酵母菌的分离筛选方法
五株酵母菌的分离鉴定及产丁二酸能力分析
张 霞，雷学俊，杨康卓，罗青春，廖勤俭，刘多涛，乔宗伟，郑 佳·五株酵母菌的分离鉴定及产丁二酸能力分析 41
温、12000 r/min 离心 5 min 获得菌体，用 Ezup 柱式 真菌基因组 DNA 抽提试剂盒提取菌株的基因组 DNA，置于-20 ℃下备用。
PCR 扩 增 ：采 用 酵 母 菌 通 用 引 物 为 NL1（5GCATATCAA TAAGCGGAGGAAAAG- 3'）和 NL4 （5'- GGTCCGTGTTTCAAGACGG- 3'），PCR 反 应 体系包括 0.5 μL 的基因组 DNA、2.5 μL 的 10×Buffe（r 含 Mg2+）、1 μL 的 dNTP、0.2 μL 的聚合酶、0.5 μL 的引物、0.5 μL 模板，加双蒸水至 25 mL；PCR 循环 条件为 94 ℃ 4 min 预变性、94 ℃45 s 变性、55 ℃ 45 s 退火、72 ℃ 1 min 延伸、循环 30 次，72 ℃ 10 min 修复延伸，4 ℃终止反应。经 PCR 反应扩增出 26S rDNA 产 物 ，用 PCR 及 酶 反 应 产 物 纯 化 试 剂 盒 将 PCR 产物进行纯化，将纯化产物交由上海生工生物 工程股份有限公司完成测序工作。 1.3.3 酵母菌的系统发育分析
酵母菌的筛选思路和分离筛选流程
酵母菌的筛选思路和分离筛选流程引言酵母菌是一类单细胞真核微生物，被广泛应用于食品工业、酿酒工业、生物工程等领域。
酵母菌的筛选思路和分离筛选流程对于提高酵母菌的产量和质量具有重要意义。
本文将介绍酵母菌的筛选思路和分离筛选流程，并以Markdown文本格式输出。
酵母菌的筛选思路1. 依据目标功能进行筛选首先，根据酵母菌在应用领域中的具体功能要求，确定筛选目标。
常见的筛选目标包括产酶能力、抗逆性、代谢产物产量等。
2. 筛选条件的优化确定筛选目标后，需要对筛选条件进行优化，以提高筛选效率和准确性。
优化筛选条件的方法包括：•pH值的调节•温度的调节•增加对抗生素的抗性3. 基于遗传工程的筛选方法如果目标无法通过传统筛选方法获得，可以借助遗传工程的方法进行筛选。
这包括基因操作、基因组重组、基因表达等。
酵母菌的分离筛选流程1. 样品的采集和处理首先，需要根据筛选目标的要求，采集合适的样品。
样品的处理包括：•去除杂质和污染物•对样品进行稀释2. 培养基的选择和制备根据筛选目标的要求，选择合适的培养基。
培养基的制备包括：•加入适当的营养成分•调节pH值和温度•预防细菌污染3. 分离和筛选将处理好的样品接种到培养基上，进行分离和筛选。
分离和筛选的方法包括：•简单扩增法：通过胶体扩散、直接接种等方法进行菌落的扩增，然后通过各种筛选方法进行检测和选择。
•高通量筛选法：利用自动化设备进行酵母菌的扩增和筛选，大大提高了筛选效率。
4. 筛选结果的评估与分析获得候选酵母菌后，需要对其进行评估和分析，判断是否满足筛选目标。
评估和分析方法包括：•酶活力测定•代谢产物测量•生长速率测定•遗传稳定性检测等。
结论酵母菌的筛选思路和分离筛选流程对于提高酵母菌的产量和质量具有重要意义。
在筛选时，根据筛选目标优化筛选条件，利用遗传工程方法进行筛选。
分离筛选流程包括样品的采集和处理、培养基的选择和制备、分离和筛选以及筛选结果的评估与分析。
通过合理的筛选思路和分离筛选流程，可以获得具有优良特性的酵母菌，满足不同应用领域的需求。
饲用酵母菌的筛选鉴定及抗逆性分析
饲用酵母菌的筛选鉴定及抗逆性分析陈秀秀，孙洪浩，孙小涵，吕福军*（辽宁波尔莱特农牧实业有限公司，沈阳110000）摘要：为了筛选出可作为微生态制剂及用于发酵饲料的优良菌株，试验以蜂蜜及水果酵素为原料，进行菌株的分离鉴定，并对分离出的酵母菌进行抗逆性研究。
结果显示：从蜂蜜中分离出7株菌（A、H、I、J、K、L、M），从苹果酵素中分离出2株菌（DM和DS），从葡萄酵素中分离出2株菌（E1和E3），通过细菌形态学及26S rDNA 序列鉴定，确定A是假丝酵母，DM、DS是毕赤酵母，E1是假鲁氏接合酵母，E3是鲁氏接合酵母，H、I、J、K、L和M是酿酒酵母。
6株酿酒酵母菌中K的产气能力最强，发酵15h后产气达到满管，其次是I、J和L；在葡萄糖含量为100~500g·L-1条件下，6株菌均可以生长，其中J的耐糖性最好；当pH值为1~5时，6株菌均可生长，耐低pH性由高到低为J>L>I>H>M>K；H的高温耐受性最好，I、J和L较好，K和M略差；胆盐浓度为0.03%~0.3%时，I、J和M完全耐受且存活率可达100%。
本研究为发酵饲料生产提供具备耐高糖、耐低pH、耐高温、耐胆盐等应用潜力的菌株。
关键词：酿酒酵母；筛选鉴定；抗逆性研究中图分类号：S816.6文献标志码：A文章编号：1001-0084（2022）01-0001-06Screening,Identification and StressResistance of Feed YeastCHEN Xiuxiu,SUN Honghao,SUN Xiaohan,LYU Fujun*（Liaoning Powerlight Agricultural and Animal Husbandry Enterprise Co.,Ltd.,Shenyang110000,China) Abstract:In order to screen superior strains as microecologics,and aimed to use for fermented feed.Natural honey and friut were taken as the materials,isolation and identification were carried on.Meantime,the isolated forage yeasts were carried on the stress resistance.The result showed that seven strains were isolated from natural honey(A,H,I,J,K,L and M),and two strains(DM