精子保存的一般步骤
实验室常用猪精液的低温保存方法
实验室常用猪精液的低温保存方法【摘要】实验室常用猪精液的低温保存方法对于保障猪种质资源的保存和利用至关重要。
本文首先介绍了猪精液的重要性及保存方法的必要性。
在正文部分分别详细介绍了液氮、干冰和冷冻等常见的低温保存方法，包括保存步骤和注意事项。
还总结了低温保存猪精液的优点，如有效延长精液的保存时间和保持精液的生物活性等。
结论部分强调了猪精液低温保存方法的重要性，指出其对猪种质资源的长期保存和利用具有不可替代的作用。
同时展望了未来研究方向，希望通过技术创新和方法改进，进一步提高猪精液保存的效率和质量，为猪业发展提供更好的支持。
【关键词】实验室猪精液、低温保存方法、液氮保存、干冰保存、冷冻保存、注意事项、优点、重要性、发展方向。
1. 引言1.1 介绍实验室常用猪精液的重要性及保存方法在现代猪生产实验室中，猪精液是一种非常重要的生物材料，它包含着猪的遗传信息，可以通过人工授精的方式传递至下一代猪种。
有效地保存猪精液对于提高猪种质量和数量是至关重要的。
在实验室中，常见的猪精液保存方法有液氮保存、干冰保存和冷冻保存等。
这些方法能够有效延长猪精液的保存时间，保持其质量和活力。
液氮保存猪精液的步骤包括快速冷冻、贮存在液氮罐中等；干冰保存则需将猪精液置于干冰盒中，快速冷冻保存；冷冻保存则需将猪精液置于冷冻离心管中，通过冷冻保存。
在进行低温保存猪精液时，需注意避免冷冻过程中产生的结晶破坏猪精液细胞膜的情况，以及避免冷冻过程中的温度变化对猪精液造成的不利影响。
通过低温保存猪精液能够有效延长其保存时间，保持其质量和活力，为猪生产实验室的科研工作提供了重要支持。
未来，随着科技的发展，猪精液保存技术也将不断提升，为猪生产和繁育工作带来更多便利和效益。
2. 正文2.1 常见的猪精液低温保存方法常见的猪精液低温保存方法主要包括液氮保存、干冰保存和冷冻保存三种方式。
液氮保存是目前应用较广泛的方法，通过将猪精液置于液氮罐中进行保存，可以长期保持其生物活性。
实验十五精液的冷冻保存
实验十五精液的冷冻保存一.实验特点实验类型：综合型实验实验类别：专业基础课计划学时：2学时每组人数：3～4人二、实验目的要求精子具有受温度变化直接影响本身活动力和代谢能力力的生物学特性。
利用这一特性，将精液特殊处理后，保存在超低温下，精子代谢活动完全受到抑制，停止能量消耗，处于生命静止状态，长期保存下来。
一旦升温精子又能复苏并维持其原来的受精能力。
要求同学们了解精液冷冻保存的技术操作过程和精液冷冻保存原理，初步学会冷冻保存方法。
三．实验原理冰晶化是水在降温过程中的一定温度下，水分子重新按几何图形排列形成冰晶。
冰晶可造成精细胞（精子）内外的溶质浓度和渗透压增高，引起细胞内脱水、原生质变干、酸碱失去平衡、细胞膜和顶体以及整个组织和结构破坏等致死性伤害，最后导致精子发生不可逆的变化而死亡。
一般精液内含85%～95%的水分，精子内也含有及少量的水分，这些水分在降温过程中在-0.6～-60℃温度区内缓慢降温能形成冰晶。
降温速率越慢，所形成的冰晶越大，其中特别以-15～-25℃时冰晶形成最多。
在冷冻精液过程中只有避开这个有害温度区，才能得以长期保存。
快速升降温度的办法，难以达到完全玻璃化冻结条件。
为此，在制作冷冻精液的稀释液内，要加入一定量的甘油等抗冻害物质。
甘油具有极强的亲水性，可限制水分子形成冰晶而处于过冷状态，降低水形成冰晶的温度，即缩小精子的有害温度的上限。
此外甘油容易渗透精子内，可降低渗透压改变的不良影响及营养作用等，增强精子的抗冻害能力和无冻害生存环境。
