实验一 淀粉酶的提取及作用

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α-淀粉酶抑制剂的提取、分离及性质研究的开题报告

α-淀粉酶抑制剂的提取、分离及性质研究的开题报告

α-淀粉酶抑制剂的提取、分离及性质研究的开题报

一、研究背景
α-淀粉酶是参与淀粉酶解的重要酶类之一,对其抑制剂的研究具有
十分重要的意义。

α-淀粉酶抑制剂可以调节血糖水平,减少糖尿病和肥
胖等疾病的发生。

因此,开展α-淀粉酶抑制剂的研究具有重要的应用前景。

二、研究目的
本研究的目的在于提取、分离α-淀粉酶抑制剂,并对其进行性质研究。

通过分析其分子量、化学结构和酶抑制活性,为进一步开发α-淀粉
酶抑制剂提供参考。

三、研究内容
1.提取、分离α-淀粉酶抑制剂:采用溶剂提取法和柱层析法分离纯
化α-淀粉酶抑制剂。

2.分子量分析:采用SDS-PAGE电泳法检测α-淀粉酶抑制剂的分子量。

3.化学结构鉴定:采用核磁共振(NMR)和质谱(MS)等技术对α-
淀粉酶抑制剂的化学结构进行鉴定。

4.酶抑制活性测定:采用体外酶活性测定技术,对α-淀粉酶抑制剂
的酶抑制活力进行测定。

四、预期结果
本研究预计可提取到α-淀粉酶抑制剂,并通过分子量分析、化学结
构鉴定和酶抑制活性测定分别对其进行定性、定量和定性分析。

预计能
够得到α-淀粉酶抑制剂的分子量、化学结构及其酶抑制活性等重要信息。

五、研究意义
通过本研究的开展,不仅有助于改善糖尿病和肥胖等疾病的治疗,还能够为进一步研发α-淀粉酶抑制剂提供参考,具有重要的理论和应用价值。

淀粉酶活力测定实验报告

淀粉酶活力测定实验报告

淀粉酶活力测定实验报告淀粉酶活力测定实验报告实验三、淀粉酶活性的测定实验报告实验四、淀粉酶活性的测定一、实验目的:1、了解α - 淀粉酶和β - 淀粉酶的不同性质及其淀粉酶活性测定的意义;2、学会比色法测定淀粉酶活性的原理及操作要点。

二、实验原理:淀粉酶存在于几乎所有植物中,特别是萌发后的禾谷类种子,淀粉酶活力最强,其中主要是α-淀粉酶和β-淀粉酶。

根据α-淀粉酶和β-淀粉酶特性不同,α-淀粉酶不耐酸,在pH3.6以下迅速钝化;β-淀粉酶不耐热,70? 15min 则被钝化。

测定时,使其中一种酶失活,即可测出另一种酶的活性。

淀粉在淀粉酶的催化作用下可生成麦芽糖,利用麦芽糖的还原性与3,5-二硝基水杨酸反应生成棕色的3-氨基-5-硝基水杨酸,测定其吸光度,从而确定酶液中淀粉酶活力(单位重量样品在一定时间内生成麦芽糖的量)。

三、实验用具:1、实验设备研钵,具塞刻度试管,离心管,分光光度计,酸度计,电热恒温水浴锅,离心机,电磁炉。

2、实验材料与试剂(1)0.1mol/l pH5.6的柠檬酸缓冲液:A液:称取柠檬酸20.01g,定容至1000ml;B液:称取柠檬酸钠29.41g,定容至1000ml;取A液55ml与B液145ml混匀。

(2)1%可溶性淀粉溶液:1g淀粉溶于100ml 0.1mol/l pH5.6的柠檬酸缓冲液;(3)1%3,5-二硝基水杨酸试剂:称取3,5-二硝基水杨酸1g、NaOH 1.6g、酒石酸钾钠30g,定容至100ml水中,紧盖瓶塞,勿使CO2进入;(4)麦芽糖标准溶液:取麦芽糖0.1g溶于100ml水中;(5)pH 6.8的磷酸缓冲液: 取磷酸二氢钾6.8g,加水500ml使溶解,用0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.8,加水稀释至1000ml即得。

(6)0.4mol/L的NaOH溶液;(7)1%NaCl溶液。

(8)实验材料:萌发的谷物种子(芽长约1cm)四、操作步骤1、酶液提取:取6.0g浸泡好的原料,去皮后加入10.0mL 1%的NaCl 溶液,磨碎后以2000r/min 离心10min,转出上清液备用。

淀粉酶活力测定实验报告

淀粉酶活力测定实验报告

淀粉酶活力测定实验报告一、实验目的1、学习和掌握淀粉酶活力测定的原理和方法。

2、了解淀粉酶的作用特点及其在生物体内的重要性。

3、培养实验操作技能和数据处理能力。

二、实验原理淀粉酶是能够水解淀粉分子中α-1,4 糖苷键的一类酶的总称,包括α淀粉酶和β淀粉酶。

α淀粉酶可以随机地作用于淀粉分子内部的α-1,4 糖苷键,生成麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖。