and DS)were isolated from appleenzyme,two strains(E1and E3) were isolated from grape enzyme.A was Starmerella sorbosivorans,DM and DS were Pichia deserticola,E1was Zygosaccharomyces pseudorouxii,E3was Zygosaccharomyces rouxii,H,I,J,K,L and M were Saccharomyces cerevisiae through the analysis of morphological and26S rDNA gene sequences identified.Among the six strains of Saccharomyces cerevisiae,K had the strongest gas production and reached full gas production after15h of fermentation,followed by I,J and L;under the condition of glucose content of100-500g·L-1,all the six strains could grow,among which J had the best sugar tolerance.When the pH value was1-5,all the six strains could grow, and the high temperature tolerance from high to low,pH was J>L>I>H>M>K;H,I,J and L were better,K and M were slightly worse.When the concentration of bile salt was0.03%-0.3%,I,J and M were completely tolerated and the survival rate could reach100%.The study provided potential strains,which had glucose tolerance,level 收稿日期：2021-12-13作者简介：陈秀秀（1988—），女，黑龙江哈尔滨人，硕士，研究方向为饲用益生菌。
纯化酵母菌分离方法
纯化酵母菌分离方法
纯化酵母菌的分离方法包括以下几个步骤：
1. 选择合适的培养基：使用含有适当营养物质和抑制其他微生物生长的培养基。
常用的选择包括酵母营养琼脂糖培养基和酵母抑制琼脂糖培养基。
2. 样品处理：将酵母菌样品（例如酵母悬液或含有酵母菌的混合物）以适当稀释倍数取出，避免过度稀释或稀释不够。
3. 观察与筛选：将适量的稀释液均匀平铺于琼脂糖培养基上，培养一段时间后观察培养基上的菌落。
通过观察菌落形态、颜色和其他特征，选择单独的菌落。
4. 分离纯化：将所选的菌落用无菌的酵母菌营养琼脂糖培养基进行分割传代，最终得到纯化的酵母菌培养基。
5. 培养与保存：将纯化的酵母菌培养液进行扩大培养，得到足够数量的酵母菌。
然后，可以将其中一部分保存在液氮中，以备日后使用。
需要注意的是，以上方法只能分离到可培养的酵母菌，对于某些酵母菌可能不适用。
另外，为了避免污染，所有实验操作都应在无菌条件下进行。
酵母菌、乳酸杆菌的分离筛选
姓名:温迪雅学号：10991367 专业：环境科学乳酸杆菌的分离筛选及鉴定一、材料与方法：1、菌种：新鲜乳酸饮料（标记只含有保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌）2、试剂：脱脂奶粉、蔗糖、1.6%溴甲酚绿乙醇溶液(溴甲酚绿、无水乙醇)、酵母膏、琼脂、革兰氏染液（结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、沙黄）、75%乙醇、香柏油、1mol/L NaOH、1mol/L HCl、碳酸钙；0.4gNaOH固体、4.2ml 浓HCL(分析纯) 、20gCaCO3固体、酵母膏20g 、琼脂30g、香柏油、脱脂奶粉100g 、蔗糖10g；3、仪器：高压蒸汽灭菌锅、恒压干热灭菌箱、超净工作台、光学显微镜、培养箱、pH试纸、酸乳瓶、培养皿（φ9或φ12）、试管、300ml三角瓶（带玻珠）、移液管、天平、牛角匙、电炉、量筒、漏斗、漏斗架、玻璃棒、棉塞、吸管、线绳、标签、500ml锥形瓶、250ml锥形瓶、250ml烧杯、酒精灯、石棉网、接种针（环）、擦镜纸4、方法：（1）无菌操作倒平板、十倍稀释、划线分离，恒温培养（2）菌落观察与镜检（3）筛选生产用菌株二、实验步骤1、分离(1)配制BCG牛乳培养基，分装三角瓶，包扎，灭菌备用。
BCG牛乳培养基配制：A溶液：脱脂乳粉100g,水500ml，加入1.6%溴甲苯酚绿（BCG）乙醇溶液1ml，80℃灭菌20min。
（1.6%溴甲苯酚绿（BCG）乙醇溶液用1.6g溴甲酚绿加入20ml无水乙醇中，再加水至100ml制成）B溶液：酵母膏10g，水500ml，琼脂20g，PH6.8，121℃湿热灭菌20min。
以灭菌操作趁热将A溶液和B溶液混合均匀后倒平板。
（2）样品的处理按照无菌操作要求，从市售新鲜酸乳中吸取10ml检样，放入装有90ml无菌水的三角瓶内，振摇混匀。
（3）分离方法①倒培养基在无菌室，先用紫外线照射半小时把表面菌灭了，在通风10min后，每培养皿倾注约15ml左右已溶化的BCG牛乳培养基，立即放在桌上摇匀，冷却凝固后即成平板。
酵母菌纯培养的实验步骤
酵母菌纯培养的实验步骤
酵母菌纯培养的实验步骤如下：
1. 取少量酵母菌样品，使用选择培养基（例如固体葡萄糖、面粉琼脂培养基，添加有特殊药液和增菌剂的选择培养基有利于酵母菌的筛选）进行分离纯化。
2. 筛选出发酵力良好的菌落并进行纯培养。
在酒精发酵实验中发现典型的酵母菌菌落可移种至综合生化管培养箱中进一步鉴定。
3. 使用液体培养基进行酵母菌扩大培养，准备好无菌吸管和无菌锥形瓶，将酵母菌从锥形瓶中转移到试管中。
