单抗

科勒
米尔斯坦
荣获1984年诺贝尔生理学或医学奖
6、单抗隆抗体的应用
①作为诊断试剂
用于体外诊断人类和动植物疾病及病原鉴定，纯度高 、特异性强，具有准确、高效、简易、快速的优点。
②定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病
利用同位素标记单抗，在特定组织成像
③用于治疗疾病和运载药物
制成生物导弹，将药物定向带到癌细胞所在的位置， 在原位杀死癌细胞，疗效高、副作用小。
小鼠的B淋巴细胞
小鼠的骨髓瘤细胞
融合
杂交瘤细胞
克隆
特点：具有两个 亲本细胞的遗传 特性
产生大量的杂交瘤细胞， 获得大量的单一抗体。
3、单克隆抗体的制备 如何使小鼠体内产生分泌某种特定抗体的B 淋巴细胞？
反复注射特定的 抗原蛋白
从脾脏处提取
B淋巴细胞
未受抗原刺激、 受已知抗原刺激、 受未知抗原刺激
“生物导弹”＝单克隆抗体＋药物 导向 杀死癌细胞
有S途径，但能不断分裂增殖。
你想到筛选杂交瘤细胞的方案了么？
第一次筛选目的：筛选出杂交瘤细胞
B细胞 瘤细胞 B-B细胞 瘤-瘤细胞 杂交瘤细胞
选择培养基 （含氨基喋呤）
杂交瘤细胞
筛选出的杂交瘤细胞可能有几种情况？
未受抗原刺激的B-瘤细胞（不能分泌抗体） 受已知抗原刺激的B-瘤细胞（能分泌所需的抗体） 受未知抗原刺激的B-瘤细胞（分泌不需要的抗体）
2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体 二、单克隆抗体
1、 抗体是由什么细胞产生的?它有何作用?
2、 抗体传统方法制备：
①方法：
向动物体内反复注射某种抗原，使 动物产生抗体，然后从血清中分离 所需抗体。
②缺点：
产量低、纯度低、特异性差
抗体
“导学案”合作探究 2、制备单克隆抗体时，为什么要选用 效应B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合形成 杂交瘤细胞？
如何筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞？
方法——
抗原-抗体杂交法
再筛选目的：筛选分泌所需抗体的杂交瘤细胞
通常采用有限稀释法，将筛选出来的杂交瘤 细胞多倍稀释，接种在多孔细胞培养板上培养， 使每孔细胞不多于一个，再由这些单细胞克隆生 长，然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体，那 些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。 最终选出分泌预定特异抗体的杂交细胞株进行扩 大培养。
阳性孔
抗原抗体杂交法检测——呈阳性反应
思考： 呈阳性反应是否说明单孔内的细胞是否来自单个 细胞？
如何克隆杂交瘤细胞？
产生特定抗体的杂交瘤细胞
体内培养
体外培养
从腹水中提取 抗体
从培养液中提 取抗体
免疫 脾脏中获得 注射抗原 B淋巴细胞
骨髓瘤 细胞
单 克 隆 抗 体 的 制 备 过 程 ：
诱导细胞融合
动物 细胞 融合 技术 动物 细胞 培养 技术 杂交细胞 第一次筛选 杂交瘤细胞 第二次筛选 特异性杂交瘤细胞 体外或体内 培养 杂交瘤细胞系 提取 单克隆抗体
特点：既能大量繁殖 又能产生专一抗体
特点：特异性强灵敏 度高可大量制备
4、单克隆抗体制备中用到的技术手段：
动物细胞融合、动物细胞培养。
5、原理： 细胞膜的流动性、细胞增殖
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如何诱导两种细胞融合，获得杂交瘤细胞？
动物细胞融合 方法
○化学方法：聚乙二醇 ○物理方法：电激 ○生物方法：灭活的病毒
原理
细胞膜的流动性
结果
杂交细胞
如何筛选出杂交瘤细胞？
小资料：
①细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被
氨基喋呤阻断。 ②人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但一般 不分裂增殖。 ③（选择缺陷型）鼠骨髓瘤细胞中只有D途径，没