精液在冷冻过程中不可避免地要形成冰晶，精子能否生存的关键在于冰晶的大小，冰晶越大对精液伤害越大，反之冰晶越小，伤害越小甚至无损伤。
因此，只要避免大冰晶形成，并使精子稳定在微晶的状态下，一旦升温精子又能复苏并维持其原来的受精能力。
四．实验材料和仪器精液、2.9%的柠檬酸钠溶液、50～100ml烧杯、滴管、10 ml试管、低温温度计、20～80目纱网、漏勺、灭菌纱布袋、液氮罐、液氮、载玻片、盖玻片、显微镜、保温箱。
《精液的冷冻保存》课件
冷冻保存的精液可以用于帮助亲属实现生育，提供了一种救命的选择。
冷冻保存的优势
保质期长
精液在低温环境下可以保存多 年，保持生育能力的质量。
高成功率
冷冻保存的精液在解冻后可以 仍然保持较高的受精能力，提 供了较高以根据需求 随时取用，方便灵活。
冷冻保存的步骤
《精液的冷冻保存》
精液的冷冻保存是一种先进的技术，可以帮助人们实现生殖自主。了解冷冻 保存的原理和方法对于对生育计划有影响的人群来说尤为重要。
冷冻保存的需求
1 生育自主权
冷冻保存提供了人们保留生育能力的方式，为其日后的生育计划提供了灵活性。
2 医学治疗
一些医学治疗方案可能对生育能力造成不可逆的损害，冷冻保存可以帮助人们在治疗前 保留生育的可能性。
结语
冷冻保存技术的发展为许多人提供了实现生育愿望的机会。了解冷冻保存的 优势和步骤，将有助于人们做出明智的生育决策。
生殖技术实验室
生殖技术实验室使用冷冻保存技 术作为其研究和治疗的基础。
冷冻保存的前景
科学进步
随着科学技术的不断发展，冷冻保存技术也将不断提高，为更多人带来福音。
社会认知
人们的生育观念正在逐渐改变，冷冻保存技术的认知度将逐渐提高。
政策支持
许多国家和地区已经意识到冷冻保存的重要性，将提供相关政策和支持。
1
检测评估
对精液进行检测和评估，确保其质量符合保存要求。
2
冷冻处理
采用特定的技术将精液在低温下快速冷冻，使其保持生育能力。
3
保存管理
将冷冻好的精液储存到特殊的冷冻设备中，并进行管理和跟踪。
冷冻保存的应用
生育诊所
冷冻保存的精液在生育诊所中应 用广泛，帮助人们实现他们的生 育目标。
精子的简易保存方法
精子的简易保存方法
精子的保存方法可以分为两种：长期保存和短期保存。
短期保存方法：
1. 使用特制的精子保存液：在实验室或生育技术中心，精子可以使用特制的精子保存液进行短期保存，如液氮冷冻保存液。
2. 阴囊内保存：男性可以将精液保存在阴囊内，阴囊的温度比体温低一些，有助于延缓精子的新陈代谢，但此方法只适用于短期保存，不能超过数小时。
长期保存方法：
1. 冷冻保存：精子可以被冷冻并存放在液氮罐中，通常使用特殊的冷冻保存液保护精子的质量。
这种方法能够长期保存精子，但需要專業的冷凍保存设备和技术。
2. 冷冻干燥保存：精子可以冷冻干燥并封装在密封容器中，以在较长时间内保持稳定。
这种方法也需要专业的设备和技术。
无论使用哪种方法，精子保存前需要经过初步的处理，如去除其他液体和不健康的精子，以保持保存的精子的质量和活力。
精子保存的有效期根据保存方法的不同可以从数小时到数十年不等，建议咨询专业的医生或生殖技术专家获得更详细的指导。
实验室常用猪精液的低温保存方法
实验室常用猪精液的低温保存方法1. 引言1.1 猪精液的重要性猪精液作为实验室常用的生物样本，在生物研究领域具有非常重要的作用。
猪精液中含有丰富的生物活性成分，包括蛋白质、酶类、激素等，这些成分对于研究猪的生殖生理、繁殖特性、遗传传递等方面具有重要意义。
通过对猪精液的分析和研究，可以帮助科研人员更好地了解猪的生殖机制，指导猪的繁殖管理，提高猪的生产性能和遗传质量。
猪精液还是一种重要的生物材料，用于人工授精、胚胎移植、繁殖技术等方面。
