量均超 过上述范围,因此气泡直径仅与通风量有关,而与喷口直径 无关。
原生流速与搅拌转速成正比,次生流速近似地与搅拌转速的平方成正比。因此, 当转速提高时,主要靠次生流加速流体的轴向混合,使传热传质速率提高。因 此,新型桨型的开发主要侧重于使轴向流速得到加强。
二、发酵罐的结构
• 罐体 :由圆柱体及椭圆形或碟形封头焊接而成,材料为碳钢或不 锈钢,对于大型发酵罐可用衬不锈钢板或复合不锈钢制成,衬里 用的不锈钢板厚为2-3毫米。 • 为了满足工业要求,在一定压力下操作、空消或实消,罐为一个 受压容器,通常灭菌的压力为2.5公斤/厘米2(绝对压力)。
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大小 代谢调节方式 营养要求胞
10-100mm 内部和激素 苛刻 倍增时间一般为12-60h 很差,缺乏保护性细胞壁 差
微生物细胞
10mm 内部 宽松,可利用多种底物 倍增时间一般为0.5-2h 较好 好
(三)、動物細胞大规模培養技術
动物细胞大规模培 养它是在传统的培养技 术的基础上,融合固定 化细胞、流式细胞技术、 填充床、生物反应器技 术以及人工灌流和温和 搅拌技术等发展起来的。 动物细胞大规模培养装 置如图。
4.攪拌罐生物反應器(stirtank bioreactor)
搅拌罐生物反应器基本结构为:一个旋转过滤器, 一台用于控制温度、pH值、搅拌速度和溶氧(DO)的 数字控制装置(DCU)和起通气作用的底部环形喷气结 构。
5.堆積床生物反應器(packedbed bioreactor)
CelligenPlus堆积床生物反应器的工作原理为:当推 进器旋转时,培养基通过推进器的中心空管螺旋式地从 罐体底部上流,然后从三个出口流出,通过堆积床向下 流动至罐体底部,再通过推进器的中心管往上流。
3.微囊化培養技術
微囊是一种由半透膜制成的多孔微球体,酶及大分 子不能从微囊中溢出,而小分子物质可以通过,微囊化 技术是固定化技术将细胞包裹在微囊里,在培养液中悬 浮培养,细胞微囊化后由于生长在各自的微小环境里, 减少了培养时搅拌对细胞的剪切力,细胞生长良好,培 养液易于迅速改变,且无分离细胞与培养液的困难。
2.中空纖維管生物反應器(hollow-fiber bioreactor)
中空纤维管生物反应器主体是由微孔中空纤维管束 组成的,纤维束由外壳包裹,可分为壳体空间及管体空 间两部分,每部分各有其出口。
3.流化床生物反應器(fluidized-bed bioreactor)
流化床生物反应器的基本原理是培养液通过反应器 垂直向上循环流动,不断提供给细胞必要的营养成分, 使细胞得以在呈流态化的微粒中生长。
1.中空纤维細胞培養法
1972年,理查德‧克瑞克等模拟体内微环境,设计了 中空纤维细胞反应器。细胞能在中空纤维上不断地从流 动的培养液中获得营养物质,细胞代谢产物和培养物又 可随培养液的流动而运走。
2.微載體培養技術
大多数动物细胞,都具有贴壁生长的特性,而传统 的适于贴壁生长的细胞培养系统,由于表面积的限制, 很难达到大规模生产的目的。
6.一次性生物反應器(disposable bioreactor)
这种生物反应器由预先消毒的、FDA认可的、对生 物无害的聚乙烯塑料箱组成,箱中部分填充培养基并接 种细胞。
7.載體細胞培養系統
微载体细胞培养系统 是专门用于贴壁生长细胞的 一种培养方法,解决了贴壁 细胞不能进行悬浮培养问题。 微载体培养系统的基 本思路是:制造一些非常小 的球体,贴壁细胞可在这些 球体表面生长,将这些表面 长有细胞的球体悬浮在培养 液中,加上适当的搅拌,实 现了贴壁细胞的悬浮培养。
长江师范学院
动植物细胞培养 装置和酶反应器
一、動物細胞生物反應器
动物细胞与微生物细胞有很大的差异, 对体外培养有严格的要求,如动物细胞对 剪切非常敏感,反应器的设计不能有像微 生物细胞那样高的剪切力,因此,传统的 微生物细胞反应器应该经过改造才能适用 动物生物反应器。根据动物细胞的特点, 开发新型的生物反应器显得十分重要和迫 切。
(四)、動物細胞培養生物反應器
在细胞培养过程中,细胞培养生物反应器是 整个过程的关键设备,它要为细胞提供适宜的生 长环境并决定着细胞培养的质量和产量。 动物细胞外层没有细胞壁,质脆性大,对剪 切敏感以及对体外培养环境有严格要求。
1.氣升式生物反應器(airlift bioreactor)
气升式生物反应器是实现动物细胞高密度培养的常 用设备之一。我国利用生物反应器生产了大量生物制剂, 多采用的是气升式细胞培养生物反应器。
(一)、動物細胞培養的類型
动物细胞的体外培养有三种类型,一类是悬 浮培养,指细胞在培养器中自由悬浮生长的过程, 主要用于非贴壁依赖性细胞,此类细胞体外生长 不需贴壁,可采用微生物的方法在培养基中悬浮 培养。另一类是贴壁培养,指必须贴附在固体介 质表面上生长的细胞培养,主要适用于贴壁依赖 性细胞,大多数动物细胞都属于这一类型。再有 一类是固定化培养,这类培养既适用于贴壁依赖 性细胞,又适用于非贴壁依赖性细胞的包埋培养 方式,具有细胞生长密度高、抗剪切力和抗污染 能力强等优点。
(二)、動物細胞體外培養的特點
动物细胞属于真核细胞,与细菌等原核细胞相 比,其进化程度更高,结构成分更复杂,功能也更 全面。动物细胞对于培养环境的适应性更差,对环 境更加敏感,包括pH、溶解氧、温度、剪切力等都 比微生物细胞有更高的的要求,需要严格控制。另 外,动物细胞相对于微生物来说生长比较缓慢因而 培养时间较长。