β淀粉酶则从淀粉分子的非还原性末端依次水解相隔的α-1,4 糖苷键,生成麦芽糖。

在本次实验中,利用淀粉酶水解淀粉生成还原糖,还原糖能与 3,5-二硝基水杨酸试剂反应,生成棕红色的 3-氨基-5-硝基水杨酸。

颜色的深浅与还原糖的量成正比,通过比色法测定吸光度,并与标准曲线对比,即可计算出淀粉酶的活力。

三、实验材料与仪器1、实验材料新鲜淀粉酶提取液1%淀粉溶液(称取 1g 可溶性淀粉,加入少量蒸馏水调匀,然后缓缓倾入沸水中并不断搅拌,最后定容至 100ml)pH 69 的磷酸缓冲液3,5-二硝基水杨酸试剂(DNS 试剂)麦芽糖标准溶液(1mg/ml)2、实验仪器分光光度计恒温水浴锅移液器离心机试管、刻度吸管、容量瓶等四、实验步骤1、标准曲线的绘制取 7 支干净的具塞刻度试管,编号,按下表加入试剂:|管号|麦芽糖标准液(ml)|蒸馏水(ml)| DNS 试剂(ml)|麦芽糖含量(mg)|||||||| 0 | 0 | 20 | 20 | 0 || 1 | 02 | 18 | 20 | 02 || 2 | 04 | 16 | 20 | 04 || 3 | 06 | 14 | 20 | 06 || 4 | 08 | 12 | 20 | 08 || 5 | 10 | 10 | 20 | 10 || 6 | 12 | 08 | 20 | 12 |摇匀后,在沸水浴中加热 5 分钟,取出后立即用冷水冷却至室温,再向每管中加入蒸馏水 20ml,摇匀。

以 0 号管为空白对照,在 540nm 波长下测定各管的吸光度值。

(植物中)淀粉酶活性的测定

(植物中)淀粉酶活性的测定

(植物中)淀粉酶活性的测定一实验目的本实验的目的在于掌握淀粉酶的提取及活性的测定方法。

二实验原理植物中的淀粉酶能将贮藏的淀粉水解为麦芽糖。

淀粉酶几乎存在于所有植物中,有α-淀粉酶及β-淀粉酶,其活性因植物生长发育时期不同而有所变化,其中以禾谷类种子萌发时淀粉酶活性最强。

α-淀粉酶和β-淀粉酶都各有其一定的特性,如β-淀粉酶不耐热,在高温下容易钝化,而α-淀粉酶不耐酸,在pH3.6以下容易发生钝化。

通常酶提取液中同时存在两种淀粉酶,测定时,可以根据他们的特性分别加以处理,钝化其中之一,即可以测出另一种酶的活性。

将提取液加热到70℃维持15分钟以钝化β-淀粉酶,便可测定α-淀粉酶的活性。

或者将提取液用pH3.6的醋酸在0℃加以处理,钝化α-淀粉酶,以测出β-淀粉酶的活性。

淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖,可用3,5-二硝基水杨酸试剂测定。

由于麦芽糖能将后者还原成3-氨基-5-硝基水杨酸的显色基团,在一定范围内其颜色的深浅与糖的浓度成正比,故可以求出麦芽糖到含量。

以麦芽糖的毫克数表示淀粉酶活性大小。

三实验材料萌发的小麦、大麦或者豆类等(芽长1cm左右)四实验仪器和试剂1.仪器:电子天平、研钵、100mL容量瓶(1个)、50mL量筒(1个)、刻度试管[25mL(9个)、10mL(1个)]、试管6支、移液管[1mL(2支)、2mL(2支)、10mL(2支)]、离心机、恒温水浴锅、7220型分光光度计2.试剂:1%淀粉溶液、0.4mol/LNaOH、pH5.6的柠檬酸缓冲液:A、称取柠檬酸20.01g,溶解后稀释至1 000mL;B、称取柠檬酸钠29.41g,溶解后稀释至1 000mL;取A液13.70mL与B液26.30mL 混匀即是。

3,5-二硝基水杨酸:精确称取3,5-二硝基水杨酸1g溶于20mL1mol/LNaOH 中,加入50mL蒸馏水,在加入30g酒石酸钾钠,待溶解后用蒸馏水稀释至100mL,盖紧瓶盖,勿让CO2进入。

α淀粉酶

α淀粉酶

6制药和临床化学分析
已有报道,基于α一淀粉酶的液体稳定试剂已应用于全自动生化分析仪(CibaComingExpress)临床化学系统。
二α—淀粉酶的研究现状
1国内α一淀粉酶研究现状
1965年,我国开始应用淀粉芽孢杆菌BF一7658生产一淀粉酶,当时只有无锡酶制剂厂独家生产。1967年杭州怡糖厂实现了应用α一淀粉酶生产饴糖的新工艺,可以节约麦芽7%~10%,提高出糖率10%左右。1964年我国开始了酶法水解淀粉生产葡萄糖工艺的研究。l979年9月通过了酶法注射葡萄糖新工艺的鉴定,并先后在华北制药厂、河北东风制药厂、郑州嵩山制药厂等单位得到应用,取得了良好的经济效益。
2淀粉的液化作用和糖化作用
α一淀粉酶的主要市场是淀粉水解的产物,如葡萄糖和果糖。淀粉被转化为高果糖玉米糖浆(HFCS)。由于他们的高甜度,被用于饮料工业中软饮料的甜味剂。这个液化过程就用到在高温下热稳定性好的α一淀粉酶。α一淀粉酶在淀粉液化上的应用工艺已经相当成熟,而且有很多相关报道。
3纤维脱浆
由于α一淀粉酶是具有重要应用价值的工业酶,周内外很多课题组对它进行了研究。国内有代表性的研究单位有:四川大学,主要研究α一淀粉酶的生产菌株及其培养条件;江南大学,主要研究α一淀粉酶的结构以及应用性能,如耐热性、耐酸性;西北大学,主要研究α一淀粉酶的变性机理以及环境对α一淀粉酶的影响;华南理工大学,主要研究α一淀粉酶的固定化和动力性质;还有华中农业大学,中国科学院沈阳应用生态研究所,天津科技大学,南开大学生命科学学院,中国农业科学院,中国科学院微生物研究所等多家研究机构对多种α一淀粉酶生产菌的一淀粉酶基因进行了克隆以及表达研究。国外有代表性的研究单位有:加拿大的UniversityofBritishColumbia,他们对人胰腺的一淀粉酶结构和作用机理进行了深入的研究;丹麦的Carlsberg实验室主要研究大麦α一淀粉酶结构域与结合位点;美国的WesternRegionalResearchCenter主要研究大麦的α一淀粉酶与抗菌素的作用以及大麦α一淀粉酶的活性位点。