通过对猪精液的保存和利用，可以推动猪繁殖技术的发展，促进畜禽生产的提高。
研究者需要深入了解如何有效保存猪精液，并确保其质量和活力，以满足实验室和生产的需求。
在接下来的内容中，我们将介绍实验室常用的猪精液低温保存方法，以及保存过程中需要注意的关键问题。
【字数：238】1.2 低温保存的必要性低温保存可以有效延长猪精液的保存时间。
猪精液中的活性成分和细胞在常温下容易受到氧化和降解的影响，导致其活力下降甚至失活。
而通过低温保存，可以有效减缓这种氧化和降解的速度，延长猪精液的有效保存时间，保证其在长期保存过程中的质量和活力。
低温保存可以有效降低猪精液的代谢速率。
在低温环境下，细胞和活性成分的代谢速率会显著降低，从而减少其对营养和氧气的需求，延缓细胞死亡和活性成分降解的过程，有利于猪精液的长期保存和使用。
低温保存对于猪精液的保存质量和有效性具有至关重要的作用，是实验室中必不可少的保存方法之一。
对于实验室常用猪精液来说，低温保存不仅可以保证其质量和活力，还可以有效延长其保存时间，为实验研究和生产提供可靠的生物样本支持。
1.3 实验室常用猪精液的意义实验室常用猪精液的意义在于为研究和生产提供了重要的资源。
猪精液中含有丰富的遗传信息，通过对其进行分析和研究，可以帮助科研人员了解猪的遗传特性、生殖生理等方面的知识。
猪精液也是生猪人工授精和繁殖的重要材料，对于提高猪的遗传育种水平具有重要意义。
精子的简易保存方法
精子的简易保存方法精子的保存方法主要是为了保持其活力和生存能力，以便在需要的时候进行使用。
以下是几种可以较为简便地保存精子的方法：1. 冷冻保存法：将精液收集到无菌容器中，并添加适量的冷冻保护液，如冷冻培养基、人工输精管液等。
然后，经过预冷处理，将容器放入液氮罐中迅速冷冻至-196，即可长期保存。
这种方法适用于较长时间保存，保存时间可达数年。
2. 低温保存法：将精液收集到无菌容器中后，使用高冷冻度冰箱或液氮冷冻保存。
一般来说，温度介于-20到-80之间，可以保存数月至数年不同程度。
这种方法适合于中长期保存，同时比冷冻保存法更便捷。
3. 保护剂保存法：使用专门的保护剂可以保持精子的活力和生存能力。
常用的保护剂有乳糜、蔗糖、麦角酸等，可以有效地减少精子受损和死亡。
将精液和保护剂混合后，放置在恰当的温度下保存。
这种方法适用于短期保存，保存时间一般为几天至一周。
4. 冷冻干燥保存法：将精液在无菌条件下进行冷冻干燥处理，即将冷冻的精液转变成固态，然后经过低温真空下的脱水处理。
这种保存方法可以延长精子的存活时间和保存时间，适用于长期保存。
5. 混合保存法：将精液与其他物质（如胎牛血清、羊血清等）混合，以提高其保存能力。
这种方法被广泛应用于精子库的建立和管理，可以有效地保存大量的精子样本。
值得注意的是，以上方法仅仅是保持精子保存的基本方法，实际操作中还需结合具体情况和实验室设备来进行选择。
此外，保存过程中需要保持无菌条件、避免温度变化过大和震荡等，以确保精子的质量和保存效果。
总结起来，精子的保存方法多种多样，从冷冻保存到保护剂保存再到混合保存等不同方式，都可以较为简便地保存精子，以备需要时使用。
选择何种保存方法应根据实际情况来定，同时在保存过程中要注意维持适宜的温度和无菌环境，以确保保存质量和效果。
精液的冷冻保存
精液的保存（一）精液冷冻保存的概念：将采集到的新鲜精液，经过特殊处理后，主要利用液态氮(-196℃)或干冰(-79 ℃)作为冷源以冻结的形式保存于超低温环境下，进行长期保存。
（二）精液冷冻保存原理1.冷冻保存的温度为-196 ℃（液氮）和-79℃（干冰）的超低温，超低温条件下精子代谢处于静止状态。