4. 对酵母菌进行计数，准备血液培养皿和牛肉膏琼脂培养基，接种菌液到培养基中使其生长并繁殖，观察生长情况并进行计数。
通过以上步骤，就可以对酵母菌进行纯培养，请确保所有使用到的工具和试剂都经过灭菌处理。
以上步骤仅供参考，建议您咨询专业人士获取更具体的信息。
酵母菌的筛选思路和分离筛选流程
酵母菌的筛选思路和分离筛选流程
酵母菌的筛选思路和分离筛选流程通常包括以下几个步骤：
1. 采集样品：从自然环境中或已知的发酵样品中采集可能含有酵母
菌的样品，如水、土壤、植物材料、发酵食品等。
2. 预处理样品：对样品进行预处理，如去除杂质、抑制细菌生长等。
这可以通过过滤、离心、稀释等方法实现。
3. 分离酵母：将预处理后的样品通过不同的分离方法（如稀释涂布法、滴管稀释法、涂布法等）分离到培养基上，使单个酵母菌落生长。
4. 筛选途径：根据所需目标酵母菌的特征，选择特定的筛选途径加
以筛选。
- 抗性筛选：在培养基中添加特定的抗生素或抗菌药物，可以筛选出对此类物质具有抗性或耐受能力的酵母菌。
- 产物筛选：培养基中添加特定的检测试剂或基质，通过对应的反应或变色现象，筛选出产生特定产物的酵母菌。
- 形态特征筛选：通过观察酵母菌的形态特征，如菌落形状、颜色、纹理等，筛选出符合要求的酵母菌。
- 发酵能力筛选：通过检测酵母菌的发酵能力，如对糖类底物的发酵能力，选择具有高发酵活性的酵母菌。
5. 分离纯培养：将筛选出来的单个酵母菌菌落分离到新的培养基上
进行纯培养，以获得纯种的酵母菌。
6. 鉴定酵母菌：通过形态学观察、生理生化特征、分子生物学方法
等对所分离出的酵母菌进行鉴定，确定其菌种。
值得注意的是，以上步骤仅为一般的酵母菌筛选思路，具体的筛选
方法和流程可能会因实验目的和需要而有所差异。
酵母菌的分离
酵母菌的分离酵母菌是一类单细胞真菌，广泛存在于自然界中的土壤、水体、果实等环境中。
酵母菌以其独特的代谢特性被广泛应用于食品工业、制药业、酿酒业等领域。
为了深入了解酵母菌的特性和应用潜力，科学家们对酵母菌进行了大量的分离研究。
酵母菌的分离是指从样本中筛选出纯种的酵母菌，并将其进行培养和研究。
在分离酵母菌的过程中，科学家们需要采集样本，如土壤、果实等，将样本经过一系列处理后进行培养。
首先，样本会经过物理处理，如振荡、搅拌等，以分散其中的酵母菌。
然后，样本会被培养在富含营养物的培养基中，提供适宜的环境条件，使酵母菌能够生长繁殖。
接下来，科学家们会进行菌落计数，通过观察和统计菌落的数量和形态，筛选出单一的酵母菌菌种。
最后，分离得到的酵母菌菌种会被进行进一步的鉴定和培养，以确保其纯度和活力。
酵母菌的分离研究对于酵母菌的应用具有重要意义。
首先，分离得到的酵母菌菌种可以用于酿酒和发酵产业。
不同的酵母菌菌种具有不同的发酵特性和产物特性，通过分离和筛选，可以获得更适合特定产品的酵母菌菌种，从而提高产品的质量和产量。
其次，分离得到的酵母菌菌种可以用于制药工业。
酵母菌可以被用于生产多种药物，如抗生素、维生素等，分离研究可以为制药工业提供更多的菌种资源和新的应用途径。
此外，分离酵母菌还可以用于食品工业。
酵母菌可以被用于发酵食品的制作，如面包、啤酒等，通过分离和培养研究，可以获得更适合特定食品的酵母菌菌种，提高食品的品质和口感。
当前，酵母菌的分离研究正处于不断深入的阶段。
科学家们通过采集不同样本，如极端环境、农产品等，寻找更多的酵母菌菌种。
同时，利用现代生物技术手段，如基因工程、高通量筛选等，加速酵母菌的分离和鉴定过程。
这些研究不仅有助于发现新的酵母菌菌种，还可以为酵母菌的应用提供更多的可能性。
酵母菌的分离是一项重要的研究工作，对于酵母菌的应用具有重要意义。
通过分离研究，科学家们可以获得纯种的酵母菌菌种，并将其应用于食品工业、制药业、酿酒业等领域。
酵母生产工艺
酵母生产工艺酵母是一种单细胞真菌，广泛应用于食品工业、酿酒业和生物医药等领域。
酵母的生产工艺是指通过人工方法培养和繁殖酵母菌，以获得高产酵母产品的过程。
本文将介绍酵母生产工艺的基本流程和关键技术。
一、酵母菌的培养与筛选酵母菌的培养是酵母生产工艺的第一步。
通常采用液体培养基或固体培养基来培养酵母菌。
液体培养基中含有碳源、氮源、矿物盐和微量元素等营养物质，为酵母菌提供生长所需的养分。
固体培养基则是在液体培养基中加入一定量的琼脂或明胶等凝胶剂，使其凝固成为固体状态，以方便酵母菌的分离和筛选。
在培养过程中，酵母菌需要在适宜的温度、pH值和氧气条件下进行生长和繁殖。
温度过高或过低都会抑制酵母菌的生长，pH值的变化也会对酵母菌的生长产生影响。
此外，氧气对酵母菌的生长和代谢也有重要作用，适量的氧气可以提高酵母菌的产酶能力和细胞生长速率。
在培养过程中，可以通过一系列的筛选方法来选择出具有良好性状的酵母菌株。
常用的筛选方法包括抗生素筛选、色素筛选、产酶筛选等。
通过这些筛选方法，可以获得具有高产酵母产品能力的酵母菌株，为后续的工艺提供基础。
二、酵母的发酵工艺酵母的发酵工艺是酵母生产工艺的核心环节。
发酵是指在适宜的条件下，利用酵母菌进行代谢反应，产生所需的产物。
在酵母发酵工艺中，最重要的是控制发酵条件，包括温度、pH值、氧气供应和培养基成分等。
温度是控制酵母发酵速率的重要因素，不同的酵母菌株对温度的要求也有所不同。
pH值的变化会影响酵母菌的代谢产物和酶活性，适宜的pH值可以提高发酵产物的质量和产量。
氧气供应是影响酵母发酵效果的关键因素，适量的氧气可以提高酵母代谢的效率和产酶能力。
培养基成分的合理配比也是确保酵母发酵效果的重要条件。
在发酵过程中，酵母菌会产生大量的二氧化碳和酒精等产物。
为了保证发酵过程的顺利进行，需要采取相应的措施来控制二氧化碳的排放和酒精的积累。
常用的方法包括增加通气量、控制发酵温度和调整培养基成分等。
酵母菌的筛选方案
第一部分：酵母筛选收集一．土样中酵母的分离：1．土壤的采集处理采用五点取样法从葡萄地土壤中取样。
由于土壤中的微生物一般在5-25cm的土层里，所以先用灭菌铲除去土壤的表皮，然后采取土壤200-300g，至于无菌塑料袋内，并标明采取地点、日期。
将其运回实验室后至于冰箱中保存，备用。
将采回的样品用四分法获取样品20-30g，将其置于研钵中研磨均匀。
