总胆汁酸(TBA)试剂盒标准操作程序

总胆汁酸（TBA）试剂盒标准操作程序

1.摘要

本试剂盒供医疗机构用于体外定量测定人血清或血浆样本中总胆汁酸（TBA）的含量。

2.适用范围

程序适用于日立7600自动生化分析仪检测血清或血浆样本中总胆汁酸（TBA）的含量。

3.职责

使用日立7600自动生化分析仪进行测定直接胆红素浓度的工作人员要严格按照本SOP 程序进行，室负责人监督管理；本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。

4.检测方法

上海科华生物工程股份有限公司生产的总胆汁酸（TBA）试剂盒采用的是循环酶法。5.原理

血清中微量的胆汁酸（3α-羟甾醇）会被3α-羟甾醇脱氢酶（3α-HSD）及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型（Thio-NAD）特异性氧化生成3α-酮甾醇，同时Thio-NAD被还原成β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NADH）。新生成的3α-酮甾醇在3α-HSD及β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还化型（NADH）存在下，还原成胆汁酸，同时NADH氧化为β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型（NAD）。这样，血清中微量的胆汁酸在多次酶循环的过程中被放大，同时可使生成的Thio-NADH扩增。在405nm处测定Thio-NADH吸光度的变化值，可以求得血清中胆汁酸的含量。

胆汁酸THio−NAD3α−HSD

→THio−NADH

NAD←NADH

3α−铜羟甾醇

6.仪器

日立7600自动生化分析仪

7.试剂

7.1试剂来源：

上海科华生物工程股份有限公司提供

7.2注册号：

沪食药监械（准）字2011第2400009号

7.3试剂瓶内主要成分：

R1： -硫烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型（THio-NAD）、Good’s缓冲液；

R2 ：β-硫烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型（NADH）、3α-羟甾醇脱氢酶（3α-HSD）、Good’s 缓冲液、叠氮钠

7.4试剂稳定性：试剂于2℃-8℃避光保存，有效期为一年；开瓶后2-8℃避光保存，可

稳定一个月

8.标准品和质量控制

8.1校准程序：

使用某某公司的校准品对自动分析仪进行校准。按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品通过合适的数学模型绘制校准曲线。

8.2质控品：

某某公司提供的生化复合定值质控血清作为室内质控品。每日在测定前做一次质控。该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。

8.3质控数据管理：

按程序对检验后的质控后结果进行转换，及时质控数据进行分析处理，如出现失控值，应及时分析失控原因，并填写好相关失控记录。

8.4质控判断规则：

按《Westgard多规则质控方法测定标准操作程序》

8.5室间质评：

分别参加某地区室间质评，对回报的室间质评结果按《室间质量评价程序》进行处理。

9.标本

9.1标本要求：

血清、肝素或EDTA抗凝的血浆。尽量使用新鲜标本。已知血清中总胆汁酸（TBA）的浓度在饭后上升，因此要注意采血时间。不进行负荷试验时，应严守早晨空腹时采血。血清中胆汁酸在4℃保存时一周内稳定，冷冻-20℃可保存三个月。

9.2标本拒收：

由实验室人员核收送来标本，如有溶血、已被污染、标识不清或与申请单不符状况，一律要求重新留取标本。

9.3标本处理：

收集编号后离心获取血清/血浆以备检测使用。

10.测定程序：

10.1分析参数：

详见参数表。

10.2操作步骤：

签收样本→离心→上机检测→审核报告→签发报告→标本保存。

10.3获取结果：

在日立7600仪器上或日立7600传送的中文系统电脑上查找相应结果。

10.4结果报告：

对检验后的结果进行审核，系统分析，判断结果的可报告性。可报告的结果直接发报告，对不可报告结果进行复检后发报告。

11.计算

标准品校准项目后，测定室内质控，质控结果符合质控要求后方可测定样本。无需手工计算，每个标本的结果自动打印。

12.废液处理

参阅检验科《安全手册》废液处理标准规程处理。

13.操作性能：

13.1可报告范围：

1-150 mol/L；样品中含量超出线性范围，则以0.1ml标本加0.5ml生理盐水稀释，再测定，结果乘以6。

13.2特异性/干扰：

样本中胆红素含量＜50mg/dl，抗换血酸＜100mg/dl，血红蛋白含量＜500mg/dl时对试剂的测定没有影响。

13.3精密度：

批内变异系数CV≤10%；

批间相对极差≤10%

13.4准确度：

用质控品做样本，其测定结果应在该批质控品规定的范围内。

14.注意事项：

14.1试剂盒仅用于体外诊断。

14.2血清等标本有些含有感染性成分，因此应以具有感染危险性而充分注意操作。

14.3本试剂盒含有防腐剂叠氮钠，叠氮钠与铅、铜等反应，有时会形成一爆炸的叠氮化

金属盐，因此废液应用大量水冲洗。

14.4测定结果仅作为各种疾病的临床辅助诊断依据。

15.参考范围：

0-10 mol/L各实验室应建立自己的参考值范围。

16.临床意义：

总胆汁酸（TBA）是肝细胞合成并分泌，随胆汁排泄，是胆汁中存在的一大类胆烷酸的总称。由于其是由肝脏分解代谢，能反映肝实质性损伤。测定血清胆汁酸可提供肝胆系统是否正常的重要信息。肝胆疾病时周围血液循环中的胆汁酸水平明显增高。急性肝炎早期和肝外阻塞性黄疸时，有些病例可增至正常值的100倍以上。血清中胆汁酸含量受肠道吸收的胆汁酸量与肝门静脉中的胆汁酸被肝脏摄取的摄取率所决定。由于肝损伤的存在，经肝门静脉回肝的胆汁酸因肝细胞功能低下或侧枝循环的形成，导致肝不能充分摄取胆汁酸，则胆汁酸在血中浓度增高。

肝胆疾病时血清总胆汁酸浓度的升高与其他肝功能试验及肝组织学的变化极为吻合，在肝细胞仅有轻微坏死时，血清胆汁酸的升高常比其他检查更为灵敏。有报告统计，急性肝炎、肝硬化、原发性肝癌、急性肝内胆汁淤滞、原发性胆汁性肝硬化以及肝外阻塞性黄疸，其血清总胆汁酸均100％出现异常，上述疾病时均有血清胆汁酸含量的增高。

17.支持性文件：

17.1日立7600自动生化分析仪使用说明书。

17.2日立7600自动生化分析仪分析参数。

17.3上海科华生物工程股份有限公司提供的试剂说明书。

用户可根据自身情况添加支持性文件。

18.参考文献

1.F.Mashige etc.,Clinical Chemistry, Vol 27,1352-1356(1981).