2.在抗冻保护剂作用下，采用一定降温速率，尽量形成玻璃化，防止冰晶化。
（1）晶体化（0--60℃；-15-- -25 ℃最多）a物理伤害：精子水分形成冰晶，体积增大形状不规则，扩展和移动，造成精子膜和细胞内部结构的机械损伤。
b化学伤害：精子内水分在形成冰晶过程中引起溶液不同部分渗透压变高，造成精子脱水。
（2）玻璃化（-60--250 ℃）玻璃化中水分子保持原来无序状态，形成纯粹玻璃样的超微粒结晶精子不会发生细胞脱水，结构维持正常，解冻后可以复苏3、抗冻剂作用（1）防止冰晶形成，增加精子抗冻力。
（2）抗冻物质：二甲基亚砜（DMSO）、甘油、乙二醇例如：甘油可以与水分子通过氢键结合，阻止水分子形成冰晶，降低水形成冰晶的温度，缩小危险温度区但是浓度过高，对精子有毒害作用。
（三）精液冷冻保存稀释液1．牛冷冻保存稀释液主要有乳糖—卵黄—甘油液；蔗糖—卵黄—甘油液；葡萄糖—卵黄—甘油液和葡萄糖—柠檬酸钠—卵黄—甘油液等四种，甘油的浓度以5～7％。
常用稀释液列表6—8。
2.猪冷冻保存稀释液一般采用以葡萄糖、乳糖、蔗糖、甘油为主要成分的稀释液。
甘油浓度以1％～3％为宜。
常用稀释液列于表6～9、10。
3.马、绵羊冷冻稀释液一般采用糖类(葡萄糖、果糖、乳糖、棉子糖、蔗糖)乳类、卵黄、甘油为主要成分，甘油的浓度以3.5～5%。
常用稀释液列于表6～9、10。
（四）冷冻保存技术程序1、精液的稀释一步稀释法应用：颗粒和细管冷冻精液方法：含甘油抗冻剂的稀释液一次按稀释比例同温稀释特点：二步稀释法应用：细管冷冻精液方法：稀释一半（无甘油）-1—1.5h缓慢降温（30 ℃~ 5 ℃）等温稀释（甘油1—1.5h缓慢降温（30℃~ 5 ℃）2、精液的平衡和分装颗粒法:将平衡的精液直接滴冻成0.1～0.2ml颗粒细管法：牛冷冻精液多用0.25或0.5ml塑料细管，在5℃下用精液分装机分装，用封口粉、塑料球或超声波封口，平衡后冻结。
精子保存操作规程
精子保存操作规程
《精子保存操作规程》
一、目的
为了确保精子保存工作的顺利进行，保证精子质量，制定本规程。
二、适用范围
本规程适用于所有精子保存工作。
三、工作流程
1. 取样：精子保存前，需先进行取样，确保精子的质量和数量。
2. 加工：将取样得到的精子进行加工处理，包括冷冻、保存、标注等操作。
3. 存储：存储精子时，需保证存储环境的稳定和温度的恒定。
4. 管理：对存储精子的信息进行记录和管理，确保精子的跟踪和管理。
5. 检测：定期对存储的精子进行检测，保证其质量。
四、责任分工
1. 取样负责人：负责取样工作，确保取得高质量的精子样本。
2. 加工负责人：负责精子加工处理工作，确保精子的存储质量。
3. 存储负责人：负责存储环境的维护和管理，保证其稳定性。
4. 管理负责人：负责精子信息的记录和管理，确保其跟踪和管理。
5. 检测负责人：负责定期检测存储的精子样本，确保其质量。
五、注意事项
1. 对精子的取样、加工、存储等操作均需在无菌条件下进行，避免外界污染。
2. 存储精子时，需保证存储温度的稳定，避免因温度变化而影响精子质量。
3. 对存储的精子信息需进行详细记录，包括取样时间、处理方法、存储温度等。
4. 如发现存储的精子质量出现异常，需要及时通知相关负责人进行处理。
六、附则
本规程自发布之日起生效，如有需要修改，需经过相关负责人和主管部门的审批。
以上为《精子保存操作规程》，希望所有工作人员能严格按照规程进行操作，确保精子保存工作的顺利进行。
实习十 家兔精液的冷冻保存
实习十家兔精液的冷冻保存一、目的掌握家兔精液冷冻保存的原理，熟悉家兔精液冷冻保存的程序和方法。