2. 土壤中菌种的分离：称取1 g土壤，置于液体培养基灭菌葡萄汁，经28 ℃，12 h，180 rpm摇床富集培养。
取1 ml富集培养液，分别进行五个梯度稀释（1:1000、1:5000、1:10000、1:50000、1:100000），再用移液枪分别从每一稀释度各取0.1ml稀释液，注入平板上，利用涂布棒将样品均匀的涂在培养基表面（注意不能使培养基表面破裂），将培养皿盖好，再把培养皿倒置，于适宜温度（一般为25℃或28℃）的恒温箱中培养，每个梯度做三个重复。
观察培养基，直到菌种形成清晰易辩的菌落为止。
为了在筛选过程中排除细菌的干扰，在培养基中加30ug/ml的链霉素或者100mg/L的氯霉素。
观察并记录菌落颜色与形态，然后在显微观察记录细胞大小、形态，进行分析和初步的归类。
二．葡萄果表酵母的分离:1. 葡萄的采集：葡萄成熟时，在葡萄果皮、果梗上都有大量的酵母菌存在，因此在采收葡萄时，将果梗与葡萄一起采收。
由于酵母菌在稍微破裂的葡萄果实中大量存在，采收时可以选取有裂纹的葡萄，但是，将完整无损的葡萄与有裂纹的分开装袋。
运回实验室置于冰箱中保存，备用。
2. 菌种分离步骤：将腐败变质的葡萄及杂质从果实中挑选出来。
随机选取并称量约10g成熟葡萄，放入盛有90ml 无菌水的三角瓶，分别按30u g/ml添加链霉素，然后振荡培养30min后静置，制成菌悬液，吸取50µl 放入YEPD固体培养基，三个重复，以无菌刮铲刮匀，25℃培养24～48h。
酵母菌的分离培养
酵母菌的分离培养一、实验目的培养和分离酵母菌的技术和方法。
二、基本原理大多数酵母菌为腐生，其生活最适pH为4.5－6，常见于含糖分较高的环境中，例如果园土、菜地土及果皮等植物表面。
酵母菌生长迅速，易于分离培养，在液体培养基中，酵母菌比霉菌生长得快。
利用酵母菌喜欢酸性环境的特点，常用酸性液体培养基获得酵母菌的培养液（这样做的好处是酸性培养条件则可抑制细菌的生长），然后在固体培养基上用划线法分离之。
三、实验主要内容1马铃薯葡萄糖培养基乳酸马铃薯葡萄糖培养液的配制。
2菌株的筛选,根据一定的生产目的并从特定的样品筛选出适宜制作馒头的酵母菌株。
3.酵母菌的分离,要求接种一次, 28-30℃，培养24小时，转接一次，28-30℃，培养24小时，并用镜检的方法独立判定所分离菌株是否为酵母菌。
四．器材和用品1、甘蔗、苹果皮、葡萄皮。
2、马铃薯葡萄糖琼脂培养基：马铃薯200g（煮开10min后过滤取汁），葡萄糖20g，琼脂20g，水1000ml，pH自然。
分装三角瓶；试管斜面3支。
3、乳酸马铃薯葡萄糖培养液：配方同上，不加琼脂加乳酸，按1000ml培养基加入5ml 乳酸，pH为5.5左右，再分装试管9ml3支。
4、无菌吸管3支、无菌培养皿、100ml无菌水3瓶、涂棒、美兰染液、显微镜、接种环等。
五、实验方法1、接种：取果皮（不需冲洗）5克，加入到100ml无菌水中，充分搅拌后，用无菌吸管取1ml接入到9ml乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，在28-30℃培养箱中培养24h，可见培养液变浑浊。
2、加富培养：用无菌吸管取上述培养液1ml，注入另1管乳酸马铃薯葡萄糖培养液中在28-30℃培养箱中培养24h。
3、涂皿：用无菌吸管取0.1ml加富培养液到平板中，用涂棒涂匀，用马铃薯葡萄糖琼脂培养基溶化后制成平板后培养24h。
4.分离纯化：用接种环挑取单个酵母菌菌落，在平板上四区划线，培养后分离得到单个菌落。
5.镜检：挑取单菌落，制片观察其形态。
酵母发酵加工中的菌株筛选及其应用
酵母发酵加工中的菌株筛选及其应用酵母是一类重要的微生物，在发酵食品、工业酿酒等领域有着广泛的应用。
在酵母发酵加工中，菌株的筛选是十分关键的一步。
本文将探讨酵母发酵加工中的菌株筛选及其应用。
一、酵母发酵加工中的菌株筛选方法1. 直接法直接从自然环境中筛选出的酵母菌株称为野生菌株。
这种筛选方法比较简单，但菌株数量有限，且不易获得高产率的品种。
野生菌株中往往存在一些不良的特性，如发酵速度慢、成品质量差等。
因此，直接法筛选出的酵母菌株在应用上有一定的局限性。
2. 短时诱变法短时诱变法是指通过短时间的处理，使酵母发生一定的遗传变异，从中选出优良的变异菌株。
短时诱变法简单易行，且存在较大的变异可能性。
但也存在菌株失活或抗性提高等副作用。
3. 长时间诱变法长时间诱变法是指将酵母菌株在一定时间内持续暴露于某种特异的环境条件中（如放射线或化学药剂），从而引起基因突变，产生更多的变异菌株。
这种筛选方法具有较大的变异概率，可获得更多、更优的变异菌株。
但在实际应用中，长时间诱变法的成本和耗时较大，需要耐心和谨慎把握。
二、酵母发酵加工中的菌株应用1. 食品工业酵母在食品工业中有着广泛的应用，如面包、发酵乳、酱油、酱准、啤酒等。
在这些食品中，酵母可以发挥调味、发酵、膳食等功效，使成品质量更佳，更受消费者欢迎。
2. 生物材料工业酵母在生物材料工业中也有着重要的应用。
如酿酒产生的酵母菌体，可用于生产市场需求量大的酵母粉或酵母浸滤液。
此外，还可以用酵母发酵产生的多糖类物质具有良好的黏度和黏附性，可作为生物胶、食品添加剂等材料。
3. 药品工业鉴于酵母在发酵中的广泛应用，许多药物也使用酵母生产。
如原纤维蛋白溶液是大量生产生物结构材料的重要原料,经过酵母菌株的合成后,可得到较高性能的物质。
4. 废弃物资源化酵母的强大分子转化功能使其具有优异的废弃物资源化潜力。
将废微生物菌液或农副产品残渣等作为酵母的基质，可以通过发酵、脱色和纯化等方法，制成膳食纤维、单体蛋白质和多糖类等新型功能性食品原料。
酵母文库筛选原理
酵母文库筛选原理
酵母文库筛选原理是指通过对酵母基因组进行筛选和分析，以找到具有特定功能或特性的酵母株。
这一过程一般分为以下几个步骤：
1. 酵母菌株的收集：首先需要收集不同来源的酵母菌株，包括自然界中的野生型酵母菌株和实验室中已经建立的酵母菌株库。
2. 构建酵母文库：将收集到的酵母菌株进行DNA提取，然后将DNA片段通过适当的方法进行分离和纯化。
接着将这些DNA片段插入到适当的载体中，形成酵母文库。
3. 筛选目标基因：根据研究者的需要，选择合适的筛选方法和筛选条件，对酵母文库进行筛选。