淀粉酶的提取-α-淀粉酶的提取、分离及测定

淀粉酶的提取-α-淀粉酶的提取、分离及测定

α-淀粉酶的提‎取、分离及测定‎(生化试验小‎组-2005.4)试验全程安‎排:试验一、色谱分离淀‎粉酶1.1 试剂及设备‎离子交换树‎脂-20℃冰箱样品管(5-10ml试‎管)1.5ml离心‎管紫外分光光‎度计α-淀粉酶样品‎秒表胶头吸管(进样用)平衡缓冲液‎(pH8.0,0.01M磷酸‎盐缓冲液)洗脱缓冲液‎(平衡缓冲液‎+0.1M,0.3M,0.5M,1.0M的氯化‎钠)试剂瓶1.2 离子交换色‎谱原理与方‎法色谱(chrom‎a togr‎a phy)是一种分离‎的技术,随着现代化‎学技术的发‎展应运而生‎。

20世纪初‎在俄国的波‎兰植物化学‎家茨维特(Twsee‎t)首先将植物‎提取物放入‎装有碳酸钙‎的玻璃管中‎,植物提取液‎由于在碳酸‎钙中的流速‎不同分布不‎同因此在玻‎璃管中呈现‎出不同的颜‎色,这样就可以‎对各种不同‎的植物提取‎液进行有效‎的成分分离‎。

到1907‎年茨维特的‎论文用俄文‎公开发表,他把这种方‎法命名为c‎hroma‎t ogra‎p hy, 即中文的色‎谱,这就是现代‎色谱这一名‎词的来源。

但由于茨维‎特当时没有‎知名度,而且能看懂‎俄文的人也‎不多,加之很快爆‎发了第一次‎世界大战,茨维特的分‎离方法一直‎被束之高阁‎。

20世纪2‎0年代,许多植物化‎学家开始采‎用色谱方法‎对植物提取‎物进行分离‎,色谱方法才‎被广泛地应‎用。

自20世纪‎40年代以‎来以Mar‎t in 为首‎的化学家建‎立了一整套‎色谱的基础‎理论使色谱‎分析方法从‎传统的经验‎方法总结归‎纳为一种理‎论方法,马丁等人还‎建立了气相‎色谱仪器使‎色谱技术从‎分离方法转‎化为分析方‎法。

20世纪5‎0年代以后‎由于战后重‎建和经济发‎展的需要,化学工业特‎别是石油化‎工得到广泛‎的发展,亟需建立快‎速方便有效‎的石化成分‎分析。

而石化成分‎十分复杂,结构十分相‎似,且多数成分‎熔点又比较‎低,气相色谱正‎好吻合石化‎成分分析的‎要求,效果十分明‎显、有效。

淀粉酶的制备及活力测定

淀粉酶的制备及活力测定

(三)α-淀粉酶活力测定: ① 取试管3支 ② 于每管中各加入酶液1mL,在70℃±0.5℃恒温 水浴中准确加热15min,钝化β-淀粉酶。取出 后迅速用流水冷却。 ③ 在对照管中加入4mL0.4mol/L氢氧化钠。 ④ 在4支试管中各加入1mLpH5.6柠檬酸缓冲液。 ⑤ 将4支试管置于恒温水浴中,40℃±0.5℃保温 15min,再向各管分别加入40℃下预热的1%淀 粉液2mL,摇匀,立即放入40℃恒温水浴准确计 时保温5min。取出后向测定管迅速加入 4mL0.4mol/L氢氧化钠,终止酶活动,准备测糖。
项目二
淀粉酶的制备及应用
班级 姓名 学号 小组
一、淀粉酶
淀粉酶是水解淀粉和糖原的酶类总称,通 常通过淀粉酶催化水解织物上的淀粉浆料, 由于淀粉酶的高效性及专一性,酶退浆的 退浆率高,退浆快,污染少,产品比酸法、 碱法更柔软,且不损伤纤维。淀粉酶的种 类很多,根据织物不同,设备组合不同, 工艺流程也不同,目前所用的退浆方法有 浸渍法、堆置法、卷染法、连续洗等,由 于淀粉酶退浆机械作用小,水的用量少, 可以在低温条件下达到退浆效果,具有鲜 明的环保特色。
四、实验步骤
1. 将萌发好的稻谷种子去壳,注意别把芽去掉, 称取1g,置于研钵中。 2. 加入少量的石英砂和2mL的蒸馏水,研磨匀浆。 3. 将匀浆倒入离心管中,用6mL蒸馏水分次将残 渣洗入离心管。提取液在室温下放置提取15至20 分钟。每隔数分钟搅动一次,使其充分提取。 4. 然后在3000转/分转速下离心10分钟。 5. 将上清液过滤,倒入100mL容量瓶中,加蒸馏 水定容至刻度,摇匀,即制得α-淀粉酶原液。 装入试剂瓶中,贴标签,保存于低温冰箱中,为 以后的实验使用。
0.1mol/L pH5.6的柠檬酸缓冲液: A液(0.1mol/L 柠檬酸):称取C6H8O7.H2O 21.01g,用蒸馏水溶解并定容至1L; B液(0.1mol/L 柠檬酸钠):称取 Na3C6H5O7.2H2O 29.41g,用蒸馏水溶解并 定容至1L。 取A液13.7mL与B液26.3mL混匀,即为 0.1mol/L pH5.6的柠檬酸缓冲液; 1%淀粉溶液:称取1g淀粉溶于 100mL0.1mol/L pH5.6的柠檬酸缓冲液中。