二、材料1．仪器分析天平，液氯罐，冰箱，离心机，磁力搅拌器，烧杯，量筒，玻璃棒，注射器，广口冷藏瓶。
2．药品葡萄糖，蒸馏水，磷酸缓冲液，三羟甲基氨基甲烷，柠檬酸，二甲基亚砜，新鲜鸡蛋，青、链霉素，甘油。
三、方法与步骤(一)冲洗涤、洗涤液和保护液的配制1．冲洗液的配制冲洗液为洗涤各种器皿所用。
具体配制方法如下：用分析天平称取无水葡萄糖5．5lg，放人量筒中，加蒸馏水至100m1处，充分溶解．过滤，消毒，密封保存。
2．洗涤液的配制洗涤液为洗涤精子用。
具体配制方法为：用分析天平称取无水葡萄糖7．6g．放人量筒中，加蒸馏水至100ml处，充分溶解，过滤，消毒，密封保存。
3．保护液的配制保护液为冷冻时保护精子用。
具体配制方法为：用分析量筒取磷酸缓冲液79m1(NaH2矾012H205．4638、Nd2N4．2K201．5208配成0．25mol／L pH7．00的缓冲液)放入量筒中，再用分析天平称取无水葡萄糖5．76g，三经甲基氨基甲烷0．48g，柠檬酸0．25g，混合溶解于缓冲液中，过滤、消毒后冷却至25℃时加入甘油2．00ml,二甲基亚砜4．00m1．新鲜卵黄15ml，青、链霉素各l0万IU，于磁力搅拌器上搅拌30~40min。
pH要求在6．95~7．05。
(二)采精及精液品质检查1，采精(略)2．精液品质检查在检精室内进行射精量、胶体数量、颜色、密度，活力，PH常规检查。
精子活力在0．6以上、每毫升精子数在l亿以上的精液．方可进行冷冻。
(三)精液的洗涤与浓缩1．按射精量1：1缓慢加入等温的洗涤液，洗涤精液。
2．将洗涤后的精液分装在离心管中，等量对称放人离心机中（室温18~25℃环境中操作)。
3．采取变速上档迅速退档的方法,即500r/min2min,1000r／min2min,1500r／min3min，2000r/min3min,2500r/min7min,然后迅速退档。
精液运输
精液保存与运输第一节 实验室保存度下降过快而刺激精子，造成死精子等增多。
来说，可在早上上班，下午下班时各摇匀一次。
为了便于监督，每次摇动的人都应有摇动时间和人员的记录。
保存过程中，一定要时时注意冰箱内温度计的变化，以免因意想不到的原因而造成电压不稳而导致温度升高或降低。
第二节 精液的运输间、地点使用，死精率也是很高，使用效果很差。
高温的夏天，一 大白长白 短途运输箱定要在双层泡沫保温箱中放入冰皇（１７℃恒温)，再放精液进行运输，以防止天气过热，死精太多， 严寒的季节，要用保温用的恒温乳胶或棉花等在保温箱内保温。
当精液需要从其采集包装的地方运送到受精的农场时，一定要确保在整个运输过程中，其质量得到保证。
在任何情况下，精液都应该保存在15℃-20℃，当精液的温度超过20℃后，精液的存活期将缩短。
当精液的温度显著的低于15℃时，其将受到冷打击而死亡。
精液在运输前，一定要使其在实验室中逐渐达到温度的最佳范围（15℃-20℃），从精液处理分装完毕到精液的温度降到这一温度范围内，这个过程需要2-3小时。
然后精液应该包装保存在一个能够在整个运输过程中维持其温度的容器中。
容器的选择要考虑运输过程中的温度变化和运输的时间。
目前，大多数精液是通过泡沫箱来运输的，其壁越厚，绝热效果越好。
有些人工授精站有几种厚度的泡沫箱，可以用来在不同环境温度下进行不同要求的包装。
当需要时还可以填充一些碎泡沫物质。
如需要，在内外层包装箱间还填装保温袋或制冷袋。
当精液可能暴露于极端温度环境下时，就应该使用带有恒温控制系统的精液贮存箱，其电源可由运输车辆的电池提供。
注意尽量减少运输时间，减少运输交接环节。