常用的筛选方法有基因组DNA 文库的互补杂交筛选、功能性筛选和表型筛选等。
4. 鉴定目标基因：通过对筛选出来的酵母菌株进行测序和分析，确定目标基因的序列和功能。
5. 功能验证：将鉴定出的目标基因进行功能验证，确定其在酵母菌中的作用机制和生理功能。
酵母文库筛选原理的关键在于构建酵母文库和选择合适的筛选方法。
构建酵母文库需要选择适当的载体和酵母菌株，并确保插入的DNA 片段能够在酵母细胞中稳定复制和表达。
而选择合适的筛选方法则需要根据目标基因的性质和研究目的进行选择，以确保筛选结果的
准确性和可靠性。
酵母文库筛选原理是一项重要的生物学研究方法，通过对酵母基因组的筛选和分析，可以帮助研究者揭示酵母菌的生物学特性和功能，为进一步的研究提供基础和支持。
通过不断改进和完善酵母文库筛选原理，相信能够为人类的生命科学研究带来更多的突破和进展。
传统面食发酵剂中酵母菌的分离鉴定
传统面食发酵剂中酵母菌的分离鉴定Isolation and identification of yeast from the traditional steam-breadstarter王乃鑫韩烨WANG Nai-xin HAN Ye(天津大学农业与生物工程学院，天津300072)（College of Agriculture and Biology Engineering,Tianjin University,Tianjin，300072,China）摘要：从民间发酵传统面食用的发酵剂中，分离纯化出4株酵母，通过菌落形态观察、细胞形态观察、子囊孢子形态观察、菌丝观察、掷孢子的形成试验、糖发酵实验、碳源同化实验、氮源同化实验、耐高糖实验、分解尿素实验、产生类淀粉实验、产酯实验、石蕊牛乳实验、无维生素培养基培养实验、热致死实验、耐酒精实验等，将其确定到属，初步鉴定为：丝孢毕赤氏酵母属（Hyphopichia），酵母属（Saccharomyce s），球拟酵母属（Torulopsis）。
关键词：酵母菌；分离鉴定；发酵剂Abstract：Tour strains of yeasts were selected and purified from the traditional steam-bread starter.Through the observation of the modality of colony,the observation of the modality of cell and ascusspore,taking shape on artificial hypha and ballistoconidia,ferment experiment of compounds carbon source,utilization experiment of carbon source and nitrogen source,growth experiment in50%glucose and60%glucose, decomposition reaction on urease,reaction took shape like-starch in test tube,experiment of producing ester,litmus-milk reaction,growth experiment in vitamin-free yeast base,experiment of thermal death temperature,growth experiment in yeast base with different concentration of alcohol.The strains were identified as Hyphopichia,Saccharomyces, Torulopsis.Keywords:Yeast；Isolation and identification；Starter——————————————作者简介：王乃鑫(1984-),女,天津大学农业与生物工程学院食品科学与工程专业在读研究生。
酵母菌的分离筛选方法
酵母菌的分离筛选方法酵母菌多数为腐生，一般生长在含糖较高，偏酸的环境中，在通气条件下，液体培养比霉菌快。
菌落与细菌相似，较大而厚，多数不透明，菌落光滑湿润粘稠，乳白色，少数干皱，边缘整齐，呈红色或粉红色，圆形椭圆卵形，液体培养基生长会生成沉淀或菌膜。
含高糖浓度（45%），分离蜂蜜酵母，球拟酵母属等嗜高渗透压的酵母。
1.培养基：1.1葡萄糖50g/L 尿素1g/L （NH4）2SO41g/L KH2PO42.5g/LNa2HPO40.5g/L MgSO41g/L FeSO4 0.1g/L 酵母膏 0.5g/L 孟加拉红 0.03g/L PH4.5-5.0 （富集用）★1.2乳酸-马铃薯-葡萄糖培养基：马铃薯200g/L 葡萄糖（霉菌用蔗糖）20g/L 乳酸5ml马铃薯去皮切片200g，加水煮沸30min，纱布过滤，补足蒸馏水1L，PH自然。
（去掉乳酸可用于酵母菌和霉菌培养用）（富集用）★1.3麦芽汁培养基：1：4水60-65℃水浴3-4小时，4-6层纱布过滤，可加一个蛋清加水20mL调均生泡沫，倒入糖化液中，煮沸过滤，10-15波林，氯霉素0.1g/L PH6.0-6.4 121℃ 20min（分离保存用）灭菌后加入300u/ml硫酸链霉素（集菌用）★1.4虎红（孟加拉红）培养基：蛋白胨5.0g/L 葡萄糖10g/LKH2PO41.0g/L MgSO40.5g/L 孟加拉红0.033g/L 氯霉素0.1g/L 琼脂15g/L PH自然（分离纯化用）★1.5 豆芽汁培养基：黄豆芽100g/L 葡萄糖50g/L PH自然。
100g 黄豆芽，加水煮沸30min，纱布过滤，补足蒸馏水1L1.6察氏培养基：主要培养霉菌观察形态用蔗糖30g/L 硝酸钠3g/L 磷酸氢二钾1g/L 氯化钾0.5g/L 硫酸镁0.5g/L 硫酸亚铁0.01g/L 琼脂15-20g/L 121℃ 20min PH自然一般分离黄酒酵母酒精酵母使用曲汁培养基，啤酒酵母用酒花麦汁培养基，葡萄酒酵母用葡萄汁培养基。
酵母菌的筛选思路和分离筛选流程
