生化仪器中的空白定标和质控

(仪器的精度、波长的准确度) 检测方法的选择和评价 （重复实验、回收实验、干扰实验、方法比较实验） 试剂和标准品的选择和评价 （线性范围测定、反应曲线的观察、稳定性实验） 标本准备 （血清、血浆、胸腹水等)
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全面质量控制的内容
全面质量控制的内容主要包括分析前、分 析中、分析后这三个主要过程的质控。
只有认真的检测和控制这三个过程中各个 环节可能出现的误差，才能保证最后检测 结果的准确性，才能达到我们的质量要求。
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（一）分析前质控
人员培训 实验室的设置 （水、电、相关设备、用具等） 实验仪器的质量保证
稳定性等变异，所以要求每次都要测定试剂空白， 称为实时试剂空白。 在全自动分析仪上，大
体上是模拟手工操作。但许多全自动分析仪为追 求速度，在设计上采用一些折中方法来测定试剂 空白。以日立全系 列生化仪为例。该系列分析仪
是做不了实时试剂空白，因为它们全是先加入样 本后加试剂，为了折中，只好在定标时做一个试 剂空白，保 存起来，需要扣除试剂空白时再减这
个预先保存的值。这种做法，对于比较稳定的试 剂来讲，对结
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果影响不大。 通俗的讲，日立的仪器工作流 程中首先是将标本加入到比色杯中，然后依次加 入R1试剂、R2试剂，所以试剂空白在每个测定项 目曲线 中是无法看到的。但是7600从 CALIBRATION中是可以看到的，S1ABS就是代表 试剂空白吸光度，在CALIBRAT ION画面里的下 方找到Reaction Monitor（反应监察），其中STD(1) 就是代表试剂空白反应曲线.为了减小误差，日立 仪器会连续做两次测定，所以你看到 FIRST和 SECOND两条，计算时是取他们的平均值。做试 剂空白目的之一就是观察试剂是否稳定，积极采 取措施纠正。对于日立 的这种试剂空白测定很多 仪器都采用这种方法，也叫做试剂空白校准。 总的说来，自动生化仪上的试剂空白一般表现为 零点吸光度，该吸光度是通过校准确立的。
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第二，标准液的吸光度与试剂空白的吸光度一定要准 确。吸光度受仪器状况、试剂状况的影响，如果您 的仪器相当稳定，试剂是影响K值的一个主要因素。 如何确定K值是正确的？ 一般我们用质控血清来检 查，最好是两种水平的质控来检查，如果质控结果 很好，可以说K值是准确的，用这个K值计算出来病 人的结果也是准确的，所以K值非常关键。 K值的真 面目： K值实际上代表了斜率，截距代表试剂空白， 试剂空白每天都在变化，所以K值的稳定性决定您 的仪器与试剂，如果仪器与试剂都十分稳定，那K 值也很稳定。 多长时间定一次标合适？ 这要看您 试剂的稳定性，质控结果不好，有些项目做试剂空 白可以解决，有些项目要做两点定标。 酶的项目如 何确定K值： 一是计算出来的理论K值； K = (TV × 1000)/(SV × L × ε) 二是用有酶项目的定标液得出K 值：目前各公司可以提供多项目的定标液，不仅有 底物类的项目，也有酶类的项目。
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生化检验中的各种空白概念
1、试剂空白： 由于生化测试测量的吸 光度为相对吸光度，所以从理论上说，所 有终点法的测试都需要把试剂本身的吸光 度扣除。试剂本身的吸光度就是 试剂空白。 测量方法是按照正常测试的试剂和样本量
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把样本换成蒸馏水来测量。 在传统手工方法 中,每次测定都要做至少三个管:测定管、标准管、 空白管。其中空白管是试剂加蒸馏水，测出来也 就是试剂空白。因为 操作环境、仪器状态、试剂
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2、样本空白： 由于溶血、脂血、黄疸等情况， 会导致样本本身的吸光度对测试结果造成影响。
所以对样本本身吸光度的测量，即样本空白，可 以去除这 方面的影响。测量方法是按照正常测试
的试剂和样本量，把试剂换成蒸馏水或生理盐水 来进行测量。自动生化仪上，很难界定样本空白。
与消除样本空白有关的大约有如下几点: a).在双 试剂测定时，加入试剂1和样品后的吸光度可一定 程度上扣除样本空白，所以有单 试剂不能扣除样
本空白的说法。 b).现在优质的试剂的抗干扰能 力都比较强，比如有些双试剂，R1加入后先和样 本孵育一段时间，将血红蛋白、脂肪
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胆红素等反应 掉，再加入R2开始测定反应。在一 定范围内都可以消除样本空白。 c).现代全自动 生化仪大多采用双波长测定.双波长测定的原则是 根据干扰组分和待测物质吸收光谱的峰形特征， 选择两个波长和 ，使干扰组分在这两个波长处的 吸光系数相等，而使待测物质在两波长处的吸光 系数有显著差别。以两波长分别测定分析溶液的 吸光度， 以两个吸光度值之差(△A)计算。这也可 以扣除一部分样本空白. d).有些仪器,例如日立 系列,有专门的“血清信息”功能的设置。做法都 是单 独占用一个空白通道来计算，这也叫做样品 空白校准。 3、水空白： 比色杯在加入水以后 的吸光度。水空白的意义主要是对光路系统进行 检查和校正，如光源，比色杯等，同时在计算中 起到消除“杯差”的 作用。日立7060中的Cell Blank（杯空白）测定的就是水空白。
生化中的定标和空白
定标的意义： 定标就是要找出一个参考点，就是一个K值 （或F值）。它是由仪器与试剂状态确定下来的。当我们测 定一个标本时，无论您是用手工的方法或全自动生化分析仪， 测出来的值只是一个吸光度，这个吸光度对我们没有什么意 义，我们要把这个吸光度转化成一个浓度或是酶的活性。那 就要乘上一个K值，计算并打印出来的结果对我们就有意义 了。K值就是我们通过定标找出来的。一般上最低要求是由 试剂空白与标准品。经过仪器测定出两个吸光度。 K=标准 浓度/(A标准－A试剂空白) 标准液的浓度我们是知道的，这 两个吸光度可以由仪器测出，这样就得出一个K值。无论什 么样的标本，用其吸光度乘以K值我们就得到了答案。因此， K值具有非常决定性的意义，可以决定标本的准确性。 K值 的决定因素： 我们看看K值会受到什么影响呢？ 第一，标 准液的浓度一定要准确（标准液最好与标本一样是以血清为 基质的）。