最好使用专用车辆运送精液到其最终目的地。
如果精液是通过航空运输的，那么要确保精液是保存在飞机的旅客舱，或至少保存在有温度控制的部分。
向运输公司解释清楚精液包装的性质和其贮存的详细要求是很重要的，以确保精液以适当的方式运输。
同时应在包装上贴上相应的说明。
67精液的保存与运输
精液的保存与运输精液保存的目的是为了延长精子的存活时间，便于运输。
扩大精液的使用范围，增加受配母畜头数。
现行的精液保存方式有三种，常温（15〜25C）保存、低温（0〜5C）保存和冷冻（-196〜-79C）保存。
（—）常温保存常温保存的温度在15〜25°C,温度允许有一定变动，所以又称为变温保存或室温保存。
常温保存所需的设备简单，便于普及推广，特别适合猪的精液保存（表5 —4）。
1. 原理利用一定范围的酸性环境抑制精子的活动，以减少其能量消耗，使精子保持在可逆的静止状态而不丧失受精能力。
一般将pH调整到6.35左右，为使稀释液的pH达到所需范围，通常采取三种方法。
（1）向稀释液中充入二氧化碳，如伊利尼变温稀释液（IVT）。
（2）利用精子本身在代谢中产酸，自行调节pH,如康奈尔大学稀释液（CUE）。
（3）向稀释液中加入有机酸，如乙酸稀释液（CME^2. 常温保存的稀释液常温保存的稀释液除能降低pH,使精子代谢减慢外，还能给精子补充足够的养分，同时加入抗菌物质抑制细菌生长和繁殖。
另外，还在稀释液中加人缓冲物质，加入明胶以阻碍精子运动（表4-5 ）00牛精液冷冻保存已十分普及，常温保存方式多不采用。
马、绵羊精液常温保存效果较好。
如果采用明胶稀释液，在10〜14C下呈凝固状态保存，绵羊精液可保存48h以上，马的精液可保存120h以上，精子活力接近0.5 （表4-6）。
猪的精液常温保存效果好。
在精液稀释后，按一个输精量分装到特定的瓶（管）中，封口，贴好标签后放入17冰箱内保存。
注：通人C02使pH达到6. 35。
表4—6马、绵羊精液常温保存稀释液(二)低温保存低温保存是将稀释后的精液置于0C〜5C的环境中保存。
各种家畜的精液都可进行低温保存，绵羊精液低温保存在1d左右，马的精液不过几天。
马、绵羊由于精液本身特性季节配种的影响以及这方面研究工作不足等原因，采用低温保存效果尚不理想。
由于猪精液常温保存的效果更好，故一般都不采用低温保存。
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保存的一般步骤
（一）精子的收集
禁欲期（通常为 3～ 5d）后，用**方法将精子收集于 10～ 20mL 无菌的聚丙烯样品收集容器中。
要求禁欲期是为了更好地冷冻保存样品。
通常而言，这样的精子与收集前禁欲期较短及不规则的精子相比，冷冻保存后的特性更恒定且更完善。
射出的精液是液态的，但正常情况下立即凝聚成胶状。
凝聚后的精液通常在 30min内液化，此时就可测定其体积。
为了使精子获得最大的冷冻存活力，应在收集精液后 1min内开始对液化精子进行冷冻保存处理。
（二）体积的丈量
体积可用较准的加样器或带针头的 5mL 注射器来丈量，有时也可根据收集精液前后采样瓶的重量之差来计算。
取 0.1～ 0.2mL 精液作精液分析（活动精子的百分数及其质量、精子密度等，参见本书有关章节），此外尚需取出一些精液，同时以用来做筛选某种性传染疾病的检测、进行某些检测以筛选导致性病的微生物如奈瑟淋球菌等（详见有关章节）。
（三）甘油化
甘油作为冷冻保护剂，可以分步方式直接加入到未经处理的精液之中。
每次加入后混匀，时间间隔为 1min；或间接地作为扩张液或基液的组分，经稀释后逐步加入精液。