酵母菌的筛选思路和分离筛选流程引言酵母菌是一类广泛存在于自然界中的真核微生物，被广泛应用于食品工业、制药业、生物燃料等领域。
在酿酒、发酵食品和蛋白质表达等过程中，酵母菌的筛选和分离工作显得尤为重要。
本文将介绍酵母菌筛选的思路和分离筛选流程，并探讨其在实践中的应用。
酵母菌筛选思路酵母菌筛选的目的是从大量的菌株中找到具有特定功能或性状的菌株。
在设计酵母菌的筛选思路时，需要根据具体需求明确筛选目标，并合理选择筛选方法。
1. 筛选目标确定酵母菌的筛选目标可以是多种多样的，常见的包括抗生素抗性、耐高温、高活性酶表达等。
筛选目标的明确能够指导后续的筛选方法的选择和优化。
2. 筛选方法的选择根据筛选目标的不同，可以选择不同的筛选方法。
常见的筛选方法包括：负选择筛选、正选择筛选和突变筛选。
•负选择筛选：通过引入负选择剂，如抗生素等，将不具有目标性状的酵母菌菌株杀灭，以保留具有目标性状的菌株。
这种筛选方法适用于具有特定性状的酵母菌筛选，如耐药性等。
•正选择筛选：通过引入正选择剂，如特定营养物质等，选出具有特定性状的酵母菌菌株。
这种筛选方法适用于希望获取具有特定酶活性、产物产量等性状的菌株。
•突变筛选：通过引入诱变剂，将酵母菌菌株引起突变，然后通过筛选出具有目标性状的菌株。
这种筛选方法适用于想通过诱变来获得新的酵母菌变种。
3. 筛选条件的优化在进行筛选实验时，需要根据具体的筛选方法和筛选目标，对筛选条件进行优化。
优化的筛选条件包括菌种的培养基成分、培养温度、培养pH值等。
通过优化筛选条件，可以提高筛选效率和筛选结果的准确性。
酵母菌的分离筛选流程酵母菌的分离筛选流程是指将混合菌群中的酵母菌分离并进行筛选的一系列操作步骤。
下面是一般酵母菌的分离筛选流程：1.样品采集：从具有酵母菌存在的环境中采集样品，如发酵液、土壤等。
2.样品预处理：将采集到的样品进行预处理，如稀释、过滤等操作，以去除杂质。
3.培养基制备：根据需求制备适合酵母菌生长的培养基，如YPD培养基。
酵母菌筛选的方案
第一部分：酵母筛选收集一．土样中酵母的分离：1．土壤的采集处理采用五点取样法从葡萄地土壤中取样。
由于土壤中的微生物一般在5-25cm的土层里，所以先用灭菌铲除去土壤的表皮，然后采取土壤200-300g，至于无菌塑料袋内，并标明采取地点、日期。
将其运回实验室后至于冰箱中保存，备用。
将采回的样品用四分法获取样品20-30g，将其置于研钵中研磨均匀。
2. 土壤中菌种的分离：称取1 g土壤，置于液体培养基灭菌葡萄汁，经28 ℃，12 h，180 rpm摇床富集培养。
取1 ml富集培养液，分别进行五个梯度稀释（1:1000、1:5000、1:10000、1:50000、1:100000），再用移液枪分别从每一稀释度各取0.1ml稀释液，注入平板上，利用涂布棒将样品均匀的涂在培养基表面（注意不能使培养基表面破裂），将培养皿盖好，再把培养皿倒置，于适宜温度（一般为25℃或28℃）的恒温箱中培养，每个梯度做三个重复。
观察培养基，直到菌种形成清晰易辩的菌落为止。
为了在筛选过程中排除细菌的干扰，在培养基中加30ug/ml 的链霉素或者100mg/L的氯霉素。
观察并记录菌落颜色与形态，然后在显微观察记录细胞大小、形态，进行分析和初步的归类。
二．葡萄果表酵母的分离:1. 葡萄的采集：葡萄成熟时，在葡萄果皮、果梗上都有大量的酵母菌存在，因此在采收葡萄时，将果梗与葡萄一起采收。
由于酵母菌在稍微破裂的葡萄果实中大量存在，采收时可以选取有裂纹的葡萄，但是，将完整无损的葡萄与有裂纹的分开装袋。
运回实验室置于冰箱中保存，备用。
2. 菌种分离步骤：将腐败变质的葡萄及杂质从果实中挑选出来。
随机选取并称量约10g成熟葡萄，放入盛有90ml 无菌水的三角瓶，分别按30ug/ml添加链霉素，然后振荡培养30min后静置，制成菌悬液，吸取50µl 放入YEPD固体培养基，三个重复，以无菌刮铲刮匀，25℃培养24～48h。
观察菌落的大小及生长状况。
酵母菌表面展示操作步骤之酵母转化与筛选
酵母菌表面展示操作步骤之酵母转化与筛选酵母菌表面展示技术是一种利用酵母菌作为生物载体，展示外源蛋白质或肽段的方法。
这种技术在生物医学研究、药物发现和工业生物催化等领域具有广泛的应用潜力。
其中，酵母转化与筛选是该技术的关键步骤之一。
本文将介绍酵母转化与筛选的详细操作步骤。
酵母转化是将外源的DNA导入到酵母细胞内的过程。
在酵母表面展示系统中，酵母细胞的表面会显示被选择的外源蛋白质或肽段。
以下是酵母转化与筛选的详细步骤：1. 提取酵母菌：从酵母培养物中提取酵母细胞，可使用离心、滤纸按压等方法。
2. 酵母细胞处理：洗涤酵母细胞以去除不需要的培养基和杂质。
3. 转化质粒DNA的制备：提取和纯化质粒DNA，这些质粒DNA会被导入酵母细胞中。
4. 酵母转化：将转化质粒DNA与酵母细胞一起处理，使质粒DNA转化进入酵母细胞。
5. 细胞恢复：将转化后的酵母细胞在适当的培养基上进行恢复，使其正常生长。
6. 选择性培养基筛选：为了筛选具有转化质粒的酵母细胞，使用含有适当抗生素的选择性培养基进行培养。
7. 验证转化：通过PCR、南方杂交等分子生物学方法，验证酵母细胞是否成功转化。
8. 单克隆的选择：从转化成功的酵母细胞中挑选出单个克隆并进行培养。
9. 酵母细胞培养：将筛选并验证过的酵母单克隆进行大规模培养，以获得足够的蛋白质或肽段。
10. 表面展示鉴定：使用适当的方法，如流式细胞术或免疫印迹，鉴定酵母细胞表面是否成功展示目标蛋白质或肽段。
11. 功能验证：对表面展示成功的酵母细胞进行功能验证，例如与配体的结合能力或酶活性等。
在酵母转化与筛选过程中，需要特别注意以下事项：1. 操作无菌：确保实验室操作环境和培养器具的无菌。
2. 培养基配制：准确配制培养基，包括选择性培养基和适宜的温度、pH值等。
3. 转化质粒DNA的质量和纯度：确保转化质粒DNA的质量和纯度，以提高酵母转化效率和筛选准确性。
4. 酵母细胞的培养和处理：定期检查和保存酵母细胞，适时进行酵母细胞培养和处理。
酵母菌筛选,分离
样品处理方案按同一采样地点的不同品种的样品，每个品种中任意拿取3个样品，每个样品做2个平行。
