玉露组织培养方案

玉露组织培养与快速繁殖技术研究方案

一、实验目的

1、探究玉露组织培养的最适培养基的配置；

2、利用探究出来的最适培养基进行玉露的快速繁殖。

二、仪器与用具

1、仪器：超净工作台，光照培养箱；

2、用具：酒精灯1个、打火机1个、酒精棉球、长镊子1把、培养皿5套、滤纸、烧杯2个、量筒、记号笔1支、剪刀1把、刀子1把、小喷壶1个、电子天平、电炉、玻棒、PH试纸等；

3、试剂：75％酒精，0．1％HgCI2 ，无菌水，工业酒精、蔗糖、琼脂、1.0mg/L的KT，不同浓度的NAA，不同浓度的6-BA,NaOH溶液；

4、实验材料：玉露的幼嫩花茎。

三、实验方法

1.培养基的配置及灭菌。

2.无菌材料的获得：将选取的培养材料小心剥去苞叶，流水冲洗2 h，75％酒精浸泡3～5 S，无菌水漂洗3～5次，0．1％HgCl2：浸泡8 min，无菌水冲洗3～4次。将消毒后的材料剪切成1 cm左右的小段置于无菌滤纸上，备用。

3.培养基的筛选

Ⅰ、诱导培养基的筛选：切取1cm左右的玉露花茎接种在：

⑴MS+NAA0.1mg/L+6-BA1.0mg/L;⑵MS+NAA0.1mg/L+KT1.0mg/L;

⑶MS+6-BA1.0mg/L+KT1.0mg/L；

⑷MS+NAA0.1mg/L+6-BA0.5mg/L+KT1.0mg/L培养基上，每个处理4瓶，每瓶3个外植体，隔天观察花茎生长状况，并记录，约15天后统计愈伤组织数目。

Ⅱ、增殖培养基的筛选：将诱导出的愈伤组织或带有芽的愈伤组织团进行切割接种在：

⑸MS+NAA0.1mg/L+KT1.0mg/L;MS+6-BA0.5mg/L+KT1.0mg/L;

⑺MS+NAA0.1mg/L+6-BA0.5mg/L;

⑻MS+NAA0.1mg/L+6-BA0.5mg/L+KT0.5mg/L四种培养基上，每个处理4瓶，每瓶3个外植体，约15天后，观察其生长发育及成株情况。

Ⅲ、生根培养基的筛选：选再生植株接种在：⑼1/2MS+NAA0.1mg/L; ⑽MS+ NAA0.1mg/L两种培养基上，观察其生根情况。

以上培养基均添加3％的蔗糖，6％的琼脂，pH 5．8～6．0，培养温度(25±2)℃，光照强度2 000～3 000 Ix，光照时间12 h／d。4．炼苗：在生根培养基上生长30-40d后，植株逐渐长大。移出培养室，置于常温室内，利用自然光照培养1周，打开瓶盖，苗2～3 d。取出带有4～5条根系的小苗。

5.移栽：用清水洗掉附着的培养基，用1 000倍多菌灵溶液浸泡20 min，置于报纸上晾干，在炼苗后，适当风干后，移栽到经灭菌的培养基质上（腐殖土：细沙：蛭石=1：1:1）再用塑料薄膜盖住，不要让植株与薄膜直接接触。每天放风2～3次，每3～4 d浇少量水。2周后揭去薄膜，让其自然生长。成活后，每个月喷洒一次杀菌剂。待其重新发出新根后，再移栽到苗床上。

四、现象记录

1、观察外植体接种2-6d的污染情况；

2、观察并逐日记录外植体出芽的情况，包括外植体的形态变化，芽

出现的时间以及芽的形态特征，并计算每种培养基外植体的诱导情况，增殖情况及生根情况，确定最适诱导培养基、增殖培养基、生根培养基。

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