淀粉酶基因的构建及其在大肠杆菌实验实验报告

淀粉酶基因的构建及其在大肠杆菌实验实验报告

(此文档为word格式,下载后您可任意编辑修改!) 实验报告:淀粉酶基因的构建及其在大肠杆菌(amp+)中的表达目录相关背景目前研究情况简略研究步骤相关实验详细介绍实验结果与讨论参考文献1、相关背景1、1淀粉酶1、1、1 淀粉酶的发现和分类淀粉酶是较早发现的酶类之一,早在1833年Payen和Persoz已首次从麦芽的水抽提物中用酒精沉淀分离到淀粉酶。

1894年高峰让吉从米曲霉(Aspergillus oryzae)中提取出作为消化剂的酶,即高峰淀粉酶。

1919年法国Boidin和Effront首次用枯草杆菌生产淀粉酶。

淀粉酶(amylase,AMY,AMS)是作用于可溶性淀粉、直链淀粉、糖元等α-1,4-葡聚糖,水解α-1,4-糖苷键的酶类的总称。

现在淀粉酶大致可分为四大类。

第一类α-淀粉酶,广泛分布于动物(唾液、胰脏等)、植物(麦芽、山萮菜)及微生物。

微生物的酶几乎都是分泌性的。

此酶以钙离子为必需因子并作为稳定因子,既作用于直链淀粉,亦作用于支链淀粉,无差别地切断α-1,4-链。

因此,其特征是引起底物溶液粘度的急剧下降和碘反应的消失,最终产物在分解直链淀粉时以麦芽糖为主,此外,还有麦芽三糖及少量葡萄糖。

另一方面在分解支链淀粉时,除麦芽糖、葡萄糖外,还生成分支部分具有α-1,6-键的α-极限糊精。

一般分解限度以葡萄糖为准是35-50%,但在细菌的淀粉酶中,亦有呈现高达70%分解限度的(最终游离出葡萄糖)。

按照使用条件α-淀粉酶可以分为中温型,高温型,耐酸耐碱型。

按产生菌不同又可分为细菌、真菌、植物和动物淀粉酶。

第二类β-淀粉酶(EC3.2.1.2)从底物非还原性末端顺次水解每隔一个α-1,4糖苷键,切下的是麦芽糖单位。

β-淀粉酶与α-淀粉酶的不同点在于从非还原性末端逐次以麦芽糖为单位切断α-1,4-葡聚糖链。

主要见于高等植物中(大麦、小麦、甘薯、大豆等),但也有报告在细菌、牛乳、霉菌中存在。

对于象直链淀粉那样没有分支的底物能完全分解得到麦芽糖和少量的葡萄糖。

淀粉酶及其作用方式

淀粉酶及其作用方式
康明丽 , ,9 3 出生 ,0 1 女 17 年 20 年毕业 于沈 阳农业大学 。硕
O一 . f 型的,所以将此酶叫做 仅 一淀粉酶。 淀粉酶 ( 一 , 一 一 1 4 D 葡萄糖 一葡萄糖苷水 解 酶 )普 遍分 布 在动 物 、植 物 和微 生 物 中 ,是 一种

k y r s s c ny s e wo d t h zme ; r a e
u a o h d oa e; h d oy i c n - y r ls y r l ss
作 用。
关键词
淀粉酶 ; 一淀粉酶 ;1一淀粉酶 ;葡萄糖 3
淀粉酶;脱支酶;水解
Abs r c S a c n y sa eo eo s mp ra ta t tr he z me n f hemo ti o tnt r t ma e a s o n f cu i sa c u a s a d f r n tr l fr ma u a t rng t r h s g r i n e me t


淀 粉 酶 是 生 产 淀 t
O一淀 粉 酶 ( 一m l e 又 称 为 液 化 型 淀 粉 t a ya ) s
酶 ,是 一种 催化 淀 粉水 解 生 成糊 精 的淀 粉 酶 ,系统
的 一种 物 质 ,对 淀粉 工 业 的发 展 起 了 巨大 的促 进
- m l e p— 瑚 — A ya ; s A . y
l e l - Gl c n l c h d o a e 1 一仅 一 Gl s a ; ,4 D- u a g u o y r l ; ,6 s D~ _
重 要 的 淀 粉 水解 酶 ,他 以随 机 作 用 方式 切 断淀 粉 、
糖原、寡聚或多聚糖分子 内的葡萄糖苷键 ,产生麦 芽糖 、低 聚糖 和 C一 ,4葡 萄糖 等 ,是工 业 生产 中 t1 应用最为广泛的酶制剂之一 。 O一 r 淀粉酶可以由微生物发酵制备 ,也可 以从 . 动植物 中提取 ,不 同来源淀粉酶 的性质有一定 的区 别 ,工业 中主要应用的是 真菌和细菌 一淀粉酶 。 能 产 生 O一淀 粉 酶 的 微 生 物有 枯 草 杆 菌 、芽 孢 杆 . f

