实验一纸层析法分离氨基酸

（3）点样：用毛细管浸液取样，点在这四个位置上。同 点样：用毛细管浸液取样，点在这四个位置上。 一位置上需点2 一位置上需点2～3次，每点完一点，立刻用电吹风热风 每点完一点， 吹干后再点， 吹干后再点，以保证每点在纸上扩散的直径最大不超过 3mm。每人须点4个样，其中3个是已知样， 3mm。每人须点4个样，其中3个是已知样，1个是待测样 品。
（2）规划：带上手套，取宽约 ）规划：带上手套， 14cm、高约 、高约22cm的层析滤 的层析滤 纸一张。 纸一张。在纸的下端距边缘 2cm处轻轻用铅笔划一条平 处轻轻用铅笔划一条平 行于底边的直线A， 行于底边的直线 ，在直线 上做4个记号 个记号， 上做 个记号，记号之间间隔 2cm，这就是原点的位置。 ，这就是原点的位置。 另在距左边缘1cm处画一条 另在距左边缘 处画一条 平行于左边缘的直线B， 平行于左边缘的直线 ，在B 线上以A、 两线的交点为原 线上以 、B两线的交点为原 点标明刻度（ 点标明刻度（以厘米为单 ），参见左图 参见左图。 位），参见左图。
双向 层析
纸层析结果
赖氨酸 苯丙氨酸 缬氨酸 待测氨基酸
原点到层析斑点 中心的距离 原点到溶剂前沿 的距离
Biblioteka BaiduRf
判断待测氨基酸
（5）显色：用喷雾器在 显色： 通风厨中向滤纸上均匀喷 0.1%茚三酮正丁醇溶液 茚三酮正丁醇溶液， 上0.1%茚三酮正丁醇溶液， 然后立即用热风吹干， 然后立即用热风吹干，即 可显出各层析斑点， 可显出各层析斑点，参见 左图。 左图。
计算各种氨基酸的Rf Rf值 （6）计算各种氨基酸的Rf值，并判断混合样品中都有哪 些氨基酸，各人将自己的实验结果贴在实验报告上， 些氨基酸，各人将自己的实验结果贴在实验报告上，见 表 3-2。
氨基酸的分离鉴定——纸层析法 纸层析法 氨基酸的分离鉴定
指导老师：郑永良
一、实验目的
掌握氨基酸纸层析的方法和原理， 掌握氨基酸纸层析的方法和原理，学会分析待 测样品的氨基酸成分。 测样品的氨基酸成分。
二、实验原理
纸层析是以滤纸为惰性支持物的分配层析。 纸层析是以滤纸为惰性支持物的分配层析。滤纸纤维 上的羟基具有亲水性，吸附一层水作为固定相， 上的羟基具有亲水性，吸附一层水作为固定相，有机 溶剂为流动相。当有机相流经固定相时， 溶剂为流动相。当有机相流经固定相时，物质在两相 间不断分配而得到分离。 间不断分配而得到分离。 值表示： 溶质在滤纸上的移动速度用Rf值表示： Rf=原点到层析斑点中心的距离/原点到溶剂前沿的距 原点到层析斑点中心的距离/ 离 值是常数。 在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。Rf值的大小 与物质的结构、性质、溶剂系统、 与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和 层析温度等因素有关。 层析温度等因素有关。本实验利用纸层析法分离氨基 酸。
实验试剂
五、实验操作
检查培养皿是否干燥、洁净；若否， 检查培养皿是否干燥、洁净；若否，将其洗净并置于 干燥箱内120℃烘干。 干燥箱内120℃烘干。 120℃烘干 平衡：剪一大块塑料薄膜铺在桌面上， （1）平衡：剪一大块塑料薄膜铺在桌面上，将层析 缸或大烧杯到置于塑料薄膜上，再把盛有约20mL 20mL展层 缸或大烧杯到置于塑料薄膜上，再把盛有约20mL展层 溶液的小烧杯置于倒置的层析缸或大烧杯中， 溶液的小烧杯置于倒置的层析缸或大烧杯中，用塑料 薄膜密封起来，平衡20min 20min。 薄膜密封起来，平衡20min。
四、实验试剂
扩展剂： 体积正丁醇和1 （1）扩展剂：将4体积正丁醇和1体积冰醋酸 放入分液漏斗中， 体积水混合，充分振荡， 放入分液漏斗中，与5体积水混合，充分振荡， 静置后分层，弃去下层水层。 静置后分层，弃去下层水层。 氨基酸溶液：0.5%的已知氨基酸溶液 的已知氨基酸溶液3 （2）氨基酸溶液：0.5%的已知氨基酸溶液3种 亮氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸， （亮氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸，脯氨 酸氨酸），0.5%的待测氨基酸液 ），0.5%的待测氨基酸液1 酸氨酸），0.5%的待测氨基酸液1种。 显色剂：0.1%水合茚三酮正丁醇溶液 水合茚三酮正丁醇溶液。 （3）显色剂：0.1%水合茚三酮正丁醇溶液。
三、实验器材
（1）大烧杯（5000mL）：1只/组 大烧杯（5000mL）：1 ）： 毛细管。 （2）毛细管。 喷雾器：公用。 （3）喷雾器：公用。 培养皿： （4）培养皿：1只/组。 层析滤纸（ 22cm、 14cm的 （5）层析滤纸（长22cm、宽14cm的 新华一号滤纸）： ）：1 新华一号滤纸）：1张/组。 直尺、铅笔：自备。 （6）直尺、铅笔：自备。 电吹风： （7）电吹风：1只/组。 托盘、 白线： （8）托盘、针、白线：1套/组。 手套： （9）手套：1双/组。 10）塑料薄膜：公用。 （10）塑料薄膜：公用。 11）小烧杯：50mL， （11）小烧杯：50mL，1只/组。
（7）实验完毕，倒掉用过的展层液和平衡液，将培养皿 实验完毕，倒掉用过的展层液和平衡液， 洗净，整理好桌面上的仪器和试剂， 洗净，整理好桌面上的仪器和试剂，并注意清洁自己的 操作台，请老师验收，实验报告当场交给老师。 操作台，请老师验收，实验报告当场交给老师。 计算 Rf= 原点到层析斑点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离 原点到层析斑点中心的距离/
层析：用针、线将滤纸缝成筒状， （4）层析：用针、线将滤纸缝成筒状，纸的两侧 边缘不能接触且要保持平行，参见图3 边缘不能接触且要保持平行，参见图3-3。向培养 皿中加入扩展剂，使其液面高度达到1cm左右， 1cm左右 皿中加入扩展剂，使其液面高度达到1cm左右， 将点好样的滤纸筒直立于培养皿中（ 将点好样的滤纸筒直立于培养皿中（点样的一端 在下，扩展剂的液面在A线下约1cm），罩上大烧 1cm）， 在下，扩展剂的液面在A线下约1cm），罩上大烧 仍用塑料薄膜密封。当上升到12 15cm， 12～ 杯，仍用塑料薄膜密封。当上升到12～15cm，取 出滤纸，剪断连线，立即用铅笔描出溶剂前沿线， 出滤纸，剪断连线，立即用铅笔描出溶剂前沿线， 迅速用电吹风热风吹干。 迅速用电吹风热风吹干。