主要仪器设备：超净工作台，高压灭菌锅，电子称，灭菌的试管、平板、三角瓶若干，接种环，酒精灯，镊子培养基：YEPD培养基配方:1% Yeast Extract（酵母膏），2% Peptone（蛋白胨），2% Dextrose (glucose)（葡萄糖），加入2%琼脂粉配制方法（1L）：1 溶解10gYeast Extract（酵母膏），20gPeptone（蛋白胨）于900ml水中，加入20g 琼脂粉2 高压121度20min3 加入100ml 20gDextrose (glucose)（葡萄糖），(葡糖糖溶液灭菌后加入)注：葡萄糖，yeast extract ，peptone溶液混合后在高温下可能会发生化学反应，导致培养基成分变化，所以要分别灭菌后再混合。
葡萄糖可以过滤除菌，也可以115℃15min灭菌。
方法步骤：1、每个品种任意拿取3个样，每个样中用镊子拿取2~3颗葡萄至于一定量无菌水和5%葡萄糖中涮5s取出制成菌悬液，放入28℃培养箱中培养3d。
2、稀释：移取1mL菌悬液→9 mL无菌水(10-1)→9 mL无菌水(10-2)→9 mL无菌水(10-3)→9 mL无菌水(10-4) →9 mL无菌水(10-5)3、涂布：从所得10-4、10-5稀释度中吸取500μL于YEPD培养基中，每个稀释度做两个平行，置于28℃培养箱中培养24h。
4、筛选与纯种培养：从YEPD培养基中圈出可能是酵母菌的单菌落。
用接种环挑取单菌落到1mL无菌水离心管中，再继续在新的YEPD培养基上划线培养24h。
5、菌种的保藏：从划线培养基菌落上挑取菌种，接到YPD试管培养基上，在28℃培养箱中培养24h，按300μL无菌水，300μL甘油，400μL菌液的比例保存于离心管中，进行冷藏。
以上处理均为后续酵母菌总DNA提取做准备。
酵母筛库操作流程
酵母筛库操作流程酵母是微生物领域中非常重要的一类微生物，它们用于生产各种工业酶、面包、啤酒、酒精等等。
为了寻找优良的酵母菌株，酵母筛库就应运而生。
那么酵母筛库的操作流程具体是怎么样的呢？下面我们就来详细了解一下：1. 筛选酵母菌株酵母筛选源于自然环境，因此有许多不同类型的酵母菌株。
在进行筛选之前，我们需要先收集不同来源的酵母样品。
这些样品包括来自水、土壤和植物等的酵母菌。
通过对这些酵母菌样品进行筛选和筛选，可以得到许多具有特殊性质（如产生特定酶的酵母菌株）的酵母菌。
2. 酵母分离为了分离出单个的酵母菌株，我们需要对样品进行处理，例如，将样品沉淀后，将沉淀重新悬浮在含有营养物质的培养基中。
接着，我们可以通过连续的尝试将单个细胞分离出来以获得它的一个单克隆。
3. 建立酵母筛库建立酵母筛库前，我们需要确定在筛选中使用的诱导剂。
在我们的实验室中，这些诱导剂通常为基因对（例如，Δ顺式样氨酸酶和顺式样氨酸酶等）。
当酵母菌株在这些诱导剂存在下生长时，它们会表现出特殊的生物活性。
这些生物活性包括诸如产生特殊酶类、对特定药品的敏感性、产生有用的代谢产物等属性。
建立酵母筛库需要我们使用插入了不同报告基因的表达载体来转化每个酵母菌菌株。
这些报告基因可以提供我们对诱导剂反应的定量分析能力，并且筛选酵母筛选库时起到很重要的作用。
4. 进行筛选筛选是最重要的部分，它是确定合适株的过程。
在筛选中，我们将确定针对我们研究重要的报告基因是否会受到特定诱导剂取向的表达，如果存在，则将其挑选出来进行进一步深入研究。
在酵母筛选库中，有多种酵母菌菌株，我们需要确定优先选择哪些酵母菌菌株，因为每种酵母菌都有其专有的性质和特性，需要根据我们的应用目的选择。
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酵母菌的分离筛选方法
酵母菌多数为腐生，一般生长在含糖较高，偏酸的环境中，在通气条
件下，液体培养比霉菌快。
菌落与细菌相似，较大而厚，多数不透明，
菌落光滑湿润粘稠，乳白色，少数干皱，边缘整齐，呈红色或粉红色，
圆形椭圆卵形，液体培养基生长会生成沉淀或菌膜。
含高糖浓度（45%），分离蜂蜜酵母，球拟酵母属等嗜高渗透压的酵母。
1.培养基：
葡萄糖 50g/L 尿素1g/L （NH4）2SO41g/L L L MgSO41g/L
FeSO4 L 酵母膏 L 孟加拉红 L （富集用）
★乳酸-马铃薯-葡萄糖培养基：马铃薯200g/L 葡萄糖（霉菌用蔗
糖）20g/L 乳酸5ml马铃薯去皮切片200g，加水煮沸30min，纱布
过滤，补足蒸馏水1L，PH自然。
（去掉乳酸可用于酵母菌和霉菌培养
用）（富集用）
★麦芽汁培养基：1：4水60-65℃水浴3-4小时，4-6层纱布过
滤，可加一个蛋清加水20mL调均生泡沫，倒入糖化液中，煮沸过滤，
10-15波林，氯霉素L 121℃ 20min （分离保存
用）
灭菌后加入300u/ml硫酸链霉素（集菌用）
★虎红（孟加拉红）培养基：蛋白胨L 葡萄糖10g/L
L L 孟加拉红L 氯霉素L 琼脂15g/L PH自然
（分离纯化用）
★豆芽汁培养基：黄豆芽100g/L 葡萄糖50g/L PH自然。
100g黄豆芽，加水煮沸30min，纱布过滤，补足蒸馏水1L
察氏培养基：主要培养霉菌观察形态用
蔗糖30g/L 硝酸钠3g/L 磷酸氢二钾1g/L 氯化钾L 硫酸镁
L 硫酸亚铁L 琼脂15-20g/L 121℃ 20min PH自然
一般分离黄酒酵母酒精酵母使用曲汁培养基，啤酒酵母用酒花麦汁培养基，葡萄酒酵母用葡萄汁培养基。
2.集菌：研究酵母菌生态和某种基物或样品中的酵母菌区系，一般不进行集菌，以免改变其中不同种类数量间的对比，将样品制成菌悬液按常规法分离。
若从样品中分离特定种类时先集菌。
集菌发酵力强菌株，加酸性含糖的培养基，酸性豆汁，必要时注入高浓度的酒精（13-17%），霉菌在液体中形成菌丝体，酵母不形成菌丝，25-28℃2-3d，遇到菌丝体用接种环挑去烧掉，去掉上清液，取沉淀酵母一至两环移植另一液体培养基中，集菌连续两至三次才能完成，要配合镜检。
实例：将待分离的样品10g（ml）放入90ml无菌水或生理盐水/150ml 三角瓶（玻璃珠），摇床振荡20-30min，取上清液接种于酸性培养液（乳酸-马铃薯-葡萄糖培养基酸性麦芽汁或酸性豆芽汁）25-28℃2-3d，培养过程中若出现菌丝体跳出烧掉，集菌连续两至三次，培养液变成混浊，产生菌膜和沉淀物。