而在美国与加拿大，40% 以上的著名精子库，仍单独使用甘油作为冷冻保护剂，而越来越多的新的精子库则使用扩张剂，尤其是含甘油的两性离子缓冲系统。
甘油化的条件不一定涉及温度的特殊条件（除了室温之外）和接触时间（除了加入甘油及混匀所需时间之外）。
（四）包装和存活力观察
甘油化的精液可吸入塑料吸管（可用封口剂，加热，或用尼龙塞来密封）或放入玻璃安瓿（用火焰封口），也可放入塑料冷冻管（冷冻小瓶）后用螺口盖拧紧。
每份冷冻精液的体积通常是 0.4～ 0.8mL，这可作为人工授精的一个单位。
当然假如合适，人工授精也可能使用一个单位以上的精液，选择用于冷冻保存精子的容器是很重要的。
这种容器应是易于标记、操纵、储存，同样也应具有很好的生物兼容性以及抗压性能。
高质量的聚丙烯吸管或小瓶看来最符合这些标准，而没有易碎及被洗涤剂污染等玻璃容器所具有的缺点。
放入液氮冷冻之前，除了要对被冷冻和储备的精子进行分装以外，还需预备一份质量控制检测样品。
对收集后未经处理的精液、用冷冻保护剂处理过的精液以及储存前、冻融后的精液均应观察其中的活动精子及其活动力。
通过观察能追踪冷冻保存各阶段的精子生存情况，并能确保了解冷冻精子的存活能力。
（五）冷冻
吸管、安瓿中的精液冷冻保存时可分散或成组贮存，其位置保持垂直、水平或倾斜。
通常是放在液氮气雾中，有时也可放在机械（电子）冷冻柜的冷冻气中。
冷却和冷冻过程则可用人工以静态或逐步方式，也可用电脑控制的液氮供给系统来完成。
最常用的是操纵者利用液氮储存容器中的气相以直接一次性或逐渐方式进行冷冻。
带有吸附液氮的石棉衬垫的生物干燥运送器，也能在气相中用于冷冻，然后在液相中转移到储存容器。
（六）储存
经分装的样品，均应贮存在金属容器内的液氮之中，而这些容器则应放置在适当的液氮冷冻箱之内。
用以监视液氮水平面的装置［机械的和（或）电子的］是为了长期储存在高于液氮温度（ -196℃ ）的情况下防止丧失精子功能，监视水平面的常见机械（手工）方法是将一根带刻度的插杆垂直放入液氮底部后拔出，则在其上面就会形成一条霜线，以指示液氮水平面，至于各种复杂的局部和遥控电子警报系统现很多国家均已有售。
另一方面，少数精子库只使用闪烁灯定期用肉眼检查，AATB 的组织库标准只要求一个有效的监测程序，以确保样品始终储存在液氮表面之下。
冷冻生物学家和有关研究职员，通过融解储存前样品，并进行检测，发现在冷冻刚开始期间精子活动力有某些丢失。
然而以后储存在液氮表面之下-196℃ 的冷冻精子，活动力没有进一步丢失，人们已经证实癌症患者治疗前精液中的精子冷冻生存活动力往往是差的（解冻后精子活动力百分数降低），尽管如此，这降低了的运动能力在长期储存期间并不进一步降低。
在所调查的 42家 AATB 成员的组织库中，只有 2 家报道了精液［由正常供精者及（或）治疗前患者提供］长期保存期间精子活动力丧失的例子。
另有报道只有 1 例冷冻保存 3 年后精子活动力丧失。
可以为人们所接受的观点是，贮存过程中精子活动力丧失系冷冻前没有正确测定所致或更可能是由于没有确保最佳储存条件所造成的。
（七）解冻
将装有冷冻精子的包装盒暴露于空气或水中即可使冷冻精液恢复液态。
通常暴露在室温，但也可暴露在其他温度下，这要根据各精子库设计的方法学而定。
（八）分发
若临床医师需要冷冻精子以开展 IVF-ET，精子库应按要求送到该医师所在医院（或）诊所。
冷冻精子从精子库的贮存柜取出后应放在预先盛有液氮或固体二氧化碳（干冰）的特殊运送盒内。
然而，精子库若就在医院内，且离操纵室甚近，则可不必放在上述特殊运送盒内，而可直接送到操纵室供医师使用。
冷冻精子在送临床使用前的融化有助于通过质量控制，再次评估精子冷冻存活状态。