淀粉酶活性测定实验报告

淀粉酶活性测定实验报告

班级:植物092 姓名:徐炜佳学号:0901080223淀粉酶活性的测定一、研究背景及目的酶是高效催化有机体新陈代谢各步反应的活性蛋白,几乎所有的生化反应都离不开酶的催化,所以酶在生物体内扮演着极其重要的角色,因此对酶的研究有着非常重要的意义。

酶的活力是酶的重要参数,反映的是酶的催化能力,因此测定酶活力是研究酶的基础。

酶活力由酶活力单位表征,通过计算适宜条件下一定时间内一定量的酶催化生成产物的量得到淀粉酶是水解淀粉的糖苷键的一类酶的总称,按照其水解淀粉的作用方式,可分为α-淀粉酶和β-淀粉酶等。

α-淀粉酶和β-淀粉酶是其中最主要的两种,存在于禾谷类的种子中。

β-淀粉酶存在于休眠的种子中,而α-淀粉酶是在种子萌发过程中形成的。

α-淀粉酶活性是衡量小麦穗发芽的一个生理指标,α-淀粉酶活性低的品种抗穗发芽,反之则易穗发芽。

目前,关于α-淀粉酶活性的测定方法很多种,活力单位的定义也各不相同,国内外测定α-淀粉酶活性的方法常用的有凝胶扩散法、3,5-二硝基水杨酸比色法和降落值法。

这3种方法所用的材料分别是新鲜种子、萌动种子和面粉,获得的α-淀粉酶活性应该分别是延迟(内源)α-淀粉酶、萌动种子α-淀粉酶和后熟面粉的α-淀粉酶活性。

本实验的目的在于掌握α-淀粉酶和β-淀粉酶的提取和测定方法。

二、实验原理萌发的种子中存在两种淀粉酶,分别是α-淀粉酶和β-淀粉酶,β-淀粉酶不耐热,在高温下易钝化,而α-淀粉酶不耐酸,在pH3.6下则发生钝化。

本实验的设计利用β-淀粉酶不耐热的特性,在高温下(70℃)下处理使得β-淀粉酶钝化而测定α-淀粉酶的酶活性。

酶活性的测定是通过测定一定量的酶在一定时间内催化得到的麦芽糖的量来实现的,淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖,可用3,5-二硝基水杨酸试剂测定,由于麦芽糖能将后者还原生成硝基氨基水杨酸的显色基团,将其颜色的深浅与糖的含量成正比,故可求出麦芽糖的含量。

常用单位时间内生成麦芽糖的毫克数表示淀粉酶活性的大小。

淀粉提取的实验报告(3篇)

淀粉提取的实验报告(3篇)

第1篇一、实验目的1. 学习和掌握淀粉提取的基本原理和实验方法。

2. 了解淀粉在不同条件下的性质变化。

3. 提高实验操作技能和数据处理能力。

二、实验原理淀粉是一种天然高分子多糖,广泛存在于植物种子、根、茎和果实中。

淀粉分子由许多葡萄糖单元通过α-1,4-糖苷键和α-1,6-糖苷键连接而成。

本实验采用水提法提取淀粉,通过热水提取、过滤、洗涤、干燥等步骤,得到纯净的淀粉。

三、实验材料与仪器1. 实验材料:玉米、水、碘液、无水乙醇、蒸馏水、硫酸铵等。

2. 实验仪器:电子天平、烧杯、漏斗、布氏漏斗、真空泵、烘箱、研钵、筛子等。

四、实验步骤1. 样品处理:称取一定量的玉米粉,用研钵研磨成粉末,过筛,得到细粉。

2. 提取:将细粉放入烧杯中,加入适量的水,加热至沸腾,保持沸腾状态5分钟,期间不断搅拌。

3. 过滤:将煮沸后的混合物用漏斗和布氏漏斗过滤,收集滤液。

4. 沉淀:向滤液中加入硫酸铵,使淀粉沉淀,搅拌后静置一段时间。

5. 洗涤:用蒸馏水洗涤沉淀,直至洗涤液无淀粉。

6. 干燥:将洗涤后的沉淀放入烘箱中,在60℃下烘干至恒重。

五、实验结果与分析1. 淀粉提取率:根据实验数据,计算淀粉提取率,结果如下:实验次数淀粉提取率(%)1 70.52 72.13 71.8平均值 71.8%2. 淀粉性质:通过观察实验现象,发现提取得到的淀粉为白色粉末,具有较好的流动性,溶解度较小。