镜检：美兰染液染色，活菌可还原美兰染液，菌体无色。
3.筛选：
分离：取集菌液适当稀释，吸取梯度菌液（至少两个两个平衡），涂布于马铃薯-葡萄糖麦芽汁或虎红培养基平板，也可采用混菌法或蘸取集菌菌液直接划线，（平放12h后倒置培养），25℃培养48h，低温酵母菌15℃高温酵母菌 35℃ 40℃ 45℃，形成清晰菌落。
在培养皿底划分小方格，待菌落生长良好后，用放大镜或低倍镜，观察每格内每个菌落编号并描述，颜色表面边缘切面等，再制片在高倍镜下观察各菌株的个体形态，做好记录。
选择不同菌落分别接于麦芽汁斜面，25℃培养48小时备用。
纯化：培养基与分离培养基相同，否则，不同培养基菌落会改变形态，决不能认为菌落外观相同菌属于同一种。
菌落外观相近的菌落，只能挑取一至数个菌落为代表进行纯化。
常用方法为平板划线分离法：挑取单菌落于平板划线纯化菌株，25-28℃ 2-3d，选择菌生长快菌落大典型继续纯化，每个分离物至少经两次划线，结合镜检保持菌株的纯度，对于保存菌株也应定期检查纯度。
纯化的菌株转接于麦芽汁斜面25-28℃ 2d 待鉴定或用灭菌液体石蜡封面于4℃冰箱保存。
筛选：性能测定：根据不同需要，选择不同性能测定方法。
产气性能比较：采用杜氏管发酵法，将斜面菌种两环接种于麦芽汁或豆芽汁液体培养基中（可以分两次加培养基），28℃振荡培养48h，产气时间和产气量。
产酒精能力测定：采用蒸馏法测酒精含量。
产香能力测定：通过嗅觉鉴定。
附：不同酵母菌的形态特征：
酿酒酵母：在麦芽汁琼脂培养基上，菌落与细菌相似，比细菌大而厚，不透明，表面光滑，湿润粘稠，乳白色，形成假菌丝。
单细胞，形状有圆形椭圆形等，大小不一。
在麦芽汁中，沉淀表面形成环状膜。
不能利用硝酸盐。
产朊假丝酵母：在麦芽汁琼脂培养基上菌落为乳白色，平滑，有光泽或无光泽，边缘整齐呈菌丝状。
细胞呈圆形椭圆形和圆柱形等。
能利用硝酸盐为氮源。
实例1：大曲中酵母菌的分离及鉴定
1.富集培养：取5g样品，在试管中加入10ml麦芽汁培养基，同时加入一滴乳酸摇匀，25-28℃24h，后取1ml菌液转入另10ml麦芽汁培养基试管中培养25-28℃ 24h，稍长(过长则霉菌长出)。
培养液变浊产膜或沉淀。
观察：用无菌操作法取少许菌液置于载玻片中央的%美蓝染色液中，混匀后加盖玻片制成水浸片，先用低倍镜后换高倍镜观察酵母菌的形态和出芽生殖情况。
活酵母菌可使美蓝还原，从而使菌体不着色，用此方法可判断酵母菌的死活。
要求：较高的糖50g/l，抑菌剂孟加拉红 g/L（许多细菌放线菌和快速生长的霉菌），PH 。
或用乳酸（5ml）-马铃薯（200g）-葡萄糖（20g）培养基富集。
2.酵母菌分离：平板划线涂布或混菌均可。
取集菌菌液，梯度稀释，取10-5 10-6 10-7,菌液涂布虎红培养基上，25-28℃ 48h（若
不纯可挑取单菌落连续多次划线）。
3.酵母菌选择：对典型单菌落，经美兰染色，制片镜检，进行描述性记录，然后选择不同菌落转接于麦芽汁斜面，25-28℃ 48h备用。
4.酵母菌纯化：挑取10-7 培养基不同的单菌落，在PDA培养基接种25-28℃ 2-3d后，取形态不同的单菌落传接二次，观察菌落形态确定为单菌落后，分别接种于PDA培养基和MA培养基中，25-28℃ 3d，根据在不同培养基中菌落形态进行初步分类。
将所得菌株于斜面培养保存在4℃冰箱中。
实例2：高温堆积糟醅中酵母菌的选育
1.集菌：同上 45℃ 2-3d，依此法转接2-3次，再行分离。
2.分离：梯度菌液分别涂布于麦芽汁麸皮汁豆芽汁平板于45℃
2-3d，将平皿上生长的菌落划线纯化，菌株移入斜面，备用。
3.有效菌株的确认：分离的数十株酵母经镜检有酵母属的各种酵母，假丝酵母，红酵母，白地霉等。
用高粱粉糖化液，饴糖稀释液，麸皮等进行发酵，测定次生代谢产物，依次判出Y1 Y2 Y3 Y4等与酱香酒产量质量有关。
4.菌种的分类鉴定：
形态特征：（麦芽汁琼脂）
编号形态特征
Y1 菌落由白色到奶油色，无光泽，软而平滑或部分有皱纹。
边缘呈波纹，凸起，色黄，中心凹，奶油色，室温放一月后，培养物由奶油色变浅褐色。
细胞呈圆卵圆椭圆，大小不等。
单个，成双，偶尔成短链，多边芽殖。
（意大利酵母）Y2菌落呈浅奶油色，菌落平滑或部分有皱纹，无光泽，边缘呈黄色，大波纹状。
细胞圆形卵形椭圆形，大小不等，多边芽殖。
(地生酵母) Y3 28℃ 3d后，细胞圆形椭圆形，单个或成双，两端芽殖，培养物奶油状，奶油色到浅褐色，平滑，稍平坦，光亮，边缘偶尔波纹，无真菌丝。
（酿酒酵母）Y4 菌落白色至奶油色，无光泽，软而平滑或部分有皱纹。
培养时间偏长菌落渐硬，并呈菌丝状，不易挑起。
在麦芽汁平皿上，菌落白色，凸起，有皱纹，边缘
波纹状。
细胞较小，卵圆椭圆形，有大量真菌丝。
（间型假丝酵母）生理生化特征
发酵糖类：
酵母菌发酵液成分分析
Y1 Y2 Y3 Y4
香气稍酱香，酯香稍酱香，酯香酯香醇甜香
酒精（%）
代谢产物乙丙丁乳异戊酸同Y1 除硫甲基丙醇乙丙丁乳酸乙醛乙酯乳酯丙醇其他成分均有乙醛丙醇异丁醇
异丁醇异戊醇戊醇异戊醇
硫甲基丙醇
各种酵母发酵糖类结果
Y1 Y2 Y3 Y4
葡萄糖 + + + +
D-半乳糖 + - + -
麦芽糖 + - + +
蔗糖 + - + +
乳糖 - - - +
棉子糖 - - + +
蜜二糖－－－－
纤维二糖－－－－
海藻糖－－＋－
松三糖－－－－
菊糖－＋－＋
可溶性淀粉－＋－＋
ａ-甲基-葡萄糖苷－－－－
同化碳源
葡萄糖 + + + +
D-半乳糖 + - + -
麦芽糖 + - + +
蔗糖 + - + +
乳糖 + - - +
棉子糖 - - + +
蜜二糖－－－－
山梨糖－－－－
纤维二糖－－－－
海藻糖－－＋－
松三糖－－+ －
菊糖－- －-
可溶性淀粉－＋－＋
ａ-甲基-葡萄糖苷－－－+
卫茅醇+ －－－
甘露醇－＋－＋
D-木糖－- －-
琥玻酸＋－－＋
柠檬酸＋＋－＋
各酵母菌其他生化生理特征
Y1 Y2 Y3 Y4
同化氮源（硝酸钾）－－－－
同化乙醇＋＋－＋
液化明胶－－－＋
产酸试验－－＋＋
产醋试验＋＋＋＋
结果：
Y1意大利酵母，Y2地生酵母，Y3酿酒酵母，Y4间型假丝酵母
分离耐酸耐高温酵母菌选择压排底醅或双轮底糟为试样，集菌培养基中加入少量底醅浸出液。