动物细胞融合和单克隆抗体(公开课)PPT课件

骨髓瘤细胞 B
杂交瘤细胞
3、A是从小鼠的脾脏中取得
C
__B_细__胞__,该细胞能够产生_抗__体___
4、图中B为_细__胞__融__合_过程，常用 足够数量的细胞群
_灭__活__病__毒__作为诱导剂，该细胞继
承__双__亲__细__胞___的遗传特性，既能 _分__泌__抗__体___,又能__无__限__增__殖___。
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4
2、诱导融合的因素
• 生物法：灭活的病毒诱导融 合.(利用灭活仙台病毒是动物细
胞融合所特有的。 这是由于病毒 的磷脂外衣与动物细胞的膜十分 相似的缘故。病毒外壳上的某些 糖蛋白可能还有促进细胞融合的
功能。)
病毒颗粒黏 附细胞表面 细胞膜被 病毒颗粒穿通
• 化学法：聚乙二醇PEG诱导融 合.
细胞膜连接
体外培养
注射到
5、C过程指细胞培养，该过程包括
小鼠腹腔
_原__代__培养和_传__代__培养两个阶段，其
中__5_0__代以内的的细胞属于- 细胞株。
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6.
选择所需要的杂交瘤克隆细胞群，体外培养或注射到小鼠腹腔
内增殖。
1、单抗的制备过程要点：
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问题强化：
1）、本过程利用了哪些原理？ 免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理
2）、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？ 这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质， 不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的 本领，因而可以获得大量单克隆抗体
• 物理法：电激融合
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细胞融合、形成杂种细胞5
3、动物细胞融合技术的应用
• 细胞融合技术突破了有性杂交的局限，使 远缘杂交成为可能。
• 利用杂交瘤技术，制备单克隆抗体。
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6
思考讨论：为什么细胞融合过程中使用的 病毒需要灭活？不灭活行吗？
因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂 质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭 活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。
思 考
——单克隆抗体的制备
• 人们获得抗体的传统方法是?
–将抗原注入动物体,然后从动物血清中提取抗体
• 这种方法的缺点是什么?
–效率低，产量有Байду номын сангаас，纯度低，动物抗体注入人体可 能产生严重的过敏反应。
• 运用已学知识，设想怎样获得单一类型的抗体？
• 能否用单个B淋巴细胞通过克隆形成的细胞群来 产生单一类型的抗体呢？
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总结：比较植物体细胞杂交和动物细胞融合
比较项目
植物体细胞杂交
动物细胞融合
原理 融合前处理 诱 导方法
细胞膜的流动性、 植物细胞的全能性
细胞膜的流动性
用纤维素酶、 果胶酶去壁
用胰蛋白酶 使细胞分散
物理、化学方法
物理、化学、 生物方法
用
途
获得部分 或完整植株
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主要用于制备 单克隆抗体
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二：动物细胞融合的成功应用
• 2、用于治疗疾病和运载药物：
• 主要用于癌症治疗。
• 生物导弹：抗癌细胞的单克隆抗体+放射性同位素+化学 药物或细胞毒素。（单克隆抗体：导向。准确找到癌细
胞位置，原位杀死癌细胞。）
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下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤 风杆菌单克隆抗体的实验方案 A
1、该实验方案的目的是_制__备__单__克__隆_ 抗体 2、该方案能达到预期效果吗？为什么？
3. 细胞融合——三种融合方式:（BB;BG;GG）
4. 第一次筛选：在“选择培养基培养”上培养筛选杂交瘤细胞 （只有BG杂交瘤细胞存活。但BG杂交瘤细胞也是一个系列： 如B1G,B2G---BnG。而BB,GG在此培养基上不能存活。）
5. 第二次筛选：在“多孔培养板上”培养杂交瘤细胞系列 ，每 孔只放一个杂交瘤细胞。“克隆化培养”每个杂交瘤细胞，并 进行“单一抗体检测”，“检测阳性”的孔内即是所需要的杂 交瘤细胞。
3）、为何要进行两次筛选？
第1次筛选得到杂交瘤细胞（多种）。第2次筛选得 到能产生特异性抗体的杂交瘤细胞群。
4）、如何进行第2次筛选？
培养在多孔培养板上，每孔只有一个杂交瘤细胞。
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2、单克隆抗体的优点：
特异性强，灵敏度高，可大量制备。 3、单克隆抗体的应用
• 1、作为诊断试剂：在临床生化诊断、病理组织定位、 体内肿瘤的定位等,与常规抗体相比,具有准确、高效、 简易、快速特点.
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经免疫的小鼠
提取
B淋巴细胞
小鼠骨髓瘤细胞
灭活的病毒等手段
杂交 细胞
用特定的选 第一次筛选
择性培养基
杂交瘤细胞 第二次筛选
能产生特定抗体、培养条件 下能无限增殖的杂交瘤细胞
注射到小鼠腹腔
体外培养
- 提取单克隆抗体
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1. 动物特异性免疫
2. 分离B淋巴细胞（B）；找到骨髓瘤细胞（G）。注意B淋巴细 胞是一个系列。（B1,B2,B3,---Bn）
B淋巴细胞在体外不能无限- 增殖。
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单克隆抗体的制备—极富创造性的方案
将能够产生特定抗体的B淋巴细胞和具有无限增殖能 力的骨髓瘤细胞融合在一起，形成杂交瘤细胞。杂交 瘤细胞既能在体外快速生长，又能持续分泌成分单一 的特异性抗体。这种单一类型的只针对某一特定抗原 决定簇的抗体分子，就是单克隆抗体。
• 米尔斯坦(阿根廷)和科勒(德国)因此在1984年获诺贝 尔奖。
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一、动物细胞融合
1、定义：指用自然或人工方 法使两个或多个不同的细胞 融合成一个细胞的过程。
◆细胞杂交：不同基因型的细 胞之间的融合就是细胞杂交。
◆杂交细胞：融合后形成的具 有原来两个或多个细胞遗传 信息的单核细胞成为杂交细 胞。
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细胞融合是正常的生命活动
受精作用
两个细胞正在融合
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二.动物细胞融合