将提取得到的淀粉加入碘液中,观察到淀粉遇碘液变蓝,证明提取得到的物质为淀粉。

3. 影响因素分析:(1)提取时间:提取时间过长或过短都会影响淀粉的提取率。

本实验中,提取时间为5分钟,效果较好。

(2)温度:温度过高或过低都会影响淀粉的提取率。

本实验中,温度控制在沸腾状态,效果较好。

(3)硫酸铵浓度:硫酸铵浓度过高或过低都会影响淀粉的沉淀效果。

本实验中,硫酸铵浓度为10%,效果较好。

六、实验结论1. 通过本实验,掌握了淀粉提取的基本原理和实验方法。

酶工程实验报告一

酶工程实验报告一

酶工程实验报告一一、实验目的本次酶工程实验的主要目的是通过实际操作,深入了解酶的性质、作用机制以及酶的分离纯化和活性测定方法。

同时,培养我们的实验操作技能、观察分析能力和科学思维方法,为今后从事相关领域的研究和工作打下坚实的基础。

二、实验原理酶是一种具有生物催化功能的蛋白质或 RNA 分子。

它们能够在温和的条件下高效地催化各种化学反应,具有高度的特异性和催化效率。

本实验中所涉及的酶主要是蛋白酶和淀粉酶。

蛋白酶能够水解蛋白质中的肽键,将蛋白质分解为小分子肽和氨基酸。

其活性可以通过测定水解产物的生成量或底物的消耗量来进行评估。

淀粉酶能够水解淀粉分子中的α-1,4 糖苷键,将淀粉分解为麦芽糖和葡萄糖等小分子物质。

其活性通常通过测定淀粉的水解程度来确定,常用的方法是碘量法。

酶的分离纯化是基于酶与杂质在物理化学性质上的差异,如溶解度、分子大小、电荷性质等,采用一系列的分离技术,如沉淀、层析、电泳等,逐步去除杂质,获得高纯度的酶。

三、实验材料与设备1、实验材料蛋白酶提取液淀粉酶提取液酪蛋白淀粉溶液福林酚试剂碘液其他化学试剂2、实验设备离心机分光光度计恒温水浴锅移液器电泳仪层析柱四、实验步骤制备酪蛋白底物溶液:称取一定量的酪蛋白,用氢氧化钠溶液溶解,调节 pH 至适宜值,定容备用。

设定反应体系:在试管中依次加入适量的蛋白酶提取液、酪蛋白底物溶液和缓冲液,混合均匀,置于恒温水浴锅中反应一定时间。

终止反应:反应结束后,加入三氯乙酸溶液终止反应。

测定吸光度:离心去除沉淀,取上清液,加入福林酚试剂显色,在分光光度计上测定吸光度。

计算蛋白酶活性:根据标准曲线计算出反应生成的酪氨酸量,从而计算出蛋白酶的活性。

2、淀粉酶活性的测定制备淀粉溶液:称取一定量的淀粉,用缓冲液溶解,加热糊化,冷却后定容备用。

设定反应体系:在试管中依次加入适量的淀粉酶提取液、淀粉溶液和缓冲液,混合均匀,置于恒温水浴锅中反应一定时间。

终止反应:反应结束后,加入碘液终止反应。

淀粉酶

淀粉酶

首页> 实验> 植物实验> 淀粉酶活性的测定淀粉酶活性的测定2005-12-05 00:00:00 来源:评论:0一、原理淀粉酶(amylase)包括几种催化特点不同的成员,其中α-淀粉酶随机地作用于淀粉的非还原端,生成麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖,同时使淀粉浆的粘度下降,因此又称为液化酶;β-淀粉酶每次从淀粉的非还端切下一分子麦芽糖,又被称为糖化酶;葡萄糖淀粉酶则从淀粉的非还原端…一、原理淀粉酶(amylase)包括几种催化特点不同的成员,其中α-淀粉酶随机地作用于淀粉的非还原端,生成麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖,同时使淀粉浆的粘度下降,因此又称为液化酶;β-淀粉酶每次从淀粉的非还端切下一分子麦芽糖,又被称为糖化酶;葡萄糖淀粉酶则从淀粉的非还原端每次切下一个葡萄糖。

淀粉酶产生的这些还原糖能使3,5-二硝基水杨酸还原,生成棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。

淀粉酶活力的大小与产生的还原糖的量成正比。

可以用麦芽糖制作标准曲线,用比色法测定淀粉生成的还原糖的量,以单位重量样品在一定时间内生成的还原糖的量表示酶活力。

几乎所有植物中都存在有淀粉酶,特别是萌发后的禾谷类种子淀粉酶活性最强,主要是α-和β-淀粉酶酶不。

Α-淀粉耐酸,在pH3.6以下迅速钝化;而β-淀粉酶不耐热,在70℃15min则被钝化。

根据它们的这种特性,在测定时钝化其中之一,就可测出另一个的活力。

本实验采用加热钝化β-淀粉酶测出α-淀粉酶的活力,再与非钝化条件下测定的总活力(α+β)比较,求出β-淀粉酶的活力。

二、材料、仪器设备及试剂(一)材料:萌发的小麦种子(芽长约1cm)。

(二)仪器设备:1. 分光光度计;2. 离心机;3. 恒温水浴(37℃,70℃,100℃);4.具塞刻度试管;5. 刻度吸管;6. 容量瓶。

(三)试剂(均为分析纯):1. 标准麦芽糖溶液(1mg/ml):精确称取100mg麦芽糖,用蒸馏水溶解并定容至100ml;2. 3,5-二硝基水杨酸试剂:精确称取1g3,5-二硝基水杨酸,溶于20ml2mol/L NaOH溶液中,加入50ml蒸馏水,再加入30g酒石酸钾钠,待溶解后用蒸馏水定容至100ml。

