糖化血红蛋白定量测定试剂盒标准操作程序

糖化血红蛋白定量测定试剂盒标准操作程序
1.摘要
本试剂盒供医疗机构用于体外定量测定人全血中的糖化血红蛋白的百分含量。

2.适用范围
程序适用于日立7600自动生化分析仪检测人全血中的糖化血红蛋白含量。

3.职责
使用日立7600自动生化分析仪进行测定总蛋白浓度的工作人员要严格按照本SOP程序进行，室负责人监督管理；本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。

4.检测方法
上海科华生物工程股份有限公司生产的糖化血红蛋白定量测定试剂盒采用的是酶法。

5.原理
本试剂盒测定人全血糖化血红蛋白（HbA1c）的含量采用百分含量表示。

采用酶法测定，全血样本中血红蛋白（THb）被特定的蛋白酶裂解，其中糖化血红蛋白（HbA1c）裂解产生果糖氨基酸，然后果糖氨基酸在果糖氨基酸氧化酶（FAOD）作用下产生H2O2，H2O2经POD与发色剂偶联Trinder反应，在700nm测定其吸光度。

通过使用合适的校准品建立校准曲线，在一定浓度范围内糖化血红蛋白（HbA1c）百分含量与吸光度变化成正比。

6.仪器
日立7600自动生化分析仪
7.试剂
7.1试剂来源：
上海科华生物工程股份有限公司提供
7.2试剂瓶内主要成分：
R1a：MES缓冲液、蛋白酶
R1b：MES缓冲液、NaCl
R2：FAOD、POD、发色剂
溶血剂：MOPS缓冲液、表面活性剂
糖化血红蛋白校准品a、b：由新鲜人EDTA或肝素抗凝全血（HBsAg，抗HIV1/2、抗
HCV、TP抗体均为阴性）冷冻干燥制备而成，冻干品。

不同批号试剂盒各组分请勿混用。

7.3试剂稳定性：
未打开试剂在2-8℃避光保存可至失效期。

校准品使用后应密封保存，以免液体挥发。

8.标准品和质量控制
8.1校准程序：
使用某某公司的校准品对自动分析仪进行校准。

按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品通过合适的数学模型绘制校准曲线。

8.2质控品：
某某公司提供的生化复合定值质控血清作为室内质控品。

每日在测定前做一次质控。

该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。

8.3质控数据管理：
按程序对检验后的质控后结果进行转换，及时质控数据进行分析处理，如出现失控值，应及时分析失控原因，并填写好相关失控记录。

8.4质控判断规则：
按《Westgard多规则质控方法测定标准操作程序》
8.5室间质评：
分别参加某地区室间质评，对回报的室间质评结果按《室间质量评价程序》进行处理。

9.标本
9.1标本要求：
EDTA或肝素抗凝血：吸取标本前应立即充分混匀抗凝全血使红细胞均匀分布，避
免产生气泡。

20μl抗凝血加250μl溶血剂于一检测管或样本杯中，轻轻用旋涡或用
震动混匀器混匀，避免产生气泡，混匀后放置。

当溶血物变为澄清红色即可使用（溶
血剂作用时间37℃大约15分钟；室温大约30分钟）。

9.2标本拒收：
由实验室人员核收送来标本，如有溶血、已被污染、标识不清或与申请单不符状况，一律要求重新留取标本。

9.3标本处理：
收集编号后离心获取血清/血浆以备检测使用。

10.测定程序：
10.1分析参数：
详见参数表。

10.2操作步骤：
签收样本→离心→上机检测→审核报告→签发报告→标本保存。

10.3获取结果：
在日立7600仪器上或日立7600传送的中文系统电脑上查找相应结果。

10.4结果报告：
对检验后的结果进行审核，系统分析，判断结果的可报告性。

可报告的结果直接发报告，对不可报告结果进行复检后发报告。

11.计算
标准品校准项目后，测定室内质控，质控结果符合质控要求后方可测定样本。

无需手工计算，每个标本的结果自动打印。

12.废液处理
参阅检验科《安全手册》废液处理标准规程处理。

13.操作性能：
13.1可报告范围：
要求试剂盒在样本浓度为4.0～15.0%（此数值可以追溯到美国NGSP项目）时，整个反应呈线性线性相关系数r应不小于0.990。

13.2特异性/干扰：
样本中抗坏血酸低于4mg/dl，胆红素低于10mg/dl，葡萄糖低于2400mg/dl，甘油三酯低于200mg/dl，尿酸低于5mg/dl对测定没干扰。

HbS、HbC、HbE对测定没有干扰；乙酸化HbAIc、氨基甲酰化HbAlc、不稳定的HbAlc对测定没有干扰。

HbF高于10%对测定有显著影响，使得测定不准确。

13.3精密度：
批内精密度CV≤10%；
批间相对极差≤15%
13.4准确度：
用质控品做样本，其测定结果应在该批质控品规定的范围内。

13.5分析灵敏度：
测试浓度约为5.5%的样本，吸光度差值应≥0.015A。

14.注意事项：
14.1试剂盒仅用于体外诊断。

14.2全血等标本有些可能含有感染性成分，因此应以具有感染危险性而充分注意操作。

14.3测试全血样本前，全血应充分混匀后再吸取样品溶血。

14.4测定样本时，溶血剂处理全血标本必须按照全血样本：溶血剂=20:250（V/V）的比
例进行溶血处理，处理后的样本直接测试，切勿稀释，如标本测定值超出线性范围，
不需要稀释重新测定，直接报结果大于15%
14.5测试全血质控品，应与标本测试一样进行溶血处理后进行测试。

14.6本试剂中具有一定腐蚀性，应避免与皮肤及粘膜。

如不慎接触，应用大量清水冲洗，
如误服，应立即上医院诊治。

15.参考范围：
≤7%；各实验室应建立自己的参考值范围。

16.临床意义：
糖化血红蛋白（HbA1c）是人血红蛋白的成份之一，是血红蛋白在高血糖的作用下发生缓慢连续的非酶促糖化反应的产物，通常占总血红蛋白(THb)的5%～8%，主要成分为HbA1c，正常生理条件下非酶促糖化反应中生成量与反应物成正比。

由于血红蛋白浓度保持相对稳定，糖化水平主要决定于葡萄糖的浓度，也与血红蛋白和葡萄糖接触时间长短有关，由于葡萄糖可以自由透过红细胞膜，血红蛋白的半衰期为60～90天，故HbA1c的测定可反应2～3个月的平均血糖水平。

糖化血红蛋白（HbA1c）的作用机制是影响细胞外信息传导途径，改变细胞内活性因子的浓度及正常血红蛋白的结构和功能。

糖化血红蛋白（HbA1c）持续升高可以导致糖尿病人的并发症的发生的危险性增加。

因此测定糖化血红蛋白（HbA1c）作为糖尿病的诊断和评价糖尿病的控制，是一项具有重要意义的实用指标。

17.支持性文件：
17.1日立7600自动生化分析仪使用说明书。

17.2日立7600自动生化分析仪分析参数。

17.3上海科华生物工程股份有限公司提供的试剂说明书。

用户可根据自身情况添加支持性文件。

18.参考文献
1.Weichselbaum,P.E., Am.J.Clin.Path.16:40(1946).
2.Doumas.B.T.,Clin.Chem.27:1642(1981).。