淀粉的提取和水解

淀粉的提取和水解

六、思考题
1、 如何选择生化物质实验中的实验材料?有何标准? 2、材料的→ 麦芽糖 → 葡萄糖 (紫蓝色)(红色) (无色)
所以根据水解液和碘反应的颜色,可以判断 水解是否已完全。 本实验中采用酸水解的方法, 用过量的酸保证水解完全。
三、试剂和器材
甘薯,搅拌器, 恒温水浴锅,滴定管
四、操作步骤
1. 淀粉的制备: 甘薯去皮 → 切成小块(0.3×0.3×0.3cm3) →每
15mLH20和6 mol/L HCl 10mL → 沸水浴30min → 冷却 → 6 mol/L NaOH中和至中性 → 定容至 100mL → 过滤 → 滤液10 mL定容至100 mL待用
五、注意事项
1. 淀粉提取时水浴温度不能超过50℃,否则会因溶 解度增大而减少产量; 2. 倾出上清时要尽可能小心,避免沉降的淀粉被震 动起来。
组15g (4组共60g) 于搅拌器中 → 加蒸馏水240 mL → 捣碎1min → 分成4份 → 3层纱布过滤 → 滤液置 50℃恒温水浴30min → 倾去上层液体 → 25 mL蒸 馏水重新悬浮白色沉淀,室温下静置15min(两次) → 60℃烘干4h → 称重
2. 多糖的水解(不做) 淀粉1.00g → 加少量蒸馏水调成糊状 →加
实验一 淀粉的提取和水解
一、目的要求
掌握淀粉提取和水解的原理及操作方法。
二、原理
多糖是自然界分布最广的糖类,由多个单 糖分子通过糖苷键缩合而成的。淀粉主要作为 植物营养的存储形式。本实验以甘薯为原料, 利用多糖和水生成胶体溶液的原理,采用过滤 和沉降等方法提取淀粉。
糖苷键对酸和酶敏感,所以淀粉在酸和体内 淀粉酶的作用下被降解成单糖,这种降解过程是 逐步进行的,降解的中间产物遇碘呈现不同的颜 色:

淀粉酶活性测定实验报告-样本

淀粉酶活性测定实验报告-样本

专业:姓名:学号:实验报告多效唑处理对小麦种子α-淀粉酶活力的影响一、实验原理萌发的种子中存在两种淀粉酶,分别是α-淀粉酶和β-淀粉酶,β-淀粉酶不耐热,在高温下易钝化,而α-淀粉酶不耐酸,在pH3.6下则发生钝化。

本实验的设计利用β-淀粉酶不耐热的特性,在高温下(70℃)下处理使得β-淀粉酶钝化而测定α-淀粉酶的酶活性。

酶活性的测定是通过测定一定量的酶在一定时间内催化得到的麦芽糖的量来实现的,麦芽糖的浓度利用比色法测得。

二、材料、试剂与仪器材料:萌发3d的小麦种子。

试剂:1%淀粉溶液、蒸馏水、3,5-二硝基水杨酸溶液、麦芽糖标准液、1M NaOH。

仪器:分光光度计、水浴锅、离心机、天平;容量瓶、移液管、刻度试管、研钵等。

三、实验方法1.麦芽糖标准曲线的制作取7支干净的具塞刻度试管,按下表加入试剂摇匀,置沸水浴中煮沸5 min,取出后流水冷却,加蒸馏水定容至10 mL。

用分光光度计测定吸光值A540。

以麦芽糖含量为横坐标,吸光度值A540为纵坐标,绘制标准曲线。

表 1 麦芽糖标准曲线制备方法试剂试管编号1 2 3 4 5 6 71mg/mL麦芽糖标准液(mL)0 0.1 0.3 0.5 0.7 0.9 1.0 蒸馏水(mL) 1.0 0.9 0.7 0.5 0.3 0.1 0 3, 5-二硝基水杨酸(mL) 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 麦芽糖浓度(mg/mL)0 0.1 0.3 0.5 0.7 0.9 1.02. 酶液制备称取1 g萌发3天的小麦种子,置于研钵中,加少量的石英砂和2 mL 蒸馏水,研磨至匀浆。

将匀浆倒入离心管中,用6mL 蒸馏水分3次将残渣洗入离心管。

提取液在室温下放置提取20 min,每隔3分钟搅动1次,使其充分提取。

然后再3000 r/min下离心10 min,将上清液倒入100 mL容量瓶中,加蒸馏水定容至100 mL,摇匀,即为淀粉酶原液。

3. 酶活力的测定变化取2支干净的具塞刻度试管,按表2加入试剂并进行相应处理,用分光光度计测定吸光值A540。

淀粉酶测定的原理及方法

淀粉酶测定的原理及方法

淀粉酶测定的原理及方法
淀粉酶测定的原理是利用淀粉酶对淀粉的水解作用来测定淀粉的含量。

淀粉酶是一种能够将淀粉分解为较小的多糖分子的酶类。

通过测定淀粉被酶解后产生的还原糖的量,可以间接推算出淀粉的含量。

淀粉酶测定的方法包括以下步骤:
1. 准备样品:将待测样品中的淀粉提取出来,通常使用适当的缓冲溶液进行提取。

2. 添加淀粉酶:将淀粉酶加入到提取得到的淀粉溶液中,使得酶与淀粉反应。

3. 反应:在一定的温度和pH条件下,将淀粉酶与淀粉反应一定的时间,使得淀粉被酶水解成还原糖。

4. 添加试剂:在反应结束后,添加适当的试剂,如碘化钾、硫酸或硫酸铵等,以停止淀粉酶的作用,并与未被水解的淀粉反应产生颜色的复合物。

5. 颜色测定:通过比色法、分光光度法或电化学法等测定淀粉酶反应产生的复合物产生的颜色强度或光学信号,来确定样品中淀粉的含量。

值得注意的是,淀粉酶测定需要在特定的温度、pH条件下进行,以使酶能够发挥最佳的活性。

同时,还应该进行合适的对照实验,在没有添加淀粉酶的条件下进行反应,以消除其他可能干扰测定结果的因素。

β淀粉酶

β淀粉酶


三、实验器材
豆浆机、玻璃棒、烧杯、漏 斗、水浴锅、胶头滴管、滴定 管、紫外分光光度计、饱和硫 酸铵。
四、实验药品
大豆100g、0.04mol/L磷酸缓冲 液、0.1mol/L磷酸缓冲溶液、NaOH 溶液(2.5mol/L)、滤纸、5g淀粉、 碘液、双蒸水、氯化钾溶液
• 1.细胞的粉碎
五、实验步骤
六、实验分析
得到的酶的活力不高,可能的原因有以下几种: (1)大豆的粉碎过程中没有完全的破坏掉细胞 组织结构; (2)在60摄氏度下进行杂志蛋白质的沉淀时, 温度没有控制好,导致少量酶的失活; (3)硫酸铵对酶的沉淀不彻底导致一些酶的流 失; (4)误将饱和硫酸铵溶液溢出的结晶当做酶一 起溶解了。

通过实验,从大豆中提取β淀 粉酶,并进行分离纯化,然 后对结果进行分析和讨论。
二、实验原理
• β-淀粉酶是外切型糖化酶,它作用于淀粉时,从
淀粉非还原端开始水解a-1,4-糖苷键,顺次切下麦 芽糖单位,遇到α-1,6键的分支点则停止不前,因 此它对淀粉的水解产物是麦芽糖及大分子的β-界 限糊精,该酶作用于底物时,同时发生沃尔登转位 反,使生成的麦芽糖的由α-型转为β-型。 β-淀粉酶广布于高等植物中(如未发芽的大麦、 小麦、燕麦、大豆、甘薯等)及微生物中,可耐酸。 将麦芽汁调节pH值为3.6,在0℃下可使α-淀粉酶 失去活力,而余下β-淀粉酶;β-淀粉酶的唯一产 物是麦芽糖,不是葡萄糖。


利用豆浆机对大豆进行植物组织细胞的破碎, 得到大豆匀浆。 2、酶的提取 采用磷酸缓冲液按照料液比1:5混合于烧杯中,得到 的混合液进行过滤(过滤2~3次),除掉固体杂质,得 到酶的粗提取液。 3、酶的分离纯化 (1)对得到的粗提取液60℃水浴加热,10分钟 后取出烧杯。 (2)静置5分钟,烧杯底部沉淀出大豆中含有固 体杂质蛋白质,取清液于另一烧杯中。 (3)硫酸铵进行沉淀 (4)用磷酸缓冲液对沉淀溶解得到酶的纯化液

实验一 淀粉酶的提取及作用

实验一 淀粉酶的提取及作用

实验一淀粉酶的提取及作用
一.原理:
1.淀粉淀粉酶水解蓝色糊精红色糊精无色糊精麦芽糖葡萄糖
2.葡萄糖+斐林试剂Cu2O↓(砖红色)
二.植物材料与实验器具:
植物材料:萌动的小麦
实验器具:试管;玻棒;量筒;研钵;漏斗;电炉;水浴锅
试剂:2%淀粉溶液;稀I-KI 溶液(原液稀释5倍);斐林试
三.操作步骤
1. 取10粒萌动的小麦种子放入研钵中,用量筒取10ml蒸馏水作为淀粉酶提取液总量
(包括研钵清洗、种子研磨),分三次加入,将小麦研成浆状,用脱脂棉过滤于试管中,摇匀。

滤液静置5-10min ,上清液为淀粉酶的提取液。

2. 取2只刻度试管做标记A管、B管
A管:2ml 2%淀粉液+2ml蒸馏水38℃
B管:2ml 2%淀粉液+2ml淀粉酶提取液20min
加I-KI 2~3滴观察并比较两管颜色变化。

3.B管+3ml 斐林试剂沸水浴2~5min观察颜色变化
四。

实验结果
淀粉酶能将淀粉水解成葡萄糖。

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实验一淀粉酶的提取及作用
一.原理:
1.淀粉淀粉酶水解蓝色糊精红色糊精无色糊精麦芽糖葡萄糖
2.葡萄糖+斐林试剂Cu2O↓(砖红色)
二.植物材料与实验器具:
植物材料:萌动的小麦
实验器具:试管;玻棒;量筒;研钵;漏斗;电炉;水浴锅
试剂:2%淀粉溶液;稀I-KI 溶液(原液稀释5倍);斐林试
三.操作步骤
1. 取10粒萌动的小麦种子放入研钵中,用量筒取10ml蒸馏水作为淀粉酶提取液总量
(包括研钵清洗、种子研磨),分三次加入,将小麦研成浆状,用脱脂棉过滤于试管中,摇匀。

滤液静置5-10min ,上清液为淀粉酶的提取液。

2. 取2只刻度试管做标记A管、B管
A管:2ml 2%淀粉液+2ml蒸馏水38℃
B管:2ml 2%淀粉液+2ml淀粉酶提取液20min
加I-KI 2~3滴观察并比较两管颜色变化。

3.B管+3ml 斐林试剂沸水浴2~5min观察颜色变化
四。

实验结果
淀粉酶能将淀粉水解成葡萄糖。

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